DB44T 447-2007桑蠶原種和一代雜交種疫病檢驗(yàn)規(guī)程

DB44/T447—20072007-10-16發(fā)布廣東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I前言 Ⅱ 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14檢驗(yàn)項(xiàng)目 4.1原種微粒子病蛾率 5檢驗(yàn)方法 5.2母蛾收集與抽樣 5.6拆盒投蛾、磨蛾 5.7過(guò)濾、離心 5.8點(diǎn)樣鏡檢 5.10蠶種合格判別 6檢驗(yàn)規(guī)則 7簽發(fā)檢驗(yàn)報(bào)告 8不合格蠶種的淘汰與處理 8.1不合格蠶種淘汰 8.2淘汰蠶種的處理 A.1原種 A.2-代雜交種 附錄B(規(guī)范性附錄)母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告 B.1原種 附錄C(資料性附錄)母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)常用藥物和主要藥物的配制 C.1檢驗(yàn)常用藥物 C.2主要藥物的配制 DB44/T447—2007本標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)“GB19179-2003《桑蠶原種》""GB/T19178-2003《桑蠶原種檢驗(yàn)規(guī)程》""NY《桑蠶一代雜交種》"和廣東省桑蠶種生產(chǎn)、微粒子病母蛾檢驗(yàn)實(shí)際情況而制定。本標(biāo)準(zhǔn)為推薦性標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)與GB/T19178—2003《桑蠶原種檢驗(yàn)規(guī)程》和NY/T327—1997《桑蠶-代雜交種檢驗(yàn)規(guī)程》相比較，技術(shù)內(nèi)容更加細(xì)化和具體，適用于廣東地區(qū)多批次養(yǎng)蠶制種和平附型蠶種的家蠶微粒子病母蛾檢驗(yàn)。技術(shù)內(nèi)容的變化主要包括：——增加了修正系數(shù)1.05即病蛾率的合格指標(biāo)嚴(yán)于GB/T19178—2003《桑蠶原種檢驗(yàn)規(guī)程》?！黾恿松ＰQ一代雜交種(平附種)補(bǔ)產(chǎn)卵母蛾的檢驗(yàn)方法?！鞔_了即時(shí)浸酸--代雜交種的檢驗(yàn)方法。——明確了被檢出的類似物集團(tuán)及蛾盒的判別方法?！?guī)定了不規(guī)范集團(tuán)及蛾盒的判別方法?！?guī)定了對(duì)不合格蠶種的處理方法。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)送檢單和附錄B母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告是規(guī)范性附錄，附錄C母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)常用藥物和主要藥物的配制是資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省蠶業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)中心提出。本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：廣東省蠶業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)中心、廣東省絲綢集團(tuán)公司、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院蠶絲科學(xué)系、廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所、茂名市蠶業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)站、廣東省絲綢公司廉江市蠶種場(chǎng)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：余愛(ài)群、李惠華、黃星光、鐘蘇苑、劉新國(guó)、邱國(guó)祥、廖富萍、楊瓊、翁扶萬(wàn)、陳康武本標(biāo)準(zhǔn)由廣東省蠶業(yè)產(chǎn)品檢測(cè)中心負(fù)責(zé)解釋。