抗氧化藥藥理

抗氧化藥藥理第1頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一100年放射生物學領(lǐng)域→潛水醫(yī)學領(lǐng)域→SOD→缺血再灌注與自由基損傷→腫瘤、免疫等各種生命過程自由基：損傷作用

信號作用現(xiàn)代抗衰老研究的目標不是將自由基徹底清除，而是將自由基維持在一個適當?shù)牡退?，維持氧化和抗氧化防御之間的平衡。第2頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一一個原子或分子含有未成對電子，或是一個原子、分子或離子子，帶有一個單獨不成對的電子。即是自由基外層只有一個子，因此急于抓取其他電子來穩(wěn)定自己，而破壞其他分子大部分生物學和醫(yī)學所關(guān)心的自由基是由氧分子衍生而來氧分子衍生之自由基也同樣應(yīng)用在以氮及碳分子為中心所衍生出之自由基O2＋e–?→O-2（氧自由基；超氧化物）自由基致線粒體DNA突變自由基對呼吸鏈的損傷自由基對線粒體膜的損傷自由基破壞線粒體的鈣穩(wěn)態(tài)已有公認,線粒體鈣穩(wěn)態(tài)的破壞是細胞壞死的最后共同通路。第3頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一燒烤、抽煙、致癌物質(zhì)、環(huán)境的化學物質(zhì)、氯化物、重金屬、酒精性飲料、抗癌藥物、劇烈運動等線粒體是細胞呼吸和氧化的中心，氧自由基主要來源于線粒體呼吸鏈反應(yīng)，這里可產(chǎn)生活細胞內(nèi)90%以上的自由基。自由基的種類繁多，其中，以超氧陰離子自由基(?O2ˉ)和羥自由基(?OHˉ)等氧自由基最為重要第4頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一近年來經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)的清除氧自由基的藥物很多，如眾所周知的維生素e、維生素a、維生素F及丹參等，都能很好地清除氧自由基，在臨床上也已得到廣泛的應(yīng)用。還有一些天然產(chǎn)物知母寧和蛋白類的化合物（金屬硫蛋白、鈍頂螺旋藻藻膽蛋白）也具有較強的抗氧化能力。在目前眾多的清除氧自由基的藥物中，以中草藥及其提取成分的活性較強，在臨床的應(yīng)用也十分廣泛.因而在中草藥中尋找高效無不良反應(yīng)的天然自由基清除劑的研究，成為醫(yī)藥學活躍的研究領(lǐng)域

。某些具有氧自由基清除能力的中草藥不僅可以治療與氧自由基增加而引起的有關(guān)疾病，如癌癥、缺血:再灌注損傷、輻射損傷，還可通過清除氧自由基對面部色素沉積（如蝴蝶斑，黃褐斑）有一定的療效。因此，研究清除氧自由基的藥物及其制劑不僅在臨床治療上有重大意義而且在化妝品及保健食品的開發(fā)上具有較大的市場潛力。但在使用的過程中應(yīng)恰當，否則利少弊多。09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進展第5頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一抗氧化劑(antioxidants)：

分為兩類：--由體內(nèi)制造的抗氧化酵素--由體外補充的抗氧化食物+體內(nèi)的抗氧化酵素，必須有有銅(Cu)鋅(Zn)硒(Se)鐵(Fe)等的參與飲食中的抗氧化物質(zhì)：β－胡蘿卜素從飲食或營養(yǎng)補充品持續(xù)補充抗氧化劑和營養(yǎng)素是必須的

09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進展第6頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一微量元素類

---------羧乙基鍺倍半氧化物（鍺--123）

電子自旋共振技術(shù)（ESR）和比色法OH·和O2·----------硒--為含硒谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）的活性部分

O2·所致脂質(zhì)過氧化鏈鎖反應(yīng)克山病、肝癌及結(jié)腸癌的預防。----------青絡(luò)鍺（Ge-M10）和青絡(luò)銅（Cu-M5）

抗癌藥的研發(fā)09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進展第7頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一藥用天然化合物-------多糖類-----藻類多糖ESR和自旋捕集技術(shù)，OH·和O2·

------菌類多糖鄰苯三酚自氧化法測定

------其他植物多糖金線蓮多糖沙棘多糖--------黃酮類化合物ESR自旋捕捉法和微量量熱法實驗--------酚類單酚類與多酚類抗衰老、心腦血管---------萜類化合物及其甙-------人參總甙類犬腎移植模型---------冬凌草甲素OH·和O2·抗癌-----------蒽醌類化合物蘆薈大黃素和蘆薈素09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進展第8頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一藥用植物----------傘形科藥用植物

