輸血相關(guān)傳染病的檢測技術(shù)概述

輸血相關(guān)傳染病的檢測技術(shù)概述第1頁/共64頁輸血相關(guān)傳染病種類病毒性肝炎乙、丙、丁、庚型肝炎艾滋病梅毒巨細(xì)胞病毒EBV感染HTLV感染（美國、歐盟及我國的廈門血站開展）瘧疾弓形體病等第2頁/共64頁輸血相關(guān)傳染病檢測方法酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA*免疫熒光法IFA放射免疫法RIA免疫印跡法WB*重組免疫印跡法RIBA顆粒凝集實驗PA病毒檢測VT病毒核酸檢測NAT*第3頁/共64頁酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA建于1971年。開創(chuàng)了運用酶標(biāo)記免疫技術(shù)進(jìn)行液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定，是檢驗醫(yī)學(xué)的里程碑式的發(fā)展。特點：敏感性高，特異性強(qiáng)，操作簡便，即可測定抗原，也可測定抗體。類型：間接法，直接法，雙抗體夾心法，競爭抑制法或競爭法。第4頁/共64頁免疫熒光法IFA熒光抗體技術(shù)熒光抗原技術(shù)原理：以特異抗原抗體反應(yīng)為基礎(chǔ)，利用熒光素作為標(biāo)記物標(biāo)記已知抗原（或抗體），在一定條件下與被測標(biāo)本中相應(yīng)的抗體（或抗原）結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物，此時熒光素起示蹤物作用。再通過有紫外光源的熒光顯微鏡就可以辨認(rèn)出特異性抗原抗體復(fù)合物的存在。第5頁/共64頁放射免疫法RIA一種用放射性同位素為標(biāo)記物的免疫學(xué)測定方法，具有很高的敏感性與特異性。其原理與ELISA大致相同，所不同的是用放射性同位素為標(biāo)記物而不是用酶為標(biāo)記物。第6頁/共64頁免疫印跡試驗WB又名蛋白印跡試驗，其原理是在病毒裂解后將不同分子量的病毒蛋白經(jīng)十二烷基硫酸鈉（SDS）聚丙烯胺凝膠電泳（PAGE）分離后，經(jīng)過電轉(zhuǎn)移將凝膠上的蛋白條帶轉(zhuǎn)移到位硝酸纖維素膜上，以此作為抗原進(jìn)行病毒特異性抗體檢測。第7頁/共64頁重組免疫印跡試驗RIBA原理：應(yīng)用重組蛋白或合成肽（而不是直接應(yīng)用病毒裂解的蛋白）以條帶形式吸附在硝酸纖維素膜條上，當(dāng)條上加入被測血清標(biāo)本溫育后，如果標(biāo)本中含有特異性抗體時，則和相應(yīng)抗原帶結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。通過洗滌，去掉未結(jié)合的血清，然后加入酶標(biāo)IgG二抗，再溫育，則酶結(jié)合物就結(jié)合到抗原抗體復(fù)合物上，再洗滌，加入底物。第8頁/共64頁顆粒凝集試驗PA是一種簡便快速的篩檢試驗，其原理為病毒裂解物或重組抗原包被于顆粒載體（紅細(xì)胞，乳膠顆粒，明膠顆粒），使之成為致敏顆粒，再加入血清標(biāo)本，如被測血清中含有特異性抗體，則因抗體與抗原間橋聯(lián)作用，使致敏顆粒發(fā)生凝集。第9頁/共64頁病毒檢測VT可通過病毒的分離和培養(yǎng)后進(jìn)行。培養(yǎng)可通過動物培養(yǎng)，雞胚培養(yǎng)和細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行，其中以細(xì)胞培養(yǎng)方法最敏感、經(jīng)濟(jì)和最有前途。病毒感染細(xì)胞后，多數(shù)病毒能引起病變，可直接鏡檢觀察，或通過血清學(xué)檢查作出鑒定。第10頁/共64頁病毒的核酸檢測NAT病毒核酸分子雜交聚合酶鏈反應(yīng)PCR第11頁/共64頁乙型肝炎的檢測技術(shù)第12頁/共64頁1乙肝病毒的生物學(xué)性狀形態(tài)與結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)與復(fù)制方式抗原組成動物模型與細(xì)胞培養(yǎng)抵抗力第13頁/共64頁1.1HBV形態(tài)與結(jié)構(gòu)HBV結(jié)構(gòu)為雙層球形，直徑42nm，具有雙層衣殼。第14頁/共64頁1.2HBV基因結(jié)構(gòu)與復(fù)制方式HBV的DNA基因較小，僅含約3200個核苷酸，負(fù)股DNA核苷酸序列含有4個開放讀碼框架（OPR）分別稱為S、C、P和X區(qū)。基因及其編碼的抗原：S區(qū)基因

