注射劑滅菌工藝專家講座

注射劑滅菌工藝驗(yàn)證

漫談主講人：李新成杭州天杭空氣質(zhì)量檢測有限企業(yè)1注射劑滅菌工藝第1頁滅菌工藝驗(yàn)證必要性滅菌安全相關(guān)藥害事件美國：1971年3月，7個州8家醫(yī)院發(fā)生了405起敗血癥

中國：年8月，“欣弗”事件，包括十幾個省，160多起嚴(yán)重不良反應(yīng)，8人死亡注：引發(fā)藥害事件產(chǎn)品均經(jīng)過了無菌檢驗(yàn)注射劑滅菌工藝第2頁滅菌工藝驗(yàn)證必要性無菌檢驗(yàn)不足一：無菌定義理論上：無菌＝?jīng)]有任何活微生物實(shí)際上：無法證實(shí)產(chǎn)品中沒有活微生物存在無法對整批產(chǎn)品進(jìn)行100%檢驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果只是一個基于“可能性”判斷無菌檢驗(yàn)用培養(yǎng)基有其不足只進(jìn)行細(xì)菌和真菌檢驗(yàn)對結(jié)果判定是基于“是否在培養(yǎng)基中生長”培養(yǎng)條件（如溫度和時間）是有限我們工作環(huán)境及操作是在相對無菌狀態(tài)注射劑滅菌工藝第3頁滅菌工藝驗(yàn)證必要性無菌檢驗(yàn)不足二：產(chǎn)品污染率、無菌檢驗(yàn)抽樣量和無菌檢驗(yàn)“經(jīng)過”率，能夠用以下數(shù)學(xué)公式表示：

P=(1-q)nq：產(chǎn)品污染率

P：無菌檢驗(yàn)經(jīng)過率

n：無菌檢驗(yàn)抽樣量按照藥典要求２０瓶抽樣量，假設(shè)該批產(chǎn)品污染率為１％，則該批產(chǎn)品“經(jīng)過”無菌檢驗(yàn)概率為８２％注射劑滅菌工藝第4頁滅菌工藝驗(yàn)證必要性

我們看一下，當(dāng)固定污染率為0.1%，抽樣20瓶時，經(jīng)過無菌檢驗(yàn)經(jīng)過率：(1-0.001)20=98.0%檢出染菌概率為2.0%抽樣1000瓶時，經(jīng)過無菌檢驗(yàn)經(jīng)過率：(1-0.001)1000=36.7%檢出染菌概率為63.3%抽樣3000瓶時，經(jīng)過無菌檢驗(yàn)經(jīng)過率：(1-0.001)

3000=4.97%檢出染菌概率為95.03%注射劑滅菌工藝第5頁滅菌工藝驗(yàn)證必要性共識－－無菌檢驗(yàn)合格不能得出產(chǎn)品無菌結(jié)論

滅菌產(chǎn)品無菌確保不能依賴于最終產(chǎn)品無菌檢驗(yàn)，而是取決于生產(chǎn)過程中采取合格滅菌工藝、嚴(yán)格GMP管理和良好無菌確保體系

滅菌工藝驗(yàn)證是無菌確保必要條件

滅菌工藝經(jīng)過驗(yàn)證后，方可正式用于生產(chǎn)注射劑滅菌工藝第6頁附：無菌產(chǎn)品檢測取樣時機(jī)和位置無菌灌裝產(chǎn)品批開始、結(jié)束及重大故障和調(diào)整后最多24小時為一批USP<1211>天天灌裝產(chǎn)品應(yīng)分別做無菌檢驗(yàn)最終滅菌產(chǎn)品從滅菌柜中最冷點(diǎn)取樣對經(jīng)不一樣滅菌柜滅菌產(chǎn)品應(yīng)分別進(jìn)行無菌檢驗(yàn)注射劑滅菌工藝第7頁滅菌工藝驗(yàn)證中幾個慣用術(shù)語3

1.無菌確保值SAL：

中國藥典、美國藥典、歐洲藥典都將最終滅菌產(chǎn)品無菌確保水平要求為微生物污染概率不超出百萬分之一；采取無菌生產(chǎn)工藝產(chǎn)品，其無菌確保水平為微生物污染概率不超出千分之一

注射劑滅菌工藝第8頁42、D值：在一溫度下，殺滅90%微生物（或殘余率為10%）所需滅菌時間。3、Z值：

降低一個lgD值所需升高溫度，即滅菌時間降低到原來1/10所需升高溫度或在相同滅菌時間內(nèi)，殺滅99%微生物所需提升溫度。4、F值：

在一定滅菌溫度（T）下給定Z值所產(chǎn)生滅菌效果與在參比溫度（T0）下給定Z值所產(chǎn)生滅菌效果相同時所相當(dāng)時間。F值以min為單位。

注：參比溫度121℃時為F0,170℃時為FH。滅菌工藝驗(yàn)證中幾個慣用術(shù)語注射劑滅菌工藝第9頁滅菌工藝驗(yàn)證中幾個慣用術(shù)語5、過分殺滅法

F0≥12微生物殘余概率＜10-66、殘余概率法8≤F0＜12微生物殘余概率＜10-67、無菌生產(chǎn)工藝

無菌確保普通只能到達(dá)10-3水平注射劑滅菌工藝第10頁滅菌工藝驗(yàn)證中幾個慣用術(shù)語8滅菌率指在某一溫度T(℃)下滅菌lmin所取得標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間L

