乳酸菌的生理生化特性介紹

乳酸菌的生理生化特性介紹形狀和培養(yǎng)特點(diǎn)觀看采納牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，將已純化后的甘油菌種活化后于37°C下培養(yǎng)20?24h，并進(jìn)行革蘭氏染色及菌體形狀和菌落特點(diǎn)的觀看。染色方法參照微生物鑒定實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)生長條件試驗(yàn)?zāi)望}性試驗(yàn)(NaCl濃度:0.85、1.20和1.71)(mol/L);耐酸堿試驗(yàn)(pH:4.3、5.7、6.8、8.4、8.6和8.7);溫度梯度試驗(yàn)(溫度：10C、30C、40C、50C、55C、60C和65C)。分別將參試菌接種于以上處理的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)48h，記錄生長狀況。生理生化試驗(yàn)⑴過氧化氫酶測定將實(shí)驗(yàn)菌接種于PGY培養(yǎng)基斜面上,37C培養(yǎng)20h—24h,取一環(huán)接種的培養(yǎng)物，涂于潔凈的載玻片上，然后在其上滴加3%——15%的過氧化氫，有氣泡那么為陽性反應(yīng),無氣泡為陰性反應(yīng)。⑵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣實(shí)驗(yàn)在PY基礎(chǔ)培養(yǎng)基內(nèi)加入30g葡萄糖和5%吐溫-80,1.6g/100mL的漠甲酚紫1.4mL作指示劑，在培養(yǎng)基內(nèi)放置一小倒管，分裝試管置37C培養(yǎng)24h,經(jīng)培養(yǎng)后,指示劑變黃表示產(chǎn)酸，倒管內(nèi)顯現(xiàn)氣泡，表示產(chǎn)氣。⑶淀粉水解實(shí)驗(yàn)接種新奇的菌種于含有0.5g可溶性淀粉的PY基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，取少許培養(yǎng)液于比色盤內(nèi)，同時取未接種的培養(yǎng)液作對比，分別在其中加入盧哥氏碘液.不顯色表示淀粉水解,顯藍(lán)黑色或藍(lán)紫色時，表示淀粉未水解或水解不完全。⑷明膠液化實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)菌接種于明膠基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,置37C培養(yǎng)，以一支未接種的試管作為對比。將接種的和未接種的對比管置于冰箱或冷水中，等待對比管凝固后記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，反復(fù)觀看對比多次。如對比管凝固時，接種管液化為陽性反應(yīng)，凝固為陰性反應(yīng)⑸甲基紅〔M.R〕試驗(yàn)接種實(shí)驗(yàn)細(xì)菌于PYG培養(yǎng)基，于37°C培養(yǎng)2天后，于培養(yǎng)物中加入幾滴甲基紅酒精溶液，如呈紅色，表示陽性。⑹乙酰甲基甲醇V-P實(shí)驗(yàn)接種新奇的實(shí)驗(yàn)菌種于培養(yǎng)基中,37C培養(yǎng)2天后，取培養(yǎng)液1mL在其中加入1ml10%的NaOH，混勻，再加入3—4滴2%氯化鐵溶液。數(shù)小時后，培養(yǎng)基表面的下層顯現(xiàn)紅色者，為陽性⑺檸檬酸鹽取幼齡菌種接種于檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基上，適溫培養(yǎng)3—7天，培養(yǎng)基呈堿性〔藍(lán)色〕者為陽性反應(yīng)，不變者那么為陰性⑻酪素水解試驗(yàn)牛奶平板的制備：取5g脫脂奶粉加入50mL蒸餾水中〔或用50mL脫脂牛奶〕，另稱1.5g瓊脂溶于50mL蒸餾水中，將兩液分開滅菌。待冷至45—50C時，將兩液混勻倒平板，即成牛奶平板。將平板倒置過夜，使表面水分干燥，然后將菌種點(diǎn)接在平板上，每皿可點(diǎn)接3—5株菌。適溫培養(yǎng)1、3、5天，記錄菌落周圍和下面酪素是否已被分解而呈透亮。配制該培養(yǎng)基時，切勿將牛奶和瓊脂混合滅菌，以防牛奶凝固⑼厭氧生長測定將菌種接入營養(yǎng)肉湯平板后，用密封帶包好放入CO2培養(yǎng)箱37C培養(yǎng)2天后,觀看生長情形，生長那么為陽性厭氧硝酸鹽產(chǎn)氣接種封油：以斜面菌種用接種環(huán)接種后，用凡士林油〔凡士林和液體石蠟為1:1〕封管，封油的高度約1厘米。必須同時接種不含有硝酸鉀的肉汁胨培養(yǎng)液作對比。觀看結(jié)果：培養(yǎng)2—7d，觀看在含有硝酸鉀的培養(yǎng)基中有否生長和產(chǎn)動氣泡。如有氣泡產(chǎn)生，表示反硝化作用產(chǎn)生氮?dú)?，為陽性反?yīng)。但如不含硝酸鉀的對比培養(yǎng)基也可產(chǎn)動氣泡，那么只能按可疑或陰性處理。石蕊牛奶的反應(yīng)牛奶中要緊含有乳糖和酪蛋白，在牛奶中加入石蕊是作為酸堿指示劑和氧化還原指示劑。石蕊在中性時呈淡紫色，酸性時呈粉紅色，堿性呈藍(lán)色，還原時那么自上而下地褪色變白。觀看其產(chǎn)酸、產(chǎn)堿、胨化、酸凝固、凝乳酶凝固、還原情形糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)將需要測定的糖或醇類等碳水化合物加入PY基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，按表分裝含5mL培養(yǎng)基的試管.