C區(qū)基因

P區(qū)基因

X區(qū)基因

S基因→HBsAgC基因→HBcAg↓↓前S1→Pre-S1前C基因→HBeAgDNA多聚酶HBXAg前S2基因→Pre-S2第15頁/共64頁1.3HBV抗原的組成表面抗原HBsAg三種形態(tài)小球型顆粒、管形顆粒、Dane顆粒亞型各亞型均有共同抗原決定簇，稱為a抗原，此外還有2組相互排斥的亞型抗原決定簇（d/y和w/r）。按不同的組合方式構(gòu)成HBsAg四個基本亞型，即adr,adw,adr,ayw。亞型的分布有明顯的地區(qū)差異和種族相關(guān)性，漢族以adr，少數(shù)民族為ayw，歐美以adw占優(yōu)勢，ayw主要分布在北非和西非。乙肝ELISA診斷試劑的標(biāo)準(zhǔn)要求adr,adw,ayw三個亞型的最小檢出量為0.5ng/L。核心抗原HBcAg為內(nèi)衣殼部分，不易在血循環(huán)中檢測，抗原性強(qiáng)。e抗原HBeAg病毒復(fù)制和具有強(qiáng)感染性的指標(biāo)。第16頁/共64頁1.4HBV動物模型與細(xì)胞培養(yǎng)黑猩猩是對HBV最敏感的動物。目前采用的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)是病毒DNA傳染系統(tǒng)。將病毒DNA導(dǎo)入肝癌等細(xì)胞后，病毒可整合并復(fù)制，在細(xì)胞中表達(dá)HBV抗原。第17頁/共64頁1.5HBV抵抗力HBV的抵抗力較強(qiáng)，在30℃-32℃可存活6個月，在-20℃可存活15年，對低溫、干燥、紫外線均有耐受。不能被70%乙醇滅活，因此不能用這一常規(guī)方法來消毒。但65℃10小時、煮沸10分鐘或高壓蒸氣均可滅活HBV。含氯制劑、環(huán)氧乙烷、戊二醛、0.5%過氧乙酸和碘伏等也有較好的滅活效果。消毒可以使HBV失去傳染性，但是HBsAg的抗原性仍可保留。第18頁/共64頁1.6HBVmarkersduringearlyinfectionInfection Day0HBVDNA Variable,upto31dayspriortoHBsAgbyID NAT(9-11daysbyMPNAT)

HBsAg Day59;disappearsDay120Infection1200102030405060708090100110Infection Day0HBVDNA Variable,upto31dayspriortoHBsAgbyID NAT(9-11daysbyMPNAT)

