實驗一細胞的形態(tài)觀察和大小測量

實驗一細胞的形態(tài)觀察和大小測量第1頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六實驗?zāi)康?、進一步熟悉顯微鏡的使用方法；2、熟悉動植物、人體細胞的基本結(jié)構(gòu)；3、掌握顯微測微的原理和方法，通過測微對細胞的大小有所了解；4、學習細胞計數(shù)方法；5、掌握臨時裝片、涂片的制作方法。第2頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六實驗原理細胞是生命活動的基本結(jié)構(gòu)和功能單位，其形態(tài)與功能相適應(yīng)，種類繁多，形態(tài)各異，有球形、橢圓形、扁平形、長梭形、星形等。雖然細胞的形狀各異，但是它們卻有共同的基本結(jié)構(gòu)特點，都是由細胞膜（動物），細胞壁（植物）、細胞質(zhì)和細胞核組成。一般光學顯微鏡分辨率為0.2um，細胞中的線粒體、高爾基體、中心體、核仁、染色體等細胞器長度或直徑大于0.2um，一般經(jīng)過一定固定染色處理后，借助顯微鏡可以觀察細胞及其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。第3頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六實驗原理

不同的組織細胞不僅形態(tài)上有差異，大小也往往各不相同。有機體的每種細胞都有其特定的尺寸和形態(tài)，這與它們發(fā)揮特定的功能有關(guān)，而一旦細胞不能保持固有形態(tài)，其功能就會受到損害，從而會給有機體帶來一系列問題。利用顯微鏡附帶的測微尺可以對觀察到的細胞或其結(jié)構(gòu)進行長度測量，從而對其體積進行計算。第4頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六實驗原理細胞計數(shù)法是細胞培養(yǎng)過程中的一項基本技術(shù)，只有控制合適的細胞密度才能確保細胞順利生長，同時在研究細胞生長狀態(tài)，繪制生長曲線等實驗中也會用到細胞計數(shù)。細胞計數(shù)的原理較簡單，只要從需要計數(shù)的細胞懸液中取一定體積的懸液，稀釋后在顯微鏡下利用細胞計數(shù)板進行計數(shù)，即可換算出原始細胞懸液中細胞的密度以及細胞總數(shù)。第5頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六洋蔥鱗莖表皮細胞第6頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六人口腔上皮細胞第7頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六人的紅細胞第8頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六神經(jīng)細胞第9頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六酵母菌細胞第10頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六實驗用品

1、器材：普通光學顯微鏡，測微尺，細胞計數(shù)板，刀片，剪刀，小鑷子，玻片，擦鏡紙；2、材料：洋蔥，人口腔上皮細胞，雞血細胞懸液；3、試劑：碘液，瑞特染液第11頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六實驗步驟（一）洋蔥鱗莖表皮細胞的觀察1.臨時裝片的制備：在載玻片中央滴一滴1%的碘液，剝?nèi)⊙笫[鱗莖表皮，用小鑷子撕取內(nèi)表皮，用剪刀剪取0.5*0.5mm2大小平鋪在碘液中，用鑷子夾取一塊蓋玻片，將一條邊緣接觸碘液，然后緩緩蓋在液滴上，防止產(chǎn)生氣泡，輕壓蓋片，用吸水紙吸去擠出的碘液。2.將制備好的裝片放到顯微鏡下，先用低倍鏡觀察，尋找細胞形狀規(guī)則、形態(tài)清晰的區(qū)域，換高倍鏡觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。第12頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六洋蔥鱗莖表皮細胞結(jié)構(gòu)第13頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六碘液染色放大10倍洋蔥鱗莖表皮細胞圖第14頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六碘液染色放大40倍洋蔥鱗莖表皮細胞圖第15頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六（二）人口腔上皮細胞的觀察1.人口腔黏膜上皮細胞涂片標本的制備：在載玻片中央滴一滴1%碘液，用一根經(jīng)過消毒的牙簽在實驗者口腔內(nèi)壁輕輕刮取黏膜上皮細胞，將其放入碘液中攪動使細胞散開。染色1分鐘后小心加蓋玻片，方法同前。2.將制備好的裝片置于顯微鏡下觀察。第16頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六人口腔上皮細胞結(jié)構(gòu)第17頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六碘液染色放大10倍口腔上皮細胞圖第18頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六碘液染色放大40倍口腔上皮細胞圖第19頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六碘液染色放大40倍口腔上皮細胞圖第20頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六（三）雞血細胞的觀察1.血涂片的制備：用吸管吸取少量稀釋了的雞血，在載玻片右端滴一滴，另取一張載玻片，使其一條邊緣接觸血液，兩玻片成30~45°，迅速向前推移，使血液被拉成均勻的薄膜。血液的大小、玻片的夾角、推移的速度對血膜的厚薄均有影響，將玻片在空氣中晾干。第21頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六2.染色：在血膜上滴幾滴瑞特染液，平置1分鐘，再向染液中加入等量的蒸餾水，稀釋染液，繼續(xù)9分鐘。用自來水輕輕沖洗玻片上的染液，晾干。3.觀察：分別用低倍鏡和高倍鏡觀察血細胞的形態(tài)。第22頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六血涂片的制片方法第23頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六染色的鴿紅細胞圖第24頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六染色的鴿紅細胞圖第25頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六染色的鴿紅細胞圖第26頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六未被染色的鴿紅細胞圖第27頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六（四）雞血細胞計數(shù)1.細胞計數(shù)板的結(jié)構(gòu)：細胞計數(shù)板是一塊7.5*3.5cm2的厚玻片，通常有兩個正方形計數(shù)室。計數(shù)室較周圍稍低，其上覆蓋一片蓋玻片時，之間的距離為0.1mm。每個計數(shù)室被分成9個大方格（邊長為1mm），四角的四個大格又均分為16個中方格，這四個大格通常用于白細胞計數(shù)和組織培養(yǎng)細胞計數(shù)。中間的大格被分成25個中方格，每個中方格又劃分為16個小方格，這些小方格一般用于紅細胞和血小板的計數(shù)。用擦鏡紙輕輕擦拭計數(shù)板，蓋上蓋玻片，在顯微鏡低倍鏡下熟悉方格的布局。第28頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六第29頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六第30頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六第31頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六2.加樣：從顯微鏡上取下計數(shù)板，蓋上蓋玻片，用吸管吸取稀釋的雞血細胞懸液，滴在計數(shù)板上蓋玻片的邊緣，細胞懸液會因為表面張力作用自然流入計數(shù)室內(nèi)（注意不要產(chǎn)生氣泡）。靜置2分鐘，待細胞沉降后即可上鏡觀察。3.計數(shù)：在低倍鏡下按照固定方向數(shù)出計數(shù)室四個角上的每個大方格內(nèi)的細胞數(shù)目，如果細胞正好停留在格線上，則按照數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則計數(shù)。第32頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六4.計算：按照下列公式計算每毫升雞血細胞懸液包含的細胞數(shù)。細胞總數(shù)（個/毫升）=（四個大格細胞數(shù)目總和/4）*104*稀釋倍數(shù)。第33頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六10倍放大倍數(shù)下鴿紅細胞計數(shù)圖第34頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六10倍放大倍數(shù)下鴿紅細胞計數(shù)圖第35頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六