L＝F0/FT＝D121℃/DT＝10(T－121)/Z9標(biāo)準(zhǔn)滅菌時間系滅菌過程賦予一個產(chǎn)品121℃下等效滅菌時間F0F0=FT×10(T－121)/Z=ΔtΣ10(T－121)/10注射劑滅菌工藝第11頁5歐盟滅菌方法選擇對策

歐盟1999年8月正式開始執(zhí)行滅菌方法選擇決議樹決議樹作用是在考慮各種復(fù)雜原因情況下輔助選擇最正確滅菌方法注射劑滅菌工藝第12頁6溶液劑型產(chǎn)品滅菌方法選擇決議樹產(chǎn)品是否能夠在121℃濕熱滅菌15分鐘產(chǎn)品是否能夠濕熱滅菌F0≥8分鐘，到達(dá)SAL≤10-6采取高壓滅菌鍋121℃15分鐘是否處方是否能夠經(jīng)過微生物滯留過濾器過濾無菌配藥和灌封采取濕熱滅菌F0≥8分鐘除菌過濾和無菌工藝相結(jié)合是否是否注射劑滅菌工藝第13頁7非溶液劑型、半固體或干粉產(chǎn)品滅菌方法選擇決議樹產(chǎn)品是否能夠在160℃干熱滅菌120分鐘產(chǎn)品是否能夠在另外一個時間和溫度條件下標(biāo)準(zhǔn)周期干熱滅菌到達(dá)SAL≤10-6采取160℃干熱滅菌120分鐘是否產(chǎn)品是否能夠用其它非干熱方法滅菌，如電離輻射，吸收最小劑量≥25KGY采取另一個替換時間和溫度條件下標(biāo)準(zhǔn)周期干熱滅菌到達(dá)SAL≤10-6是否產(chǎn)品是否能夠使用經(jīng)過驗(yàn)證稍低輻射劑量滅菌（參見ISO11137）采取最小輻射吸收最小劑量≥25KGY進(jìn)行輻射滅菌是否處方是否能夠經(jīng)過微生物滯留過濾器過濾采取經(jīng)過驗(yàn)證輻射劑量滅菌是否無菌配藥和灌封除菌過濾和無菌工藝相結(jié)合是否注射劑滅菌工藝第14頁8決議樹越往下，風(fēng)險(xiǎn)越大需要提供必要證據(jù)越多注射劑滅菌工藝第15頁10滅菌工藝驗(yàn)證要求驗(yàn)證內(nèi)容：空載熱分布滿載熱分布熱穿透試驗(yàn)微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)（殘余概率法）滅菌前微生物污染水平----數(shù)量和耐熱性

----過程控制注射劑滅菌工藝第16頁找出冷點(diǎn)多個溫度探頭均勻/重點(diǎn)分布在腔室內(nèi)，重復(fù)運(yùn)行代表性滅菌程序，統(tǒng)計(jì)個點(diǎn)溫度改變曲線，計(jì)算各點(diǎn)溫差經(jīng)過比較各點(diǎn)溫度與平均溫度差異確定冷點(diǎn)11空載熱分布試驗(yàn)注射劑滅菌工藝第17頁找出裝載方式下冷點(diǎn)

以空載試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)更靠近實(shí)際情況12滿載熱分布試驗(yàn)注射劑滅菌工藝第18頁熱穿透試驗(yàn)測定產(chǎn)品實(shí)際溫度和F0值以熱分布（空載、滿載）試驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ)，深入確定實(shí)際樣品（或模擬樣品）冷點(diǎn).主要標(biāo)準(zhǔn)冷點(diǎn)F0－平均F0≤2min13注射劑滅菌工藝第19頁

14熱穿透試驗(yàn)注意：同品種不一樣濃度——考查不一樣濃度對熱穿透影響不一樣包裝規(guī)格——進(jìn)行最大和最小包裝規(guī)格試驗(yàn)不一樣裝載量——進(jìn)行最小和最大裝載量試驗(yàn)不一樣滅菌溫度——進(jìn)行最高溫度條件下試驗(yàn)注射劑滅菌工藝第20頁15

證實(shí)經(jīng)過該工藝能殺滅一定污染量和D值微生物

--生物指示劑

--依據(jù)D值計(jì)算接種量

--植入芽孢產(chǎn)品放在冷點(diǎn)部位

--運(yùn)行滅菌程序后含芽孢產(chǎn)品應(yīng)經(jīng)過無菌檢驗(yàn)微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)注射劑滅菌工藝第21頁以上試驗(yàn)普通應(yīng)連續(xù)進(jìn)行三次空載、滿載熱分布試驗(yàn)——考查滅菌設(shè)備特征和情況