HBsAg Day59;disappearsDay120HBV

DNAAnti-HBcInfectionHBsAgALT第19頁/共64頁2乙型肝炎病原體檢測病毒直接標(biāo)志物病毒抗原：HBsAg、HBeAg、Pre-S1、Pre-S2病毒核酸：HBVDNA間接性標(biāo)志物抗病毒抗體：HBsAb、HBeAb、HBcAb第20頁/共64頁2.1乙肝抗原抗體的檢測及結(jié)果分析HBsAg陽性表示HBV感染;抗-HBs為保護(hù)性抗體;HBeAg陽性可作為HBV復(fù)制和傳染性高的指標(biāo);抗-HBe陽性表示HBV復(fù)制水平低(但有前C區(qū)突變者例外);抗-HBc總抗體主要是抗-HBcIgG,只要感染過HBV,無論病毒是否被清除,此抗體均為陽性;抗-HBcIgM陽性提示HBV復(fù)制,多見于乙型肝炎急性期。近些年有許多實驗室開展了乙肝前S1抗原檢測,前S1抗原在病毒感染、裝配、復(fù)制和刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)等方面起著十分重要的作用,被認(rèn)為是比HBeAg更敏感的病毒復(fù)制標(biāo)志,尤其適合無條件開展HBVDNA檢測的醫(yī)療單位。微粒子酶免分析法(MEIA)及化學(xué)發(fā)光法雖然靈敏度更高,,但由于價格昂貴并未能廣泛開展。HBV血清學(xué)標(biāo)志物檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢是從定性檢測轉(zhuǎn)變?yōu)槎糠治觥BV血清學(xué)標(biāo)志傳統(tǒng)上包括HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc和抗-HBcIgM。第21頁/共64頁2.2HBVDNA及其基因型、變異和cccDNA的檢測1HBVDNA檢測HBVDNA定性和定量檢測反映了病毒復(fù)制情況或水平,主要用于慢性HBV感染的診斷、血清HBVDNA水平的監(jiān)測,以及評價抗病毒療效,多使用各種PCR技術(shù)?；蛐秃妥儺惖臋z測HBV病毒可分為8型,分別為A、B、C、D、E、F、G、H。HBV基因分型常用的方法有:多重PCR法;限制性片段長度多態(tài)性分析法;線性探針反向雜交法;全基因序列測定法等。全基因序列測序分型的結(jié)果準(zhǔn)確性高,尤其是能發(fā)現(xiàn)兩種不同基因型的重組體感染,被公認(rèn)為HBV基因分型的金標(biāo)準(zhǔn),但比較昂貴繁瑣,不適合常規(guī)應(yīng)用。目前的研發(fā)趨勢是針對有重要臨床意義的HBV變異進(jìn)行快速、定量的多位點聯(lián)合檢測。第22頁/共64頁2.2HBVDNA及其基因型、變異和cccDNA的檢測2cccDNA（共價閉合DNA[covalentclosedcircular]）的檢測

cccDNA是HBV的原始復(fù)制模板,對乙肝病毒的復(fù)制及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義。Southernblot是檢測HBVcccDNA的經(jīng)典方法,但是該方法過程比較復(fù)雜,而且靈敏度不高。實時熒光定量PCR不需對PCR反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行開蓋檢測,從而減少了PCR產(chǎn)物污染的可能,可對cccDNA進(jìn)行定量分析,多被實驗室采用。第23頁/共64頁2.3乙肝病毒微生物學(xué)檢查法HBV感染宿主的免疫學(xué)監(jiān)測HBV感染的病程很大程度上取決于宿主的免疫機(jī)能,不同病程時期的機(jī)體免疫特點、體內(nèi)病毒水平和肝臟損傷程度均不相同,臨床免疫學(xué)檢測對HBV感染的各病程階段的免疫狀態(tài)判斷、指導(dǎo)治療和評價療效等方面都有重要的意義。流式細(xì)胞儀可以同時準(zhǔn)確檢測幾種T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量,監(jiān)控病人的免疫狀態(tài),被實驗室廣泛應(yīng)用。第24頁/共64頁3乙肝診斷試劑的研制進(jìn)展抗-HBs診斷血清血凝試驗反向被動血凝試驗RPHA

