DNA重組技術(shù)的基本工具

第1節(jié)DNA重組技術(shù)的基本工具【本節(jié)重難點(diǎn)】重點(diǎn)：DNA重組技術(shù)所需的三種基本工具的作用難點(diǎn)：基因工程載體所需要具備的條件【知識(shí)精講】教材梳理知識(shí)點(diǎn)一基因工程的概念：基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，并通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫做DNA重組技術(shù)。注意：對(duì)本概念應(yīng)從以下幾個(gè)方面理解：蕉操作環(huán)境大生物體外欣操作對(duì)象根基因高操作水平蝴DNA分子看水平憶基本過(guò)程瓣剪切奏→稼拼接味→達(dá)導(dǎo)入識(shí)→蔑表達(dá)刺結(jié)果藍(lán)人類需要的抄基因產(chǎn)物知識(shí)點(diǎn)二基因工程的基本工具1.限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”嬌（1）限制武性內(nèi)切酶的渡來(lái)源：主要碌是從原核生籮物中分離純蘭化來(lái)的。堵（2）限制學(xué)性內(nèi)切酶的林功能：能夠傭識(shí)別雙鏈D刮NA分子的勿某種特定的園核苷酸序列懲，并能將每巨一條鏈上特幅定部位的兩堆個(gè)核苷酸之式間的磷酸二懷酯鍵切開。斯（3）限制鞠性內(nèi)切酶的輪切割方式：蠟①步在中心軸線億兩側(cè)將DN封A切開，切脖口是黏性末尊端。瘡②浮沿著中心軸姜線切開DN倆A，切口是臉平末端。頑注意：比較洲有關(guān)的DN巡A酶羞（1）DN討A水解酶：新能夠?qū)N纏A水解成四鼠種脫氧核苷蔑酸，徹底水砌解成膦酸、鉗脫氧核糖和渡含氮堿基模饒（2）DN毛A解旋酶：父能夠?qū)N兇A或DNA故的某一段解騎成兩條長(zhǎng)鏈罪，作用的部這位是堿基和臺(tái)堿基之間的栗氫鍵。注意與：使DNA輪解成兩條長(zhǎng)狂鏈的方法除耽用解旋酶以萍外，在適當(dāng)士的高溫（如肝94央℃捉）、重金屬容鹽的作用下蹲，也可使D藝NA解旋?？担?）DN犧A聚合酶：筑能將單個(gè)的攻核苷酸通過(guò)短磷酸二酯鍵俗連接成DN壟A長(zhǎng)鏈。帽餃（4）DN擱A連接酶：笨是皂通過(guò)磷酸二叔酯鍵恭連接雙鏈D尸NA的缺口怕。注意比較撐DNA聚合州酶和DNA治連接酶的異續(xù)同點(diǎn)。刃2.DNA糞連接酶頑——“評(píng)分子縫合針囑”狠（1）DN添A連接酶的曉分類：E.辦coliD挎NA連接酶吊和T巾4漿DNA連接轟酶。波（2）作用遲及作用部位役：E.co晨liDNA部連接酶作用御于黏性末端漆被切開的磷獄酸二酯鍵，箭T號(hào)4字DNA連接方酶作用于黏凍性末端和平厲末端被切開現(xiàn)的磷酸二酯農(nóng)鍵。勝3.基因進(jìn)賀入受體細(xì)胞姜的載體刪——“范分子運(yùn)輸車字”駛（1）分子檔運(yùn)載車的分窄類：辮①畝質(zhì)粒：常存位在于原核細(xì)臘胞和酵母菌粱中，是一種纖分子質(zhì)量較根小的環(huán)狀的腎裸露的DN拖A分子，獨(dú)豎立于擬核之恩外。亦②督病毒：常用暫的病毒有噬剝菌體、動(dòng)植辜物病毒等。掏（2）運(yùn)載踩體使用的目抓的：幸①象是用它做運(yùn)吹載工具，將商目的基因轉(zhuǎn)距運(yùn)到宿主細(xì)刮胞中去。閱②的是利用它在個(gè)受體細(xì)胞內(nèi)膠對(duì)目的基因棍進(jìn)行大量復(fù)躁制。?。?）作為觀運(yùn)載體必須百具備的條件牛：括①喉在宿主細(xì)胞封中保存下來(lái)李并大量復(fù)制橋講②適有多個(gè)限制雖性內(nèi)切酶切夕點(diǎn)并③鐘有一定的標(biāo)炊志基因，便洲于篩選。為思維探究：此知識(shí)點(diǎn)3、動(dòng)4、5訪主要是介紹雀DNA重組何技術(shù)的三種縱基本工具及附其作用。限塘制酶──“茶分子手術(shù)刀器”，主要是靠介紹限制酶寺的作用，切婚割后產(chǎn)生的橋結(jié)果。在這觀部分內(nèi)容學(xué)墨習(xí)時(shí)，龍應(yīng)關(guān)心的問(wèn)淋題之一是：腫限制酶從哪稿里尋找劑？我們可以掃聯(lián)想從前學(xué)準(zhǔn)過(guò)的內(nèi)容─認(rèn)─噬菌體侵倉(cāng)染細(xì)菌的實(shí)喚驗(yàn)，進(jìn)而認(rèn)誼識(shí)細(xì)菌等單管細(xì)胞生物容裙易受到自然演界外源DN惹A的入侵。兇那么這類原烈核生物之所須以長(zhǎng)期進(jìn)化醉而不絕滅，捎有何保護(hù)機(jī)虹制？進(jìn)而皇聯(lián)想到跨可能是有什脫么酶來(lái)切割?yuàn)A外源DNA撐，而使之失穗效，達(dá)到保作護(hù)自身的目航的”。這樣本就痕對(duì)塑“鵝限制劫酶主要是從性原核生物中宵分離純化出帆來(lái)悉”結(jié)的認(rèn)識(shí)提高瓜了一個(gè)層次菌。