熱穿透和微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)——考查滅菌設(shè)備在執(zhí)行特定滅菌工藝時賦予產(chǎn)品F0值，以及對微生物孢子實(shí)際殺滅效果。注射劑滅菌工藝第22頁滅菌前產(chǎn)品微生物控制監(jiān)控原因①產(chǎn)品滅菌前微生物監(jiān)控是國際規(guī)范要求：世界衛(wèi)生組織GMPl992版第17.50款要求，應(yīng)制訂產(chǎn)品滅菌前微生物污染控制標(biāo)準(zhǔn)，這一標(biāo)準(zhǔn)與所采取(滅菌)方法有效性及熱原污染風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。②注射劑滅菌后無菌確保值與滅菌前產(chǎn)品微生物污染程度及污染菌耐熱性相關(guān)，對滅菌前微生物污染情況進(jìn)行檢控是對產(chǎn)品作無菌評價(jià)先決條件。③控制滅菌前微生物污染程度是控制產(chǎn)品熱原污染主要伎倆。注射劑滅菌工藝第23頁滅菌前產(chǎn)品微生物控制監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)前歐洲一些大容量注射劑生產(chǎn)企業(yè)采取標(biāo)準(zhǔn)以下：①每100ml藥液中污染菌不得超出100個。②在設(shè)定滅菌程序下，污染菌耐熱性(即D值)不造成滅菌后產(chǎn)品微生物污染概率大于10－6。注射劑滅菌工藝第24頁滅菌前產(chǎn)品微生物控制監(jiān)控方法(1)取樣在正常生產(chǎn)過程中，從每批產(chǎn)品灌裝開始、中間及結(jié)尾各取一瓶灌封好產(chǎn)品作滅菌前微生物監(jiān)控檢驗(yàn)。應(yīng)該使用事先滅菌并做好標(biāo)識瓶子取樣。(2)試驗(yàn)方法①污染水平檢驗(yàn)：先用滅菌5％吐溫充分濕潤0.45μm濾膜，然后定量過濾藥液，將此濾膜移至營養(yǎng)瓊脂平板上，在30～35℃培養(yǎng)3～7天，計(jì)數(shù)。②耐熱性檢驗(yàn)：另用一張0.45μm濾膜，經(jīng)滅菌5％吐溫充分濕潤后，過濾生物負(fù)荷檢驗(yàn)所剩下藥液樣品。將此濾膜轉(zhuǎn)移入裝有沒有菌待監(jiān)測產(chǎn)品試管中，在沸水浴上煮沸30min，然后在30～35℃下在硫乙醇酸鹽肉湯中培養(yǎng)，觀察是否有耐熱菌生長。

注射劑滅菌工藝第25頁滅菌前產(chǎn)品微生物控制當(dāng)污染水平超標(biāo)按時，應(yīng)對污染菌進(jìn)行判別，調(diào)查污染菌起源并取對應(yīng)糾正辦法。當(dāng)耐熱性檢驗(yàn)發(fā)覺藥液存在耐熱菌污染時，應(yīng)測定污染菌D值或采取定時沸騰法將它和已知生物指示劑D值作比較，然后依據(jù)滅菌F0值及污染菌耐熱性對產(chǎn)品無菌作出評價(jià)。

假如曝?zé)岷髽悠窓z測結(jié)果為不長菌，則說明產(chǎn)品中無耐熱孢子注射劑滅菌工藝第26頁滅菌器溫度均勻度標(biāo)準(zhǔn)USP24在〈1211〉中要求，干熱滅菌器在不低于250℃空載運(yùn)行時，腔室各點(diǎn)允許溫差范圍在±15℃。USP24提到：在121℃下滅菌時，各測溫點(diǎn)之間溫差允許在±1℃之內(nèi)。JB1－中要求：大、小容量注射劑滅菌器熱分布試驗(yàn)中，冷點(diǎn)溫度與腔室平均溫度之差≤±1℃；熱穿透試驗(yàn)中，冷點(diǎn)F0與腔室平均F0之差≤2min.注射劑滅菌工藝第27頁干熱滅菌、除熱原標(biāo)準(zhǔn)BP1993年版要求：僅以滅菌為最終目標(biāo)干熱滅菌系統(tǒng)，必須確保其最小FH值大于170℃60min。干熱除熱原必須確保其暴露實(shí)際溫度和時間相當(dāng)于250℃30min。

說明：250℃30min除熱原效應(yīng)FH＝900

中國藥典要求：

160~170℃×

120min;

170~180℃×60min；

250℃×45min（可除熱原）

說明：250℃×45min除熱原效應(yīng)FH＝1365。注射劑滅菌工藝第28頁隧道式滅菌干燥機(jī)除熱原標(biāo)準(zhǔn)口服液瓶灌裝聯(lián)動線隧道式滅菌干燥機(jī)JB7.3－中要求：口服液瓶、抗生素瓶在隧道高溫區(qū)300℃以上最少5min。除熱原效應(yīng)FH＝1276；安瓿隧道式滅菌干燥機(jī)JB2.3－中要求：安瓿在隧道高溫區(qū)300℃以上最少4min。除熱原效應(yīng)FH＝1021；表冷式隧道干燥機(jī)標(biāo)準(zhǔn)：FH＝1365（與藥典接規(guī)）注射劑滅菌工藝第29頁說明過去，很多人將流通蒸氣滅菌法誤認(rèn)為是終端滅菌法。其實(shí)流通蒸氣滅菌法應(yīng)以無菌生產(chǎn)工藝（除菌過濾，嚴(yán)格控制與藥液接觸設(shè)備、器具和環(huán)境微生物污染水平等）為基礎(chǔ)，流通蒸氣加熱只是無菌生產(chǎn)工藝補(bǔ)充伎倆，不計(jì)算F0，微生物殘余概率＜10-3

流通蒸氣100℃加熱30分鐘，相當(dāng)于F0值0.24注射劑滅菌工藝第30頁滅菌器驗(yàn)證過程中曾碰到幾個問題1、濕熱滅菌柜腔室內(nèi)溫度上下分層－－排氣不徹底；－－疏水閥堵塞。以前，我們在杭州一家藥廠一臺傳統(tǒng)滅菌柜驗(yàn)證過程中曾碰到過這個問題。