被動血凝試驗PHA放射免疫試驗RIA酶聯(lián)免疫測定法（ELISA）試劑DNA聚合酶鏈反應(yīng)PCRHBsAg全血金標(biāo)檢測試紙條第25頁/共64頁4檢測乙肝時常見問題1陽性漏檢的問題一步法試劑的鉤端效應(yīng)，后帶現(xiàn)象。試劑的標(biāo)準(zhǔn)中對一步法試劑有3份1：64效價的HBsAg陽性血清，檢測結(jié)果要求為陽性。靈敏度：靈敏度對于早期檢出有利。窗口期：美國研究表明90%的HBsAg漏檢是因為窗口期。國內(nèi)研究表明30%－40%是因為窗口期。亞型問題ad型檢出率要高于ay型變異HBsAg變異類型有很多，50％－70％變異株與抗野生株單抗的免疫反應(yīng)減弱或消失。有部分變異株與野生株在立體構(gòu)型和抗原反應(yīng)性上有明顯的差異,因此防治困難。第26頁/共64頁4檢測乙肝時常見問題2乙肝假陽性問題類風(fēng)濕因子RF與抗體結(jié)合，造成ELISA和金標(biāo)法的假陽性。補(bǔ)體與IgG的Fc段結(jié)合，造成ELISA和金標(biāo)法的假陽性。纖維蛋白原與酶結(jié)合物粘附于微板上洗不掉，造成ELISA假陽性。稀釋液推進(jìn)劑，金標(biāo)法中應(yīng)先加樣品，后加釋釋劑，否則易出現(xiàn)假陰性。第27頁/共64頁丙型肝炎的檢測技術(shù)第28頁/共64頁1丙肝病毒的生物學(xué)性狀形態(tài)與結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)與功能丙肝病毒抗體的特點與臨床意義丙肝病毒感染后ALT特點與意義丙肝病毒的生物學(xué)檢測第29頁/共64頁丙肝病毒簡介1974年Golafield首先報告輸血后非甲非乙型肝炎。1989年Choc等應(yīng)用分子克隆技術(shù)獲得本病毒基因克隆，并命名本病及其病毒為丙型肝炎（HepatitisC）和丙型肝炎病毒（HCV）。由于HCV基因組在結(jié)構(gòu)和表型特征上與人黃病毒和瘟病毒相類似，1991年，國際病毒命名委員會(ICTV)將其歸為黃病毒科丙型肝炎病毒屬。第30頁/共64頁1.1形態(tài)與結(jié)構(gòu)HCV病毒體呈球形，直徑小于80nm（在肝細(xì)胞中為36-40nm，在血液中為36-62nm），為單股正鏈RNA病毒，在核衣殼外包繞含脂質(zhì)的囊膜，囊膜上有剌突。HCV體外培養(yǎng)尚未找到敏感有效的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，但黑猩猩對HCV很敏感。第31頁/共64頁1.2HCV基因結(jié)構(gòu)與功能丙型肝炎病毒是單股正鏈RNA病毒．其基因組含有一個大約9033個核苷酸構(gòu)成的大開放讀碼框(0RF)，可編碼3010—3033個氨基酸的多蛋白前體，多蛋白N端的1／4依次為核心蛋白(c)和包膜蛋白(El和E2)等結(jié)構(gòu)蛋白，其余依次為NS2、NS3、NS4和NS5等非結(jié)構(gòu)蛋白，膜蛋白分布于病毒表面，NS3蛋白具有蛋白酶的功能，NS5蛋白為一依賴于RNA的RNA多聚酶．第32頁/共64頁1.3HCV抗體的特點與臨床意義1抗核心區(qū)抗體抗-C22-3核心區(qū)抗體，核心區(qū)基因保守性強(qiáng)，其抗體出現(xiàn)較早（感染后8-10周），持續(xù)時間長，與HCVRNA高度相關(guān)，其血液有較大的傳染性?？?HCe被膜區(qū)抗體，被膜區(qū)基因（E1，E2/NS1）變異程度高，其抗體可用于血清學(xué)分型，用于感染的流行病學(xué)研究。第33頁/共64頁1.3HCV抗體的特點與臨床意義2抗非結(jié)構(gòu)區(qū)抗體抗-C33C

編碼C33C多肽的基因位于NS3中區(qū)，與HCV的復(fù)制有關(guān)，用于HCV感染檢測，抗-C33C

與抗-C22-3同時或稍早出現(xiàn)，兩者對HCV感染具有互補(bǔ)作用，但不能相互替代?？?C100-3C100-3多肽編碼基因位于NS4區(qū)，從感染后4-32周出現(xiàn)，最長可達(dá)1年以上，對感染早期診斷意義不大，在鑒別急性、慢性感染和判斷上有一定價值。但假陽性比例較高，血清中類風(fēng)濕因子，過氧化物歧化酶、球蛋白、自身抗體等與多肽呈低親和結(jié)合；標(biāo)本放置過長或反復(fù)凍融也可出現(xiàn)假陽性?？?NS5抗-NS5持續(xù)陽性者，ALT多明顯升高，而持續(xù)陰性者，ALT多正?；蜉p度升高，與疾病活動相關(guān)。IgM抗體先于IgG抗體出現(xiàn)，對感染早期診斷及急、慢性感染具有重要意義。HCV感染后標(biāo)志物出現(xiàn)的次序：HCVRNA（2周）→ALT（4周）→抗體-NS5（6周）→抗-C22-3（7周）→抗-C33C

（8周）→抗-C100-3

（9周）第34頁/共64頁1.4丙肝感染后標(biāo)志物的產(chǎn)生第35頁/共64頁第36頁/共64頁2丙肝病毒微生物學(xué)檢查法酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA放射免疫測定法RIA重組免疫印跡實驗（確認(rèn)實驗）血清HCVRNA檢測雙抗體夾心法測HCV病毒抗原第37頁/共64頁2.1丙肝抗體ELISA檢測第一代抗-HCV試劑盒采用的抗原C100-3

