外源化學(xué)物致癌作用

外源化學(xué)(huàxué)物的

致癌作用

CarcinogenesisofXenobiotics第一頁，共123頁。1目的(mùdì)要求掌握：化學(xué)致癌作用、化學(xué)致癌物、直接致癌物、間接致癌物、終致癌物、完全致癌物的概念，致癌物的分類〔IARC〕；熟悉：細(xì)胞癌變(áibiàn)過程的3個(gè)階段、致癌物評(píng)價(jià)的主要方法；了解：致癌機(jī)制、化學(xué)致癌的阻斷。第二頁，共123頁。2內(nèi)容(nèiróng)一、化學(xué)致癌作用與致癌物二、化學(xué)致癌機(jī)制三、化學(xué)致癌物的分類四、化學(xué)致癌物的評(píng)價(jià)五、化學(xué)致癌過程(guòchéng)的阻斷第三頁，共123頁。3第一節(jié)化學(xué)(huàxué)致癌作用與致癌物一、概述癌癥是嚴(yán)重威脅人類健康和生命(shēngmìng)的疾病。惡性腫瘤發(fā)病和死亡率不斷增高，且發(fā)病年齡年輕化。在很多國(guó)家中，癌癥死亡率占死因順位的第二位，甚至第一位。第四頁，共123頁。45據(jù)IACR的癌癥發(fā)病資料全球每年新發(fā)癌癥患者總數(shù)約為840萬，其中(qízhōng)興旺國(guó)家約占46％，開展中國(guó)家占54％。每年全世界約有700萬人死于癌癥。第五頁，共123頁。56第六頁，共123頁。62006年中國(guó)城鄉(xiāng)居民主要死亡原因統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，惡性腫瘤(èxìngzhǒngliú)已成為中國(guó)城鄉(xiāng)居民首要死因〔2007年5月8日衛(wèi)生部〕。與2005年相比，城市和農(nóng)村居民惡性腫瘤(èxìngzhǒngliú)的死亡率分別上升了％和％，呈顯著增高狀態(tài)。第七頁，共123頁。78全世界新發(fā)癌癥患者(huànzhě)中，僅中國(guó)就占有1/5。腫瘤是我國(guó)勞動(dòng)年齡人口尤其是最正確勞動(dòng)人口的首要死亡原因，在35-59歲年齡人口中，所有年齡組的第一位死因都是腫瘤。只有60歲以后腦血管或心血管疾病才上升為第一位死亡原因。第八頁，共123頁。8降低(jiàngdī)癌癥的發(fā)生率和死亡率是整個(gè)醫(yī)學(xué)面臨的重大挑戰(zhàn)。第九頁，共123頁。910化學(xué)(huàxué)物致癌的歷史可追溯到數(shù)千年前EdwinSmith的文獻(xiàn)中關(guān)于乳腺癌的記載。1700年，Ramazzini描述了第一例職業(yè)腫瘤。他注意到修女中乳腺癌高發(fā)，并將其歸因于單身生活。二、化學(xué)(huàxué)物致癌研究簡(jiǎn)史第十頁，共123頁。101775年P(guān)ott指出煤煙、煤焦油可引起煙囪清潔工發(fā)生陰囊(yīnnáng)癌。1915年日本Yamagava和Ichikawa用煤焦油涂抹兔耳成功地誘發(fā)了實(shí)驗(yàn)性皮膚癌。1922年英國(guó)Kennway從煤焦油中別離出多種多環(huán)芳烴類物質(zhì)，其中有幾種可誘發(fā)動(dòng)物皮膚癌，證實(shí)了化學(xué)物質(zhì)的致癌性。第十一頁，共123頁。111930年生產(chǎn)出第一個(gè)致癌性多環(huán)芳烴——二苯并蒽，并證實(shí)其可誘發(fā)(yòufā)小鼠皮膚癌。1932年強(qiáng)致癌物苯并(a)芘的別離和合成獲得成功。第十二頁，共123頁。121895年，德國(guó)外科醫(yī)生Rehn又發(fā)現(xiàn)苯胺染料生產(chǎn)廠工人膀胱癌發(fā)病率高。1937年，美國(guó)(měiɡuó)人Huepper用狗做實(shí)驗(yàn)證明苯胺工人接觸的聯(lián)苯胺和2-荼胺可致膀胱癌。1945年英國(guó)Case對(duì)染料工業(yè)膀骯癌流行病學(xué)調(diào)查，證實(shí)2-荼胺及聯(lián)苯胺的致癌性。第十三頁，共123頁。13研究發(fā)現(xiàn)，通常在染料化工開展15-20年后，職業(yè)性膀胱癌相繼發(fā)生。德國(guó)1860年始制造染料，1895年首先報(bào)道品紅染料生產(chǎn)工中3例膀胱癌；美國(guó)染料生產(chǎn)始于1917年，1934年出現(xiàn)職業(yè)性膀胱癌；日本的染料化工1925投產(chǎn)，報(bào)道首例職業(yè)性膀胱癌的時(shí)間(shíjiān)是1940年；我國(guó)的染料生產(chǎn)大約在1940年開始，1959年天津報(bào)道第1例職業(yè)性膀胱癌。第十四頁，共123頁。14腫瘤發(fā)生是宿主與環(huán)境之間發(fā)生復(fù)雜、動(dòng)態(tài)的相互作用過程宿主因素：遺傳構(gòu)成和健康狀況。環(huán)境因素：一般估計(jì)，80-90％的人類腫瘤與環(huán)境有關(guān)。包括物理(wùlǐ)因素，生物因素，化學(xué)因素。其中主要是化學(xué)因素。占70-90％以上。第十五頁，共123頁。15歸因于環(huán)境因素的癌癥死亡(sǐwáng)構(gòu)成比第十六頁，共123頁。16要降低腫瘤的發(fā)生率，首先必須識(shí)別、鑒定(jiàndìng)化學(xué)致癌因素和有害的生活方式，并說明其作用機(jī)制，然后采取措施加以防治。第十七頁，共123頁。17三、有關(guān)(yǒuguān)概念腫瘤：指有分裂潛能的細(xì)胞受致癌因素的作用后發(fā)生克隆性增生和惡性轉(zhuǎn)化所形成的新生物，在人體任何部位、任何組織(zǔzhī)都可以發(fā)生。良性腫瘤癌：上皮細(xì)胞的惡性病變?nèi)饬觯洪g質(zhì)細(xì)胞的惡性病變毒理學(xué)中“癌〞的概念是廣義的。第十八頁，共123頁。18化學(xué)致癌作用(chemicalcarcinogenesis)化學(xué)致癌物引起(yǐnqǐ)或誘導(dǎo)正常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化并開展成為腫瘤的過程?；瘜W(xué)致癌物(chemicalcarcinogen)應(yīng)用于未經(jīng)其他物質(zhì)作用過的動(dòng)物后，能引起(yǐnqǐ)一種或多種組織惡性腫瘤發(fā)生率升高，并且與未處理動(dòng)物相比，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異有顯著性的化學(xué)物。第十九頁，共123頁。1920第二節(jié)化學(xué)致癌機(jī)制