（五）細胞的顯微測量我們在理論課上學習過細胞的大小，知道細胞一般都很小，如一般植物細胞的直徑為10~100μm，人和動物的細胞直徑為10~20μm，細菌的細胞就更小了，那么有沒有一種工具能夠測量細胞大小呢？今天，我們就來學習一種測量細胞大小的工具——顯微測微尺。第36頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六（1）、顯微測微尺的組成

鏡臺測微尺顯微測微尺

目鏡測微尺第37頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六鏡臺測微尺：鏡臺測微尺是一塊特制的載玻片，在它的中央由一片圓形蓋片封固著一個具有精細刻度的標尺，標尺長1mm，分成100等份的小格，每小格長為10μm，標尺的外圍有一黑色的小環(huán)，以便在顯微鏡下尋找標尺位置。第38頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六目鏡測微尺：分為線性目鏡測微尺和網(wǎng)狀目鏡測微尺。目鏡測微尺是一塊比目鏡筒內(nèi)徑稍小的有標尺的圓形玻璃片，標尺長10mm、分為100等份的小格。每小格表示的實際長度隨不同的顯微鏡、不同放大倍數(shù)的物鏡而不同。線性目鏡測微尺一般用來測量長度，網(wǎng)狀目鏡測微尺上有數(shù)個正方格的網(wǎng)狀刻度，經(jīng)常使用網(wǎng)狀目鏡測微尺測面積。第39頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六（2）、測微原理鏡臺測微尺是顯微長度測量的標準，但它并不被用來直接測量（為什么）。目鏡測微尺每小格的實際長度隨不同顯微鏡、不同放大倍數(shù)而不同，因為目鏡測微尺是安裝在目鏡隔板上，顯微鏡下被測標本的物像是經(jīng)過物鏡、目鏡兩次放大成像后才進入視野的，而目鏡測微尺上的刻度只經(jīng)過一次放大成像，放大倍數(shù)與顯微鏡下標本的放大倍數(shù)不同，因此目鏡測微尺每小格的長度只代表相對長度，是變化的，必須由鏡臺測微尺校正后才有意義，因此鏡臺測微尺和目鏡測微尺必須配合使用。第40頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六

所以先要用鏡臺測微尺對目鏡測微尺進行校正，測出不同放大倍數(shù)下目鏡測微尺每小格的實際長度。在測量標本時，移去鏡臺測微尺，換上被測標本，用目鏡測微尺即可測得觀察標本的實際長度。鏡臺測微尺用來校正目鏡測微尺，故其質(zhì)量對所測細胞影響極大。通過測量細胞的長度可以計算出細胞的面積和體積。第41頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六0.01mm鏡臺測微尺第42頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六目鏡測微尺0102030405060708090100第43頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六（3）、顯微測微尺的使用方法（3.1）安裝1、卸下目鏡的一個上透鏡，將目鏡測微尺刻度線向下安裝在目鏡的焦平面上，再旋上目鏡的上透鏡。2、將鏡臺測微尺刻度向上安裝在載物臺上夾好，打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)載物臺使測微尺分度位于視野中央。用低倍鏡（4倍）觀察，調(diào)焦至能看清鏡臺測微尺的刻度線。第44頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六（3.2）校正