羨DNA連接賣酶──DN戴A片段的“亭分子縫合針樓”，妻在這里同學(xué)奔們很容易想忠到堿基互補(bǔ)健配對(duì)或DN穗A聚合酶，鐘這是很自然帽的。但只考失慮到堿基互眨補(bǔ)配對(duì)原則婆還是不夠的物，乖我們可以從疫原有的知識(shí)妹出發(fā)，要想?yún)挼较拗泼甘虑虚_的DN亦A既中膦酸與脫槐氧核糖之間艦的磷酸二酯捕鍵夫，再這個(gè)地方還芽沒(méi)有連接起稠來(lái)，又是怎乳樣連接的呢星？這樣自然籌而然地想到汁DNA連接壓酶。家基因進(jìn)入受驅(qū)體細(xì)胞的載攪體──“分慣子運(yùn)輸車”娛的學(xué)習(xí)內(nèi)容飯，不能僅僅芒著眼于記住燕這幾個(gè)條件芒，而應(yīng)該忍深入思考每翅一個(gè)條件的非內(nèi)涵，兔通過(guò)處深思熟慮脆，昂才能真正押明確為什么逝要有這曉些墓條件才能充間當(dāng)載體。教材拓展碌拓展點(diǎn)一你劑限制酶所識(shí)贏別序列電的弓特點(diǎn)企限制酶所識(shí)中別的序列撫的特點(diǎn)是：搭呈現(xiàn)堿基互守補(bǔ)對(duì)稱丙，無(wú)論是抓奇數(shù)昏個(gè)堿基還是復(fù)偶數(shù)描個(gè)堿基，都漠可以找到一茫條中心軸線票，如圖偵，中軸線兩絲側(cè)的雙鏈D久NA上的堿勿基是反向?qū)θしQ重復(fù)排列闊的。島如：尺以中心線非為軸，兩側(cè)壽堿基互補(bǔ)對(duì)罪稱；訓(xùn)以野為軸，兩難側(cè)堿基互補(bǔ)廚對(duì)稱。心拓展點(diǎn)二慶敵DNA連接惹酶連接的是妥什么部位？堂DNA連接獵酶是將一段揮DNA片段搏3′端的羥摘基與另一D葛NA片段5饑′端磷酸基崖團(tuán)上的羥基時(shí)連接起來(lái)形掠成酯鍵，而屆不是連接互裕補(bǔ)堿基之間牲的氫鍵。宅【典題分類綠精析】臟考點(diǎn)拔一、基因工沙程的概念賣例1．（2亭005高考罷廣東）以下載有關(guān)基因工虹程的敘述，提正確的是做（代）鐮A、基因工超程是細(xì)胞水赤平上的生物保工程暫B、基因決工程的產(chǎn)物雜對(duì)人類都是諒有益的袋C、基因工莫程產(chǎn)生的變忙異屬于人工撫誘變廣D、基因橡工程育種的狀優(yōu)點(diǎn)之一是疫目的性強(qiáng)療分認(rèn)析：糕本題考查的級(jí)知識(shí)點(diǎn)是基三因工程的風(fēng)概念死。慎解答本題的誕關(guān)鍵是理解妙基因工程的杯概念。摔基因工程是縣在生物體外唯，通過(guò)對(duì)D僵NA分子進(jìn)杠行人工“剪味切”和“拼執(zhí)接”，對(duì)生桌物的基因進(jìn)膀行改造(目仆的性強(qiáng))和滔重新組合(兆基因重組)街，然后導(dǎo)入角受體細(xì)胞內(nèi)亡進(jìn)行無(wú)性繁憂殖，使重組威基因在受體音細(xì)胞內(nèi)表達(dá)同，產(chǎn)生出人櫻類所需要的辭基因產(chǎn)物.粥但并不是所揮有的基因產(chǎn)刊物對(duì)人類都樹有益的艦。所以選D販。虹坡答案：D坊丈點(diǎn)評(píng)：正確食理解基因工匙程的概念是忍解題的關(guān)鍵梳。齒富譯勺果扣澇團(tuán)紛屬厭纖考點(diǎn)旺二、基因工保程的基本工飼具象例2.下列拳關(guān)于限制酶墾的說(shuō)法不正瘦確的是扔A．限制酶亡廣泛存在于連各種生物中拘，微生物中俱很少分布哨B．一種限循制酶只能識(shí)倍別一種特定奶的核苷酸序割列洲C．不同的下限制酶切割間DNA的切靈點(diǎn)不同纏D．限制酶旋的作用是用巾來(lái)提取目的浸基因裙分析：此題勤主要考察限上制酶的有關(guān)丙知識(shí)。解答臘本題的關(guān)鍵氏是理解限制招酶的來(lái)源和蘿限制酶的特毫點(diǎn)。限制酶良主要是從原漂核生物中分秋離出來(lái)的，厚并不是廣泛戴存在于各種北生物中；一徒種限制酶能那識(shí)別雙鏈D惕NA的某種享特定核苷酸也序列，并且籮使每一條鏈絨中特定部位哥的兩個(gè)核苷迅酸之間的磷粉酸二酯鍵斷膀開；DNA鐘分子經(jīng)限制屠酶切割形成議黏性末端和歪平末端兩種買。答案：B樓點(diǎn)評(píng)：考察倡有關(guān)限制酶關(guān)的題目，主態(tài)要是考察限藝制酶的特點(diǎn)鴉，這一點(diǎn)一轟定要牢記。姥例3別．在基因工歇程中用來(lái)完牧成基因的剪紛接的工具是憤丘A．限制酶既和連接酶形B．賠限制酶和水檢解酶呆C．限制酶語(yǔ)和運(yùn)載體陵D連欄接酶和運(yùn)載金體賭分析：本題爺考查限制酶凈和連接酶的航有關(guān)知識(shí)。繳解答本題的卵關(guān)鍵是裕“養(yǎng)剪接爆”劉二字，是既化剪又接。刊限制性內(nèi)切場(chǎng)酶(即限制網(wǎng)酶)是剪切同基因的扯“大剪刀久”淺，DNA連稈接酶是將D陡NA末端之蓮間的縫隙敏“猛縫合宇”哲起來(lái)的寫“掛基因的針線艱”視。所以，剪獵接工具是限撇制酶和連接薄酶。答案：A駝點(diǎn)評(píng)：本題她注意審題，藥剪接是既剪春又接，需要火限制酶和連志接酶。掠例4暑．有關(guān)基因級(jí)工程的敘述放正確的是送A．限制酶圍只在獲取目迫的基因時(shí)才歸用早慨帳B．重組質(zhì)臺(tái)粒的形成是惰在細(xì)胞內(nèi)完施成的纏C．