一、與致癌作用(zuòyòng)有關(guān)的代謝代謝活化：有些致癌物通過不同的途徑進(jìn)入人體后，需經(jīng)過(jīngguò)Ⅰ、Ⅱ相代謝，所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物才有致癌活性。這個(gè)過程成為代謝活化。代謝滅活：各種有活性的致癌物經(jīng)歷不同的代謝過程成為致癌性減弱，極性增高的產(chǎn)物排出體外。這個(gè)過程成為代謝滅活。第二十頁，共123頁。20前致癌物(precarcinogens)：本身不直接致癌，必須在體內(nèi)經(jīng)代謝轉(zhuǎn)化，其所形成的代謝產(chǎn)物才具致癌作用。近致癌物(proximatecarcinogens)：前致癌物經(jīng)代謝活化過程(guòchéng)形成一種或一系列中間代謝產(chǎn)物。終致癌物(ultimatecarcinogens)：不需代謝活化的直接致癌物和間接致癌物經(jīng)代謝活化所形成的具有致癌作用的代謝產(chǎn)物的統(tǒng)稱。第二十一頁，共123頁。21體內(nèi)致癌物靶部位活性致癌物致癌性下降、極性高的產(chǎn)物體外靶分子

滅活

活化代謝滅活代謝活化致癌有效劑量直接(zhíjiē)致癌物第二十二頁，共123頁。2223苯并(a)芘在體內(nèi)的代謝(dàixiè)活化AHH:芳烴氫化酶EH:環(huán)氧化物水化酶AHH環(huán)氧化物B(a)P極性增加，易排出體外代謝滅活GSH-S復(fù)合物GSTEH7,8-二醇-9,10環(huán)氧化物等7,8-二氫二醇等P450與DNA結(jié)合活性最高，是B(a)P主要終致癌物代謝活化第二十三頁，共123頁。2324二、化學(xué)(huàxué)致癌過程化學(xué)致癌作用(zuòyòng)機(jī)制目前還有許多尚未徹底說明。一般認(rèn)為，化學(xué)致癌作用(zuòyòng)是一個(gè)多因素、多基因參與的多階段過程。第二十四頁，共123頁。2425腫瘤的發(fā)生是一個(gè)長(zhǎng)期的、多階段改變累積的過程，具有多基因控制和多因素(yīnsù)調(diào)節(jié)的復(fù)雜性。目前較公認(rèn)的階段學(xué)說認(rèn)為至少包括3個(gè)階段引發(fā)階段(initiation)促長(zhǎng)階段(promotion)進(jìn)展階段(progression)該學(xué)說已在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械玫阶C實(shí)。第二十五頁，共123頁。25261、引發(fā)階段(jiēduàn)〔啟動(dòng)階段(jiēduàn)〕致癌物直接作用于DNA的初級(jí)序列，引起基因突變(jīyīntūbiàn)，使單個(gè)細(xì)胞或少量細(xì)胞發(fā)生永久性的、不可逆的遺傳性改變，成為具有開展為腫瘤潛能的突變細(xì)胞，稱“引發(fā)細(xì)胞〞或“啟動(dòng)細(xì)胞〞(initiatedcell)。致癌物不可逆地將正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槟[瘤細(xì)胞的起始步驟。引發(fā)劑(initiator)或啟動(dòng)劑：具有引發(fā)作用的化學(xué)物質(zhì)。第二十六頁，共123頁。2627引發(fā)劑可直接改變細(xì)胞遺傳物質(zhì)DNA的成分或結(jié)構(gòu)。一般一次接觸即可完成(wánchéng)，歷時(shí)短。劑量-反響顯示沒有可測(cè)定的閾值，無可測(cè)定的最大反響。不可逆。但并非所有引發(fā)細(xì)胞都構(gòu)成腫瘤，其中大多數(shù)將凋亡。需要通過一次或?qū)掖渭?xì)胞分裂加以固定。引發(fā)階段的主要(zhǔyào)特征第二十七頁，共123頁。2728引發(fā)細(xì)胞在形態(tài)上與正常細(xì)胞很難區(qū)別。引發(fā)細(xì)胞不具有生長(zhǎng)自主性，因此不是腫瘤(zhǒngliú)細(xì)胞。只有引發(fā)無促長(zhǎng)時(shí)不導(dǎo)致腫瘤(zhǒngliú)。引發(fā)劑作用的靶主要是原癌基因和腫瘤(zhǒngliú)抑制基因。對(duì)外源化學(xué)物及其他化學(xué)因子敏感。第二十八頁，共123頁。28292、促長(zhǎng)階段(jiēduàn)為化學(xué)致癌作用第二階段。引發(fā)細(xì)胞增殖成為(chéngwéi)癌前病變或良性腫瘤〔引發(fā)細(xì)胞群〕的過程。促進(jìn)作用選擇性地使啟動(dòng)細(xì)胞增殖加快或細(xì)胞凋亡減緩，實(shí)現(xiàn)克隆擴(kuò)增，導(dǎo)致局部增殖并引起良性局灶性病理損害如乳頭瘤、結(jié)節(jié)或息肉。促長(zhǎng)劑〔promotor〕或促癌物：具有促長(zhǎng)作用的化學(xué)物質(zhì)，稱為促長(zhǎng)劑。第二十九頁，共123頁。2930促長(zhǎng)階段(jiēduàn)主要特征促長(zhǎng)必須在引發(fā)之后。只有促癌物的慢性作用而沒有引發(fā)作用也不會(huì)引起腫瘤。劑量-反響(fǎnxiǎng)曲線顯示有可測(cè)定的閾值，有可測(cè)定的最大效應(yīng)。促長(zhǎng)階段歷時(shí)較長(zhǎng)，是長(zhǎng)期、慢性的作用，必須持續(xù)和反復(fù)暴露〔特別在早期〕，才能引起腫瘤。促進(jìn)劑有一定的物種特異性，有些具有器官特異性。第三十頁，共123頁。3031促癌物通常(tōngcháng)是非致突變物。早期有可逆性，很多病損會(huì)消退，僅少數(shù)細(xì)胞發(fā)生進(jìn)一步突變引成惡性腫瘤。對(duì)生理調(diào)節(jié)因素的敏感，如衰老、飲食和激素。促長(zhǎng)階段是腫瘤形成過程較易受干擾的階段，是最容易取得預(yù)防效果的階段。第三十一頁，共123頁。31323、進(jìn)展(jìnzhǎn)階段化學(xué)致癌作用的第三階段(jiēduàn)，指從癌前病變或良性腫瘤轉(zhuǎn)變成惡性腫瘤，并進(jìn)一步演變成更具侵襲特征的腫瘤的過程。在進(jìn)展階段(jiēduàn)腫瘤獲得惡性化的特征，在形態(tài)上或功能代謝和行為方面逐漸表現(xiàn)出如生長(zhǎng)加快、侵襲、轉(zhuǎn)移、抗藥性及生化、免疫性能改變等。