熒光分析法簡(jiǎn)述

熒光分析法簡(jiǎn)述第1頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日在我的的在分析課本中提到分子光譜法有吸光光度法熒光法拉曼光譜法那么什么是熒光分析法呢?第2頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日某些物質(zhì)經(jīng)紫外線照射后，能立即放出能量較低（亦即波長(zhǎng)較長(zhǎng)）的光。當(dāng)照射停止后，如化合物的發(fā)射在10-9秒鐘內(nèi)停止，則稱熒光

超過(guò)此限度即稱為磷光。

第3頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日熒光的波長(zhǎng)與被照射物質(zhì)有關(guān)。以紫外線作激發(fā)光源，所發(fā)射的熒光常在可見光區(qū)。

測(cè)量熒光強(qiáng)度以確定物質(zhì)含量的方法叫做熒光分析法，所使用的儀器叫熒光計(jì)

第4頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日一.原理設(shè)IF為熒光強(qiáng)度；I0入射紫外線強(qiáng)度；It為透過(guò)溶液后紫外線強(qiáng)度；Ia為溶液吸收紫外線；C為溶液中被測(cè)物質(zhì)的濃度；l為溶液層的厚度。

第5頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日被溶液吸收的紫外線強(qiáng)度為：

Ia=I0-It據(jù)朗伯-比爾定律

代入上式得：經(jīng)數(shù)學(xué)推導(dǎo)，當(dāng)濃度很小時(shí)：第6頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日熒光強(qiáng)度IF與物質(zhì)吸收紫外線的強(qiáng)度成正比

當(dāng)紫外線的強(qiáng)度一定，溶液的厚度一定，對(duì)同一物質(zhì)而言2.3

KI0ξl為常數(shù)，以A表示,故:IF=AC這說(shuō)明濃度與熒光強(qiáng)度成正比，這就是熒光定量分析的理論基礎(chǔ)。第7頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日所以只要測(cè)出樣品溶液的熒光強(qiáng)度和標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度，就可按正比關(guān)系計(jì)算樣品溶液的濃度。

CX為樣品溶液濃度CS為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度IFX為樣品溶液熒光強(qiáng)度；IFS為標(biāo)準(zhǔn)溶液熒光強(qiáng)度

第8頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日二．熒光計(jì)熒光分析中有兩種光線：紫外線和熒光,故:在比色計(jì)中光源、比色杯和光電源三者排列成一條直線在熒光計(jì)中三者需排成三角形，通常呈直角三角形，如下圖所示第9頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日第10頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日第11頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日兩種裝置的不同(1)比色計(jì)中光源是普通的鎢絲燈熒光計(jì)中的光源則必須是產(chǎn)生紫外線的汞燈，常用的是高壓汞燈，它發(fā)射的是線狀光譜；能透過(guò)汞燈玻璃套管的主要射線波長(zhǎng)是365鈉米第12頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日兩種裝置的不同(2)比色計(jì)中只有一種光源，只需要一個(gè)濾光板熒光計(jì)中有兩種輻射、三個(gè)濾光板:

濾光板1用于過(guò)濾紫外線，除去其中可見光濾光板2用于過(guò)濾熒光，以去除其他顏色的雜光；濾光板3可濾去熒光中夾雜的紫外線

第13頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日三，熒光分析的操作1.標(biāo)準(zhǔn)曲線法先配制一第列濃度由大到小的標(biāo)準(zhǔn)管C1，C2、C3、、、、、、C1為濃度最大的標(biāo)準(zhǔn)管作為起始濃度，置熒光計(jì)透光率為100，調(diào)節(jié)光柵使檢流計(jì)指零第14頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日然后再測(cè)一系列濃度較低的標(biāo)準(zhǔn)管的透光率，以濃度對(duì)透光率作標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線的另一作法是以空白溶液為起始濃度，置熒光計(jì)透光率于10或20處，調(diào)節(jié)光柵使檢流計(jì)指零，然后再測(cè)一系列濃度較高的標(biāo)準(zhǔn)管的透光率，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線。第15頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日2.比較法先配一標(biāo)準(zhǔn)溶液，其濃度應(yīng)略大于樣品溶液;濃度越接近，誤差越小以此標(biāo)準(zhǔn)溶液為準(zhǔn)，調(diào)節(jié)透光率在20~60之間的某一數(shù)值上然后測(cè)定樣品溶液及空白溶液的透光率。第16頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日由下式求得:C標(biāo)準(zhǔn)透光率為60C樣品的透光率為X空白溶液的透光率為Y第17頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日四.熒光分析的注意事項(xiàng)1.熒光的減退熒光物質(zhì)經(jīng)紫外線長(zhǎng)時(shí)間照射及空氣的氧化作用，會(huì)使熒光逐漸減退.2.試劑的濃度有些試劑能吸收紫外線，有顏色的試劑還有吸收熒光的作用，因此分析時(shí)所加試劑的量不可太多。第18頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日3.pH的影響大多數(shù)熒光反應(yīng)都受溶液酸堿度的影響，故熒光分析需在適合的酸堿度溶液中進(jìn)行。最適當(dāng)?shù)乃釅A度必須由實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。所用酸的種類也影響熒光的強(qiáng)度，例如，奎寧在硫酸溶液中的熒光較在鹽酸中的要強(qiáng)些。第19頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日4.溶劑許多有機(jī)物及金屬的有機(jī)絡(luò)合物，在乙醇溶液中的熒光比在水溶液中強(qiáng)。乙醇、甘油、丙酮、氯仿及苯都是常用的溶劑。熒光分析所用的有機(jī)試劑，在有機(jī)溶劑中大多有熒光，應(yīng)設(shè)法避免；一般避免的辦法是稀釋，或加入一部分水。第20頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日5.鹽類的影響能與試劑發(fā)生反應(yīng)的其他金屬鹽類都應(yīng)事先除去。堿金屬與銨鹽雖不參與反應(yīng)，但量太大亦有妨礙；強(qiáng)氧化劑、還原劑及絡(luò)合劑均不應(yīng)存在于溶液中。6.熒光強(qiáng)度達(dá)到最高點(diǎn)所需要的時(shí)間不同有的反應(yīng)加入試劑后熒光強(qiáng)度立即達(dá)到最高峰第21頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日有的反應(yīng)需要經(jīng)過(guò)15~30分鐘才能達(dá)到最高峰7.有機(jī)溶劑中常有產(chǎn)生熒光的雜質(zhì)，可用蒸餾法提純。橡皮塞、軟木塞及濾紙中也常有能溶于溶劑的一些帶熒光的物質(zhì)。

第22頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日六.總結(jié)熒光分析法靈敏度高，儀器設(shè)備相對(duì)簡(jiǎn)單，休積小，操作較簡(jiǎn)便反應(yīng)時(shí)間也較快

第23頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日20世紀(jì)90年代曾有兩位瑞士化學(xué)家提出一個(gè)叫μ-TAS的概念

什么是u-TAS???第24頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日μ-TAS就是把整個(gè)實(shí)驗(yàn)室的功能，包括采樣、稀釋、加試劑、反應(yīng)、分離、檢測(cè)等集成到盡可能小的操作平臺(tái)上。μ-TAS的進(jìn)樣量只有納升級(jí)(10-6L)甚至皮升級(jí)(10-12L)。當(dāng)然這就要求檢測(cè)反應(yīng)有高的靈敏度。

第25頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日而熒光法是目前公認(rèn)的最靈敏的檢測(cè)方法之一,它正適應(yīng)分析設(shè)備微型化、集成化、與便攜化的發(fā)展趨勢(shì)。但是它也有一些先天的不足限制了它的應(yīng)用，那就是只有少數(shù)化合物能發(fā)射熒光。這就要靠這座的各位精英們以后多多努力了

革命尚未成功，同志仍需努力啊?。?！

第26頁(yè)，共28頁(yè)，2023年，2月20日，星期日參考文獻(xiàn):<<空氣中有害物質(zhì)的測(cè)定方法>>

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生研究所編

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