質(zhì)粒都絲可以作為運(yùn)備載體濕D．蛋白質(zhì)桌的氨基酸排嫌列順序可以刷為合成目的眉基因提供線霧索據(jù)分析：本題晨綜合考察了殊基因工程中高所用到的工語(yǔ)具。違在基因工程輪中，不僅要炮用限制酶切逼割目的基因挑，還要用同董一種限制酶耍在質(zhì)粒上切損割出一個(gè)切閣口，使目的多基因與質(zhì)粒閣切口的黏性算末端能進(jìn)行畫堿基互補(bǔ)配完對(duì)，所以A字錯(cuò)；重組質(zhì)扣粒是在細(xì)胞觀外進(jìn)行的，供所以B錯(cuò)；賭并不是所有逆的質(zhì)粒都可葡作運(yùn)載體，福在科學(xué)研究盞中，人們通團(tuán)常只是用大寧腸桿菌的質(zhì)沸粒(其上有瓶抗藥基因)年作運(yùn)載體，串所以C錯(cuò)；群在人工合成過(guò)目的基因的才方法中，有龜一種方法是罪根據(jù)已知蛋棗白質(zhì)的氨基疤酸序列，推往測(cè)出相應(yīng)的范mRNA序聰列，然后按惜照堿基互補(bǔ)葵配對(duì)原則，黑推測(cè)出它的架結(jié)構(gòu)基因的燕核苷酸序列現(xiàn)，最后通過(guò)披化學(xué)方法，惹以單核苷酸誤為原料合成范目的基因。耗所以D項(xiàng)正破確。答案：D炊點(diǎn)評(píng)：解答眾本題時(shí)要綜殼合考慮基因圖工程的基本灘工具的特點(diǎn)次、條件、適責(zé)用范圍。熱例5．下列撐哪項(xiàng)通常不財(cái)被用作基因木工程的運(yùn)載涉體烏A．細(xì)菌質(zhì)若粒兵臣B．噬菌體斧C．動(dòng)植物踢病毒品D．細(xì)菌壟核區(qū)的DN恨A詠分析：本題敞考察基因工蝶程中的工具米——險(xiǎn)運(yùn)載體。解謹(jǐn)答本題的關(guān)放鍵是記住、中理解運(yùn)載體適必須具備的資條件和課本妖上講的常用惜運(yùn)載體。召作為運(yùn)載體沉必須具備的與條件：伍①刃在宿主細(xì)胞狂中保存下來(lái)漲并大量復(fù)制零港②擾有多個(gè)限制墾性內(nèi)切酶切睡點(diǎn)裁③旺有一定的標(biāo)匙志基因，便贈(zèng)于篩選。服記住常用的久運(yùn)載體有：鋤質(zhì)粒、噬菌獎(jiǎng)體、動(dòng)植物諒病毒等。違細(xì)菌的核區(qū)痰由一個(gè)大型李的環(huán)狀DN檢A分子反復(fù)搶折疊纏繞而倚成，控制著坦細(xì)菌的主要糊性狀，所以碌一般不被用職作基因工程能的運(yùn)載體。答案：D請(qǐng)點(diǎn)評(píng)：牢記拐作為運(yùn)載體茶必須具備的筆3個(gè)條件是纏解答本題的族關(guān)鍵。芒考點(diǎn)獨(dú)三、羊限制酶所識(shí)共別序列畜的珠特點(diǎn)稼例6用．摸［2005彈天津］蔑（1）限制速性內(nèi)切酶Ⅰ喉的識(shí)別序列蛙和切點(diǎn)是—換G↓GAT尚CC—，限瘡制性內(nèi)切酶后Ⅱ的識(shí)別序扶列和切點(diǎn)是顆—↓GAT樂(lè)C—。在質(zhì)唉粒上嚴(yán)有酶濃Ⅰ婦的一個(gè)切點(diǎn)歐，在目的基請(qǐng)因的兩側(cè)各冬有貝1個(gè)酶Ⅱ的趴切點(diǎn)。尾①蠢請(qǐng)畫出質(zhì)粒已被限制酶饒Ⅰ噴切割后形成珠的黏性未端穗。粉_____城_____竿_____聾_____循_____仆__燥②駁請(qǐng)畫出目的喉基因兩側(cè)被沙限制酶沫Ⅱ穗切割后形成站的黏性未端隨。耗_____該_____霜_____弄_____堅(jiān)_較③綁在飲DNA連接具酶的作用下追，上述兩種海不同限制酶宗切割后形成國(guó)的訊黏性未端能墨否連接起來(lái)殖？為什么？仇_____鬼_____送_____射_____軌_____譜_____艙_____佳_____致_____柴_____拉_____屢_遺分析：本題欺主要考察黏征性末端的知咳識(shí)。解答本捷題的關(guān)鍵是俱理解限制酶價(jià)的特點(diǎn)。在丑切割目的基備因和運(yùn)載體塵時(shí)，一定要奸使用同一種慰限制性內(nèi)切宰酶，這樣，喘切出的切口繭才一樣，才州能進(jìn)行堿基煌互補(bǔ)配對(duì)連洽接起來(lái)。兩癥個(gè)黏性末端蹄只要一樣就胡可以進(jìn)行堿用基互補(bǔ)配對(duì)設(shè)，再通過(guò)D竿NA連接酶喚連接起來(lái)。貍答案：（濁1）向

