細胞生物學(xué)翟中和專家講座

第一節(jié)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察方法一、光學(xué)顯微鏡二、電子顯微鏡三、掃描隧道顯微鏡第二節(jié)細胞組分分析方法一、用超速離心技術(shù)分離細胞器與生物大分子及其復(fù)合物二、細胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、糖與脂質(zhì)等成份顯示方法三、特異蛋白抗原定位與定性四、細胞內(nèi)特異核酸序列定位與定性五、應(yīng)用放射自顯影技術(shù)碩士物大分子在細胞內(nèi)合成動態(tài)六、定量細胞化學(xué)分析技術(shù)第三節(jié)細胞培養(yǎng)、細胞工程與顯微操作技術(shù)一、細胞培養(yǎng)二、細胞工程第四節(jié)用于細胞生物學(xué)研究模式生物細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第1頁第一節(jié)細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察方法光學(xué)顯微鏡：以可見光（或紫外線）為光源。電子顯微鏡：以電子束為光源。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第2頁一、光學(xué)顯微鏡（一）普通光學(xué)顯微鏡1、組成：①照明系統(tǒng)②光學(xué)放大系統(tǒng)③機械裝置2、原理：經(jīng)物鏡形成倒立實像，經(jīng)目鏡深入放大成像。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第3頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第4頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第5頁3.分辨力：指分辨物體最小間隔能力。R=0.61λ/N．A．其中λ為入射光線波長；N．A：為鏡口率

＝ｎsinα/2，n=介質(zhì)折射率；α=鏡口角（樣品對物鏡鏡口張角）。思索：怎樣提升顯微鏡分辨能力？細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第6頁表一、幾個介質(zhì)折射率細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第7頁顯微鏡幾個光學(xué)特點：制作光學(xué)鏡頭所用玻璃折射率為1.65~1.78，所用介質(zhì)折射率越靠近玻璃越好。sinα/2最大值必定小于1；介質(zhì)為空氣，鏡口率普通為0.05~0.95；油鏡頭用香柏油為介質(zhì)，鏡口率可靠近1.5。普通光線波長為400~700nm，分辨力數(shù)值不會小于.2μm，人眼分辨力為0.2mm,所以顯微鏡最大設(shè)計倍數(shù)為1000X。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第8頁（二）相差和微分干涉顯微技術(shù)干涉:兩列頻率相同光波在空中相遇時發(fā)生疊加，在一些區(qū)域總加強，在另外一些區(qū)域總減弱，出現(xiàn)明暗相間條紋或者是彩色條紋現(xiàn)象叫做光干涉。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第9頁相差顯微鏡把透過標本可見光光程差變成振幅差，從而提升了各種結(jié)構(gòu)間對比度，使各種結(jié)構(gòu)變得清楚可見。在結(jié)構(gòu)上，相差顯微鏡有不一樣于普通光學(xué)顯微鏡兩個特殊之處。1、環(huán)形光闌（annulardiaphragm）：位于光源與聚光器之間。2、相位板（annularphaseplate）：物鏡中加了涂有氟化鎂相位板，可將直射光或衍射光相位推遲1/4λ。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第10頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第11頁用途：觀察未經(jīng)染色玻片標本細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第12頁微分干涉顯微鏡1952年，Nomarski創(chuàng)造，微分干涉顯微鏡是以平面偏振光為光源，光線經(jīng)棱鏡折射后分成兩束，在不一樣時間經(jīng)過樣品相鄰部位，然后經(jīng)過另一棱鏡將這兩束光匯合，從而樣品中厚度上微小差異就會轉(zhuǎn)化成明暗區(qū)分，增加了樣品反差，造成了標本人為三維立體感，類似大理石上浮雕。微分干涉顯微鏡適于研究活細胞中較大細胞器，假如接上錄像裝置能夠統(tǒng)計活細胞中顆粒以及細胞器運動。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第13頁（三）熒光顯微鏡特點：光源為紫外線，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡；有兩個特殊濾光片；照明方式通常為落射式。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第14頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第15頁用于觀察能激發(fā)出熒光結(jié)構(gòu)。用途：免疫熒光觀察、基因定位、疾病診療。Fluorescenceimageofepithelialcell,DNAinblueandMicrotubulesingreen細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第16頁（四）激光共聚焦掃描顯微境