2、隧道式烘箱溫度控制顯示與驗(yàn)證儀溫度差異很大－－測溫探頭質(zhì)量問題；－－測溫探頭位置（高度）。我們在富陽一家藥廠驗(yàn)證時曾碰到過這個問題。注射劑滅菌工藝第31頁滅菌器驗(yàn)證過程中曾碰到幾個問題3、隧道式烘箱腔室溫度分布差異很大－－部分加熱管損壞；－－進(jìn)風(fēng)、回風(fēng)調(diào)整問題。在寧波一家藥廠驗(yàn)證時曾碰到過這個問題。注射劑滅菌工藝第32頁國內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗(yàn)證常見缺點(diǎn)無包裝規(guī)格無裝載方式未對每一個產(chǎn)品每一個包裝規(guī)格每一個裝載方式進(jìn)行驗(yàn)證采取留點(diǎn)溫度計(jì)監(jiān)測溫度無溫度探頭校準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)驗(yàn)證滅菌工藝與實(shí)際工藝不一致未驗(yàn)證最差滅菌條件僅針對生產(chǎn)線進(jìn)行驗(yàn)證，未結(jié)合產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)證設(shè)定驗(yàn)證合格標(biāo)準(zhǔn)達(dá)不到無菌確保水平（SAL）10-6注射劑滅菌工藝第33頁國內(nèi)企業(yè)滅菌工藝驗(yàn)證常見缺點(diǎn)生物指示劑使用不規(guī)范國內(nèi)缺乏一些無菌藥品生產(chǎn)必備檢測儀器－－D值測定儀企業(yè)微生物試驗(yàn)室能力微弱－－缺乏專業(yè)人員－－缺乏菌種分離判別條件和能力無菌生產(chǎn)工藝未進(jìn)行培養(yǎng)基灌裝和微生物截流量試驗(yàn)注射劑滅菌工藝第34頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答

1、問：洗烘灌聯(lián)動線在正常運(yùn)行時，玻璃瓶經(jīng)過隧道烘箱滅菌后即進(jìn)行灌裝，但當(dāng)灌裝機(jī)出現(xiàn)故障或不間斷檢修情況下，受聯(lián)動線限制，必定會造成隧道烘箱內(nèi)一部分玻璃瓶將處于高溫區(qū)，長時間滯留時會不會對瓶本身產(chǎn)生影響？答：要看什么材質(zhì)，能夠做驗(yàn)證‘，烘洗后做耐酸耐堿試驗(yàn)。

2、問：熱風(fēng)循環(huán)烘箱溫度時有失控現(xiàn)象，怎樣處理？答：能夠檢驗(yàn)一下溫度傳感器是否失靈，電磁閥是否工作正常：一、更換溫度傳感器，二、更換溫度控制儀。注射劑滅菌工藝第35頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答

3、問：玻璃瓶在隧道烘箱里冷爆原因和風(fēng)速相關(guān)系嗎？答：玻璃瓶爆裂，其原因就在于溫差或是外力擊打，此問題中原因是溫差，可能是風(fēng)速原因，就是說冷卻得不均衡，或是移動過程中接觸到低溫物體，尤其是熱傳導(dǎo)較快金屬物體。再有就是所用玻璃瓶質(zhì)量不很好，提議選取正規(guī)廠家生產(chǎn)。注射劑滅菌工藝第36頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答

4、在對濕熱滅菌器進(jìn)行熱分布、熱穿透驗(yàn)證時，假如柜內(nèi)找到冷點(diǎn)在3次驗(yàn)證中不一樣，該怎樣處理？

答：普通來說，空載熱分布冷點(diǎn)應(yīng)該是在確定位置周圍，不然就可能是設(shè)備、壓力、空氣置換不完全、蒸汽質(zhì)量等原因引發(fā)。

對于裝載熱穿透，大容量注射劑（LVP，>100ml）冷點(diǎn)位于產(chǎn)品幾何中心和沿縱軸位于產(chǎn)品底部，但需要驗(yàn)證確認(rèn)。冷點(diǎn)定位在小容量注射劑中并不經(jīng)典，因?yàn)槿芤杭訜崴俾蕩缀跖c滅菌器相同。

還有，容器方向也會影響冷點(diǎn)位置，當(dāng)容器旋轉(zhuǎn)或翻轉(zhuǎn)時，可能不存在可區(qū)分冷點(diǎn)。

假如裝載不變，容量相同，蒸汽穿透不存在阻隔等，冷點(diǎn)依然無法重現(xiàn)，則應(yīng)檢驗(yàn)設(shè)備、工藝、壓力、蒸汽質(zhì)量等方面可能存在不確定性。注射劑滅菌工藝第37頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答

5、熱穿透試驗(yàn)中模擬樣品是什么概念，是指試驗(yàn)室小批量樣品嗎？

答：熱穿透試驗(yàn)中模擬樣品是指熱穿透性能與真實(shí)樣品一致樣品，不是試驗(yàn)室小批量樣品。注射劑滅菌工藝第38頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答