③鐘可以連接。爛因?yàn)橛蓛煞N亦限制性內(nèi)切主酶切割后所警形成的黏性餡末端是相同汽的（或移“踏是可以互補(bǔ)即的戀”燥）。衫點(diǎn)評(píng)：限制矛酶所識(shí)別的動(dòng)是特定的堿蔽基序列，并賽在特定部位皮進(jìn)行切割，社限制酶不同尼，所識(shí)別的獨(dú)堿基序列不攻同，黏性末朋端不同。但按不同的粘性乓末端有時(shí)是槍可以進(jìn)行拼蒜接的，如：罷黏性末端覆。兩者不要霜混淆。旋克黨滾烘賣蠟識(shí)膏【針對(duì)性練彎習(xí)】轟1晃．實(shí)施基因家工程第一步宇的一種方法執(zhí)是把所需的攪基因從供體里細(xì)胞內(nèi)分離叼出來(lái)，這要剖利用限封制施性內(nèi)切酶。罩一種限制性蘿內(nèi)切酶能識(shí)槳?jiǎng)eDNA子耀中的GAA埋TTC順序槐，切點(diǎn)在G膝和A之間，處這是應(yīng)用了贊酶的部A．酶的高晃效性B愛(ài)．上酶的專一性仙槍C．酶的多脾樣性珠李D續(xù)．藏酶的催化活歇性受外界條焦件影響鴨2．以下說(shuō)訴法正確的是負(fù)巾A．所有的胸限制酶只能紅識(shí)別同一種邊特定的核苷閃酸序列邊B．質(zhì)粒是合基因工程中列惟一的運(yùn)載起體泳C．運(yùn)載體敬必須具備的跨條件之一是處：具有多個(gè)惰限制酶切點(diǎn)流，以便與外糖源基因連接斃D．基因治步療主要是對(duì)志有缺陷的細(xì)妨胞進(jìn)行修復(fù)母3.下列黏悉性末端屬于吵同一種限制祝性內(nèi)切酶切幼割的是（潑）將哈A．熄①②蜜恐B．浪①③渣起C．蠢②④愉糧D．歇③④驢4.下列四厘條DNA分悉子，彼此間夠具有粘性末蓮端的一組是棒周槳較片知A．徒①②億慧做B．候②③礦寸綱C．券③④映厚認(rèn)D．柴②④戲5．依右圖拋有關(guān)基因工返程的工具酶希功能的敘述浪，師不輔正確的是姿A．切斷a亞處的酶為限流制核酸性內(nèi)衰切酶覽屆B．連接a彩處的酶為D戰(zhàn)NA連接酶畝C．切斷b溝處的酶為解滑旋酶薦應(yīng)欠叛D．切斷b僑處的為限制慨性內(nèi)切酶毯6．居不芒屬于質(zhì)粒被尼選為基因運(yùn)縣載體的理由柳是威A．能復(fù)鍛制效著坐B．有薄多個(gè)限制酶比切點(diǎn)惱C．具有孝標(biāo)記基因者楊消D．它閣是環(huán)狀DN企A掛7.基因工趕程技術(shù)也稱弊為DNA重庫(kù)組技術(shù)，其裕實(shí)施必須具錘備的四個(gè)必轟要條件是外A.目的基再因趨限制性內(nèi)切槐酶運(yùn)付載體析爭(zhēng)體細(xì)胞復(fù)屋B.重組D印NA對(duì)RNA聚定合酶因限制潛性內(nèi)切酶撈連接渠酶冰C.工具酶礎(chǔ)覆目的基因奧耳運(yùn)載體棉水媽受體細(xì)胞寇D.模板D武NA侄信使RN捷A沒(méi)質(zhì)劉粒頑宜受體回細(xì)胞就8．下列關(guān)亦于各種酶作席用的敘述，蒜不正確的是爪棋劣A．DNA預(yù)連接酶能使笨不同脫氧核羅苷酸的磷酸暑與脫氧核糖愚連接資B．RNA英聚合酶能與吼基因的特定菠位點(diǎn)結(jié)合，口催化遺傳信辯息的轉(zhuǎn)錄格C．一種D盾NA限制酶倡能識(shí)別多種拾核苷酸序列奪，切割出多時(shí)種目的基因程D．胰蛋白醉酶能作用于她離體的動(dòng)物拼組織，使其慢分散成單個(gè)優(yōu)細(xì)胞劑9.下列關(guān)涂于限制酶的那說(shuō)法不正確雙的是扶A.限制酶元廣泛存在于慕各種生物中殲，尤其在微左生物細(xì)胞中高分布最多狀B.不同的柄限制酶識(shí)別直不同的核苷境酸序列暗C.限制酶瀉能識(shí)別不同朵的核苷酸序少列，體現(xiàn)了蔑酶的專一性西D.限制酶仆的作用只是踩用來(lái)提取目魄的基因舍10殲．有關(guān)基因胃工程的敘述猶中，室不份正確的是驅(qū)劉么A.倦DNA連接供酶將黏性未檔端的堿基對(duì)矩連接起來(lái)響B(tài).限浩制性內(nèi)切酶院可用于目的?；虻墨@得弱招C.見(jiàn)目的基因須提由運(yùn)載體導(dǎo)地入受體細(xì)胞剝芽伙D出.聲人工合成目互的基因不用倚限制性內(nèi)切衫酶糊11．下圖灑所示限制酶顯切割基因分丘子的過(guò)程，星從圖中可知幻，該限制酶王能識(shí)別的堿攜基序列和切藝點(diǎn)是冠A．駐CTTAA艙G，切點(diǎn)在塞C和T之間牲步B．糞CTTAA棚G，切點(diǎn)在掛G和A之間哭C青．魔GAATT孫C，切點(diǎn)在瞎G和A之間冬承D．恢GAATT蔑C，切點(diǎn)在財(cái)C和T之間牛翅逢12.下列爽關(guān)于質(zhì)粒的堡敘述，正確態(tài)的是奔是（些）仗A、質(zhì)粒是濾廣泛存在于科細(xì)菌細(xì)胞中己的一種顆粒誕狀細(xì)胞器倍B、質(zhì)粒是藏細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)歡中能夠自主濕復(fù)制的小型燃環(huán)狀DNA從分子齊C、質(zhì)粒只真有在導(dǎo)入宿辰主細(xì)胞后才哭能在宿主細(xì)伯胞內(nèi)復(fù)制慮D、細(xì)菌質(zhì)規(guī)粒的復(fù)制過(guò)尼程一定是在布宿主細(xì)胞外蠢獨(dú)立進(jìn)行的奉13．科學(xué)叨家常選用的販細(xì)菌質(zhì)粒往赤往帶有一個(gè)昨抗菌素抗性痰基因，該抗姿性基因的主艘要作用是甩A．提高受煉體細(xì)胞在自門然環(huán)境中的鷹耐熱性紀(jì)B．有利于通檢測(cè)目的基數(shù)因否導(dǎo)入受貼體細(xì)胞薯C．增加質(zhì)慈粒分子的相原對(duì)分子質(zhì)量壘雹D．偽便于與外源邪基因連接奮14．下圖災(zāi)是基因工程揪主要技術(shù)環(huán)購(gòu)節(jié)的一個(gè)基甜本步驟，這率一步需用到熱的工具是捷A．DNA盟連接酶和解屈旋酶蚊段標(biāo)B中．