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37Diagnostictechnicalspecificationforgooseastrovirus請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。鵝星狀病毒感染診斷技術(shù)規(guī)范臨床癥狀、病理變化;實驗室診斷包括樣品的采集與保存、病毒分離鑒定、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)GB/T27401實驗室質(zhì)量控制規(guī)范動物NY/T541—2016獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范4.1環(huán)境5.1儀器設(shè)備5.2試劑與材料5.3樣品采集與運送5.3.2組織樣品:采集疑似鵝星狀病毒感染死亡鵝的肝臟、脾臟和腎臟等組織樣品。采集病料時,用5.3.3泄殖腔/喉拭子樣品:活禽泄5.4樣品處理與保存5.4.1樣品應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行處理,取10g~20g樣品放入滅菌的研缽中磨碎。研磨充分的組織5.5檢測要求),7.2.1.2.11陰性對照標(biāo)準(zhǔn)品,為健康鵝染料溶液,混勻后倒入放置在水平臺面上的凝膠盤中,膠板厚5mm左右。依據(jù)樣品數(shù)選用適宜的梳子。mol/L。0.4μL,探針P(10μmol/L)0.8μL,模板RNA2μL,加ddH2O至20μL。反應(yīng)液混勻后置于),鵝星狀病毒間接ELISA檢測方法陰性對照OD均值=(ODA1+ODA2)/2;陽性對照OD均8.4.2.3當(dāng)樣品0.17<OD450<0.21,9鵝星狀病毒感染綜合判定A.1磷酸鹽緩沖液(PBS,0.01mol/LpH7.0.5×TAE電泳緩沖液加至A.3.1配制0.5mol/L乙二胺四乙酸鈉(EDTA-Na2)溶液(p滅菌雙蒸水氫氧化鈉調(diào)pH至A.3.3配制1×TAE電泳緩沖液A.5包被液(0.05mol/LNa2CO3NaHCO3A.6洗滌液A.7樣品稀釋液(封閉液)水養(yǎng)物保藏中心(CCTCC),其保藏編號為CCTCCNO根據(jù)SDPY株ORF2基因序列設(shè)計一對特異性引物,序列ORF2-R:5’-TGCGGCCGCAAGCTTGTCGACGTCGACTCATGTCCGCCCTT-3’,擴(kuò)增片段長度為759bp,引物在0.1mmol/L
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