進(jìn)展劑〔progressor〕或催展物：作用于促長(zhǎng)階段(jiēduàn)的細(xì)胞轉(zhuǎn)變成進(jìn)展期的化學(xué)物。第三十二頁，共123頁。32腫瘤的發(fā)生、開展(kāizhǎn)非常復(fù)雜。引發(fā)、促長(zhǎng)和進(jìn)展三個(gè)階段常難以清楚地界定。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)致癌模型中，某些致癌物的致癌過程的階段劃分較明確。人由于可同時(shí)或反復(fù)接觸引發(fā)劑、促長(zhǎng)劑或致癌劑，而且一種因素可以起多種作用，致癌分期不很清楚。第三十三頁，共123頁。33完全致癌物〔completecarcinogen〕兼有引發(fā)劑、促長(zhǎng)劑和進(jìn)展劑作用的化學(xué)致癌物。促長(zhǎng)期是最可能(kěnéng)控制癌癥發(fā)生的環(huán)節(jié)，可在此期進(jìn)行采用化學(xué)預(yù)防，如使用促長(zhǎng)劑抑制劑〔如維生素A類〕、抑制促長(zhǎng)期轉(zhuǎn)變成進(jìn)展期的抑制劑〔如抗氧化劑〕等。第三十四頁，共123頁。3435亞致癌劑量涂抹小鼠皮膚，20周巴豆油涂抹同一部位20周苯并(a)芘不發(fā)生腫瘤皮膚癌啟動(dòng)劑促癌劑不可逆可逆第三十五頁，共123頁。3536正常(zhèngcháng)上皮↓上皮過度增殖↓早期腺瘤↓中期腺瘤↓晚期腺瘤↓癌癥↓轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌的多階段模型引發(fā)階段:促長(zhǎng)階段:進(jìn)展階段:正常細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橥蛔?引發(fā))細(xì)胞腫瘤細(xì)胞分裂增殖，形成癌前惡變或良性腫瘤(引發(fā)細(xì)胞群)癌前惡變或良性腫瘤轉(zhuǎn)變成惡性腫瘤第三十六頁，共123頁。3637三、化學(xué)(huàxué)致癌機(jī)制學(xué)說腫瘤的發(fā)生是一復(fù)雜的生物學(xué)過程。是細(xì)胞遺傳物質(zhì)異常的結(jié)果，也涉及(shèjí)機(jī)體的內(nèi)環(huán)境的各種因素，包括機(jī)體的免疫能力、各種生長(zhǎng)因子和生物活性物質(zhì)。至今化學(xué)致癌機(jī)制還未完全說明。第三十七頁，共123頁。3738目前主流的化學(xué)致癌機(jī)制學(xué)說為體細(xì)胞突變致癌學(xué)說：即造成DNA損傷而引發(fā)腫瘤的遺傳毒性機(jī)制，專指DNA堿基序列的改變，可通過細(xì)胞分裂傳遞給子代。非突變致癌學(xué)說：即對(duì)DNA以外靶分子(fēnzǐ)作用的非遺傳毒性機(jī)制。目前認(rèn)為化學(xué)致癌物誘導(dǎo)腫瘤發(fā)生可能是兩種機(jī)制共同作用，即相互作用，共同控制細(xì)胞癌變的過程。第三十八頁，共123頁。3839一、化學(xué)致癌作用(zuòyòng)的遺傳毒性機(jī)制大多數(shù)環(huán)境因素的致癌作用都是通過影響遺傳基因起作用的，腫瘤是細(xì)胞中多種基因突變累積(lěijī)的結(jié)果。第三十九頁，共123頁。3940大多數(shù)致癌物同時(shí)也是致突變物。對(duì)某些致癌物的易感性取決于細(xì)胞代謝活化酶轉(zhuǎn)化致癌物成為致突變物的活力。DNA修復(fù)能力的缺失(quēshī)增加癌發(fā)生的可能性。在多種癌觀察到染色體和基因組的不穩(wěn)定性。第四十頁，共123頁。4041某些癌具有可遺傳性。某些癌有突變的癌基因。某些癌有腫瘤抑制基因的喪失或突變。許多致癌物的致突變和致癌性質(zhì)取決于它們(tāmen)是否能轉(zhuǎn)變?yōu)橛H電子的代謝產(chǎn)物。DNA加合物的水平通常與致癌性和致突變性成正相關(guān)。第四十一頁，共123頁。41〔一〕DNA加合物〔二〕DNA修復(fù)(xiūfù)與致癌過程〔三〕癌基因、原癌基因和抑癌基因 1、癌基因和原癌基因 2、抑癌基因第四十二頁，共123頁。4243生物轉(zhuǎn)化(shēnɡwùzhuǎnhuà)

酶系統(tǒng)致癌物代謝活化

DNA加合物DNA分子(fēnzǐ)

局部惡性轉(zhuǎn)化腫瘤(一)DNA加合物修復(fù)(xiūfù)失敗終致癌物(親電基團(tuán))DNA突變第四十三頁，共123頁。4344DNA加合物提供了致癌物暴露和DNA原始損傷的證據(jù)，反映致癌物吸收、代謝和修復(fù)等互相作用的綜合效應(yīng)，代表致癌物的生物有效劑量。DNA加合物的數(shù)量與致癌性有密切關(guān)系。DNA加合物可作為人類(rénlèi)腫瘤的接觸〔效應(yīng)〕生物學(xué)標(biāo)志。第四十四頁，共123頁。4445(二)DNA修復(fù)(xiūfù)與化學(xué)致癌化學(xué)致癌物對(duì)于人體內(nèi)DNA損傷的方式(fāngshì)是多種多樣的，機(jī)體對(duì)DNA損傷相應(yīng)有了多種形式的修復(fù)機(jī)制。DNA修復(fù)有兩種后果：一是正確修復(fù)，使機(jī)體內(nèi)受損的DNA完全回復(fù)原有的結(jié)構(gòu)和功能。一是錯(cuò)誤修復(fù)，指經(jīng)修復(fù)的DNA局部仍可能在結(jié)構(gòu)和功能上有缺陷。通常，經(jīng)錯(cuò)誤修復(fù)的細(xì)胞，盡管能夠生存并保持了局部功能，但其代價(jià)是出現(xiàn)突變。第四十五頁，共123頁。4546突變的出現(xiàn)呈現(xiàn)(chéngxiàn)為損傷-修復(fù)-突變模式，即DNA損傷能夠正確修復(fù)，突變就不會(huì)發(fā)生；如果修復(fù)錯(cuò)誤或未經(jīng)修復(fù)，進(jìn)行DNA復(fù)制后，可出現(xiàn)突變。損傷-修復(fù)-突變-腫瘤，所以，DNA修復(fù)與化學(xué)致癌作用在一定程度上相關(guān)。第四十六頁，共123頁。4647〔三〕原癌基因、癌基因及抑癌基因癌基因與抑癌基因的發(fā)現(xiàn)對(duì)于說明腫瘤(zhǒngliú)的發(fā)生機(jī)制、腫瘤(zhǒngliú)的基因治療以及抗腫瘤(zhǒngliú)藥物的開展提供了科學(xué)依據(jù)。第四十七頁，共123頁。4748原癌基因、癌基因

原癌基因〔prooncogene〕，即癌基因的原型，普遍存在于正常(zhèngcháng)動(dòng)物細(xì)胞的基因組內(nèi)，在進(jìn)化過程中高度保守，具有正常(zhèngcháng)的生物學(xué)功能，對(duì)細(xì)胞增殖、分化和信息傳遞的調(diào)控起重要作用。截至2004年，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)超過100種的原癌基因。第四十八頁，共123頁。4849癌基因(oncogene)原癌基因受到致癌因素〔膳食和營(yíng)養(yǎng)因素、化學(xué)致癌、某些病毒(bìngdú)、放射線等〕作用激活即活化為癌基因，顯示致癌活性。癌基因是顯性基因。在自然或?qū)嶒?yàn)條件下具有誘發(fā)惡性轉(zhuǎn)化的潛在能力，是致癌物的主要靶分子。癌基因指導(dǎo)合成的蛋白質(zhì)能夠促成細(xì)胞惡性表型的形成。第四十九頁，共123頁。4950抑癌基因(anti-oncogene)又稱腫瘤抑制基因〔tumorsuppressorgene〕或抗癌基因，是正常細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，其編碼的蛋白質(zhì)能夠降低(jiàngdī)或抑制細(xì)胞分裂活性?？梢种颇[瘤細(xì)胞的腫瘤性狀的表達(dá)。抑癌基因?yàn)殡[性基因，只有處于純合失活狀態(tài)時(shí)，細(xì)胞才會(huì)因正常抑制的解除而惡性轉(zhuǎn)化。第五十頁，共123頁。5051抑癌基因的產(chǎn)物能阻斷腫瘤的細(xì)胞生長(zhǎng)(shēngzhǎng)，抑癌基因突變后喪失其功能。抑癌基因失活——腫瘤細(xì)胞增殖失控。第五十一頁，共123頁。5152遺傳毒性致癌物主要通過原癌基因突變激活為癌基因和/或抑癌基因突變失活引起致癌作用。正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化(zhuǎnhuà)為腫瘤細(xì)胞涉及兩類基因的遺傳學(xué)改變，即癌基因和抑癌基因的改變。第五十二頁，共123頁。5253二、化學(xué)(huàxué)致癌的非遺傳毒性機(jī)制有的化學(xué)致癌物對(duì)細(xì)胞DNA并無致突變作用，用常用致突變?cè)囼?yàn)方法不能檢出其致突變性。當(dāng)基因(jīyīn)以外的物質(zhì)或因素如蛋白質(zhì)、RNA、生物膜發(fā)生了改變，而使與細(xì)胞生長(zhǎng)、分化有關(guān)的基因(jīyīn)異常地關(guān)閉或啟動(dòng)表達(dá)，這樣的細(xì)胞就可能轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞。第五十三頁，共123頁。53表觀(biǎoɡuān)遺傳學(xué)細(xì)胞異常增生免疫抑制激素失調(diào)第五十四頁，共123頁。54第三節(jié)化學(xué)(huàxué)致癌物的分類一、根據(jù)人類和動(dòng)物致癌作用證據(jù)分類自1971年起，WHO下屬IARC根據(jù)對(duì)人類和對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌性資料，以及實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)和人類其他(qítā)有關(guān)的資料，將各種化學(xué)物質(zhì)〔并擴(kuò)展到物理因子、生物因子〕分類。第五十五頁，共123頁。55其分類只與致癌物的證據(jù)權(quán)重有關(guān)。將化學(xué)物對(duì)人類(rénlèi)和動(dòng)物致癌資料分為4級(jí)致癌證據(jù)充分(sufficient)致癌證據(jù)有限(limited)致癌證據(jù)缺乏(inadequate)證據(jù)提示缺乏致癌性(lackofcarcinogenicity)第五十六頁，共123頁。56目前估計(jì)有7000種化學(xué)物已經(jīng)過動(dòng)物致癌試驗(yàn)(shìyàn)，其中約1700種為陽性反響。至2012年3月，IARC已評(píng)價(jià)951種化學(xué)物、混合物和接觸環(huán)境，根據(jù)對(duì)人類和對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌性資料，及其他有關(guān)資料進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，將環(huán)境致癌因素分為四類。第五十七頁，共123頁。57組l(group1)：對(duì)人類是致癌物(carcinogenictohuman)對(duì)人的致癌性有足夠(sufficient)的證據(jù)。某種因子對(duì)人致癌性證據(jù)尚缺乏(quēfá)夠(1essthansufficient)，但實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌證據(jù)足夠(sufficient)和暴露人體有該因子強(qiáng)有力的致癌機(jī)制證據(jù)(strongevidence)時(shí)，也可歸為此類。107種，如砷及其化合物、黃曲毒素、苯、雌激素、氯乙烯、鎘及其化合物、鎳化合物、鈹及其化合物、酒精飲料、檳榔與煙草同嚼、腌魚(中國(guó)式)等。第五十八頁，共123頁。58組2(group2)根據(jù)流行病學(xué)、動(dòng)物致癌及其他有關(guān)資料(zīliào)分為2A和2B兩類。第五十九頁，共123頁。59組2A(group2A)：對(duì)人類很可能是致癌物(possiblecarcinogenictohuman)對(duì)人的致癌性的流行病學(xué)證據(jù)有限(limitedevidence)，在實(shí)驗(yàn)(shíyàn)動(dòng)物的致癌證據(jù)足夠(sufficient)。某些情況下，將對(duì)人的致癌性證據(jù)不充分(inadequateevidence)、在實(shí)驗(yàn)(shíyàn)動(dòng)物的致癌證據(jù)足夠(sufficient)、有在人體同樣發(fā)揮作用的致癌機(jī)制的強(qiáng)有力證據(jù)(strongevidence)的因子歸于此類。63種，苯并(a)芘、多氯聯(lián)苯、氧化苯乙烯等。第六十頁，共123頁。60組2B(group2B)：對(duì)人類(rénlèi)是可能致癌物(probablycarcinogenictohuman)對(duì)人的致癌性有有限的證據(jù)(1imitedevidence)，動(dòng)物致癌性證據(jù)缺乏夠(lessthansufficient)。或?qū)θ酥掳┬宰C據(jù)不充分(inadequateevidence)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌證據(jù)足夠(sufficient)。某些情況下，將對(duì)人的致癌性證據(jù)不充分(inadequateevidence)而實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的致癌證據(jù)有限(1immitedevidence)，但具有其他相關(guān)資料的支持證據(jù)(supportingevidence)的化學(xué)物、混合物和接觸環(huán)境歸為此類。271種，如四氯二苯并對(duì)二噁英(TCDD)、苯乙烯、烏拉坦。第六十一頁，共123頁。61組3(group3)：對(duì)人的致癌性尚不能確定(unclassifiableastocarcinogenicitytohuman)對(duì)人的致癌性證據(jù)不充分(inadequateevidence)，動(dòng)物(dòngwù)致癌性資料也不充分或有限(inadequateorlimited)的化學(xué)物、混合物和接觸環(huán)境。對(duì)人的致癌性證據(jù)不充分(inadequateevidence)，動(dòng)物(dòngwù)致癌性資料足夠(sufficient)，但有強(qiáng)有力證據(jù)(strongevidence)說明動(dòng)物(dòngwù)致癌機(jī)制在人體不適用的化合物、混合物和接觸環(huán)境也歸此類。509種，如丙烯醛、丙烯酸、偶氮苯、氯消毒飲用水等。第六十二頁，共123頁。62組4(group4)：可能對(duì)人類不致癌(probablynotcarcinogenictohuman)證據(jù)提示在人類和動(dòng)物不具致癌性(lackofcarcinogenicity)的化學(xué)(huàxué)物、混合物和接觸環(huán)境。有時(shí)，將對(duì)人的致癌性證據(jù)不充分(inadequateevidence)，動(dòng)物不具致癌性(lackofcarcinogenicity)，并被大量其他相關(guān)資料一致和強(qiáng)有力支持的因子或混合物歸為此類。僅1種，己內(nèi)酰胺。第六十三頁，共123頁。63美國(guó)EPA1986年致癌物危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)方法將致癌物分為六類A：人的致癌物，B1：人的可能(kěnéng)致癌物，B2：或許為人的致癌物，C：可疑的人類致癌物，D：證據(jù)缺乏尚不能進(jìn)行分類，E：人類非致癌物。第六十四頁，共123頁。641996年，美國(guó)(měiɡuó)EPA又建議將致癌物分為三類/可能(know/likely)不能確定(cannotbedetermined)不可能(no1ikely)第六十五頁，共123頁。652005年美國(guó)EPA致癌危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)指南最終(zuìzhōnɡ)報(bào)告以證據(jù)權(quán)重分為五類對(duì)人是致癌性的(carcinogenictohumans)對(duì)人可能是致癌的(likelytobecarcinogenictohumans)證據(jù)提示有致癌可能(suggestiveevidenceofcarcinogenicpotential)評(píng)價(jià)致癌性的信息缺乏(indicateinformationtoaccesscarcinogenicpotential)對(duì)人可能不是致癌性的(notlikelytobecarcinogenictohumans)第六十六頁，共123頁。66歐共體〔EEC〕分為三組為人類致癌物(knowtobecarcinogenictohumans)認(rèn)為(rènwéi)是人類致癌物(regardedasofcarcinogenictohumans)證據(jù)缺乏以進(jìn)行滿意的評(píng)價(jià)(causesconcernduetopossiblecarcinogeniceffects)第六十七頁，共123頁。671、遺傳毒性致癌物(genotoxiccarcinogens)進(jìn)入(jìnrù)人細(xì)胞后與DNA共價(jià)結(jié)合，引起機(jī)體遺傳物質(zhì)改變，導(dǎo)致癌變的化學(xué)物質(zhì)。這類致癌物約占化學(xué)致癌物的大多數(shù)，因其作用機(jī)制是損傷遺傳物質(zhì)，故可利用遺傳毒理學(xué)試驗(yàn)來檢測(cè)這類致癌物。二、根據(jù)化學(xué)致癌物作用(zuòyòng)模式分類第六十八頁，共123頁。68(1)直接致癌物〔directcarcinogens〕本身(běnshēn)直接具有致癌作用，在體內(nèi)不需要經(jīng)過代謝活化即可致癌。例如，各種烷化劑，其大多為親電子反響物。(2)間接致癌物(indirectcarcinogens)本身(běnshēn)并不直接致癌，必須在體內(nèi)經(jīng)代謝轉(zhuǎn)化，其所形成的代謝產(chǎn)物才具致癌作用。例如，多環(huán)芳烴、芳香胺類化合物等。第六十九頁，共123頁。692、非遺傳毒性致癌物(epigenotoxiccarcinogens)指不作用于機(jī)體遺傳物質(zhì)的化學(xué)致癌物。非遺傳毒性致癌物包括以下(yǐxià)幾種：第七十頁，共123頁。70〔1〕促長(zhǎng)劑〔2〕內(nèi)分泌調(diào)控劑〔3〕免疫抑制劑〔4〕細(xì)胞毒劑〔5〕過氧化物酶體增殖(zēngzhí)劑〔6〕固態(tài)物質(zhì)〔膜片〕〔7〕助癌物第七十一頁，共123頁。71三、根據(jù)致癌物是否(shìfǒu)需要活化來分〔1〕前致癌物〔procarcinogen〕〔2〕近致癌物〔proximatecarcinogen〕〔3〕終致癌物〔ultimatecarcinogen〕第七十二頁，共123頁。72四、按化學(xué)(huàxué)結(jié)構(gòu)分類〔1〕烷化劑：芥子氣、甲醛、氯甲醚〔2〕多環(huán)芳烴類：煤焦油、二苯蒽〔3〕芳香胺類：乙萘胺、硝基聯(lián)苯〔4〕氨基偶氮染料(ǒudànrǎnliào)〔5〕亞硝胺類化合物〔6〕黃曲霉毒素〔7〕植物毒素〔8〕金屬致癌物：鎳、鉻、鎘第七十三頁，共123頁。73第四節(jié)化學(xué)(huàxué)致癌物的評(píng)價(jià)化學(xué)致癌物危險(xiǎn)評(píng)價(jià)(píngjià)包括兩方面一是定性的，即該化學(xué)物能否致癌；二是定量的，即進(jìn)行劑量-反響關(guān)系分析，推算可接受的危險(xiǎn)度的劑量或人體實(shí)際可能接觸劑量下的危險(xiǎn)度。第七十四頁，共123頁。74一、定量(dìngliàng)構(gòu)效關(guān)系分析構(gòu)效關(guān)系分析從一種同系物著手，找出該系物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)中與致癌性關(guān)系最密切的結(jié)構(gòu)成分，以及其他構(gòu)分改變時(shí)對(duì)其致癌性的影響。如對(duì)數(shù)百種PAHs類化合物的小鼠皮膚癌誘發(fā)試驗(yàn)結(jié)果(jiēguǒ)做的構(gòu)效關(guān)系分析說明，不僅化學(xué)結(jié)構(gòu)的微小變化都關(guān)系著致癌性的強(qiáng)弱，而且與其立體結(jié)構(gòu)的變化也有密切關(guān)系。第七十五頁，共123頁。75二、遺傳(yíchuán)毒性試驗(yàn)遺傳毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)即致突變篩檢試驗(yàn)，又稱為短期致癌物篩檢試驗(yàn)。致突變篩檢試驗(yàn)的理論依據(jù)是：化學(xué)物的致突變性與致癌性相聯(lián)系，即大多數(shù)致癌物具有致突變性，而大多數(shù)非致癌物無致突變性。第七十六頁，共123頁。76局限性：無法確定非遺傳毒性致癌物(假陰性)和具有遺傳毒性的非致癌物(假陽性)。致癌物的篩選需一組致突變?cè)囼?yàn)(shìyàn)，最好每一遺傳學(xué)終點(diǎn)均有一個(gè)試驗(yàn)(shìyàn)。假設(shè)在組合試驗(yàn)(shìyàn)中有一項(xiàng)為哪一項(xiàng)陽性結(jié)果，即可認(rèn)為該受試物為致突變物。組合試驗(yàn)(shìyàn)中出現(xiàn)的陽性結(jié)果愈多，受試物致癌的可能性就愈大。Ames試驗(yàn)(shìyàn)是應(yīng)用篩檢致癌物最廣泛和最敏感的致突變?cè)囼?yàn)(shìyàn)。第七十七頁，共123頁。77三、細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化(zhuǎnhuà)試驗(yàn)體外培養(yǎng)條件下，細(xì)胞在有害因素〔受試物〕作用下發(fā)生一系列與腫瘤形成有關(guān)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)及生物學(xué)特性(tèxìng)的改變。觀察內(nèi)容包括：生長(zhǎng)自控能力、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞生長(zhǎng)能力、生化表型以及移植于動(dòng)物體內(nèi)形成腫瘤的能力等。在敏感宿主中的成瘤性是確定轉(zhuǎn)化細(xì)胞惡性變性質(zhì)的可靠指標(biāo)。第七十八頁，共123頁。78常用(chánɡyònɡ)細(xì)胞原代細(xì)胞：常用(chánɡyònɡ)敘利亞倉(cāng)鼠胚體細(xì)胞(SHE細(xì)胞)、人類成纖維細(xì)胞、小鼠皮膚或大鼠支氣管上皮細(xì)胞等。細(xì)胞系：常用(chánɡyònɡ)細(xì)胞系BALB/C-3T3，C3Hl0Tl/2和BHK21；病毒感染細(xì)胞：如RLV/RE細(xì)胞(勞舍爾白血病病毒感染Fisher大鼠胚胎細(xì)胞)和SA7/SHE細(xì)胞(猿猴腺病毒感染的SHE細(xì)胞)。第七十九頁，共123頁。79試驗(yàn)(shìyàn)的觀察終點(diǎn)：惡性變的細(xì)胞細(xì)胞偏大，且大小不等核大而畸形，染色質(zhì)深染而粗糙，核漿比例倒置，核膜粗厚，核仁增生而肥大多見核分裂現(xiàn)象正常的接觸抑制消失，它的克隆不是單層細(xì)胞且細(xì)胞排列有序，而是多層細(xì)胞且細(xì)胞排列紊亂(wěnluàn)生長(zhǎng)表型的改變?nèi)鐚⒋朔N細(xì)胞移植于動(dòng)物體內(nèi)〔一般為裸鼠〕可形成腫瘤。第八十頁，共123頁。80由于它不以致突變?yōu)橛^察終點(diǎn)，可以彌補(bǔ)(míbǔ)以致突變?cè)囼?yàn)來篩查化學(xué)致癌物的缺乏，即它可檢出遺傳毒性致癌物和非遺傳毒性致癌物。第八十一頁，共123頁。81局限性本試驗(yàn)所指的轉(zhuǎn)化大多數(shù)為形態(tài)轉(zhuǎn)化或惡性前期(qiánqī)轉(zhuǎn)化。它們可以開展成為真正的惡性變，但亦可能到此為止，其結(jié)局不一定形成腫瘤。第八十二頁，共123頁。82動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)(shìyàn)〔long-termcarcinogenicitystudy)也叫有限動(dòng)物試驗(yàn)(shìyàn)〔limitedinvivobioassay〕或中期致癌試驗(yàn)(shìyàn)〔medium-termtest〕哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期誘癌試驗(yàn)(shìyàn)〔limitedcarcinogenicitystudy)即終身試驗(yàn)(shìyàn)〔life-timetest〕四、哺乳動(dòng)物(bǔrǔdòngwù)致癌試驗(yàn)第八十三頁，共123頁。83在哺乳動(dòng)物致癌試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)受試化合物對(duì)某些特定組織的致瘤作用比對(duì)其他組織更為明顯，據(jù)此建立了比常規(guī)動(dòng)物致癌試驗(yàn)時(shí)間更短，更敏感的哺乳動(dòng)物短期致癌試驗(yàn)，又稱為有限體內(nèi)試驗(yàn)。在這些試驗(yàn)中僅觀察特定靶器官的腫瘤發(fā)生情況(qíngkuàng)，試驗(yàn)期限一般在數(shù)周到數(shù)月。1、動(dòng)物短期(duǎnqī)致癌試驗(yàn)第八十四頁，共123頁。84在有限(yǒuxiàn)的短時(shí)間內(nèi)完成而不是終生，又指觀察的靶器官限定為一個(gè)而不是全部器官和組織。主要有四種：小鼠肺腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)大鼠肝轉(zhuǎn)變?cè)钤囼?yàn)小鼠皮膚腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)雌性SD大鼠乳腺癌誘發(fā)試驗(yàn)。第八十五頁，共123頁。85小鼠肺腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)一次或?qū)掖谓o予受試物后，或一次給予受試物一至兩周后持續(xù)屢次給予促癌劑，16周至30周左右結(jié)束試驗(yàn)。如在肺組織發(fā)現(xiàn)腫瘤，可認(rèn)為受試物具有誘發(fā)腫瘤作用。大鼠肝轉(zhuǎn)變?cè)钫T發(fā)試驗(yàn)肝癌(ɡānái)發(fā)生過程有幾種明顯肝細(xì)胞病灶，較早發(fā)現(xiàn)的是轉(zhuǎn)變?cè)睿M(jìn)一步開展為瘤性結(jié)節(jié)。用酶組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)方法將轉(zhuǎn)變?cè)詈徒Y(jié)節(jié)中的谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和胚體型谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶染色，顯色說明有肝癌(ɡānái)細(xì)胞生化表型的癌前細(xì)胞。第八十六頁，共123頁。86小鼠皮膚腫瘤誘發(fā)試驗(yàn)小鼠皮膚外表涂抹某些致癌物能誘發(fā)乳頭狀瘤或癌，皮下注射可誘發(fā)肉瘤。一般9個(gè)月左右結(jié)束試驗(yàn)，如在啟動(dòng)后加用佛波醇酯，那么縮短至20周左右。適用(shìyòng)于煤、石油和煙草的焦油以及其中所含的多環(huán)芳烴，還有許多直接致癌物如硫芥、氮芥、雙氯甲醚和丙環(huán)內(nèi)醋等。雌性SD大鼠乳腺癌誘發(fā)試驗(yàn)適用(shìyòng)于多環(huán)芳烴、芳香胺、氯烷、亞硝基脲等。能在9個(gè)月以內(nèi)誘發(fā)乳腺癌。第八十七頁，共123頁。87肺和肝是最常見的發(fā)生腫瘤器官，也是許多致癌物的靶器官，故小鼠肺腫瘤和大鼠肝轉(zhuǎn)變?cè)钤囼?yàn)的應(yīng)用價(jià)值較高。上述任一試驗(yàn)的陽性結(jié)果，其意義與長(zhǎng)期動(dòng)物致癌試驗(yàn)相當(dāng)。由于實(shí)驗(yàn)期短，又未檢查其他器官和系統(tǒng)，特別是皮膚腫瘤和乳腺癌的誘發(fā)試驗(yàn)一般僅適用(shìyòng)于較小范圍的化學(xué)物質(zhì)類型，所以哺乳動(dòng)物短期致短試驗(yàn)陰性結(jié)果的意義較差。第八十八頁，共123頁。882、哺乳動(dòng)物長(zhǎng)期(chángqī)致癌試驗(yàn)是目前(mùqián)公認(rèn)確實(shí)認(rèn)動(dòng)物致癌物的經(jīng)典方法。用來確定受試物對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物的致癌性、劑量-反響關(guān)系及誘發(fā)腫瘤的靶器官等。化學(xué)致癌的最大特點(diǎn)是潛伏期長(zhǎng)。嚙齒類動(dòng)物1-2年的試驗(yàn)，相當(dāng)于人類大半生的時(shí)間。動(dòng)物試驗(yàn)可嚴(yán)格控制試驗(yàn)條件，而人群流行病學(xué)調(diào)查不易排除混雜因素的影響。第八十九頁，共123頁。89局限性需時(shí)長(zhǎng)〔約2年〕，消耗人力(rénlì)、物力大，需用的染毒劑量大。致癌試驗(yàn)所用的動(dòng)物種系有限，試驗(yàn)用動(dòng)物數(shù)量也有限。最大局限性是動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果外推至人存在不確定性。第九十頁，共123頁。90動(dòng)物長(zhǎng)期致癌試驗(yàn)的一般原那么①人體可能長(zhǎng)期暴露于該化學(xué)物；②該化學(xué)物或其代謝物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與致癌物相似(xiānɡsì)；③短期染毒毒性試驗(yàn)提示該化學(xué)物可能產(chǎn)生癌前病變等。第九十一頁，共123頁。91(1)動(dòng)物(dòngwù)選擇物種(wùzhǒng)的選擇：根據(jù)動(dòng)物對(duì)腫瘤的易感性，選擇具有特定靶器官的物種(wùzhǒng)和品系。如果無法知道受試物的靶器官時(shí)，可選用兩種嚙齒類動(dòng)物。應(yīng)選擇自發(fā)腫瘤率低的物種(wùzhǒng)。嚙齒類動(dòng)物對(duì)多數(shù)致癌物易感性較高，壽命相對(duì)較短，費(fèi)用也較低，使用最廣泛。常用的是大鼠和小鼠，也可用倉(cāng)鼠。為防止動(dòng)物種(wùzhǒng)屬敏感性的差異影響評(píng)價(jià)的結(jié)果，一般也用兩種物種(wùzhǒng)進(jìn)行試驗(yàn)。第九十二頁，共123頁。92年齡：斷乳或斷乳不久的動(dòng)物。性別：一般是雌雄各半。除非(chúfēi)已證明該受試物結(jié)構(gòu)近似的致癌物有易感性性別差異。動(dòng)物數(shù)量：原那么上根據(jù)對(duì)照組腫瘤的自發(fā)率及試驗(yàn)組腫瘤的發(fā)生率來確定。對(duì)照組自發(fā)率越低及試驗(yàn)組發(fā)生率越高，每組需要的動(dòng)物數(shù)越少。一般每組動(dòng)物數(shù)為雌雄各50只。第九十三頁，共123頁。93〔2〕染毒(rǎndú)方式根據(jù)受試物的理化(lǐhuà)特性和對(duì)人有代表性的接觸方式，多為經(jīng)口和經(jīng)呼吸道接觸染毒。也可經(jīng)皮。第九十四頁，共123頁。94胃腸道染毒最好采用口服，把受試物混入飼料、飲水中，或用管飼法連續(xù)給予動(dòng)物?；烊腼暳现械氖茉囄锏淖罡邼舛炔粦?yīng)超過5%。