DNA聚爸合酶和限制啦性核酸內(nèi)切免酶扭C．限制性氧核酸內(nèi)切酶憶和DNA連撐接酶仗D．袋DNA聚合疤酶和RNA意聚合酶砍15．限制岸酶是一種核賤酸切割酶，違可辨識(shí)并切袋割貞DNA匯分子上特定推的核苷酸堿腦基序列。下鑼圖為四種限齊制酶丙BamH朗I忙，完Eco符RI重，瓦Hin絨d墨Ⅲ腔以及慰Bg徐l至Ⅱ鄉(xiāng)的辨識(shí)序列表。箭頭表示霸每一種限制律酶的特定切旋割部位，其規(guī)中哪兩種限費(fèi)制酶所切割功出來(lái)的萬(wàn)DNA婚片段末端可呈以互補(bǔ)黏合嘉？其正確的蒙末端互補(bǔ)序史列為何？六恐A.Ba俗mH耽I排和和Eco控RI燦；末端互補(bǔ)趣序列股—友AATT徐—竭B.Ba甩mH為I候和當(dāng)Hin翅d鄉(xiāng)Ⅲ襪；末端互補(bǔ)酒序列材—衡GATC殃—婦C.Ec敘oR你I浪和稀Hin眠d墓Ⅲ閘；末端互補(bǔ)為序列控—誼AATT愈—學(xué)D.Ba哭mH捉I叼和逃Bgl嗽II友；末端互補(bǔ)運(yùn)序列失—肌GATC膀—?jiǎng)?6．在印DNA疤測(cè)序工作中環(huán)，需要將某講些限制性內(nèi)濱切核酸酶的斧限制位點(diǎn)在增DNA啊上定位，使切其成為亂DNA沃分子中的物岸理參照點(diǎn)。勺這項(xiàng)工作叫退做聾“發(fā)限制酶圖譜徑的構(gòu)建遮”重。假設(shè)有以盤下一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)比：用限制酶是纖Hind蜻Ⅲ勒，BamH糖Ⅰ魯和二者的混劈合物分別降留解一個(gè)曬4kb飲（1kb即侮1千個(gè)堿基印對(duì)）大小的炸線性泳DNA添分子，降解刺產(chǎn)物分別進(jìn)倍行凝膠電泳票，在電場(chǎng)的貴作用下，降蕩解產(chǎn)物分開繭，如下圖所浴示。稠?yè)?jù)此分析，它這兩種限制堆性內(nèi)切核酸醋酶在該廢DNA敵分子上的限策制位點(diǎn)數(shù)目陵是以下哪一溫組？開A．Hin尤d蠶Ⅲ豐1個(gè)，Ba擾mH康Ⅰ瘡2禁僅個(gè)花堅(jiān)塔B．Hin避d餡Ⅲ誕2個(gè)，Ba閉mH壇Ⅰ掩3個(gè)魂C．Hin反d賄Ⅲ蟻2個(gè)，Ba群mH碰Ⅰ梁1做博個(gè)刑釋遙D．Hin詠d依Ⅲ教和BamH鐵Ⅰ促各有帥2趙個(gè)貴17.兩個(gè)生核酸片段在槽適宜的條件奪下，經(jīng)X酶刻的作用，發(fā)抓生下述變化關(guān)，則X酶是饅A.連接酶刮B.父RNA聚合賞酶要C.D冬NA聚合酶年D求.限制酶布18．基因膚工程中涉及太多種工具酶堅(jiān)：焦（1）限制輪性內(nèi)切酶是盒一類能識(shí)別坡特定核苷酸岸序列并在特輩定位點(diǎn)切割進(jìn)雙鏈DNA貞的形“疤基因剪刀退”凳。被限制酶仍識(shí)別的序列鏈往往正反讀強(qiáng)順序相同，符斷裂的位置邀交錯(cuò)，但又鉗是圍繞著一禿個(gè)軸線（對(duì)透稱軸）對(duì)稱瓣排列，如下識(shí)左圖。Ps獅tI和Ec眨oRI都是益限制酶。請(qǐng)傷補(bǔ)全下右圖遍中的互補(bǔ)鏈丑，畫出對(duì)稱鍋軸以及切割前后的產(chǎn)物。濁瓜遣途拜還依場(chǎng)爪跡思（2）DN價(jià)A連接酶是悼基因操作的抽“蛛針線勻”瑞，其作用是扇把基于坦姨慌叼收能力而粘貼揚(yáng)在一起但存養(yǎng)在的切口封苦閉，進(jìn)而才牌可能形成有擺意義的謠恰來(lái)產(chǎn)恥蝦。剝（3）逆轉(zhuǎn)慎錄酶也常被太用于基因工熊程，其存在本于榮鏈?zhǔn)迹ㄉ铮┲型?，催化以屑柱平仰為模板合成旋DNA的過(guò)和程。萍猴京狡胞增租19.越利用基因工逢程生產(chǎn)蛋白飼質(zhì)藥物，經(jīng)副歷了三個(gè)發(fā)鏈展階段。第悔一階段，將昂人的基因轉(zhuǎn)落入細(xì)菌細(xì)胞域；第二階段喘，將人的基齡因轉(zhuǎn)入小鼠雀等動(dòng)物的細(xì)宜胞。前兩個(gè)豬階段都是進(jìn)爺行細(xì)胞培養(yǎng)項(xiàng)，提取藥物攔。第三階段飲，將人的基徑因轉(zhuǎn)入活的奸動(dòng)物體，飼磨養(yǎng)這些動(dòng)物私，從乳汁或敞尿液中提取姓藥物。但（1）將人匆的基因轉(zhuǎn)入嫌異種生物的趟細(xì)胞或個(gè)體嫩內(nèi)，能夠產(chǎn)廈生藥物蛋白槍的原理是基昆因能毯控牢制匯產(chǎn)綢牢。醉（2）人的典基因能和異術(shù)種生物的基天因拼接在一執(zhí)起，是因?yàn)榫S它們的分子禍都具有雙螺啦旋結(jié)構(gòu)，都校是由四種肺_____棍___像____翠構(gòu)成，基因序中堿基配對(duì)巧的規(guī)律都是筐山_____卷_____悅。稈（3）人的斗基因在異種兇生物細(xì)胞中種表達(dá)成蛋白亡質(zhì)時(shí)，需要匯經(jīng)過(guò)潑按和翻譯兩個(gè)懂步驟。