分別取0.2mL,被鑒定菌株接到滅菌后的碳水化合物培養(yǎng)基中37C培養(yǎng)24h,振蕩培養(yǎng)。檢測時取培養(yǎng)液少許置于比色盤內(nèi)，同時取未加碳水化合物的PY培養(yǎng)液作為對比，滴加試劑比較顏色的變化，記錄產(chǎn)酸的強(qiáng)弱.附一些培養(yǎng)基：PY培養(yǎng)基〔100mL〕：蛋白胨1.0g,酵母提取物1.0g,無機(jī)鹽溶液4.0mL[鹽溶液成分:無水CaCl20.2g,MgSO420.0g,K2HPO41.0g,,KH2PO41.0g,NaHCO310.0g,NaCl2.0g](將CaCl2和MgSO4一起溶解于300mL蒸餾水中，再加500mL蒸餾水，一邊攪拌一邊緩慢加入其他鹽類.連續(xù)攪拌直到全部溶解，加蒸餾水定容至1000mL,混合后貯備于4C)PYG培養(yǎng)基:PY在基礎(chǔ)培養(yǎng)液內(nèi)加入1.0g葡萄糖營養(yǎng)明膠蛋白胨5g、牛肉膏3g、明膠120g、蒸餾水1000mL、pH6.8?7.0；加熱溶解、校正至pH7.4?7.6，分裝小管，121°C高壓滅菌10min,取出后迅速冷卻，使其凝固。復(fù)查最終pH應(yīng)為6.8?7.0檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基：檸檬酸鈉3gNH4H2PO41gMgSO40.2gK2HPO41gNaCl5g瓊脂15—20g水1000mL加熱溶解后，調(diào)pH至7,再加入1.6%漠麝香草酚藍(lán)指示劑10mL,培養(yǎng)基呈綠色，分裝試管，每管5mL，121滅菌30min含硝酸鉀的營養(yǎng)肉湯加入29硝酸鉀入營養(yǎng)肉湯4.16SrDNA序列分析那個LZ另外查好了，專門多學(xué)問。5.生長曲線活菌計(jì)數(shù)方法：采納涂布法，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，每隔一段時刻〔2-4小時〕測實(shí)驗(yàn)九細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)［日期：2020-5-30］來源：孔慶學(xué)［字體：大中小］實(shí)驗(yàn)九細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)1目的了解細(xì)菌鑒定中常用的生理生化試驗(yàn)反應(yīng)原理1.2把握測定細(xì)菌生理生化反應(yīng)的技術(shù)和方法2原理各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)了專門大的差異。由于細(xì)菌特有的單細(xì)胞原核生物的特性，這種差異就表現(xiàn)的更加明顯。不同細(xì)菌分解、利用糖類、脂肪類和蛋白類物質(zhì)的能力不同，因此其發(fā)酵的類型和產(chǎn)物也不相同，也確實(shí)是說，不同微生物具有不同的酶系統(tǒng)。即使在分子生物學(xué)技術(shù)和手段不斷進(jìn)展的今天，細(xì)菌的生理生化反應(yīng)在菌株的分類鑒定中仍有專門大作用。3材料3.1菌種大腸埃希氏菌〔Escherichiacoli〕、產(chǎn)氣腸桿菌〔Enterobacteraerogenes〕、一般變形桿菌〔Proteusvulgaris〕、枯草芽孢桿菌〔Bacillussubtilis〕的斜面菌種3.2培養(yǎng)基葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基、糖發(fā)酵培養(yǎng)基〔葡萄糖、乳糖或蔗糖〕3.3試劑40%NaOH溶液、肌酸、甲基紅試劑、吲噪試劑、乙醚、1.6%漠甲基酚紫指示劑。3.4器具超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、試管、移液管、杜氏小套管。4流程糖發(fā)酵試驗(yàn)—V-P試驗(yàn)一甲基紅試驗(yàn)一吲噪試驗(yàn)5步驟（一）糖類發(fā)酵試驗(yàn)1目的了解不同細(xì)菌分解利用糖的能力及實(shí)驗(yàn)原理，并把握其操作方法.2原理可依照細(xì)菌分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。是否產(chǎn)酸，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中加入指示劑漠甲酚紫〔即B.C.P指示劑，其pH在5.2以下呈黃色，pH在6.8以上呈紫色〕，經(jīng)培養(yǎng)后依照指示劑的顏色變化來判定。是否產(chǎn)氣，可在發(fā)酵培養(yǎng)基中放入倒置杜氏小管觀看。3材料3.2菌種大腸埃希氏菌〔Escherichiacoli〕、產(chǎn)氣腸桿菌〔Enterobacteraerogenes〕、一般變形桿菌〔Proteusvulgaris〕的斜面菌種3.3培養(yǎng)基葡萄糖、蔗糖和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液試管4流程發(fā)酵液試管-標(biāo)記-接種-培養(yǎng)-觀看-記錄5步驟5.1試管標(biāo)記圖9-1糖發(fā)酵產(chǎn)氣取分別裝有葡萄糖、蔗糖和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液試管各A不產(chǎn)氣；B產(chǎn)氣4支，每種糖發(fā)酵試管中均分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、一般變形菌和空白對比。