Laserconfocalscanningmicroscope,LCSM用激光作光源，逐點、逐行、逐面快速掃描。能顯示細胞樣品立體結(jié)構(gòu)。分辨力是普通光學(xué)顯微鏡3倍。用途類似熒光顯微鏡，但能掃描不一樣層次，形成立體圖像。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第17頁laserconfocalscanningmicroscope,LCSM細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第18頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第19頁LCSMImageofaXenopusMelanophore

microtubulecytoskeleton(green)andthenucleus(blue)細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第20頁(五)熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)CFP發(fā)射光譜與YFP吸收光譜有相當(dāng)重疊，當(dāng)它們足夠靠近時，用CFP吸收波長激發(fā)，CFP發(fā)色基團將會把能量高效率地共振轉(zhuǎn)移至YFP發(fā)色基團上，所以CFP發(fā)射熒光將減弱或消失，主要發(fā)射將是YFP熒光。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第21頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第22頁應(yīng)用:1、檢測酶活性改變2、關(guān)于膜蛋白研究3、細胞膜受體之間相互作用4、細胞內(nèi)分子之間相互作用

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第23頁(六)熒光漂白恢復(fù)技術(shù)FRAP(光漂白后熒光恢復(fù))就是在光漂白后對樣本確定區(qū)中熒光恢復(fù)。FRAP是由沒有漂白熒光團由周圍進入漂白區(qū)FRAP運動引發(fā)。FRAP用于測量2-維或3-維分子運動力度。分子運動包含膜或活細胞內(nèi)用熒光標明分子擴散、轉(zhuǎn)移或其它類型運動。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第24頁二、電子顯微鏡（一）電子顯微鏡基本知識1、電子顯微鏡與光學(xué)顯微鏡基本區(qū)分細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第25頁不一樣光線波長細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第26頁２、電子顯微鏡分辨本事和有效放大倍數(shù)分辨本事：是指電鏡處于最正確狀態(tài)下分辨率電鏡分辨率受制樣技術(shù)影響。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第27頁３、電子顯微鏡基本結(jié)構(gòu)１）電子束照明系統(tǒng)２）成像系統(tǒng)３）真空系統(tǒng)４）統(tǒng)計系統(tǒng)細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第28頁（二）、主要電鏡制樣技術(shù)介紹1、超薄切片技術(shù)電子束穿透力很弱，用于電鏡觀察標本須制成厚度僅40-50nm超薄切片，(1)固定：通常以鋨酸和戊二醛固定樣品，丙酮逐層脫水(2)包埋：環(huán)氧樹脂包埋(3)切片：以熱膨脹或螺旋推進方式切片(4)染色：重金屬（鈾、鉛）鹽染色形成明暗黑白圖象細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第29頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第30頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第31頁2、負染技術(shù)用重金屬鹽(如磷鎢酸)對鋪展在載網(wǎng)上樣品染色；吸去染料，干燥后，樣品凹陷處鋪了一層重金屬鹽，而凸出地方?jīng)]有染料沉積，從而出現(xiàn)負染效果，分辨力可達1.5nm左右。NegativeStainedActin細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第32頁3、冰凍蝕刻freeze-etching亦稱冰凍斷裂。標本置于干冰或液氮中冰凍。然后斷開，升溫后，冰升華，暴露出了斷面結(jié)構(gòu)。向斷裂面上噴涂一層蒸汽碳和鉑。然后將組織溶掉，把碳和鉑膜剝下來，此膜即為復(fù)膜（replica）。