抗體專題知識(shí)講座

抗體專題知識(shí)講座抗體專題知識(shí)講座第1頁第一節(jié)抗體結(jié)構(gòu)與功效一、抗體概念與分布1.抗體（Antibody，Ab）是機(jī)體B細(xì)胞在抗原刺激下產(chǎn)生免疫球蛋白。2.免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）指含有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相同球蛋白。區(qū)分：

Ab都是Ig，Ig不一定是Ab?？贵w專題知識(shí)講座第2頁3.抗體分布1體液抗體2親細(xì)胞抗體(體液,尤其是血清中)(細(xì)胞表面)抗體專題知識(shí)講座第3頁二、抗體基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)結(jié)合抗原之前結(jié)合抗原之后TY抗體專題知識(shí)講座第4頁二、抗體基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)抗體專題知識(shí)講座第5頁V區(qū)內(nèi)氨基酸殘基組成和排列次序極易改變區(qū)為高變區(qū)（CDR區(qū)）。3個(gè)高變區(qū)即可組成抗原結(jié)合區(qū)。高變區(qū)抗體專題知識(shí)講座第6頁抗體專題知識(shí)講座第7頁三、抗體功效區(qū)Ig多肽鏈折疊后由二硫鍵連接成球狀結(jié)構(gòu)為其功效區(qū)。VH-VL功效區(qū)---結(jié)合抗原；CH1-CL功效區(qū)---遺傳標(biāo)志區(qū)CH2功效區(qū)---結(jié)合補(bǔ)體；CH3功效區(qū)---結(jié)合一些細(xì)胞抗體專題知識(shí)講座第8頁第二節(jié)抗體分類及其生物學(xué)功效一、抗體類別重鏈抗原性與分子量鉸鏈區(qū)組成和二硫鍵數(shù)目輕鏈抗原性氫鏈個(gè)別氨基酸抗體專題知識(shí)講座第9頁抗體類γ鏈α鏈μ鏈δ鏈ε鏈抗體專題知識(shí)講座第10頁抗體亞類抗體專題知識(shí)講座第11頁二、各類抗體特征與功效1.IgG（1）單體，血清中含量最高，半衰期最長(zhǎng)；（2）是抗感染主要抗體，發(fā)揮抗細(xì)菌、抗毒素、抗病毒

作用。（3）唯一能經(jīng)過胎盤抗體，在新生兒抗感染中起作用?？贵w專題知識(shí)講座第12頁

J鏈膜型IgM,單體，存在B細(xì)胞表面，組成BCR。

B細(xì)胞膜BCR分泌型IgM(巨球蛋白),

五聚體，分子量最大，存在于血流中。免疫應(yīng)答中最先出現(xiàn)抗體，早期抗感染及早期診療指標(biāo)。2.IgM抗體專題知識(shí)講座第13頁3.IgA血清型IgA---單體，分布于血清，主要起免疫調(diào)整作用

分泌型IgA(SIgA）---二聚體，分布于外分泌液中，可經(jīng)初乳傳給胎兒。

唾液

眼淚、乳汁

鼻黏膜分泌液

支氣管分泌液

生殖道分泌物

前列腺液

小腸黏膜分泌液

SIgA是抗黏膜感染主要抗體抗體專題知識(shí)講座第14頁4.IgE（1）單體，最晚產(chǎn)生，主要存在于肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面，又稱為親細(xì)胞抗體。（2）介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)和抗寄生蟲感染?？贵w專題知識(shí)講座第15頁5.IgD（1）血清IgD---單體,血清中含量極低，功效不清。（2）膜型IgD（mIgD）---單體,表示于成熟B細(xì)胞表面，與

B細(xì)胞成熟相關(guān)。

抗體專題知識(shí)講座第16頁第三節(jié)抗體基因及表示Ig基因庫V基因D基因J基因C基因基因定位染色體H鏈基因庫（IGH）96（65）279（6）11（9）14κ鏈基因庫(IGK)90（60）0512λ鏈基因庫(IGL)60（30）077（4）22一、人Ig基因庫及基因結(jié)構(gòu)抗體專題知識(shí)講座第17頁抗體專題知識(shí)講座第18頁二、抗體基因重排與表示抗體專題知識(shí)講座第19頁三、抗體多樣性（104）機(jī)理（1）抗體基因庫存放大量基因片段；（2）V-J和V-D-J重排時(shí)，基因片段進(jìn)行隨機(jī)組合；（3）VDJ連接過程中核苷酸可能發(fā)生突變、缺失或插入；（4）L鏈H鏈之間隨機(jī)配對(duì)組合；（5）抗原刺激后，B細(xì)胞中高頻基因突變?？贵w專題知識(shí)講座第20頁第四節(jié)人工制備抗體依據(jù)制備原理不一樣分：1多克隆抗體2單克隆抗體PolyclonalantibodyPcAbMonoclonalantibodyMcAb抗體專題知識(shí)講座第21頁一、PcAb概念抗原免疫動(dòng)物后，由多個(gè)不一樣Ｂ細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多個(gè)不一樣表位異質(zhì)性抗體。B1B2B3B4

Ag2341Ab1Ab2Ab3Ab4抗體專題知識(shí)講座第22頁二、PcAb制備---采取免疫動(dòng)物法免疫原制備

免疫動(dòng)物（3次）

測(cè)定抗體水平

動(dòng)物采血分離血清

-20℃凍存12341231234B細(xì)胞抗體專題知識(shí)講座第23頁免疫原制備即將抗原與佐劑進(jìn)行充分研磨乳化。免疫佐劑是增強(qiáng)機(jī)體反抗原免疫應(yīng)答物質(zhì)。常見有氫氧化鋁、蜂膠、弗氏佐劑等?？贵w專題知識(shí)講座第24頁Rabbit/2kgBALB/Cmouse/20gRat/200gGuineapigSheep、Goat、Horse免疫動(dòng)物選擇抗體專題知識(shí)講座第25頁1.免疫劑量：100-200ug/只2.免疫間隔時(shí)間:第一次和第二次間隔10-20d，三次及以后間隔7-10d3.免疫路徑:皮內(nèi)、皮下、肌肉、腹腔、腋窩淋巴結(jié)免疫程序抗體專題知識(shí)講座第26頁三、McAb概念由單個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)單一抗原表位同質(zhì)性抗體?？贵w專題知識(shí)講座第27頁四、單克隆抗體與多克隆抗體特征比較

PcAb

McAb

特異性專一性

免疫動(dòng)物取得淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)取得產(chǎn)量有限產(chǎn)量無限用于普通免疫診療判別診療、制備生物導(dǎo)彈治療及免疫治療腫瘤、抗原結(jié)構(gòu)分析

抗體專題知識(shí)講座第28頁五、McAb制備1975年Kohler和Milstein創(chuàng)建了淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)用于生產(chǎn)McAb。原理:是B細(xì)胞是短壽細(xì)胞，在體外不能無限制增殖；骨髓瘤細(xì)胞可在體外無限增殖，但不能產(chǎn)生Ab。將免疫后含有分泌抗體能力B細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合形成B細(xì)胞雜交瘤，B細(xì)胞雜交瘤經(jīng)克隆后成為單細(xì)胞克隆，則該克隆既可無限生長(zhǎng)又可分泌McAb?？贵w專題知識(shí)講座第29頁抗體專題知識(shí)講座第30頁

免疫BALB/C小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞（缺乏TK，HGPRT）

搜集免疫后B淋巴細(xì)胞搜集骨髓瘤細(xì)胞

PEG細(xì)胞融合

HAT選擇培養(yǎng)基篩選雜交瘤細(xì)胞篩選分泌抗體雜交瘤細(xì)胞

單克隆化培養(yǎng)（有限稀釋法）

取得穩(wěn)定分泌McAb雜交瘤細(xì)胞株

McAb生產(chǎn)（雜交瘤培養(yǎng)上清或誘生腹水）

McAb

純化及判定單克隆抗體制備程序用已知抗原檢測(cè)抗體專題知識(shí)講座第31頁抗體專題知識(shí)講座第32頁液體