6、請問滅菌前微生物污染水平和耐熱性（D值）測試方法？答：微生物污染水平通常采取濾膜過濾法截留微生物，再將濾膜轉(zhuǎn)移到固體培養(yǎng)基表面，培養(yǎng)并作微生物計(jì)數(shù)。應(yīng)注意過濾體積、截留微生物數(shù)量，確保足夠檢出率（足量過濾量）和可計(jì)數(shù)性（截留微生物太多就沒法計(jì)數(shù)了）。每批產(chǎn)品都進(jìn)行耐熱性測試并非D值測試，而是所謂沸騰試驗(yàn)－一個定性試驗(yàn)。將截留了微生物濾膜放入裝有同種產(chǎn)品藥液試管中，進(jìn)行水浴煮沸15分鐘或更長時間，對該藥液進(jìn)行無菌檢驗(yàn)，如陰性則經(jīng)過，呈陽性，說明污染菌是耐熱菌，則需要深入測D值。99%以上檢品是非耐熱菌。D值測定相當(dāng)復(fù)雜，請參考《藥品生產(chǎn)驗(yàn)證指南》（藍(lán)皮書，國家藥監(jiān)局編）第三篇第三章第一節(jié)，有詳細(xì)介紹。注射劑滅菌工藝第39頁附：D值測定法生物指示劑耐熱性測定儀在滅菌過程中形成矩形脈沖曲線，即升溫及降溫極快，能保持恒定溫度，曝?zé)徇^程輕易計(jì)時。假設(shè)條件微生物存活數(shù)從N0到滅菌終點(diǎn)一直與曝?zé)釙r間呈線性關(guān)系（對數(shù)規(guī)則）。注射劑滅菌工藝第40頁方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）①最可能數(shù)測定法將一組樣品（最少10個樣本）置于設(shè)定滅菌溫度下，加熱到設(shè)定時間后，分別作無菌檢驗(yàn)。當(dāng)滅菌溫度T為121℃時，可用下式計(jì)算D值DT＝F0/lgN0-lg[2.303lg(n/q)]式中：n――樣品總數(shù)

q――曝?zé)崽幚砗鬅o菌樣品數(shù)注射劑滅菌工藝第41頁方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）②估算法系列組（每組最少10個樣品），置于預(yù)定溫度下，按等差遞增方式設(shè)置不一樣曝?zé)釙r間，分別進(jìn)行熱處理，處理后樣品放入無菌液體中適宜溫度下培養(yǎng)，統(tǒng)計(jì)每組樣品中沒有微生物生長樣品數(shù)，按下表方式進(jìn)行排列注射劑滅菌工藝第42頁選擇從全部生長最長曝?zé)釙r間組（B）到顯示完全不生長最短曝?zé)釙r間組（G）之間數(shù)據(jù)計(jì)算D值。首先計(jì)算出孢子完全殺滅時間tt=tk-d/2-(d/10×∑f)式中：tk――陰性分?jǐn)?shù)范圍下限（全部樣品不長菌所需最短曝?zé)釙r間）

d――等差值注射劑滅菌工藝第43頁方法一：不生長分?jǐn)?shù)法（陰性分?jǐn)?shù)法）然后依據(jù)下式計(jì)算D值D＝t/(lgN0+0.2507)假設(shè)N0＝105，其它試驗(yàn)數(shù)據(jù)如上表所表示，則D值計(jì)算為

t＝15－2/2-（2/10×26）=8.8(min)

D=8.8/(5+0.2507)=1.7(min)注射劑滅菌工藝第44頁方法二：存活曲線法測試兩個樣品（最少），在設(shè)定溫度下（如121℃）分別取兩個不一樣曝?zé)釙r間，然后將熱處理后樣品及對照樣品（未經(jīng)熱處理樣品）采取平皿計(jì)數(shù)法或經(jīng)薄膜過濾并置于適當(dāng)培養(yǎng)基表面培養(yǎng)方法對每個樣品中存活微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)（NS），將試驗(yàn)數(shù)據(jù)平均值取慣用對數(shù)（lg），對對應(yīng)曝?zé)釙r間F0作圖，可得如圖所表示存活曲線注射劑滅菌工藝第45頁在存活曲線上，從微生物差值為一個對數(shù)單位二個點(diǎn)分別作X軸和Y軸平行線，在X軸上即可求得D值，也可用下面公式計(jì)算D121℃＝F0/（lgN0－lgNS）舉例：D值測定中曝?zé)釙r間為5min,而N0＝105，NS＝102，則D121℃＝5/(lg105-lg102)=5/3=1.7(min)注射劑滅菌工藝第46頁方法二：存活曲線法從上圖中也能夠看出，D值為存活曲線斜率負(fù)倒數(shù)（－1/K），所以D值可在存活曲線直線段，用未加權(quán)最小二次線性回歸分析法按下式求得式中u――曝?zé)釙r間

y－－曝?zé)釛l件下存活菌落數(shù)平均值

n――所得初驗(yàn)數(shù)據(jù)組數(shù)注射劑滅菌工藝第47頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答7、對于選擇殘余概率法最終滅菌產(chǎn)品，假如滅菌前每批檢測微生物程度，而微生物程度檢測時間為72小時，而實(shí)際連續(xù)生產(chǎn)生產(chǎn)周期遠(yuǎn)遠(yuǎn)短于72小時，其檢測結(jié)果僅是對滅菌后產(chǎn)品無菌確保水平參考嗎？

答：顯然滅菌前微生物含量檢驗(yàn)結(jié)果遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于生產(chǎn)過程，其目標(biāo)不是用于對當(dāng)批產(chǎn)品中間控制。該檢驗(yàn)意義主要有兩項(xiàng)：第一，用于評價(jià)該批產(chǎn)品無菌確保水平；第二，長久積累了多批滅菌前微生物含量數(shù)據(jù)后，能夠?qū)ιa(chǎn)系統(tǒng)在滅菌前各工藝步驟微生物污染情況作整體評定，從而指示該生產(chǎn)體系是否有效地將微生物污染控制在很好水平，是否需要進(jìn)行改進(jìn)等。注射劑滅菌工藝第48頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答