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第33頁４、電鏡三維重構(gòu)技術(shù)對樣品在不一樣傾角拍照，得到圖片經(jīng)處理后而展現(xiàn)電子密度圖。電鏡三維重構(gòu)技術(shù)與X-射線晶體衍射技術(shù)及核磁共振分析技術(shù)相結(jié)合，是當(dāng)前結(jié)構(gòu)生物學(xué)（StructuralBiology）（主要碩士物大分子空間結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系）主要試驗伎倆。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第34頁５、掃描電鏡技術(shù)20世紀60年代問世，用來觀察標本表面結(jié)構(gòu)。分辨力為6~10nm，因為人眼分辨力（區(qū)分熒光屏上距離最近兩個光點能力）為0.2mm，掃描電鏡有效放大倍率為0.2mm/10nm=0X。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第35頁Scanningelectronmicroscope（SEM）細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第36頁工作原理：是用一束極細電子束掃描樣品，在樣品表面激發(fā)出次級電子，次級電子多少與樣品表面結(jié)構(gòu)相關(guān)，次級電子由探測器搜集，信號經(jīng)放大用來調(diào)制熒光屏上電子束強度，顯示出與電子束同時掃描圖像。為了使標本表面發(fā)射出次級電子，標本在固定、脫水后，要噴涂上一層重金屬膜，重金屬在電子束轟擊下發(fā)出次級電子信號。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第37頁掃描電子顯微鏡原理細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第38頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第39頁人類精子細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第40頁三、掃描隧道顯微鏡

scanningtunnelingmicroscope，原理：依據(jù)隧道效應(yīng)而設(shè)計，當(dāng)原子尺度針尖在不到一個納米高度上掃描樣品時，此處電子云重合，外加一電壓（2mV~2V），針尖與樣品之間形成隧道電流。電流強度與針尖和樣品間距離有函數(shù)關(guān)系，將掃描過程中電流改變轉(zhuǎn)換為圖像，即可顯示出原子水平凹凸形態(tài)。分辨率：橫向為0.1~0.2nm，縱向可達0.001nm。用途：三態(tài)（固態(tài)、液態(tài)和氣態(tài)）物質(zhì)均可進行觀察。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第41頁掃描隧道顯微鏡原理細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第42頁第二節(jié)細胞組分分析方法一、用超速離心技術(shù)分離細胞器與生物大分子及其復(fù)合物轉(zhuǎn)速為10~25kr/min離心機稱為高速離心機。轉(zhuǎn)速>25kr/min，離心力>89Kｇ者稱為超速離心機。當(dāng)前超速離心機最高轉(zhuǎn)速可達100000r/min，離心力超出500Kg。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第43頁超速離心技術(shù)：用途：分離大小相差懸殊細胞和細胞器。沉降次序：核——線粒體——溶酶體與過氧化物酶體——內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高基體——核蛋白體?？蓪⒓毎鞒醪椒蛛x，常需深入經(jīng)過密度梯離心再行分離純化。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第44頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第45頁密度梯度離心用介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)頂部，經(jīng)過離心力場作用使細胞分層、分離。類型：速度沉降、等密度沉降。慣用介質(zhì)：氯化銫、蔗糖、多聚蔗糖。分離活細胞介質(zhì)要求：1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時，粘度不高；2）PH中性或易調(diào)為中性；3）濃度大時滲透壓不大；4）對細胞無毒。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第46頁Velocity(A)andEquilibrium(B)sedimentation細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第47頁二、細胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、糖與脂質(zhì)等成份顯示方法１、DNA經(jīng)1N鹽酸水解，其上嘌呤堿和脫氧核糖之間鍵打開，使脫氧核糖第一碳原子上形成游離醛基，這些醛基與Schiff試劑反應(yīng)。Schiff試劑是由堿性品紅和偏重亞硫酸鈉相作用，形成無色品紅液，當(dāng)無色品紅與醛基結(jié)合形成紫紅色化合物。所以凡有DNA地方，都能顯示紫紅色。２、四氧化鋨與不飽和脂肪酸反應(yīng)呈黑色，證實脂肪滴存在，蘇丹Ⅲ使脂滴呈深紅３、蛋白質(zhì)定性：米倫反應(yīng)，重氮反應(yīng)細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第48頁三、特異蛋白抗原定位與定性(一)免疫熒光技術(shù)將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標識，試劑與標本中對應(yīng)抗體或抗原反應(yīng)后，測定復(fù)合物中熒光素，這種免疫技術(shù)，稱為免疫熒光素技術(shù)。慣用標識物有熒光素和酶。免疫熒光法（immunofluorescenttechnique）：慣用螢光素有異硫氰酸熒光素、羅丹明等。酶標免疫法（enzyme-labeledantibodymethod）：慣用酶有辣根過氧化物酶，酶與底物發(fā)生反應(yīng)后形成不透明沉積物，從而顯示出抗原存在部位。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第49頁間接法原理示意圖細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第50頁補體結(jié)正當(dāng)原理示意圖細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第51頁(二)免疫電鏡技術(shù)又稱為免疫細胞化學(xué)技術(shù)是在免疫組織化學(xué)技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來，它是利用抗原與抗體特異性結(jié)合原理，在超微結(jié)構(gòu)水平上定位、定性及半定量抗原技術(shù)方法。該方法為準確定位各種抗原存在部位、研究細胞結(jié)構(gòu)與功效關(guān)系及其在病理情況下所發(fā)生改變提供了有效伎倆。免疫電鏡技術(shù)主要經(jīng)歷了鐵蛋白標識技術(shù)、酶標識技術(shù)以及膠體金標識技術(shù)三個主要發(fā)展階段。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第52頁鐵蛋白標識技術(shù)適合用于細胞膜表面抗原定位，因為其分子量較大，不易穿透細胞膜，定位細胞內(nèi)抗原較為困難。鐵蛋白對電鏡包埋劑非特異性吸附很強，不適合用于包埋后免疫標識，使其應(yīng)用受到一定限制。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第53頁酶標識免疫電鏡技術(shù)是將酶（主要是過氧化物酶）與抗體相交聯(lián)，抗原抗體反應(yīng)后，加底物顯示酶活性部位，酶反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)OsO4處理變?yōu)楹幸欢娮用芏蠕~黑，可在電鏡下觀察。過氧化物酶相對分子量較小，與其交聯(lián)抗體較易穿透經(jīng)處理細胞膜，可用于細胞內(nèi)抗原定位。不過酶反應(yīng)產(chǎn)物比較彌散，所以分辨率不如顆粒性標識物高。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第54頁膠體金標識免疫電鏡技術(shù)是當(dāng)前應(yīng)用最廣免疫電鏡標識物，該技術(shù)是將膠體金作為抗體標識物，用于細胞表面和細胞內(nèi)各種抗原準確定位。膠體金主要含有以下幾個優(yōu)點：（1）膠體金能穩(wěn)定并快速地吸附蛋白，而且蛋白生物活性不發(fā)生顯著改變，可制備抗體-膠體金、蛋白A-膠體金、卵白素-膠體金、植物凝集素-膠體金等用于免疫電鏡；（2）在電鏡下金顆粒電子密度高、圓形且界限清楚，易于識別，定位比酶反應(yīng)物更準確；（3）膠體金標識物易于制備，并能夠依據(jù)需要制備大小不一樣（1～150nm）膠體金，所以可進行免疫電鏡雙重或多重標識；（4）金顆粒能發(fā)射強烈二次電子，是掃描電鏡理想標識物；（5）膠體金經(jīng)過銀顯影增強后，金顆粒外周吸附大量銀顆粒而展現(xiàn)黑色或黑褐色，所以也能用于光學(xué)顯微鏡觀察。另外，膠體金還能用于冷凍蝕刻標本免疫標識。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第55頁四、細胞內(nèi)特異核酸序列定位與定性含有互補核苷酸序列兩條單鏈核苷酸分子片段，在適當(dāng)條件下，經(jīng)過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA，DNA-RNA或RNA-RNA雜交雙鏈分子。這種技術(shù)可用來測定單鏈分子核苷酸序列間是否含有互補關(guān)系。（一）原位雜交（insituhybridization）用于檢測染色體上特殊DNA序列。最初是使用帶放射性DNA探針，以后又創(chuàng)造了免疫探針法。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第56頁（二）Southern雜交是體外分析特異DNA序列方法，操作時先用限制性內(nèi)切酶將核DNA或線粒體DNA切成DNA片段，經(jīng)凝膠電泳分離后，轉(zhuǎn)移到醋酸纖維薄膜上，再用探針雜交，經(jīng)過放射自顯影，即可識別出與探針互補特殊核苷序列。將RNA轉(zhuǎn)移到薄膜上，用探針雜交，則稱為Northern雜交。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第57頁五、應(yīng)用放射自顯影技術(shù)碩士物大分子在細胞內(nèi)合成動態(tài)用于研究標識化合物在機體、組織和細胞中分布、定位、排出以及合成、更新、作用機理、作用部位等等。原理：將放射性同位素標識化合物導(dǎo)入生物體內(nèi)，經(jīng)過一段時間后，制取切片，涂上鹵化銀乳膠，經(jīng)放射性曝光，使乳膠感光。普通用14C和3H標識。慣用3H-TDR來顯示DNA，用3H-UDR顯示RNA；用3H氨基酸研究蛋白質(zhì)，用3H甘露糖、3H巖藻糖研究多糖。14C半衰期為5730年，3H為12.5年。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第58頁六、定量細胞化學(xué)分析技術(shù)（一）流式細胞術(shù)用途：對單個細胞進行快速定量分析與分選一門技術(shù)。原理：包在鞘液中細胞經(jīng)過高頻振蕩控制噴嘴，形成包含單個細胞液滴，在激光束照射下，這些細胞發(fā)出散射光和熒光，經(jīng)探測器檢測，轉(zhuǎn)換為電信號，送入計算機處理，輸出統(tǒng)計結(jié)果，并可依據(jù)這些性質(zhì)分選出高純度細胞亞群，分離純度可達99%。包被細胞液流稱為鞘液，所用儀器稱為流式細胞計（flowcytometer）。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第59頁細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第60頁（二）顯微分光光度測定技術(shù)細胞中有一些成份含有特定吸收光譜，核酸、蛋白質(zhì)、細胞色素、維生素等都有自己特征性吸收曲線?？衫蔑@微分光光度計對一些成份進行定位、定性和定量測定。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第61頁七、PCR技術(shù)PCR即：polymerasechainreaction。反應(yīng)體系：①樣品DNA；②引物（primer），約15-20個核苷酸；③4種dNTP；④TagDNA聚合酶，來自于嗜熱水生菌Thermusaquaticus，最適作用溫度75~80℃，短時間在95℃下不失活。⑤緩沖體系和Mg2+。反應(yīng)過程：①變性：約90-95℃；②復(fù)性：約60℃左右；③延伸：70-75℃；④重復(fù)“變性——復(fù)性——延伸”過程20-30次循環(huán)。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第62頁PCR原理細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第63頁第三節(jié)細胞培養(yǎng)、細胞工程與顯微操作技術(shù)一、細胞培養(yǎng)（一）動物細胞培養(yǎng)群體培養(yǎng)（massculture）：將含有一定數(shù)量細胞懸液置于培養(yǎng)瓶中，讓細胞貼壁生長，匯合（confluence）后形成均勻單細胞層；克隆培養(yǎng)（clonalculture）：培養(yǎng)高度稀釋細胞懸液，細胞貼壁生長，每一個細胞形成一個細胞集落，稱為克隆。轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)法：為制取細胞產(chǎn)品而設(shè)計，大容量旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，使培養(yǎng)細胞一直處于懸浮狀態(tài)之中。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第64頁原代培養(yǎng)（primaryculture）：即：培養(yǎng)直接來自動物機體細胞群，將細胞從一個培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到另外一個培養(yǎng)瓶稱為傳代或傳代培養(yǎng)（Passage）。細胞株（cellstrain）：從原代培養(yǎng)細胞群中篩選出含有特定性質(zhì)或標志細胞群。細胞系（cellline）：從腫瘤組織培養(yǎng)建立細胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化細胞，可無限繁殖。克?。╟lone）：亦稱無性系。指由同一個祖先細胞經(jīng)過有絲分裂產(chǎn)生遺傳性狀一致細胞群。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第65頁細胞系名稱細胞類型起源3T3成纖維細胞小鼠HeLa宮頸癌上皮細胞HenriettaLacksBHK21成纖維細胞敘利亞倉鼠PtKl上皮細胞袋鼠L6成肌細胞大鼠PCI2嗜鉻細胞大鼠SP2漿細胞小鼠SP2／0骨髓瘤漿細胞小鼠CHO卵巢細胞中國地鼠試驗室中慣用幾個細胞系細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第66頁（二）植物細胞培養(yǎng)外植體培養(yǎng)：誘發(fā)產(chǎn)生愈傷組織。用于研究植物生長發(fā)育、分化和變異；進行無性繁殖；制取代謝產(chǎn)物。懸浮細胞培養(yǎng)：適合于進行產(chǎn)業(yè)化大規(guī)模細胞培養(yǎng)，制取植物代謝產(chǎn)物。原生質(zhì)體培養(yǎng)：培養(yǎng)脫壁后細胞，特點：①比較輕易攝取外來遺傳物質(zhì)，如DNA；②便于進行細胞融合，形成雜交細胞；③適宜條件下可產(chǎn)生細胞壁，經(jīng)誘導(dǎo)分化成完整植株。單倍體培養(yǎng)：經(jīng)過花藥或花粉培養(yǎng)可取得單倍體植株。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第67頁AnimalCellCulture細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第68頁二、細胞工程（一）細胞融合經(jīng)過培養(yǎng)和介導(dǎo)，兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞過程稱為細胞融合（cellfusion）或細胞雜交。同核體：相同基因型細胞融合而成。異核體：不一樣基因型細胞融合而成。自發(fā)融合：同種細胞在培養(yǎng)過程中自發(fā)合并現(xiàn)象。誘發(fā)融合：異種間細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合。誘導(dǎo)細胞融合方法：生物方法（仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（電擊和激光）。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第69頁單克隆抗體技術(shù)正常淋巴細胞（如小鼠脾細胞）含有分泌抗體能力，但不能長久培養(yǎng)，瘤細胞（如骨髓瘤）能夠在體外長久培養(yǎng)，但不分泌抗體。于是英國人Kohler和Milstein1975將兩種細胞雜交而創(chuàng)建了單克隆抗體技術(shù)，獲1984年諾貝爾獎。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第70頁（三）細胞拆合與顯微操作技術(shù)１、物理法：用機械方法或短光波把細胞核去掉或使之失活，然后用微吸管吸收其它細胞核，注入去核細胞質(zhì)中，組成新雜交細胞。２、化學(xué)法：用細胞松弛素B處理細胞，細胞出現(xiàn)排核現(xiàn)象，再結(jié)合離心技術(shù)，將細胞拆分為核體和胞質(zhì)體兩部分，因為核體外表包有一層細胞質(zhì)膜和少許胞漿，因而在PEG或仙臺病毒介導(dǎo)下，核體可與另一胞質(zhì)體融合，形成重組細胞。細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第71頁第四節(jié)用于細胞生物學(xué)研究模式生物

生物學(xué)家經(jīng)過對選定生物物種進行科學(xué)研究，用于揭示某種含有普遍規(guī)律生命現(xiàn)象，此時，這種被選定生物物種就是模式生物。比如，孟德爾在揭示生物界遺傳規(guī)律時選取豌豆作為試驗材料，而摩根選取果蠅作為試驗材料，在他們研究中，豌豆和果蠅就是碩士物體遺傳規(guī)律模式生物。

細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第72頁模式生物特點有:1)生理特征能夠代表生物界某一大類群。2)輕易取得并易于在試驗室內(nèi)喂養(yǎng)繁殖。3)輕易進行試驗操作,尤其是遺傳學(xué)分析。4)個體較小,生長繁殖快。生命科學(xué)研究中慣用模式生物有：病毒，細菌，酵母，原生動物，黏菌，蛙，海膽，線蟲，果蠅，斑馬魚，小鼠細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第73頁１、病毒：１）特點：結(jié)構(gòu)簡單（殼體和核酸）進入細胞才能進行復(fù)制２）應(yīng)用：適合遺傳操作，進行相關(guān)生物大分子之間相互作用，基因表示調(diào)空腫瘤發(fā)生和防治等研究。作為外源基因載體，用于蛋白質(zhì)功效研究以及腫瘤基因治療細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第74頁２、細菌１）特點：細菌培養(yǎng)方便，生長快，基因結(jié)構(gòu)簡單，突變株誘變和分離、判定輕易轉(zhuǎn)基因技術(shù)成熟，進行基因定位簡便易行。２）應(yīng)用：轉(zhuǎn)基因技術(shù)?；虮硎菊{(diào)控細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第75頁３、酵母１）特點是單細胞生物,可在基本培養(yǎng)基上生長,可經(jīng)過改變物理或化學(xué)環(huán)境完全控制其生長在單倍體和二倍體狀態(tài)下均可生長,并可在試驗條件下控制單倍體和二倍體之間相互轉(zhuǎn)換,這對其基因功效研究十分有利有快要31%編碼蛋白質(zhì)基因或ORF與哺乳動物編碼蛋白質(zhì)基因有高度同源性細胞生物學(xué)細胞生物學(xué)翟中和專家講座第76頁２）應(yīng)用：細胞周期調(diào)控，P34cdc28突變，細胞停留在G1/S

P34cdc2突變，細胞停留在G２/S利用酵母基因突變?yōu)榛虮硎菊{(diào)控，膜泡運輸，細胞分化，衰老等研究領(lǐng)域提供研究材料細胞生物學(xué)