動物細胞融合和單克隆抗體

問題探討

“番茄—馬鈴薯”（理想圖）通過長期的實驗，科學家們采用體細胞雜交技術(shù)獲得了“番茄—馬鈴薯”植株。目前一頁\總數(shù)二十八頁\編于四點如果將奶牛的細胞與植物細胞雜交，得到綠色的小奶牛，那豈不是只要曬曬太陽就可以擠出牛奶嗎？動物細胞也能融合嗎？目前二頁\總數(shù)二十八頁\編于四點動物細胞融合與單克隆抗體目前三頁\總數(shù)二十八頁\編于四點動物細胞融合和單克隆抗體細胞融合是正常的生命活動正在融合的兩個細胞受精作用目前四頁\總數(shù)二十八頁\編于四點一、動物細胞融合3.過程：1.概念：兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程融合含不同DNA的兩個細胞有絲分裂雜交細胞2.原理：細胞膜的流動性目前五頁\總數(shù)二十八頁\編于四點思考題①.植物體細胞雜交時首先應用什么方法去掉細胞壁？酶解法，如纖維素酶,果膠酶②.動物細胞融合時需要進行去壁處理嗎？為什么？無需，因為動物細胞無細胞壁③.植物體細胞雜交誘導原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；PEG等化學方法④.動物細胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能還可以利用滅活的病毒進行誘導⑤.植物體細胞雜交應先進行原生質(zhì)體的融合再進行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個體，動物細胞融合后能形成雜種動物個體嗎？不能目前六頁\總數(shù)二十八頁\編于四點誘導方式物理法化學法生物法：滅活的病毒仙臺病毒紫外線喪失感染性（不感染細胞）保留融合活性（誘導細胞融合）誘導方法目前七頁\總數(shù)二十八頁\編于四點細胞A細胞B雜種細胞滅活的病毒物理法化學法仙臺病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒目前八頁\總數(shù)二十八頁\編于四點過程目前九頁\總數(shù)二十八頁\編于四點細胞融合與誘導細胞融合物質(zhì)：誘導劑：仙臺病毒、聚乙二醇

誘導細胞融合的仙臺病毒必須滅活。

思考討論：為什么細胞融合過程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細胞，而不能誘導細胞融合。目前十頁\總數(shù)二十八頁\編于四點植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合過程原理細胞融合的過程誘導方法用途細胞膜的流動性、細胞的全能性細胞膜的流動性去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導細胞融合物理、化學方法物理、化學、生物方法獲得雜種植株制備單克隆抗體細胞融合，植物組織培養(yǎng)細胞融合目前十一頁\總數(shù)二十八頁\編于四點提問？#抗體是由何種細胞產(chǎn)生的？效應B細胞（漿細胞）。#一個Ｂ淋巴細胞(漿細胞)能分泌多種抗體嗎？

每一個Ｂ淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。B淋巴細胞與抗體的關(guān)系：

１．B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗體。３．動物體內(nèi)的B淋巴細胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。目前十二頁\總數(shù)二十八頁\編于四點抗原動物體內(nèi)刺激效應B抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應B細胞不能增殖產(chǎn)生大量抗體特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應不夠靈敏

所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個問題？目前十三頁\總數(shù)二十八頁\編于四點二、單克隆抗體是B淋巴細胞受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白1.抗體2.概念：由單個B淋巴細胞經(jīng)過克隆形成的基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體特異性強、靈敏度高產(chǎn)量高、純度高3.特點：目前十四頁\總數(shù)二十八頁\編于四點如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞如何篩選？融合方式？目前十五頁\總數(shù)二十八頁\編于四點HAT培養(yǎng)基（屬于選擇性培養(yǎng)基，含有次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)）中進行選擇性培養(yǎng)，由于氨基蝶呤可阻礙DNA正常合成途徑，所以培養(yǎng)基中含有它時，細胞只能通過補救途徑合成DNA。未融合的骨髓瘤細胞合成DNA的主要途徑被培養(yǎng)基中的氨基蝶呤阻斷，又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT），不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤完成DNA的合成過程而死亡。未融合的脾細胞因不能在體外長期存活而死亡；只有融合的雜交瘤細胞由于從脾細胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，因此能在HAT培養(yǎng)基中存目前十六頁\總數(shù)二十八頁\編于四點單克隆抗體大量制備過程（雜交瘤技術(shù)）過程：目前十七頁\總數(shù)二十八頁\編于四點

4.單克隆抗體制備過程

注射抗原B淋巴細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體目前十八頁\總數(shù)二十八頁\編于四點①利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能②利用腫瘤細胞無限增殖的特性③利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞④利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞思考1、本過程利用了哪些原理？目前十九頁\總數(shù)二十八頁\編于四點2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體目前二十頁\總數(shù)二十八頁\編于四點3、整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?（第一次篩選得到雜交瘤細胞（多種），“第二次”需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群。

由于該細胞群是單個雜交瘤細胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學性質(zhì)單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個細胞克隆的含義，只不過克隆的不是B淋巴細胞，而是雜交瘤細胞。）

目前二十一頁\總數(shù)二十八頁\編于四點6.單克隆抗體的應用①、作為診斷試劑——單克隆抗體最廣泛的用途②、用于治療疾病和運載藥物目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”治療腫瘤目前二十二頁\總數(shù)二十八頁\編于四點小結(jié)兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法－－滅活病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優(yōu)勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢目前二十三頁\總數(shù)二十八頁\編于四點1、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細胞A鞏固練習目前二十四頁\總數(shù)二十八頁\編于四點２、在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的

B．雜種細胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導融合的手段相同Ｂ目前二十五頁\總數(shù)二十八頁\編于四點3、單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是------（）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合B.由小鼠一個B淋巴細胞誘導融合而成C.由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成D.由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成D目前二十六頁\總數(shù)二十八頁\編于四點4、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和B淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細胞是（）①淋巴細胞②小鼠骨髓瘤細胞③B淋巴細胞自身融合細胞④小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞⑤雜交瘤細胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C目前二十七頁\總數(shù)二十八頁\編于四點

下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4、圖中B為________過程，常用_________作為誘導劑，該細胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實驗方案的目的是__________3、A是從小鼠的