8、請問微生物種類、數(shù)量研究方法？所需設(shè)備？假如采取殘余概率法，是否在生產(chǎn)過程中必須對微生物水平進(jìn)行測定？答：微生物污染程度－即數(shù)量檢驗(yàn)?zāi)軌虬凑账幍涫蛰d微生物程度檢驗(yàn)方法進(jìn)行；微生物種類能夠從以下幾方面依次展開：1）經(jīng)過肉眼觀察菌落形態(tài)；2）鏡檢形態(tài)和運(yùn)動性；3）普通生化試驗(yàn)：革蘭氏染色或3％KOH試驗(yàn)；4）生化判定（即API試驗(yàn)）判別到種。采取殘余概率法時，應(yīng)該檢測產(chǎn)品滅菌前微生物污染水平，包含污染菌煮沸試驗(yàn)（如100℃，15分鐘）和微生物計(jì)數(shù)。

注射劑滅菌工藝第49頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答

9、過分殺滅法是否確定不需進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)？答：過分殺滅法內(nèi)涵是產(chǎn)品中微生物下降12個對數(shù)，微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)是證實(shí)微生物殘余概率小于10-6，故過分殺滅法可不進(jìn)行微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)。注射劑滅菌工藝第50頁注射劑生產(chǎn)常見問題問答

10、怎樣進(jìn)行藥液儲存周期驗(yàn)證，儲存周期起點(diǎn)、終點(diǎn)怎樣確定，使配制完成后→滅菌前，還是過濾后→滅菌前，取樣點(diǎn)怎樣設(shè)置，檢驗(yàn)方法及合格判定標(biāo)準(zhǔn)怎樣確定？

答：進(jìn)行藥液儲存時間驗(yàn)證目標(biāo)是為了確保藥液微生物水平控制在下道工藝要求范圍內(nèi)并確保對產(chǎn)品無菌性和內(nèi)毒素等質(zhì)量指標(biāo)無不良影響。普通來講，配液完成后到無菌過濾前，或過濾完成后到滅菌前（終端滅菌產(chǎn)品）是考查重點(diǎn)，方法和標(biāo)準(zhǔn)需要依據(jù)自己產(chǎn)品工藝特點(diǎn)確定。注射劑滅菌工藝第51頁討論1:隧道式滅菌干燥機(jī)傳輸速度提請注意審核一下你們注射劑工藝規(guī)程中，是否要求干熱滅菌干燥機(jī)傳輸帶運(yùn)行速度？沒有制訂傳輸帶運(yùn)行速度，滅菌除熱原效果（時間）靠什么確保？再請大家審核一下你們以前做驗(yàn)證方案或驗(yàn)證匯報(bào)（包含委托專業(yè)企業(yè)進(jìn)行驗(yàn)證），里面有沒有表達(dá)出“傳輸速度”這個關(guān)鍵驗(yàn)證點(diǎn)呢？倘若這個點(diǎn)沒有出現(xiàn)在方案或匯報(bào)中，你驗(yàn)證是什么呢？注射劑滅菌工藝第52頁討論2：裝載熱分布和熱穿透合做試驗(yàn)分析濕熱滅菌柜驗(yàn)證時，裝載熱分布和熱穿透試驗(yàn)?zāi)闶欠珠_做還合在一起做呢？當(dāng)你合在一起做時候，哪些探頭是用于熱分布，哪些是用于熱穿透，你標(biāo)注清楚了嗎？你合在一起做目標(biāo)描述了嗎？對兩組數(shù)據(jù)分析了嗎？濕熱滅菌柜測溫探頭裝置方式，不一樣企業(yè)有時是不一樣，有是暴露在滅菌環(huán)境中，測空氣溫度，有則裝在模擬產(chǎn)品中，測滅菌產(chǎn)品內(nèi)部溫度。也就是說，有和熱分布是一致，有和熱穿透試驗(yàn)是一致，不一樣安裝方式對于你制訂滅菌程序時影響你考慮了嗎？注射劑滅菌工藝第53頁討論3：接二連三注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么齊二藥事件不法商人王桂平偽造藥品生產(chǎn)許可證等證件，于２００５年１０月將工業(yè)原料二甘醇假冒藥用輔料丙二醇出售給齊二藥?；?yàn)室主任陳桂芬等人未將檢測圖譜與“藥用標(biāo)準(zhǔn)丙二醇圖譜”進(jìn)行對比判別，并在發(fā)覺檢驗(yàn)樣品“相對密度值”與標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重不符情況下，將其改為正常值，簽發(fā)合格證，致使假藥“亮菌甲素注射液”出籠并造成１１名患者使用該產(chǎn)品后出現(xiàn)急性腎功效衰竭并死亡。注射劑滅菌工藝第54頁討論3：接二連三注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么“欣弗”事件安徽華源生物藥業(yè)有限企業(yè)年6月至7月生產(chǎn)克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按同意工藝參數(shù)滅菌，降低滅菌溫度，縮短滅菌時間，增加滅菌柜裝載量，影響了滅菌效果。經(jīng)中國藥品生物制品檢定所對相關(guān)樣品進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果表明，無菌檢驗(yàn)和熱原檢驗(yàn)不符合要求。工藝參數(shù)不得任意進(jìn)行更改注射劑滅菌工藝第55頁討論3：接二連三注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么甲氨蝶呤事件上海華聯(lián)制藥廠在生產(chǎn)過程中，現(xiàn)場操作人員將硫酸長春新堿尾液混于注射用甲氨蝶呤及鹽酸阿糖胞苷等批號藥品中，造成了多個批次藥品被硫酸長春新堿污染，造成重大藥品生產(chǎn)質(zhì)量責(zé)任事故標(biāo)識、清場、工作態(tài)度、培訓(xùn)注射劑滅菌工藝第56頁討論3：接二連三注射劑產(chǎn)品出事提醒些什么完達(dá)山刺五加注射液事件