調(diào)換物鏡至10倍放大倍數(shù)，調(diào)節(jié)焦距使鏡臺測微尺的刻度線最清晰。此時在視野內(nèi)可以同時看到鏡臺測微尺和目鏡測微尺。移動載物臺將鏡臺測微尺標尺移至目鏡測微尺的下方以避免后者標尺上的刻度線妨礙視線。旋轉(zhuǎn)目鏡鏡筒使目鏡測微尺的標尺與鏡臺測微尺平行且靠近，移動載物臺使鏡臺測微尺左端的0刻度線與目鏡測微尺左端的0刻度線重疊，從左至右依次間隔（為什么）讀出兩尺刻度線重合的位置，記錄格數(shù)，至少記錄5個讀數(shù)。第45頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六

若以S表示鏡臺測微尺的格數(shù)、E表示目鏡測微尺的格數(shù)，L表示目鏡測微尺每小格代表的實際長度，計算5次數(shù)值的平均值即為該放大倍數(shù)下目鏡測微尺每小格代表的實際長度。

L＝S/E*10μm

第46頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六第47頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六10倍放大倍數(shù)下的校正值測量次數(shù)及讀數(shù)12345鏡臺測微尺（格數(shù)）110316595目鏡測微尺（格數(shù)）110306493目鏡測微尺每小格實長(μm)101010.3310.1610.22L=(L1+L2+L3+L4+L5)/5=(10+10+10.3+10.2+10.2)/5=10.14(μm)第48頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六

依次在高倍鏡和油鏡下對目鏡測微尺進行校正。在高倍鏡和油鏡下鏡臺測微尺的刻度線顯得很粗，目鏡測微尺的刻度線與它相比是很細的，為了減少誤差，校正時目鏡測微尺左端的刻度線應(yīng)放在鏡臺測微尺左端刻度線的左旁邊緣。

第49頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六（3.3）測微移去鏡臺測微尺，換上洋蔥鱗莖表皮裝片，用目鏡測微尺測量一個細胞所占小格數(shù)并乘以目鏡測微尺每小格代表的實際長度，即為被測細胞的實際長度。在10倍放大倍數(shù)下測得一個洋蔥鱗莖表皮細胞的寬共有23格，由此可以計算出這個洋蔥表皮細胞的寬：

10.14×23=233.22(μm)

用同樣的方法可以測量洋蔥鱗莖表皮細胞的長，測出長后可以計算出細胞的面積。第50頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六0102030405060708090100洋蔥鱗莖表皮細胞第51頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六測量口腔上皮細胞大小圖第52頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六

在測量過程中，為了數(shù)值的準確性，一般通過多次測量取平均值。另外我們在測量的過程中還會出現(xiàn)被測標本的長度不是整數(shù)格，這個時候就要估計，有時遇到比較大的細胞，目鏡測微尺的長度不夠長，要通過幾次測量才可以把一個長度測出來，出現(xiàn)這兩種情況就會產(chǎn)生誤差。第53頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六

（4）.使用顯微測微尺注意事項

1.鏡臺測微尺標尺的圓環(huán)上蓋有一圓形蓋玻片起保護刻度線的作用，蓋玻片是用樹膠粘在載玻片上的，因此避免二甲苯與其接觸。（酒精和乙醚2：8或3：7混合液擦洗）

2.在用鏡臺測微尺對目鏡測微尺進行校正時，注意不要把鏡臺測微尺放反或放倒。

3.在用鏡臺測微尺對目鏡測微尺進行校正時，顯微鏡的光亮度不易太亮。

4.測微尺都是用玻璃材質(zhì)做的，在使用的時候要小心，不要摔碎或壓碎。

第54頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六結(jié)果討論

思考題：1、將所觀察到的幾種細胞繪制在實驗報告上，并表明其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。2、計算1ml雞血細胞懸液中所包含的細胞數(shù)。3、測量一個洋蔥鱗莖表皮細胞的大小。第55頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六生物學繪圖方法及注意事項

生物繪圖是形象地描繪生物外形、結(jié)構(gòu)和行為等的一種重要的科學記錄方法。其原則是要求對所描繪的生物對象做深入細致的觀察，從科學的角度充分了解其有關(guān)形態(tài)結(jié)構(gòu)特征，在此基礎(chǔ)上準確、嚴謹?shù)乩L制。生物繪圖要求具有科學性、真實性，并且要求清晰。一、繪圖用具2H或3H鉛筆、繪圖紙、削筆刀、橡皮、小尺等。第56頁，共60頁，2023年，2月20日，星期六二、生物繪圖的主要技法(一)基本要求

(1).仔細觀察標本，區(qū)分正常結(jié)構(gòu)與偶然、人為的差異，選擇典型和正常的部分認真觀察。充分了解各部分的結(jié)構(gòu)特點是繪圖的前提?？茖W、認真、實事求是的態(tài)度