假設(shè)受試物有異味影響動(dòng)物自由攝入，可采用灌胃法。應(yīng)保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)平衡(pínghéng)。營(yíng)養(yǎng)成分受試物應(yīng)盡可能采用高劑量。較理想的應(yīng)是每周7天均染毒，也可每周5天。但是中斷染毒可使動(dòng)物得到恢復(fù)或毒性緩解。第九十五頁，共123頁。95呼吸道染毒每日接觸時(shí)間依試驗(yàn)要求而定。工業(yè)毒物試驗(yàn)通常(tōngcháng)每日吸入4-6h；環(huán)境污染物每日吸入8h或更長(zhǎng)。第九十六頁，共123頁。96(3)劑量(jìliàng)設(shè)計(jì)l個(gè)對(duì)照組,(必要時(shí)設(shè)陽性對(duì)照組〕3-5個(gè)染毒劑量組：最高劑量為最大耐受劑量〔MTD,NCI〕。最低劑量最好相當(dāng)于人類(rénlèi)實(shí)際可能接觸的劑量。等比差異，1/4-1/2。第九十七頁，共123頁。97〔4〕試驗(yàn)(shìyàn)期限與染毒時(shí)間原那么(nàme)上試驗(yàn)期限要求長(zhǎng)期甚至終生，最少不低于受試動(dòng)物壽命的2/3時(shí)間。一般情況下小鼠年，大鼠年。一般染毒直至試驗(yàn)結(jié)束。第九十八頁，共123頁。98出現(xiàn)第一個(gè)腫瘤時(shí)，每組還有不少于25只動(dòng)物。當(dāng)最低劑量組或?qū)φ战M存活的動(dòng)物只有25％時(shí)，可以結(jié)束試驗(yàn)。有明顯性別差異的試驗(yàn)，結(jié)束時(shí)間對(duì)不同(bùtónɡ)的性別應(yīng)有所不同(bùtónɡ)。因明顯的毒性作用，只造成高劑量組動(dòng)物過早死亡，此時(shí)不應(yīng)結(jié)束試驗(yàn)。第九十九頁，共123頁。99一個(gè)合格的陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)符合：①因自溶、同類(tónglèi)自食，或因管理問題所造成的動(dòng)物損失在任何一組都不能高于10％。②小鼠和倉(cāng)鼠在18個(gè)月，大鼠在24個(gè)月時(shí)各組存活的動(dòng)物不能少于50％。第一百頁，共123頁。100(5)結(jié)果(jiēguǒ)的觀察、分析和評(píng)定每天密切觀察動(dòng)物1-2次，及時(shí)發(fā)現(xiàn)瀕死動(dòng)物并進(jìn)行病理學(xué)解剖。試驗(yàn)最初(zuìchū)三個(gè)月每周稱體重一次，以后每4周稱體重一次。摻入飼料或飲水中染毒時(shí)，應(yīng)記錄食物消耗量或飲水量。第一百零一頁，共123頁。101發(fā)現(xiàn)第一例腫瘤時(shí)存活的動(dòng)物數(shù)，作為試驗(yàn)終結(jié)時(shí)的有效(yǒuxiào)動(dòng)物數(shù)。體表及體內(nèi)各組織器官均應(yīng)肉眼觀察，找出可疑腫塊，并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。確定腫瘤的性質(zhì)和靶器官。對(duì)已出現(xiàn)腫瘤或可疑腫瘤的器官和肉眼檢查有明顯病變的器官，應(yīng)注意觀察癌前病變。第一百零二頁，共123頁。102致癌試驗(yàn)(shìyàn)常用的指標(biāo)腫瘤發(fā)生率：是最重要(zhòngyào)的指標(biāo)腫瘤總發(fā)生率；惡性腫瘤總發(fā)生率；各器官或組織腫瘤發(fā)生率和惡性腫瘤發(fā)生率；各種類型腫瘤發(fā)生率。第一百零三頁，共123頁。1032.多發(fā)性：是化學(xué)(huàxué)致癌的又一特征，指一個(gè)動(dòng)物出現(xiàn)多個(gè)腫瘤或一個(gè)器官出現(xiàn)多個(gè)腫瘤。①計(jì)算每組動(dòng)物的平均腫瘤數(shù)。②每組中出現(xiàn)2個(gè)〔或以上〕腫瘤的動(dòng)物數(shù)或比例。第一百零四頁，共123頁。104潛伏期體表腫瘤：從接觸致癌物到各組第一個(gè)腫瘤出現(xiàn)的時(shí)間作為該組潛伏期。內(nèi)臟(nèizàng)腫瘤：分批剖殺，計(jì)算平均潛伏期?；?qū)⒛[瘤引起動(dòng)物死亡的時(shí)間定為發(fā)生腫瘤的時(shí)間。第一百零五頁，共123頁。1054.陽性結(jié)果的判斷存在劑量-反響關(guān)系，并與對(duì)照組差異顯著時(shí)，為陽性結(jié)果。WHO提出，需滿足以下反響的一種或數(shù)種①陰性對(duì)照組出現(xiàn)的一種或數(shù)種腫瘤，試驗(yàn)組均有發(fā)生(fāshēng)，但腫瘤發(fā)生(fāshēng)率高于對(duì)照組；②試驗(yàn)組動(dòng)物發(fā)生(fāshēng)陰性組沒有的腫瘤類型；②試驗(yàn)組動(dòng)物腫瘤發(fā)生(fāshēng)早于陰性對(duì)照組；④試驗(yàn)組每個(gè)動(dòng)物的平均腫瘤數(shù)超過陰性對(duì)照組。第一百零六頁，共123頁。106五、促癌劑的檢測(cè)(jiǎncè)可用于促癌劑檢測(cè)的試驗(yàn)1.小鼠肺癌誘發(fā)(yòufā)試驗(yàn)2.大鼠肝轉(zhuǎn)變?cè)钤囼?yàn)3.小鼠皮膚腫瘤誘發(fā)(yòufā)試驗(yàn)首先選用適當(dāng)?shù)膯?dòng)劑,啟動(dòng)后l-2周開始用受試物染毒。引發(fā)劑的劑量應(yīng)較低，不致引起或僅引起少量腫瘤。第一百零七頁，共123頁。107由于有些促癌劑對(duì)某些器官具有特異性，上述三種試驗(yàn)應(yīng)同時(shí)做才不致漏檢。也可做體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)，讓受試物直接(zhíjiē)與細(xì)胞接觸，以解決某些促癌劑的親器官特性。第一百零八頁，共123頁。108六、轉(zhuǎn)基因(jīyīn)或基因(jīyīn)敲除動(dòng)物在致癌物

評(píng)價(jià)中的應(yīng)用將目的基因?qū)雱?dòng)物受精卵中，使其與細(xì)胞核染色體整合，從而獲得(huòdé)帶外源基因并能表達(dá)和遺傳的動(dòng)物。集整體、細(xì)胞和分子水平于一體，更能表達(dá)生命整體研究的效果，是目前最高層次的實(shí)驗(yàn)