實驗室檢測技術(shù)概要演示文稿

實驗室檢測技術(shù)概要演示文稿現(xiàn)在是1頁\一共有39頁\編輯于星期三主要內(nèi)容概述疾病鑒別診斷過程臨床癥狀和大體病變檢病料的采集及處理實驗室檢驗病料中細菌的檢測病料中病毒的檢測現(xiàn)在是2頁\一共有39頁\編輯于星期三一、疾病鑒別診斷過程

臨床標本的采集及處理原則合理的采樣時機正確的采樣方法適宜的采樣部位現(xiàn)在是3頁\一共有39頁\編輯于星期三一、標本采集盡量在病程的早期采集；標本應放置無菌容器中；標本應做適當?shù)臉擞洠鐒游?、地點、時間、暫定的診斷等。1唾液在生理理鹽水中常加0.5%明膠或BSA，以保護不穩(wěn)定病毒。2鼻、咽及肛門拭子3糞便標本4腦脊髓液、心包液、尿液等5尸體材料死后應盡早獲取，無菌采取，不使用防腐劑。不同病毒所取材料不同，如NDV，取腦、氣管，F(xiàn)MV取肺、PRRS取肺、SFV取淋巴結(jié)等?，F(xiàn)在是4頁\一共有39頁\編輯于星期三二標本的保存和運送

盡量活體送檢，大部分病毒不穩(wěn)定，必須盡快送實驗室；如有延誤，則標本必須冷藏，到實驗室立即處理和接種，延誤時間短的，可置4℃；時間延誤較長，置-70℃。如郵寄標本則需放置有干冰的保溫箱內(nèi)。三標本處理1體液可以直接接種、檢測2血標本凝固血離心后的血清即可用于檢測3各種拭子4糞便標本5組織材料現(xiàn)在是5頁\一共有39頁\編輯于星期三病原學檢測常用的實驗室技術(shù)分離培養(yǎng)（“金標準”）形態(tài)學檢查（病毒電鏡鏡檢）細菌的生化試驗動物實驗免疫學診斷技術(shù)ELISAIFA免疫組化分子生物學診斷技術(shù)PCR熒光定量PCR現(xiàn)在是6頁\一共有39頁\編輯于星期三二、病料中細菌的檢測方法細菌的形態(tài)學檢查細菌的分離培養(yǎng)細菌的生化試驗動物試驗血清學試驗分子生物學方法現(xiàn)在是7頁\一共有39頁\編輯于星期三光學顯微鏡下細菌的形態(tài)細菌的形態(tài)觀察現(xiàn)在是8頁\一共有39頁\編輯于星期三光鏡和電鏡的比較大腸桿菌葡萄球菌電鏡鏡檢光學顯微鏡鏡檢現(xiàn)在是9頁\一共有39頁\編輯于星期三培養(yǎng)結(jié)果初次分離純培養(yǎng)鑒別培養(yǎng)現(xiàn)在是10頁\一共有39頁\編輯于星期三不乳糖發(fā)酵乳糖麥康凱平板現(xiàn)在是11頁\一共有39頁\編輯于星期三不發(fā)酵乳糖的細菌大腸桿菌，呈現(xiàn)黑色金屬光澤EMB平板

現(xiàn)在是12頁\一共有39頁\編輯于星期三SS平板大腸桿菌或者別的發(fā)酵乳糖的腸桿菌有黑色中心的是沙門氏菌。如果沒有黑色中心，就很可能是志賀氏菌了?，F(xiàn)在是13頁\一共有39頁\編輯于星期三不發(fā)酵乳糖的腸道菌，可能就是志賀氏菌。不發(fā)酵乳糖的某種腸道菌，而且產(chǎn)生硫化氫，可能是沙門氏菌發(fā)酵乳糖的某種腸桿菌。HE（蘇木素伊紅)瓊脂平板

本培養(yǎng)基傾注平皿待冷卻后呈草綠色，質(zhì)控菌株接種后。36±1℃培養(yǎng)18—24h，觀察結(jié)果。大腸桿菌部分被抑制，橙黃色-橙紅色。葡萄球菌生長被抑制?，F(xiàn)在是14頁\一共有39頁\編輯于星期三革蘭氏染色革蘭氏陽性革蘭氏陰性染色原理及過程：初染（結(jié)晶紫）媒染（碘液）脫色（95％酒精）復染（復紅）現(xiàn)在是15頁\一共有39頁\編輯于星期三細菌的生化試驗硫化氫試驗糖發(fā)酵試驗MR試驗VP試驗靛基質(zhì)試驗現(xiàn)在是16頁\一共有39頁\編輯于星期三藥敏試驗示意圖測量抑菌圈涂布細菌貼上藥敏紙片12溫箱培養(yǎng)34現(xiàn)在是17頁\一共有39頁\編輯于星期三以大腸桿菌為例：