在翻蠟譯中需要的搶模板是錦輪，原料是氨娘基酸，直接虎能源是AT餡P，搬運(yùn)工定兼裝配工是惠嫁輝，將氨基酸攏的肽鍵連接候成蛋白質(zhì)的浸場(chǎng)所是絞_____憤___紋，“翻譯”猛可理解為將顏由叫____承個(gè)“字母”軟組成的核酸太“語(yǔ)言”翻顧譯成由呢制個(gè)“字母”處組成的蛋白堆質(zhì)“語(yǔ)言”斯，從整體來(lái)塘看膀蔑且在翻譯中充偵任著“譯員岸”。吃（4）利用抖轉(zhuǎn)基因牛甩、傾羊乳汁提取纏藥物工藝簡(jiǎn)制單，甚至可怎直接飲用治件病。如果將岡藥物蛋白基爆因移到動(dòng)物馬如牛章、朱羊的膀胱上獵皮細(xì)胞中，坐利用轉(zhuǎn)基因雹牛羊尿液生互產(chǎn)提取藥物拌比乳汁提取迷藥物的更大棗優(yōu)越性在于間：處于不同圖發(fā)育時(shí)期的汁拾動(dòng)物都可生究產(chǎn)藥物。兔20.在某害一特定的植吹物基因工程暈中，用土壤獎(jiǎng)農(nóng)桿菌中的廁Ti質(zhì)粒作靈為運(yùn)載體。爹把目的基因嬌重組入Ti疼質(zhì)粒上的T棟-DNA片姑段中，再將剩重組的T-銀DNA插入廣植物細(xì)胞的菊染色體DN梁A中。部(1)科學(xué)特家在進(jìn)行上貧述基因操作階時(shí)，要用同黃一種料驗(yàn)驅(qū)用匠凳叮分別切割質(zhì)沈粒和目的基培因，質(zhì)粒的址黏性末端與攻目的基因D餓NA片段的倆黏性末端就班可通過(guò)硬泳巷叔器濾而黏合。虛(2)將攜廣帶抗除草劑捐基因的重組良Ti質(zhì)粒導(dǎo)肅入二倍體油戒菜細(xì)胞，經(jīng)昌培養(yǎng)、篩選襖獲得一株有返抗除草劑特瞞性的轉(zhuǎn)基因吳植株。經(jīng)分壇析，該植株冰含有一個(gè)攜攻帶目的基因揮的T-DN殿A(yù)片段，因槍此可以把它追看作是雜合乞子。理論上匆，在該轉(zhuǎn)基圾因植株自交癢F半1律代中，仍具漢有抗除草劑世特性的植株仇占總數(shù)的罰傭股，機(jī)(3)種植第上述轉(zhuǎn)基因扣油菜，它所黃攜帶的目的垂基因可以通負(fù)過(guò)花粉傳遞井給近緣物種顯，造成防“摟基因污染薄”烈。如果把目芒的基因?qū)胧枞~綠體DN墨A中，就可架以避免檔“崖基因污染出”耗，原因是胡葉迷夫銳斷辱虛梅谷勝居比仙敲筐燒渴。爬【課后答案青點(diǎn)撥】綿思考與探究垂（P7）洞1.鳥不能。連秩接如下：善電2和7能連狡接形成哥：崇…ACGT佳…侄定堵蒼筋喝…TGCA拆…；倍4和8能連醋接形成稍：濱…GAAT幼TC…洋差秒落尾…CTTA榴AG…；京3和6能連漲接形成漠：蓬…GCGC杰…沸坦渡平泡崇…CGCG港…；拜1和5能連循接形成寄：倒…CTGC權(quán)AG…壺糧仔淋鋪系…GACG協(xié)TC…。置解析：限制密酶具有特異蛛性，一種限票制酶只能識(shí)貞別特定的堿定基序列，并振在特定的部憐位切開。戴2.聯(lián)系你河已有的知識(shí)被，想一想，饅為什么細(xì)菌志中限制酶不旨剪切細(xì)菌本烏身的DNA湯？畫解析愈：迄今為止啊，基因工程谷中使用的限固制酶絕大部相分都是從細(xì)巧菌或霉菌中給提取出來(lái)的聰，它們各自撈可以識(shí)別和惡切斷DNA屈上特定的堿氧基序列。細(xì)何菌中限制酶魄之所以不切何斷自身DN背A，是因?yàn)槿菸⑸镌陂L(zhǎng)寧期的進(jìn)化過(guò)糟程中形成了恩一套完善的刪防御機(jī)制，號(hào)對(duì)于外源入微侵的DNA賺可以降解掉葡。生物在長(zhǎng)昌期演化過(guò)程慘中，含有某是種限制酶的泛細(xì)胞，其D災(zāi)NA分子中欲或者不具備腔這種限制酶腹的識(shí)別切割炸序列，或者墊通過(guò)甲基化舊酶將甲基轉(zhuǎn)志移到所識(shí)別撓序列的堿基電上，使限制飲酶不能將其崇切開。這樣載，盡管細(xì)菌宗中含有某種饞限制酶也不吳會(huì)使自身的者DNA被切膝斷，并且可呀以防止外源掌DNA的入您侵（本題不赤要求學(xué)生回?zé)鸬耐耆〗處熆蓞⒖妓處熡脮斜⒌奶崾?，根莖據(jù)學(xué)生的具掩體情況，給怎予指導(dǎo)。上蛛述原則也應(yīng)恰適用于其他刺章節(jié)中有關(guān)免問(wèn)題的回答亮。）。頂3.天然的終DNA分子鍬可以直接用鍛做基因工程辮載體嗎？為紀(jì)什么？燦解析浸：基因工程誕中作為載體濫使用的DN掏A分子很多截都是質(zhì)粒（或plasm領(lǐng)id），即光獨(dú)立于細(xì)菌閘擬核處染色辛體DNA之肚外的一種可庭以自我復(fù)制街、雙鏈閉環(huán)敢的裸露的D蔥NA分子。膨是否任何質(zhì)沃粒都可以作議為基因工程訴載體使用呢莖？其實(shí)不然漫，作為基因抽工程使用的冠載體必需滿鉛足以下條件段。貿(mào)（1）載體獲DNA必需品有一個(gè)或多朝個(gè)限制酶的荒切割位點(diǎn)，酒以便目的基求因可以插入閱到載體上去匯。這些供目擊的基因插入浙的限制酶的織切點(diǎn)所處的漫位置，還必貝須是在質(zhì)粒著本身需要的決基因片段之干外，這樣才郊不至于因目瘦的基因的插尋入而失活。?。?）載體沸DNA必需瓜具備自我復(fù)陰制的能力，葵或整合到受速體染色體D鍛NA上隨染節(jié)色體DNA佳的復(fù)制而同棚步復(fù)制。圈（3）載體凱DNA必需邁帶有標(biāo)記基浩因，以便重讀組后進(jìn)行重掃組子的篩選患。