劉分化課件高效液相色譜

7.1

液相色譜的種類7.2

色譜方法的建立液液色譜固定相保留機(jī)制流動相應(yīng)用色譜柱填料擔(dān)體(如硅膠)固定相與樣品分子作用

球形顆粒承受壓力承載固定液有機(jī)分子或功能團(tuán)包覆或鍵合+液液色譜:固定相是通過物理吸附的方法將液相固定液涂在載體表面。為了防止固定液的流失，流動相需要預(yù)先用固定液飽和，這種方法除了較麻煩外，還不能用于梯度洗脫。鍵合相色譜的固定相是通過化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)分子鍵合到載體或硅膠表面上。這樣不僅解決了固定相的流失問題，而且使固定相的功能得以改善，成為高效液相色譜中占壓倒優(yōu)勢的一種方法。下圖是硅膠基質(zhì)的冠醚大分子固定相的結(jié)構(gòu)示意圖，功能層冠醚分子吸附或鍵合在硅膠基質(zhì)的表面色譜柱填料色譜柱填料鍵合疏水基團(tuán)?反相鍵合固定相色譜正相鍵合固定相色譜鍵合極性基團(tuán)?反相：甲醇，乙腈，四氫呋喃和水乙醚，氯仿，三氯甲烷和n-己烷洗脫物的流出順序在反相鍵合相色譜中，極性大的組分先流出，極性小的后流出。在正相鍵合相色譜中，極性弱的組分先流出色譜。甲苯苯酚常用溶劑：乙腈、甲醇、水等等度洗脫：流動相比例恒定

梯度洗脫：逐步提高有機(jī)溶劑比例實際使用：甲醇-水/乙腈-水混合體系甲醇-水的比例？？？流動相的流速？？？反相通過改變流動相，可分離混合組分水、甲醇作為流動相，便宜、易得色譜柱平衡快，適宜梯度洗脫用單柱和流動相就能分離非離子化合物，離子化合物和可電離化合物極性鍵合相對流動相組成的變化響應(yīng)較快，特別有利于梯度洗脫正相液相色譜可以分離烷烴和類脂，以及糖類在水溶液中不穩(wěn)定的化合物必須用正相鍵合相色譜法進(jìn)行分離正相液固色譜固定相保留機(jī)制流動相應(yīng)用常用的固定相是硅膠和氧化鋁。固定相硅膠的表面終端為硅醇或硅氧烷鍵。它們對試樣的保留時間順序大致如下:

醛酮醇胺砜亞砜酰胺羧酸極性大的物質(zhì)后流出Xm

+nMad=Xad+nMm吸附劑表面上發(fā)生了試樣分子和流動相分子間的競爭吸附吸附劑吸附試樣的能力，主要取決于吸附劑的比表面積和理化性質(zhì)，試樣分子的組成和結(jié)構(gòu)以及洗脫液的性質(zhì)等。保留機(jī)制流動相在吸附色譜中選擇溶劑系統(tǒng)的方法與分配色譜中類似選擇兩個共存的溶劑，其中一個的強(qiáng)度很大，另一個強(qiáng)度則很小。然后通過改變這兩種溶劑的體積，以獲得適宜的分離度。液固色譜的分離對象與分配色譜可以相互替代，但主要還是互補(bǔ)。液固色譜最適宜分離那些溶解在非極性溶劑中，具有中等相對分子質(zhì)量且為非離子型的試樣。液固色譜也能分離那些具有相同極性基團(tuán)但數(shù)量不同的試樣。液固色譜特別適于分離異構(gòu)體。應(yīng)用離子色譜離子交換色譜離子排斥色譜離子對色譜離子交換色譜以離子間作用力不同為原理，主要用于有機(jī)和無機(jī)陰、陽離子的分離離子交換色譜儀器輸液泵色譜柱檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)樣閥抑制柱細(xì)顆粒柱填料，高柱效；采用高壓輸液泵固定相：交換容量非常低低濃度淋洗液在分離柱后，用另外一支抑制柱來消除淋洗液的高本底電導(dǎo)采用電導(dǎo)檢測器檢測流出組分?？焖俜蛛x分析微量無機(jī)離子混合物特點

優(yōu)點是降低了流動相的總離子含量，提高檢測試樣離子的靈敏度。缺點在于抑制柱必須再生，并且由于抑制柱的存在而使色譜峰展寬，導(dǎo)致分辨率下降。離子交換樹脂的分類陽離子交換樹脂陰離子交換樹脂螯合樹脂兩性交換樹脂強(qiáng)酸型弱酸型交換基為酸性，H+與陽離子交換—SO3H—COOH—OHpH>2pH>6使用pH范圍pH>10交換基為堿性，陰離子發(fā)生交換強(qiáng)堿型弱堿型—N+(CH3)3Cl-—N+H3OH-—N+H2ROH-—N+HR2OH-pH<12pH<4含有特殊螯合基團(tuán)的樹脂電子交換樹脂，含有氧化還原功能基團(tuán)強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂對一價陽離子

Li+<H+<Na+<NH4+<K+<Rb+<Cs+<Ag+<Tl+

對二價陽離子

Mg2+<Ca2+<Sr2+<Ba2+<Fe2+<Co2+<Ni2+<Cu2+<Zn2+

水合離子半徑越小親和力越大強(qiáng)堿型陰離子交換樹脂

F-<OH-<Ac-<HCOO-<H2PO4-<Cl-<NO3-<HSO4-

<CrO42-<SO42-對不同價態(tài)離子

Na+<Ca2+<Fe3+<Th4+

電荷數(shù)越高親和力越大樹脂對離子親和力順序ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＨＣＯ３－Ｃｌ－ＳＯ４２－Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－TemporalcourseＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＨＣＯ３－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋陰離子交換樹脂檢測器與抑制柱電導(dǎo)檢測器電壓電流的測量溶液中離子的濃度流動相的導(dǎo)電性很高抑制柱分析速度快分離能力高，分離混合陰離子的最有效方法儀器流路采用全塑件，玻璃柱，耐腐蝕優(yōu)點應(yīng)用與發(fā)展食品和飲料中陰陽離子、有機(jī)酸、胺和糖類分析的較好方法。聯(lián)用技術(shù)關(guān)于離子色譜--原子吸收（發(fā)射）光譜、離子色譜--電感耦合等離子體、離子色譜--質(zhì)譜的聯(lián)用已有不少報道。環(huán)境分析應(yīng)用對象主要是環(huán)境樣品中各種陰、陽離子的定性、定量分析。尺寸排斥色譜

size-exclusionchromatography原理色譜柱填料和流動相應(yīng)用尺寸排斥色譜也稱為凝膠色譜。它是基于試樣分子的尺寸和形狀不同來實現(xiàn)分離的。凝膠的孔穴大小與被分離的試樣的大小相當(dāng)。原理特點柱壽命長可用靈敏度較低的檢測器分子量的差別需要10%以上時才能得到分離，主要用來獲得分散性聚合物的相對分子質(zhì)量分布情況固定相：化學(xué)惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝膠、親水凝膠、無機(jī)多孔材料。流動相：在凝膠色譜中，流動相的作用不是為了控制分