接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至以上各相應(yīng)試管中，每種糖發(fā)酵培養(yǎng)液的空白對比均不接菌。將裝有培養(yǎng)液的杜氏小管倒置放入試管中〔圖9-1〕，置37°C恒溫箱中培養(yǎng)，分別在培養(yǎng)24h、48h、和72h觀看結(jié)果。5.3觀看記錄與對比管比較，假設(shè)接種培養(yǎng)液保持原有顏色，其反應(yīng)結(jié)果為陰性，說明該菌不能利用該種糖，記錄用''一〃表示；如培養(yǎng)液呈黃色，反應(yīng)結(jié)果為陽性，說明該菌能分解該種糖產(chǎn)酸，記錄用''+〃表示。培養(yǎng)液中的杜氏小管內(nèi)有氣泡為陽性反應(yīng)，說明該菌分解糖能產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，記錄用''+〃表示；如杜氏小管內(nèi)沒有氣泡為陰性反應(yīng)，記錄用''一〃表示?！捕骋阴＜谆状荚囼?yàn)（V.P試驗(yàn)）1目的了解鑒別不同腸桿菌科各菌屬的乙酰甲基甲醇試驗(yàn)原理，并把握其操作方法.2原理某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中氧，氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V-P〔+〕反應(yīng)。3材料3.1菌種大腸埃希氏菌〔Escherichiacoli〕、產(chǎn)氣腸桿菌〔Enterobacteraerogenes〕、一般變形桿菌〔Proteusvulgaris〕、枯草芽孢桿菌〔Bacillussubtilis〕的斜面菌種3.2培養(yǎng)基葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管4流程培養(yǎng)液試管-標(biāo)記-接種-培養(yǎng)-觀看-記錄5步驟標(biāo)記試管取5支裝有葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、一般變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對比。接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應(yīng)試管中，空白對比管不接菌，置37C恒溫箱中，培養(yǎng)24?48h。觀看記錄取出以上試管，振蕩2min。另取5支空試管相應(yīng)標(biāo)記菌名，分別加入3?5ml以上對應(yīng)管中的培養(yǎng)液，再加入40%NaOH溶液10?20滴，并用牙簽挑入約0.5?1mg微量肌酸，振蕩試管，以使空氣中的氧溶入，置37°C恒溫箱中保溫15?30min后，假設(shè)培養(yǎng)液呈紅色，記錄為V.P.試驗(yàn)陽性反應(yīng)〔用''+〃表示〕；假設(shè)不呈紅色，記錄為V.P.試驗(yàn)陰性反應(yīng)〔用''一〃表示〕。注意：原試管中留下的培養(yǎng)液用作甲基紅試驗(yàn)?！踩臣谆t試驗(yàn)〔M.R.試驗(yàn)〕1目的了解鑒別腸桿菌科各菌屬的甲基紅試驗(yàn)原理，并把握其操作方法.2原理腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。3材料3.1菌種同V.P試驗(yàn)3.2培養(yǎng)基同V.P試驗(yàn)4流程培養(yǎng)液-指示劑-觀看-記錄結(jié)果5步驟于V.P.試驗(yàn)留下的培養(yǎng)液中，各加入2?3滴甲基紅指示劑，注意沿管壁加入，認(rèn)真觀看培養(yǎng)液上層，假設(shè)培養(yǎng)液上層變成紅色，即為陽性反應(yīng)；假設(shè)仍呈黃色，那么為陰性反應(yīng)，分別用''+〃或''一〃表示。〔四〕吲噪試驗(yàn)1目的把握吲噪試驗(yàn)（Ehrlich法）的原理和方法2原理有些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲噪（靛基質(zhì)）。吲噪本身沒有顏色，不能直截了當(dāng)看見，但當(dāng)加入對二甲基氨基苯甲醛試劑時，該試劑與吲噪作用，形成紅色的玫瑰吲噪。3材料3.1菌種測試菌株.3.2培養(yǎng)基蛋白胨水培養(yǎng)基3.3試劑二甲基氨基苯甲醛溶液、乙醚。4流程標(biāo)記試管-接種-培養(yǎng)-觀看-記錄5步驟5.1試管標(biāo)記取裝有蛋白胨水培養(yǎng)液的試管5支，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、一般變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對比。5.2接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔到以上相應(yīng)試管中，第5管作空白對比不接種，置37°C恒溫箱中培養(yǎng)24?48h。5.