俘（4）載體識(shí)DNA必需貢是安全的，候不會(huì)對(duì)受體另細(xì)胞有害，鍵或不能進(jìn)入停到除受體細(xì)什胞外的其他遇生物細(xì)胞中汪去。信（5）載體光DNA分子寒大小應(yīng)適合詢，以便提取辟和在體外進(jìn)柿行操作，太基大就不便操牲作。嫩實(shí)際上自然健存在的質(zhì)粒前DNA分子熊并不完全具覺(jué)備上述條件鄭，都要進(jìn)行怕人工改造后顯才能用于基榆因工程操作脾。斷4.網(wǎng)上查溝詢：DNA令連接酶有連蹦接單鏈DN垮A的本領(lǐng)嗎譜？障解析醉：迄今為止淺，所發(fā)現(xiàn)的躍DNA連接序酶都不具有宏連接單鏈D累NA的能力帶，至于原因燦，現(xiàn)在還不譽(yù)清楚，也許敞將來(lái)會(huì)發(fā)現(xiàn)舉可以連接單授鏈DNA的科酶。音P4汪尋根問(wèn)底憂：信根據(jù)你所掌夜握的知識(shí)，鄙你能分析出還限制酶存在泉于原核生物抹中的作用是肉什么嗎？射解析追：原核生物廈容易受到自葡然界外源D富NA的入侵磁，但是，生浪物在長(zhǎng)期的涉進(jìn)化過(guò)程中符形成了一套撿完善的防御津機(jī)制，以防溫止外來(lái)病原寺物的侵害。老限制酶就是堪細(xì)菌的一種怖防御性工具恢，當(dāng)外源D緊NA侵入時(shí)些，會(huì)利用限層制酶將外源章DNA切割潑掉，以保證偶自身的安全鬧。所以，限底制酶在原核胞生物中主要蒜起到切割外飯?jiān)碊NA、球使之失效，耐從而達(dá)到保昆護(hù)自身的目葡的。長(zhǎng)尋根問(wèn)底（沉P6）：駝DNA連接擱酶與DNA循聚合酶是一誦回事嗎？為之什么？誼答：不是一犯回事?；蚍还こ讨兴么痰倪B接酶有測(cè)兩種：一種聞是從大腸桿轉(zhuǎn)菌中分離得掘到的，稱之英為E資.償coli連欠接酶。另一槍種是從T4作噬菌體中分按離得到，稱暫為T4連接攻酶。這兩種秘連接酶催化俱反應(yīng)基本相諒?fù)?，都是連演接雙鏈DN候A的缺口（廳nick）悼，而不能連棒接單鏈DN堅(jiān)A。DNA誰(shuí)連接酶和D飯NA聚合酶惕都是形成磷啞酸二酯鍵（丘在相鄰核苷蔥酸的3位碳嬌原子上的羥眾基與5位碳蹈原子上所連姻磷酸基團(tuán)的重羥基之間形李成），那么丈，二者的差紛別主要表現(xiàn)摟在什么地方奏呢？懸（1）DN也A聚合酶只狐能將單個(gè)核萍苷酸加到已匯有的核酸片貸段的3′末筒端的羥基上淡，形成磷酸可二酯鍵；而超DNA連接揉酶是在兩個(gè)使DNA片段門之間形成磷鄙酸二酯鍵，歷不是在單個(gè)爽核苷酸與D蠢NA片段之燦間形成磷酸悼二酯鍵。榴（2）DN候A聚合酶是念以一條DN守A鏈為模板櫻，將單個(gè)核膀苷酸通過(guò)磷逆酸二酯鍵形垮成一條與模蛇板鏈互補(bǔ)的蟲DNA鏈；魄而DNA連書接酶是將D師NA雙鏈上某的兩個(gè)缺口允同時(shí)連接起敘來(lái)。因此D濕NA連接酶脖不需要模板讓。閑此外，二者耗雖然都是由躲蛋白質(zhì)構(gòu)成駝的酶，但組酷成和性質(zhì)各湯不相同。庭模擬制作討意論題兼（P6）：抱1.你模塵擬插入的D尊NA片段能呆稱得上一個(gè)軍基因嗎？歌提示：不能騾。因?yàn)橐话泱E基因有上千亭個(gè)堿基對(duì)。嘆2.如果剩你操作失誤傻，堿基不能吩配對(duì)?？赡苈┦鞘裁丛蚬荚斐傻?？驅(qū)解析樓：可能是剪焦切位點(diǎn)或連語(yǔ)接位點(diǎn)選得擇不對(duì)（也可巧能是其他原花因）。昨P6厲旁欄思考題售：鄰想一想，具慨備什么條件娛才能充當(dāng)“確分子運(yùn)輸車道”？素解析現(xiàn)：能自我復(fù)掀制、有一個(gè)睬或多個(gè)切割徐位點(diǎn)、有標(biāo)姻記基因位點(diǎn)怪及對(duì)受體細(xì)護(hù)胞無(wú)害等。凡【拓展閱讀孕】巾1.演磷酸二酯鍵薯磷酸二酯鍵傳全稱為分3′,5′艙－慎磷酸二酯鍵臭，冶是核酸中核健苷酸的連接濾方式，組成綁了核酸的一優(yōu)級(jí)結(jié)構(gòu)。在糠核酸中一個(gè)懂核苷酸核糖界上第3位的紙羥基與下一谷個(gè)核苷酸核援糖上第5位莊的磷酸羥基披脫水縮合成堵酯鍵，該酯爛鍵稱3′,剩5′狗－圣磷酸二酯鍵內(nèi)。若干個(gè)核塘苷酸間以3罪′,5′洗－找磷酸二酯鍵信連接成的多截核苷酸鏈為炎核酸。在鏈演的一端的一身個(gè)核苷酸核梯糖上第5位姜連接的磷酸柔只有一個(gè)酯烘鍵，稱此核寧苷酸為DN抹A鏈的5′獵磷酸末端或重5′端。另課一端核苷酸蛋上第3位的美羥基是自由辭的，所以此浪核苷酸稱為占3′羥基末半端或3′端瞎。鏈內(nèi)的核保苷酸第5位賓上的磷酸已轟形成二酯鍵訓(xùn)，第3位上遲的羥基也已袍參與二酯鍵掩的形成，故峰稱核苷酸殘猶基。嚷2.惕騾影響限制性爺內(nèi)切酶活性見(jiàn)的因素橫（1）DN初A純度孝在DNA樣批品中若含有憂蛋白質(zhì)，或跟沒(méi)有去除干貌凈制備過(guò)程燥中所用的乙欠醇、EDT膛A、SDS藍(lán)、酚、氯仿圖和某些高濃注度金屬離子嫂，均會(huì)降低蛛限制酶的催陰化活性，甚趕至使限制酶清不起作用。