年7月1日，昆明特大暴雨造成庫存刺五加注射液被雨水浸泡。完達(dá)山藥業(yè)企業(yè)云南銷售人員張某從完達(dá)山藥業(yè)企業(yè)調(diào)來包裝標(biāo)簽，更換后銷售。正是這些被雨水浸泡過產(chǎn)品，致使3名使用該藥品患者死亡。

二次污染、貯存條件、標(biāo)簽管理注射劑滅菌工藝第57頁附件1：滅菌器驗(yàn)證流程1.首次驗(yàn)證

2.偏差管理、變更控制

3.再驗(yàn)證

4.階段性風(fēng)險(xiǎn)評定

注射劑滅菌工藝第58頁首次驗(yàn)證用戶要求

URS（UserRequirementSpecification）

︱功效標(biāo)準(zhǔn)

FDS（FunctionalDesignSpecification

︱設(shè)計(jì)確認(rèn)

DQ（DesignQualification）

︱工廠測試

FAT（FactoryAcceptanceTest）

︱現(xiàn)場測試

SAT（SiteAcceptanceTest）︱安裝確認(rèn)

IQ（InstallationQualification）︱運(yùn)行確認(rèn)

OQ（OperationalQualification）︱性能確認(rèn)

PQ（PerformanceQualification）注射劑滅菌工藝第59頁首次驗(yàn)證－－用戶要求URS1.工藝描述(產(chǎn)品,部件)生產(chǎn)流程介紹、滅菌工藝、產(chǎn)品特征,物料特征、產(chǎn)量、滅菌效果到達(dá)要求,(Temp&Time;FO)等2.滅菌柜驗(yàn)證主要合格標(biāo)準(zhǔn)3.一些指南要求4.環(huán)境和安全要求5.技術(shù)要求及布局要求機(jī)械部分要求電氣部分要求控制系統(tǒng)要求6.介質(zhì)要求注射劑滅菌工藝第60頁URS關(guān)注點(diǎn)對于自己列出要求,首先要自己判斷是否了解，是否合理因?yàn)樵O(shè)備大都是按標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計(jì),必須確保供給商對URS仔細(xì)閱讀注射劑滅菌工藝第61頁首次驗(yàn)證－－功效標(biāo)準(zhǔn)FDS由供給商提供設(shè)備控制系統(tǒng)對驗(yàn)證設(shè)計(jì)也是FDS一部分

大多設(shè)備FDS都是針對型號編寫,能夠要求供給商提供FDS/URS符合表注射劑滅菌工藝第62頁首次驗(yàn)證－－設(shè)計(jì)確認(rèn)DQDQ參考資料:URS/FDS/圖紙/法規(guī)確保設(shè)計(jì)滿足URS和法規(guī)要求對于FDS和URS不符合項(xiàng),需要作出決定是整改還是接收