大都具有清除自由基-------------馬齒莧不同處理方法引起的馬齒莧水提物對O2·作用的差異，使得馬齒莧的臨床應(yīng)用有所不同--------------鮮花提取液化學發(fā)光法多數(shù)鮮花具有抗氧化活性，其中天竺葵、春蘭、仙客來、萬壽菊等花瓣浸提液具有較強的清除·OH的活性---------------其他的藥用植物大黃，丹參，三七，銀杏，陳皮，荷葉，桑葉等09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進展第9頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一酶類------------巴曲酶蛇毒中提取的血栓素樣的蛋白酶，具有抗血栓作用超氧陰離子自由基清除劑--------------SOD

公認有效期很短，只有幾小時，且不易通過細胞膜09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進展第10頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一化學合成藥

-----------吲達帕胺和維拉帕米

離體兔心灌注模型試驗，設(shè)置吲達帕胺和維拉帕米組與對照組MDA下降，SOD增強------------4-氧和4-羥四甲基哌啶氮氧自由基及其衍生物

明顯的抗脂質(zhì)過氧化物09年，抗氧化劑的臨床應(yīng)用及其研究進展第11頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一特異性抗氧化是用比較特異的抗氧化物質(zhì)來阻斷那些主要損害機體的自由基，保留正?；蚝玫淖杂苫姆椒ㄎ镔|(zhì)的還原性不強，否則可能具有還原損傷效應(yīng)，如維生素C目前比較有前途的幾個是：尿酸、衣達拉豐（藥物）、氫氣、FK106(免疫抑制藥物)第12頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一另外一個比較有前途的是啟動內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)的方法，就是氧化反應(yīng)元件的激動物，如硫氧化還原蛋白、GSH合成等，這些物質(zhì)是體內(nèi)抗氧化最有效的系統(tǒng)，不需要補充抗氧化物質(zhì)，就可以發(fā)揮作用，而且不會造成過度抗氧化，實際上氧化還原最重要的是平衡許多天然化合物能激動這個途徑例如蘿卜硫素、姜黃素，這些藥物具有非常好的抗癌作用第13頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一天然藥物抗氧化活性成分分離提取技術(shù)的發(fā)展

天然藥物有效成分的傳統(tǒng)提取方法為索氏萃取法(Soxhletextraction,SE)缺點：局部過熱，溶液限制

新的液相色譜法的發(fā)展和應(yīng)用,為有效成分的提取提供了新的有利的方法。如：灌注色譜法可用于天然藥物中蛋白質(zhì)、肽類、酶類、低聚糖類、生物堿類等的分離純化。高速逆流色譜法(Hsccc)用于生物堿類、黃酮類、萜類、木脂素類、香豆素類及植物激素類等活性成分的分離提取第14頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一目前多采用微波輔助萃取法(MAE)和超臨界流體萃取技術(shù)(SFE)。MAESFE分離提取快速,與索氏萃取法比較只需較少的溶劑且得率較高

。酚類化合物可以容易地用MAE提取而得最干凈的提取方法,萃取和分離合二為一，速度快，在接近常溫的條件下操作，適合于揮發(fā)性物質(zhì)的分離第15頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一抗氧化活性的測定--體外抗氧化活性總的抗氧化能力消除活性氧能力--在體抗氧化作用試劑盒丙二醛含量可以反應(yīng)出體內(nèi)脂質(zhì)過氧化損傷的水平。第16頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一主要為三大類：

@體外抗氧化模型

—脂質(zhì)過氧化的抑制

—清除各類活性氧、自由基能力的檢測方法

—氧化還原法@細胞損傷模型—H2O2損傷細胞的體外模型

—過氧化脂質(zhì)損傷細胞的體外模型建立

@體內(nèi)抗氧化模型07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第17頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一以油脂為底物：

加速氧化方法：烘箱法、活性氧加速法等

利用金屬離子、自由基引發(fā)劑氧化誘導期的指示方法能否客觀反映底物氧化誘導期的結(jié)束，對評價抗氧化劑的活性非常關(guān)鍵。

方法：碘量法

硫氰酸亞鐵法三價鐵離子與硫氰酸絡(luò)合

共軛二烯酸測定法

化學熒光法

增重法

養(yǎng)壓法茴香胺反應(yīng)物法、克雷斯實驗法、胡蘿卜素漂白法等

脂質(zhì)過氧化的抑制07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第18頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一以亞油酸為底物硫氰酸鐵法

硫代巴比妥酸法

-----利用亞油酸氧化產(chǎn)生丙二醛和硫代巴比妥酸反應(yīng)生成紅色物質(zhì)，在532nm有吸收。+卵磷脂氧化法+亞油酸甲酯氧化法+以鼠肝微粒體為底物脂質(zhì)過氧化的抑制07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第19頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一清除羥自由基能力產(chǎn)生羥自由基(·OH)的體系有Fe—EDTA一抗壞血酸一H20體系、Fe一EDTA—H20體系、黃嘌呤一黃嘌呤氧化酶一H0體系及紫外光照H0，光解產(chǎn)生·OH等。