失（2）核酸究?jī)?nèi)切限制酶紛的緩沖液請(qǐng)核酸內(nèi)切限凝制酶的標(biāo)準(zhǔn)途緩沖液包括叉氯化鎂、氯精化鈉或氯化繪鉀、Tri件s-HCL復(fù)、巰基乙醇短或二硫蘇糖共醇(DTT賽)以及牛血盼清白蛋白(琴BSA)等蘭。信使用所有限賊制酶均可發(fā)舉揮活性的一盼種緩沖液。刃不同限制性再內(nèi)切酶對(duì)N臥aCl濃度幫的要求不同隔，這是不同蜜限制酶緩沖擔(dān)液組成上的歲一個(gè)主要的底不同。據(jù)此郊可分為高鹽爽、中鹽和低抗鹽緩沖液，清在進(jìn)行雙酶寇解或多酶解騾時(shí)，若這些隆酶切割可在惜同種緩沖液鏡中作用良好留，則幾種酶材可同時(shí)酶切涌；若這些酶仆所要求的緩設(shè)沖液有所不驚同，可采用貞以下三種方兆法進(jìn)行消化療反應(yīng)：先用清要求低鹽緩迷沖液的限制揉性內(nèi)切酶消姑化DNA，念然后補(bǔ)足適獅量的NaC種l，再用要富求高鹽緩沖束液的限制酶去消化；潑先用一種酶瞞進(jìn)行酶解，兵然后用乙醇吼沉淀酶解產(chǎn)套物，再重懸蚊于另一緩沖賢液中進(jìn)行第園二次酶解。辰（3）酶切紅消化反應(yīng)的怖溫度笑DNA消化等反應(yīng)的溫度是，是影響限蹲制內(nèi)切酶活料性的一個(gè)重星要因素。不不同的核酸內(nèi)菠切限制酶，州具有各自的無(wú)最適反應(yīng)溫書度。多數(shù)限泳制內(nèi)切酶的啦最適反應(yīng)溫抵度是枕37℃刷，少數(shù)限制的性內(nèi)切酶的欣最適反應(yīng)溫車度高于或低接于懷37℃慣。藥（4）DN專A的分子結(jié)掃構(gòu)價(jià)DNA分子憲構(gòu)型對(duì)核酸掌內(nèi)切限制酶哈的活性有很跟大影響，如奪消化超螺旋言的DNA比艇消化線性D抹NA用酶量也要高出許多律倍。眠有些限制酶坡在消化它們惕自己的處于津不同部位的犯限制位點(diǎn)，叼其效率也有閃明顯差異。鑄限制性內(nèi)切蚊酶反應(yīng)的終月止通常是朋采用欲65℃省條件下溫浴需5min；嗚加終止反應(yīng)偏液（如0.裹5mol/慨L的EDT匹A使之在溶摟液中的終濃零度達(dá)到10青mol/即L）螯合M抄g2，以憤終止反應(yīng)。徑【五年高考瘦回放】紛1．［筐2006四壇川屆高考］用基鐵因工程技術(shù)嗽可使大腸桿大菌合成人的禮蛋白質(zhì)。下?lián)趿袛⑹霾徽痛_的是他()塊第A醒．常用相同耍的限制性內(nèi)即切酶處理目邁的基因和質(zhì)式粒驗(yàn)B型．側(cè)DNA格連接酶和流DNA女聚合酶是構(gòu)梨建重組質(zhì)粒敢必需的工具凱酶野C企．可用含抗軟生素的培養(yǎng)挨基檢測(cè)大腸舞桿菌中是否劫導(dǎo)入了重組闖質(zhì)粒選D簡(jiǎn)．導(dǎo)入大腸汪桿菌的目的墊基因不一定歇能成功表達(dá)句答案：B俗命解析：率構(gòu)建重組質(zhì)坡粒必需的工懇具酶是限制扔性內(nèi)切酶和錫DNA封連接酶，其巡作用部位是祥磷酸與脫氧慶核糖之間的儀磷酸二酯鍵驅(qū)，而肉DNA救聚合酶的作助用是在涂DNA凱復(fù)制過(guò)程中蠶用于連接堿垃基間的氫鍵擊，故凈B選項(xiàng)錯(cuò)誤患。作2．［20翅06江蘇高俯考］我國(guó)科下學(xué)家運(yùn)用基寬因工程技術(shù)感，將蘇云金把芽孢桿菌的四抗蟲基因?qū)Т稳朊藁?xì)胞攜并成功表達(dá)返，培育出了怕抗蟲棉。下師列敘述不正厚確的是戀(侮)擱A．基因非爛編碼區(qū)對(duì)于察抗蟲基因在扎棉花細(xì)胞中布的表達(dá)不可短缺少法B．重組D口NA分子中誰(shuí)增加一個(gè)堿毛基對(duì)，不一覆定導(dǎo)致毒蛋估白的毒性喪肝失織C．抗蟲棉濫的抗蟲基因擇可通過(guò)花粉典傳遞至近緣危作物，從而舒造成基因污集染未D．轉(zhuǎn)基因亮棉花是否具周有抗蟲特性朋是通過(guò)檢測(cè)櫻棉花對(duì)抗生承素抗性來(lái)確想定的芽答案：D由局解析：萍基因具有特爐異性，一種腸基因只能控斯制一種性狀嫂的表達(dá)。抗曬蟲基因能表僑達(dá)出致毒蛋回白，導(dǎo)致害約蟲因食用抗凱蟲棉后死亡臉，而不能填產(chǎn)生對(duì)抗生跑素的抗性。際因此，轉(zhuǎn)基慮因棉花是否伯具有抗蟲特俯性是不能通編過(guò)檢測(cè)棉花樣抗生素的抗請(qǐng)性對(duì)來(lái)確定瘡的。旬3．趴[2005繪江蘇高考齡]塊在植物基因勇工程中，用惠土壤農(nóng)桿菌伍中的叮Ti貨質(zhì)粒作為運(yùn)顯載體．把目屯的基因重組池入躍Ti么質(zhì)粒上的孩T-DNA病片段中，再鞏將重組的貪T-DNA盲插入植物細(xì)乓胞的染色體假DNA預(yù)中。竄(1)足科學(xué)家在進(jìn)袖行上述基因冒操作時(shí)，要跟用同一種抖菊礙繁分別切割質(zhì)抓粒和目的基派因，質(zhì)粒的理黏性末端與量目的基因淋DNA憲片段的黏性殖末端就可通挽過(guò)卵涌去而黏合。哪(2)觸將攜帶抗除先草劑基因的座重組玩Ti級(jí)質(zhì)粒導(dǎo)入二驚倍體油菜細(xì)描胞，經(jīng)培養(yǎng)耗、篩選獲得殃一株有抗除赤草劑特性的服轉(zhuǎn)基因植株利。經(jīng)分析，保該植株含有胞一個(gè)攜帶目摔的基因的肝T-DNA勺片段，因此編可以把