從DQ開始,全部文件變更都是GMP檢驗(yàn)范圍!注射劑滅菌工藝第63頁首次驗(yàn)證－－工廠測試FAT在出廠之前對設(shè)備進(jìn)行整體測試對制造文件詳細(xì)檢驗(yàn)材料(材質(zhì)證實(shí))焊接檢驗(yàn)壓力容器證書對于IQ/OQ中一些無法檢驗(yàn)項(xiàng)目,需要安排在FAT中進(jìn)行，如：一些控制功效模擬,一些挑戰(zhàn)試驗(yàn)注射劑滅菌工藝第64頁首次驗(yàn)證－－現(xiàn)場測試SAT設(shè)備在現(xiàn)場組裝完成后進(jìn)行整體測試確保系統(tǒng)能按設(shè)計(jì)要求正常運(yùn)轉(zhuǎn)是對員工進(jìn)行培訓(xùn)機(jī)會開始準(zhǔn)備SOP能夠作為IQ準(zhǔn)備注射劑滅菌工藝第65頁首次驗(yàn)證－－安裝確認(rèn)IQ文件檢驗(yàn) 儀表與管道檢驗(yàn)介質(zhì)檢驗(yàn)設(shè)備主要特征及安全特征檢驗(yàn)注射劑滅菌工藝第66頁首次驗(yàn)證－－運(yùn)行確認(rèn)OQ儀表校準(zhǔn)（控制用儀表和統(tǒng)計(jì)用儀表）LOOP測試安全檢驗(yàn)報(bào)警測試單項(xiàng)功效測試整體性能測試程序運(yùn)行電子統(tǒng)計(jì)和電子署名測試注射劑滅菌工藝第67頁首次驗(yàn)證－－性能確認(rèn)PQ1前提條件滅菌柜IQ、OQ完成程序及裝載預(yù)測試完成純蒸汽PQ第一第二階段完成壓縮空氣PQ完成驗(yàn)證儀器確實(shí)認(rèn)完成SOP完成,所用程序和裝載方式確定人員培訓(xùn)完成全部測試材料準(zhǔn)備完成注射劑滅菌工藝第68頁首次驗(yàn)證－－性能確認(rèn)PQ2.PQ中主要測試項(xiàng)目空腔體溫度分布最小裝載溫度分布最大裝載溫度分布中間裝載溫度分布(依據(jù)實(shí)際情況)微生物挑戰(zhàn)試驗(yàn)泄漏率測試AirDetector測試對于每一個測試,重復(fù)三次注射劑滅菌工藝第69頁滅菌驗(yàn)證一些基本要求驗(yàn)證用儀器必須提供校準(zhǔn)證書熱電偶/電阻在使用前和使用后都必須進(jìn)行校準(zhǔn)對于大容量瓶子,熱電偶/電阻在瓶子中位置必須進(jìn)行確認(rèn)假如采取替換物質(zhì)進(jìn)行PQ,必須進(jìn)行等同性測試必須確定產(chǎn)品滅菌接收標(biāo)準(zhǔn)F0值范圍對于濕熱滅菌柜,需要考慮平衡時間對于搜集數(shù)據(jù),必須及時進(jìn)行分析,總結(jié)注射劑滅菌工藝第70頁偏差管理和變更控制對于驗(yàn)證過程中出現(xiàn)偏差必須遵照偏差管理流程假如需要變更,則還需要遵照變更流程注射劑滅菌工藝第71頁再驗(yàn)證滅菌程序和裝載發(fā)生改變后,必須進(jìn)行再驗(yàn)證滅菌柜使用一定周期后,必須對程序和裝載進(jìn)行再次確認(rèn).通常為一年再驗(yàn)證策略是列出程序和裝載列表,有選擇地對關(guān)鍵裝載進(jìn)行再驗(yàn)證注射劑滅菌工藝第72頁風(fēng)險(xiǎn)評定幾個術(shù)語：

風(fēng)險(xiǎn)：是危害發(fā)生可能性和嚴(yán)重性組合。風(fēng)險(xiǎn)管理：即系統(tǒng)性應(yīng)用管理方針、程序?qū)崿F(xiàn)對目標(biāo)、任務(wù)風(fēng)險(xiǎn)分析、評價(jià)和控制。風(fēng)險(xiǎn)分析：利用有用信息和工具，對危險(xiǎn)進(jìn)行識別、評價(jià)。風(fēng)險(xiǎn)控制：即制訂減小風(fēng)險(xiǎn)計(jì)劃和對風(fēng)險(xiǎn)降低計(jì)劃執(zhí)行，及執(zhí)行后結(jié)果評價(jià)。注射劑滅菌工藝第73頁風(fēng)險(xiǎn)管理有什么風(fēng)險(xiǎn)?從哪兒來?對什么有影響?嚴(yán)重程度怎樣?我們怎樣應(yīng)對?注射劑滅菌工藝第74頁風(fēng)險(xiǎn)管理應(yīng)用程序風(fēng)險(xiǎn)回顧

風(fēng)險(xiǎn)評定風(fēng)險(xiǎn)評價(jià)

不接收風(fēng)險(xiǎn)控制

風(fēng)險(xiǎn)分析

風(fēng)險(xiǎn)消減

風(fēng)險(xiǎn)確認(rèn)

事件回顧

風(fēng)險(xiǎn)接收

開始風(fēng)險(xiǎn)管理程序

風(fēng)險(xiǎn)管理結(jié)果

風(fēng)險(xiǎn)評定工具

風(fēng)險(xiǎn)信息交流注射劑滅菌工藝第75頁風(fēng)險(xiǎn)管理過程風(fēng)險(xiǎn)評定對危害源判定和對接觸這些危害源造成風(fēng)險(xiǎn)分析和評定1）什么時候犯錯2）犯錯可能性有多大3）結(jié)果是什么（嚴(yán)重性）風(fēng)險(xiǎn)控制制訂降低和/或接收風(fēng)險(xiǎn)決定1）風(fēng)險(xiǎn)是否在可接收水平以上？2）怎么才能降低、控制或消除風(fēng)險(xiǎn)3）在利益、風(fēng)險(xiǎn)和資源間合適平衡點(diǎn)是什么？4）作為判定風(fēng)險(xiǎn)控制結(jié)果而被引入新風(fēng)險(xiǎn)是否處于受控狀態(tài)風(fēng)險(xiǎn)通報(bào)風(fēng)險(xiǎn)回顧決議制訂人及其它人員之間交換或分享風(fēng)險(xiǎn)及其管理信息風(fēng)險(xiǎn)管理過程結(jié)果應(yīng)結(jié)合新知識與經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行回顧風(fēng)險(xiǎn)評定風(fēng)險(xiǎn)評定注射劑滅菌工藝第76頁質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)評定風(fēng)險(xiǎn)評定是基于對危害發(fā)生頻次和危害程度這兩方面考慮而得出綜合結(jié)論，評定結(jié)果需被量化。發(fā)生可能第1級:稀少(發(fā)生頻次小于每十年一次)第2級:不太可能發(fā)生(每十年一次)第3級:可能發(fā)生(每五年一次)第4級:很可能發(fā)生(每一年一次)第5級:經(jīng)常發(fā)生(幾乎每次都可能發(fā)生)嚴(yán)重程度第1