方法：二甲基亞砜法DMSO脫氧核糖核酸降解法亞硝基二甲苯胺(NPA)漂白法水楊酸法高效液相電化學檢測法茜素紫顯色法清除各類活性氧、自由基能力的檢測方法07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第20頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一檢測清除H202

能力的方法清除過氧自由基能力的檢測方法過氧自由基(RO·)包括水溶性RO·和脂溶性RO·

RO·可使順式十八碳四烯酸脂質(zhì)過氧化，測定熒光強度(于324nm激發(fā)，412nm處釋放)可了解脂質(zhì)過氧化的情況，推測受試物清除RO·的情況。+超氧陰離子自由基清除能力的測定鄰苯三酚蛋氨酸

鄰苯三酚法可通過測定鄰苯三酚的自氧化速率來確定待測物的抑制作用+清除二苯代苦味?；杂苫芰Φ臋z測方法ABTs方法2，2一連氮一雙一(3一乙基苯并噻唑啉一6一磺酸清除各類活性氧、自由基能力的檢測方法07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第21頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一受試物直接清除自由基能力的檢測除以上介紹的方法外，受試物對各類自由基的清除作用還可用電子順磁共振(ESR)法。用ESR測試得到自旋加合物的電子自旋共振圖譜，得知受試物對自旋加合物信號強度的影響，從而了解受試物對自由基的清除情況07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第22頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一FRAPassay(FerricReducingAbilityofplasma)：血漿高鐵還原能力分析能力原理：實質(zhì)是基于氧化還原反應(yīng)的比色法在低pH值的溶液中，F(xiàn)e3+一TPTZ(Fe3+一三吡啶三嗪)被抗氧化劑還原成Fe2+一TPTz，溶液變成深藍色，并且在593nm處有最大光吸收。其他體外測定抗氧化活性的方法還有利用Cu2~-Fenton反應(yīng)，P標記檢測DNA的氧化損傷法，SPME法監(jiān)測脂質(zhì)過氧化系統(tǒng)中產(chǎn)生的揮發(fā)性羰基類化合物來評價抗氧化活性法等。氧化還原法07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第23頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一H202

損傷細胞的體外模型

H202培養(yǎng)液MTT法觀察細胞損傷及藥物對細胞損傷的保護作用+過氧化脂質(zhì)損傷細胞的體外模型建立過氧化脂質(zhì)t—BuOOH、NDE(2，4一nona—diena1)07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第24頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一用受試物連續(xù)喂飼大鼠或小鼠1個月～3個月，然后處死動物，測定其血或組織(如肝、腦)中MDA、單胺氧化酶(MAO—B)及抗氧化酶SOD、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH—Px)及過氧化氫酶(CAT)，同對照組比較，若MDA、MAO—B降低，SOD、GSH—Px、CAT等升高，則說明受試物具有抗氧化能力。07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第25頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一體外篩選具有抗氧化活性的物質(zhì)可通過體內(nèi)實驗進一步驗證。體內(nèi)實驗的特點是比較靈敏，周期較長，成本較大，實驗比較繁瑣，不如體外實驗簡易方便，但卻是目前最準確、可信度最高的抗氧化劑的篩選方法。天然抗氧化活性物質(zhì)篩選對促進抗衰老、防癌和心血管系統(tǒng)疾病的保健食品、藥品的開發(fā)具有積極作用。07年，徐清萍等，抗氧化劑抗氧化方法研究進展第26頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一在化學工作者用實驗方法檢測某一類抗氧化劑抗氧化能力的基礎(chǔ)上，根據(jù)所得的數(shù)據(jù)，以計算機軟件為工具用量子化學模擬計算，確定抗氧化劑的構(gòu)效關(guān)系，開創(chuàng)了用量子化學理論研究抗氧化劑能力的新路可以對抗氧化劑的活性進行預測，且有可能在理論上構(gòu)造出新的活性更高的抗氧化劑，進而加速抗氧化劑的合成與篩選第27頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一第28頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一研究藥物效應(yīng)的遺傳變異及其規(guī)律在正常個體間，藥物代謝酶的動力學參數(shù)(米氏常數(shù)Km,反應(yīng)最大速率Vmax)存有很大差異在體內(nèi)試驗測量到的藥物消除速率差異可自4倍~40倍以上大量的孿生子女和家族的研究顯示遺傳是造成高度個體間差異的主要因素第29頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一不同病人清除藥物的固有能力是不同的一位具有迅速代謝藥物能力的人，為獲得適宜的治療濃度，可能需要更高的劑量、更頻繁地給藥一位代謝能力緩慢的病人，為避免發(fā)生毒性反應(yīng)，可能需要較低的劑量和較少的給藥次數(shù)對于安全范圍較窄的藥物尤為重要第30頁，共36頁，2023年，2月20日，星期一認識和闡明藥物反應(yīng)個體和群體間差異的發(fā)生機制，提高藥物治療效果闡明遺傳在機體對藥物和