本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了桑蠶原種和一代雜交種疫病——家蠶微粒子病母蛾檢驗(yàn)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于廣東省桑蠶原種和一代雜交種——平附種生產(chǎn)過(guò)程的母蛾檢驗(yàn)。下列文件中的條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB19179—2003桑蠶原種GB/T19178—2003桑蠶原種檢驗(yàn)規(guī)程N(yùn)Y326—1997桑蠶一代雜交種NY/T327—1997桑蠶一代雜交種檢驗(yàn)規(guī)程DB44/T253—2005桑蠶一代雜交種感染微粒子病母蛾所產(chǎn)卵制成的蠶種。在集團(tuán)磨蛾檢驗(yàn)中，包括不合格批和合格批中的不合格單日、合格單日樣本檢出有微粒子孢子的蠶種統(tǒng)稱為微粒子病蠶種，又稱有毒蠶種。母蛾集團(tuán)檢驗(yàn)中，帶微粒子孢子的集團(tuán)數(shù)占該制種批母蛾總數(shù)的百分比。個(gè)制種批的母蛾微粒子病檢出率，稱為批病蛾率。微粒子病蛾率超過(guò)合格指標(biāo)的同一制種批稱為不合格批，又稱超毒批。同一制種批單日病蛾率超過(guò)單日合格指標(biāo)稱為不合格單日，又稱超毒朝。2烘送蛾樣送收樣樣烘蛾合格判別檢驗(yàn)報(bào)告清洗點(diǎn)板點(diǎn)板的樣本和用其不合格最種3DB44/T447—2007按蠶品種、制種批(戶)及日期對(duì)蠶種紙和對(duì)應(yīng)蛾盒做好編號(hào)，殺蛾前，每1大張(4張平附種)按梅花形五點(diǎn)分別各抽取5只母蛾，共25只，對(duì)號(hào)裝入蛾盒內(nèi)。每制種批(戶)抽取母蛾盒數(shù)，以該批(戶)制種數(shù)量而定，若制種數(shù)量不足30大張(120張平附種)時(shí)，應(yīng)隨機(jī)抽足30盒，同時(shí)記錄蛾盒數(shù)及相應(yīng)蠶種編號(hào)。若蠶種需補(bǔ)產(chǎn)卵時(shí)，每1大張補(bǔ)產(chǎn)卵蛾應(yīng)全部對(duì)號(hào)裝入蛾盒作為1個(gè)集團(tuán)。將裝有母蛾的蛾盒放入烘蛾箱內(nèi)，溫度保持60℃~70℃,每隔半小時(shí)上下調(diào)格一次，使其受熱均勻，連續(xù)烘蛾4~6小時(shí)，以母蛾頭胸干硬，腹部稍軟為宜。烘蛾溫度不得>70℃,以免導(dǎo)致微粒子孢子變形。殺蛾后原種7天、一代雜交種15天內(nèi)將經(jīng)烘蛾處理的母蛾送到檢驗(yàn)單位。將送樣蛾盒捆扎、裝袋(箱)包裝，運(yùn)輸過(guò)程中避免受潮、污染、損壞或丟失。送樣前，應(yīng)詳細(xì)填寫蠶種母蛾送檢單一式二份，隨母蛾交檢驗(yàn)單位驗(yàn)收。送檢單見(jiàn)附錄A。樣本與送檢單填寫內(nèi)容要一致，記錄異常情況和客戶特殊要求。送檢單二份，一份由檢驗(yàn)單位存查，將驗(yàn)收后的母蛾樣本集中存放，防止發(fā)霉腐爛及蟻、蟲(chóng)、鼠害和受潮、污染、損壞或丟失。按編號(hào)順序?qū)⒍旰胁痖_(kāi)，用鑷子或竹簽將全部母蛾及殘物放入磨蛾管內(nèi)，做好標(biāo)記。如發(fā)現(xiàn)有散落或混亂的蛾盒、空盒、裝蛾不規(guī)范的蛾盒，登記其編號(hào)，并判為不合格蠶種。用過(guò)的鑷子或竹簽要用消毒液在磨蛾管內(nèi)加入0.2%～0.4%的氫氧化鈉溶液(或其它堿液)約70ml,,用8000r/min鉸刀磨蛾機(jī)磨蛾15s5.7過(guò)濾、離心將研磨后的蛾液用濾網(wǎng)充分過(guò)濾到離心管內(nèi)，并編號(hào)放好。將離心管按順序放入離心機(jī)內(nèi)，以3000r/min～4000r/min,離心2min～3min。取出離心管傾去上清液，保留3mL~4mL余液待檢。用竹簽攪勻離心管內(nèi)余液沉淀物，每蘸1次沉淀物點(diǎn)1點(diǎn)于載玻片上，每樣本點(diǎn)2塊載玻片，每塊載玻片點(diǎn)2點(diǎn)，加蓋玻片后送檢驗(yàn)員進(jìn)行鏡檢。每1號(hào)樣本由兩位檢驗(yàn)員負(fù)責(zé)對(duì)檢，每點(diǎn)樣本用600～800倍的顯微鏡仔細(xì)觀察5個(gè)視野以上。如兩位檢驗(yàn)員均未發(fā)現(xiàn)微粒子孢子者，即判為無(wú)微粒子孢子集團(tuán)；如兩位檢驗(yàn)員檢驗(yàn)結(jié)果不一致時(shí)，應(yīng)重新點(diǎn)樣2點(diǎn)加以復(fù)查，如發(fā)現(xiàn)有微粒子孢子判為有微粒子孢子集團(tuán)，如4用竹簽攪勻離心管內(nèi)余液沉淀物，每蘸1次沉淀物點(diǎn)1點(diǎn)于載玻片上，每樣本點(diǎn)2點(diǎn)，每點(diǎn)樣本用600～800倍的顯微鏡仔細(xì)觀察5個(gè)視野以上。如未發(fā)現(xiàn)微粒子孢子判為無(wú)微粒子孢子蛾盒；2點(diǎn)中均發(fā)現(xiàn)按式(1)計(jì)算合格率。 按式(2)計(jì)算病蛾率。按式(3)計(jì)算合格率。批合格率≥89.38%,相當(dāng)于批微粒子病蛾率<0.4%判為合格批；批合格率<89.38%,相當(dāng)于批微粒子批合格率≥78%,相當(dāng)于病蛾率<1%,判為合格批；批合格率<78%,相當(dāng)于病蛾率≥1%,判為不合5同一批分日制種時(shí)，在批合格率≥78%,相當(dāng)于病蛾率<1%前提下，而其中單日合格率>50%,相當(dāng)于病蛾率<2.74%,判為合格單日；合格率≤50%,相當(dāng)于病蛾率≥2.74%,判為不合格單日。 即浸種單日樣本量≥30盒，合格率≥78%,相當(dāng)于病蛾率<1%,判為合格單日；合格率<78%相當(dāng)于病蛾率≥1%,判為不合格單日，允許整批檢完后重新判別合格與否。 即浸種單日樣本量<30盒并檢出有微粒子孢子時(shí)，其蠶種應(yīng)待整批母蛾檢驗(yàn)結(jié)束后才判別合格與凡判為類似物集團(tuán)或蛾盒，在母蛾檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)時(shí)不計(jì)入病蛾率。檢驗(yàn)時(shí)如發(fā)現(xiàn)有微粒子孢子(含類似物)的用具要徹底消毒后方可再用。檢出有微粒子孢子的母蛾本要消毒后才能排放，其裝樣蛾盒要集中消毀防止病源擴(kuò)散。消毒藥物的選用和使用濃度參見(jiàn)附錄C集團(tuán)或蛾盒數(shù)取整數(shù)，百分?jǐn)?shù)按數(shù)值修約規(guī)則保留兩位小數(shù)。以制種批為單位，全部母蛾檢驗(yàn)。以制種批(戶)為單位，抽樣檢驗(yàn)。7簽發(fā)檢驗(yàn)報(bào)告檢驗(yàn)單位在整批母蛾檢驗(yàn)結(jié)束后，根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果給送樣單位出具檢驗(yàn)(疫)報(bào)告。原種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告見(jiàn)附錄B中表B1。代雜交種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告見(jiàn)附錄B中表B2。8不合格蠶種的淘汰與處理8.1不合格蠶種淘汰依據(jù)檢驗(yàn)單位出具的檢驗(yàn)(疫)報(bào)告淘汰不合格蠶種。不合格批蠶種整批淘汰，合格批中的不合格單日蠶種整日淘汰，淘汰合格批中檢出有微粒子孢子集團(tuán)檢驗(yàn)時(shí)判為類似物集團(tuán)或蛾盒相對(duì)應(yīng)的蠶種要淘汰。因散落、混亂、裝蛾不規(guī)范、空盒等原因造成未檢驗(yàn)集團(tuán)或蛾盒相對(duì)應(yīng)的蠶種要淘汰。68.2淘汰蠶種的處理蠶種生產(chǎn)單位將應(yīng)淘汰的不合格蠶種集中監(jiān)督消毀，防止微粒子病病源擴(kuò)散。表1桑蠶一代雜交種合格率與平均微粒子病蛾率對(duì)照表單位：%合格率病蛾率合格率病蛾率合格率病蛾率合格率病蛾率合格率病蛾率0987654321根據(jù)0—C曲線中合格率(%)在100～61%范圍內(nèi)、可信限為99%。7DB44/T447—2007母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)送檢單A.1原種原種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)送檢單見(jiàn)表A1。