剖檢（采集病料）纖維素滲出物的涂片染色分離培養(yǎng)（普通營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板或伊紅美蘭瓊脂平板）培養(yǎng)物涂片G染色生化試驗動物試驗血清學實驗玻板凝集鑒定血清型現(xiàn)在是18頁\一共有39頁\編輯于星期三三、病料中病毒的檢測電鏡技術(shù)血清學試驗分子生物學技術(shù)病毒的分離鑒定標本采集與送檢病毒分離和鑒定的一般程序

現(xiàn)在是19頁\一共有39頁\編輯于星期三常用檢測方法分離培養(yǎng)血清學中和試驗補體結(jié)合試驗血凝及血凝抑制試驗免疫擴散試驗

免疫學診斷技術(shù)

ELISAIFA免疫組化分子生物學檢測PCR分子雜交技術(shù)

現(xiàn)在是20頁\一共有39頁\編輯于星期三病毒分離標本采集殺滅雜菌（青鏈霉素）接種鑒定病毒種型易感動物出現(xiàn)病狀雞胚病變或死亡細胞培養(yǎng)細胞病變?nèi)蠓椒ìF(xiàn)在是21頁\一共有39頁\編輯于星期三1．動物接種病毒的分離與鑒定2．雞胚培養(yǎng)3．組織培養(yǎng)現(xiàn)在是22頁\一共有39頁\編輯于星期三病毒中和試驗本實驗極為特異和敏感，是病毒學中重要的血清學實驗。主要用于病毒感染的血清學診斷、病毒分離株的鑒定、不同病毒株的抗原關(guān)系研究、疫苗免疫原性的評價、免疫血清質(zhì)量的評價以及實驗動物中是否存在相應的抗體等。virus現(xiàn)在是23頁\一共有39頁\編輯于星期三補體結(jié)合反應

AgAb紅細胞溶血素補體AbAg紅細胞補體溶血素溶血（-）不溶血（+）現(xiàn)在是24頁\一共有39頁\編輯于星期三免疫擴散

現(xiàn)在是25頁\一共有39頁\編輯于星期三電鏡技術(shù)雞痘病毒（超薄切片）狂犬病毒包涵體（Negribody）現(xiàn)在是26頁\一共有39頁\編輯于星期三ELISA分類現(xiàn)在是27頁\一共有39頁\編輯于星期三現(xiàn)在是28頁\一共有39頁\編輯于星期三現(xiàn)在是29頁\一共有39頁\編輯于星期三ELISAProcedures現(xiàn)在是30頁\一共有39頁\編輯于星期三現(xiàn)在是31頁\一共有39頁\編輯于星期三分子生物學方法PCR

(PolymeraseChainReaction,聚合酶鏈反應)

熒光實時定量PCR（realtimePCR）NASBA（依賴核酸序列的擴增）現(xiàn)在是32頁\一共有39頁\編輯于星期三PCR原理:實質(zhì)就是體外基因復制技術(shù)Mg2+dCTPdGTPdUTPdATPTaqDNA聚合酶AmpErasePrimer靶序列加熱變性95°C靶序列引物退火55°C引物延伸72°C現(xiàn)在是33頁\一共有39頁\編輯于星期三原理圖示一二三完成一個循環(huán)現(xiàn)在是34頁\一共有39頁\編輯于星期三30次循環(huán)后靶序列擴增的數(shù)量No.of No.AmpliconCycles CopiesofTarget1 22 43 84 165 326 6420 1,048,57630 1,073,741,8241cycle=2Amplicon2cycle=4Amplicon3cycle=8Amplicon4cycle=16Amplicon5cycle=32Amplicon6cycle=64Amplicon7cycle=128Amplicon現(xiàn)在是35頁\一共有39頁\編輯于星期三熒光定量PCRTaqman技術(shù)特異性熒光雙標記探針Taq酶5’→3’外切酶活性現(xiàn)在是36頁\一共有39頁\編輯于星期三染料法的優(yōu)點：成本低不需要探針；適合初步篩查先用SYBR篩查，再用TaqMan精確定量部分關(guān)鍵樣品；融解曲線鑒定PCR有無雜帶、引物二聚體；染料法的缺點：無模板特異性不能分辨主帶與雜帶，給出的是總信號；不能做多重檢測每孔只能檢測一個目標基因；靈敏度低適合于5000拷貝以上的基因定量。與DNA結(jié)合時發(fā)光游離時不發(fā)光SYBRGreenI染料法現(xiàn)在是37頁\一共有39頁\編輯于星期三舉例：基于結(jié)核分枝桿菌插入序列IS1081，建立SYBRGreen熒光定量PCR方法。實驗結(jié)果：圖2.3：標準曲線引物二聚體1copy圖2.4融解曲線10copies/uL1copy/ul陰性對照105copies/ullL107copies/uL106copies/uL圖2.5: