酵母核糖核酸的提取及組分鑒定

酵母核糖核酸的提取及組分鑒定酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第1頁核酸(nucleicacid)

是以核苷酸為基礎組成單位生物大分子，攜帶和傳遞遺傳信息。Nucleic

Acid基因化學本質——核酸酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第2頁核酸分類及分布

90%以上分布于細胞核，其余分布于核外如線粒體，葉綠體，質粒等。分布于胞核、胞液。(deoxyribonucleicacid,DNA)(ribonucleicacid,RNA)脫氧核糖核酸核糖核酸攜帶遺傳信息，決定細胞和個體基因型(genotype)。是DNA轉錄產物，參加細胞內DNA遺傳信息表示。除RNA病毒以外，全部有機體遺傳物質（基因）都是DNA。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第3頁一、試驗目標1.掌握從酵母中提取核糖核酸原理。2.學會核糖核酸提取基礎操作。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第4頁二、試驗原理

酵母，即酵母菌，是一些單細胞真菌，是人類文明史中被應用得最早微生物，繁殖速度快，生長周期短，其細胞質中核酸大個別是RNA，而DNA極少；RNA提取液與菌體分離比較輕易，所以生產中常選取酵母作為RNA提取原材料。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第5頁

工業(yè)上提取RNA方法主要有三種，包含稀堿法、濃鹽法和自溶法。本試驗采取是稀堿法。稀堿法是利用RNA可溶于堿性溶液性質，先使RNA溶于稀NaOH溶液中，然后再利用核酸不溶于乙醇性質，向溶液中加入酸性乙醇溶液，從而使RNA沉淀出來，如此得到即是RNA粗制品；再用乙醇、乙醚等有機溶劑洗滌脂類雜質，即得到純化RNA。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第6頁三、試驗步驟1.酵母RNA提取(1)準確稱取15g酵母，加入潔凈研缽中,加入適量石英砂；然后，向研缽中加入30-40mL0.04MNaOH溶液，并用力研磨約10min。(2)待研磨均勻后，將缽中溶液倒入錐形瓶中，并再取30-40mL0.04MNaOH溶液洗滌研缽，一并轉入錐形瓶中，然后放于沸水浴中加熱20-30min，取出冷卻。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第7頁2.酵母RNA分離及沉淀

將錐形瓶中溶液轉移到100ml離心管中，在4200rpm離心8-15min后，將上清液緩緩傾入30ml酸性乙醇溶液中，邊傾倒邊輕輕攪拌，待RNA沉淀完全后，3500rpm離心3-5min，棄上清，沉淀即為RNA粗制品。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第8頁3.洗滌及干燥

（1）向離心管中加15-20ml95%乙醇，輕搖后，靜置3-5min,3500rpm離心3-5min，棄上清，留沉淀。（2）再加入15-20ml乙醚，輕搖后，靜置3-5min,3500rpm離心3-5min，棄上清，沉淀即為酵母RNA。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第9頁四、試驗結果將提取RNA在空氣中或用吹風機風干，稱重，計算RNA含量。參考公式以下：酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第10頁試驗八

核糖核酸組分判定酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第11頁核酸(DNA和RNA)核苷酸核苷和脫氧核苷磷酸戊糖堿基嘌呤嘧啶核糖脫氧核糖核酸組成酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第12頁分子組成堿基(base)：嘌呤堿，嘧啶堿戊糖(pentose)：核糖，脫氧核糖磷酸(phosphate)核苷酸是組成核酸基礎組成單位堿基苦——堿基甜——戊糖酸——磷酸酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第13頁一、試驗目標掌握核糖核酸組分判定原理。學會判定核糖核酸組分方法。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第14頁二、試驗原理核糖核酸組成成份主要包含核糖、磷酸和堿基。在堿性環(huán)境下，嘌呤堿能與銀離子反應形成沉淀，但此處堿性環(huán)境不能用普通強堿，不然強堿會與銀離子反應產生沉淀而干擾結果判定。酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第15頁3.核糖核酸與濃鹽酸共熱時，會發(fā)生降解，形成核糖繼而轉變成糠醛，后者可與3，5-二羥基甲苯（地衣酚）反應，在Fe3+或Cu2+催化下，生成綠色復合物。4.磷酸組分可與定磷試劑在酸性環(huán)境中反應，生成藍色物質。所以，能夠依據以上性質，設計試驗對各組分進行判定。

酵母核糖核酸的提取及組分鑒定第16頁三、試驗步驟1.取200-500mg試驗七中提取酵母RNA，加入1.5MH2SO4溶液10mL，在沸水浴中加熱10-20分鐘，使核酸充分水解后，用于對各組