表A1桑蠶原種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)送檢單送檢單位(蓋章):年月日編號(hào)品種名稱造別與批次制種日期日/月制種量，張計(jì)劃用種日期月用種方式樣本狀態(tài)烘蛾溫度℃?zhèn)渥⒗洳亟岱N即時(shí)浸酸種烘下半干鮮蛾最高最低平均合計(jì)檢驗(yàn)單位(蓋章):送樣員年月日驗(yàn)收員1本表一式二份隨同樣本送檢驗(yàn)(疫)單位驗(yàn)收，其中一份經(jīng)驗(yàn)收蓋章后返回生產(chǎn)單位2即時(shí)浸酸種母蛾可逐日送檢，冷藏浸酸種待制種批結(jié)束后一次送檢。A.2一代雜交種-代雜交種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)送檢單見(jiàn)表A2。表A2桑蠶一代雜交種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)送檢單送檢單位(蓋章):年月日戶批編號(hào)品種名稱造別與批次制種日期日1月制種量，張送檢蛾盒數(shù)起止蛾盒編號(hào)計(jì)劃用種日期用種方式樣本狀態(tài)烘蛾溫度℃?zhèn)渥⒐烙?jì)凈種即時(shí)浸酸種烘干半干鮮蛾最高最低平均合計(jì)檢驗(yàn)單位(蓋章):送樣員驗(yàn)收員1本表一式二份隨同樣本送檢驗(yàn)(疫)單位驗(yàn)收，其中一份經(jīng)驗(yàn)收蓋章后返回生產(chǎn)單位。2即時(shí)浸酸種母蛾可逐日送檢，冷藏浸酸種待制種批結(jié)束后一次送檢，8母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告原種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告見(jiàn)表B1。表B1桑蠶原種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告送樣單位：樣本編號(hào)品種名稱造別與批次制種日期日1月制種量張起止蛾盒編號(hào)送樣集團(tuán)數(shù)盒有微粒子孢子集團(tuán)數(shù)盒微粒子病蛾率，%檢疫結(jié)果蠶種處理意見(jiàn)(淘汰蠶種編號(hào))合計(jì)備注檢驗(yàn)單位(蓋章):制表復(fù)核日期注：病蛾率<0.4%判為合格。B.2一代雜交種代雜交種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告見(jiàn)表B2。表B2桑蠶一代雜交種母蛾微粒子病檢驗(yàn)(疫)報(bào)告戶編號(hào)造別與批次制種日期日1月制種量張起止蛾盒編號(hào)送樣集團(tuán)數(shù)盒有微粒子孢子集團(tuán)數(shù)盒微粒子病蛾率，%檢疫結(jié)果蠶種處理意見(jiàn)(淘汰蠶種編號(hào))合計(jì)備注檢驗(yàn)單位(蓋章):制表復(fù)核日期注：批病蛾率<1%,單日病蛾率<2.74%判為合格。9DB44/T447—2007(資料性附錄)C.1檢驗(yàn)常用藥物檢驗(yàn)和消毒常用藥物見(jiàn)表C1。表C1蠶種母蛾檢驗(yàn)(疫)常用藥物用途與目的常用藥物濃度溶解脂肪球選用堿性藥物1、氫氧化鈉2、氫氧化鉀3、碳酸鉀4、碳酸鈉1、0.2～0.4%氫氧化鈉溶液2、0.2～0.4%氫氧化鉀溶液3、0.5%碳酸鉀4、0.5%碳酸鈉主要儀器設(shè)備和工作臺(tái)面的消毒選用低腐蝕性、無(wú)刺激性氣味的藥物1、蠶消安2、克孢靈1、210mg/L蠶消安藥液2、100mg/L克孢靈藥液有微粒子孢子樣本的消毒選用滲透力強(qiáng)、高效的藥物1、次氯酸鈉2、漂白粉3、漂白(粉)精4、消毒凈1、0.4%有效氯次氯酸鈉溶液2、1%有效氯漂白粉溶液3、1%有效氯漂白(粉)精溶液4、0.4%有效氯消毒凈溶液檢驗(yàn)用具消毒檢驗(yàn)室地面消毒外環(huán)境消毒C.2主要藥物的配制C.2.1氫氧化鈉溶液的配制母蛾檢驗(yàn)中用于溶解脂肪球的氫氧化鈉溶液目的濃度是0.2～0.4%,依式(C1)計(jì)算加水倍數(shù)。Co——藥物原濃度，%;Cr——目的濃度，%?！瑿.2.2次氯酸鈉有效氯含量的測(cè)定和