公開課動物細胞融合與單克隆抗體課件

2002年12月30日，

兩場籌備了10年的“太空婚禮”首次在神舟四號飛船上舉行，植物細胞“新人”—黃花煙草和革新一號煙草葉肉細胞原生質體，動物細胞“新人”是小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，兩批新人同時在“產房”—電融合儀內孕育新生命?！疤栈槎Y”這兩場“太空婚禮”實質是哪兩項細胞工程技術？植物體細胞雜交技術動物細胞融合技術(1)(1)(2)(3)(4)(5)植物體細胞雜交過程示意圖閱讀課本P52及識圖2-23，并完成學案第1頁【學習過程】細胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞誘導的手段？融合后細胞的類型？AB雜種細胞遺傳物質有什么特點？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質1.2動物細胞融合過程原理？1.2動物細胞融合過程為什么滅活的病毒能作誘導劑？滅活喪失感染性保留融合活性比較項目細胞融合的原理細胞融合的方法誘導手段用途植物體細胞雜交細胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶去除細胞壁后誘導原生質體融合離心、電刺激、振動、聚乙二醇克服遠源雜交不親和，獲得雜種植株動物細胞融合細胞膜的流動性用胰蛋白酶使細胞分散后誘導細胞融合除應用植物細胞雜交手段外，還有滅活病毒獲得雜種細胞、制備單克隆抗體1.4比較動、植物細胞雜交技術【例1】能使動物細胞融合的特有的誘導因子是（）A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D.振動【例2】融合后的雜交細胞的遺傳物質有何特點（）具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息B.能無限增殖C.可形成新個體D.培養(yǎng)過程會貼壁【例3】動物細胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產雜種細胞

BB初試牛刀A強調：效應B淋巴細胞是能夠產生抗體的B淋巴細胞，下文將其簡稱為B淋巴細胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結合的免疫球蛋白。能產生抗體的細胞是漿細胞（即效應B細胞）。溫故知新二、單克隆抗體B淋巴細胞效應B淋巴細胞記憶B淋巴細胞分化讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內的B細胞可以產生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細胞只分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細胞進行無性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體：單個B細胞克隆產生的化學性質單一、特異性強的抗體提示1：對B細胞進行細胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？問題：如何大量生產單克隆抗體？請嘗試設計一個方案。2.2單克隆抗體的制備

一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術設計方案：動物細胞融合技術單克隆抗體既能產生特異性抗體，又能大量增殖的細胞1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細胞才能存活獲得產生相應抗體的B細胞（二選）：選能產生所需專一抗體的雜交瘤細胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內培養(yǎng)雜交瘤細胞特點：既能產生特異性抗體，又能大量增殖。單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

你學會了嗎？單克隆抗體制備過程“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導向，藥物為彈頭治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”，準確殺傷癌變細胞?！纠?】科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經培養(yǎng)可產生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經過免疫的B淋巴細胞C.經過免疫的T淋巴細胞B.不經過免疫的T淋巴細胞D.不經過免疫的B淋巴細胞【例5】單克隆抗體是由下列哪種細胞產生的（）B淋巴細胞B．T淋巴細胞C．骨髓瘤細胞D．雜交瘤細胞A初試牛刀D【例6】用動物細胞工程技術獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中錯誤的是（）A．將抗原注入小鼠體內，獲得能產生抗體的B淋巴細胞B．用纖維素酶處理B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞C．用聚乙二醇作誘導劑，促使能產生抗體的B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合D．篩選雜交細胞，并從中選出能產生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B初試牛刀×謝謝(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B細胞是取自小鼠體內的

細胞，從小鼠體內提取分離該細胞之前，應給小鼠注射_____________類物質。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導。(3)假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成

種類型的C細胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。效應B

抗原

細胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無限增殖又能產生特異性抗體

雜交瘤細胞（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動物體內誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是

。（4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因為它是用小鼠的_______細胞制備的，其化學本質是___________，應用于人體，會作為

產生

，解決這個問題的方法是_____________________________。大量生產選①，小規(guī)模生產選②效應B蛋白質異物免疫反應采用人的效應B細胞制備15、右圖為某同學根據雜交瘤技術的方法，設計的生產破傷風桿菌抗體的實驗方案。據圖回答：

（1）該方案能達到預期效果嗎？

。原因是

______________________________________________。

（2）圖中②為

過程，常用

作為誘導劑。該細胞繼承了_____________________

，因此不僅能分泌