是HCV非結(jié)構(gòu)基因(NS3／NS4)和人超氧化物歧化酶基因嵌合后表達(dá)的融合蛋白，靈敏度低，漏檢率較高；第二代抗-HCV試劑盒在第一代基礎(chǔ)上增加了核心區(qū)重組蛋白C22-3和NS3區(qū)重組蛋白-C33C，雖然在靈敏度和特異忡上有很大改善，但仍不能排除由于重組融合蛋白帶來的少數(shù)假陽性和極少數(shù)的漏檢。第三代抗-HCV試劑盒其包被抗原為HCV核心抗原、NS3、NS4和NS5抗原，特異性超過99％，雖然目前缺乏判斷其敏感性的金標(biāo)準(zhǔn)，但對于免疫功能正常的HCVRNA陽性感染者，抗一HCV檢出率也高于99％。第38頁/共64頁2.2丙肝病毒核酸RNA的檢測HCVRNA檢測包括定性和定量兩種，定性PCR的靈敏度高于定量PCR，因此定性PCR主要用于急慢性丙型肝炎診斷，而定量PCR則用于療效監(jiān)測．但該方法在技術(shù)和設(shè)備上要求較高，且費時，檢出率較低，主要原因是：HCV在血液和肝組織中的感染滴度很低，且有一定波動：HCVRNA易被血細(xì)胞中的RNA酶降解，因此如果被檢標(biāo)本保存不當(dāng)(例如反復(fù)凍融)將影響檢測結(jié)果：HCVRNA還受進(jìn)食的影響，易與血中脂質(zhì)及脂蛋白結(jié)合，降低檢出率：另外，RT-PCR的多步驟實驗中任何步驟的問題均易影響其檢出．該方法也容易因污染而出現(xiàn)假陽性。為了使HCVRNA的規(guī)范化檢測：對患者在空腹條件下抽血，及早分離血清和進(jìn)行檢測，避免對標(biāo)本反復(fù)凍融，PCR的整個過程應(yīng)避免RNA酶及DNA酶對標(biāo)本的降解和對模板的污染。第39頁/共64頁2.3丙肝病毒核心抗原的檢測HCV核心抗原的檢出比抗一HCV的檢出約早49d，用雙抗體夾心法定性或定量檢測血清樣品中總的或游離的HCV核心抗原，方法簡單、時間短、對環(huán)境要求低以及假陽性率低的特點。用途：可用于HCV血清學(xué)轉(zhuǎn)換前的早期急性丙型肝炎診斷、抗一HCV陽性感染者的病毒血癥分析以及HCV感染者治療前后病毒血癥追蹤分析等。局限性：由于方法敏感性的限制，HCVRNA水平低于20000kTU／L時不適用。第40頁/共64頁3檢測丙肝時常見問題假陽性比較高HCV基因組的變異較大血清中抗-HCV出現(xiàn)較晚不同廠家的試劑對同一標(biāo)本檢驗結(jié)果存在差異第41頁/共64頁梅毒螺旋體的檢測技術(shù)第42頁/共64頁1梅毒螺旋體的生物學(xué)性狀形態(tài)結(jié)構(gòu)與染色培養(yǎng)特性抵抗力梅毒螺旋體抗體 抗TP抗體 抗心磷脂抗體，稱反應(yīng)素第43頁/共64頁基本概念1.病原性螺旋體（Spirochetes）：是一群細(xì)長而柔軟、波狀或螺旋狀，運動活潑的原核細(xì)胞微生物。主要有鉤端螺旋體，梅毒螺旋體，雅司螺旋體和回歸熱螺旋體等。2.梅毒螺旋體（Treponemapallidum）學(xué)名蒼白密螺旋體，梅毒病原體，對人有致病性的密螺旋體中最重要的一種。第44頁/共64頁1.2TP形態(tài)結(jié)構(gòu)與染色TP直徑0.1-0.2微米，長6-15微米，有8-14年致密而規(guī)則的螺旋，兩端尖直，運動活潑。電鏡下菌體內(nèi)為軸絲，最外層為外膜，其內(nèi)為胞質(zhì)膜，二者之間為鞭毛樣結(jié)構(gòu)。菌體有蛋白質(zhì)、類脂及糖類，外膜蛋白質(zhì)中P47和軸絲P37抗原具有高度免疫原性，在免疫學(xué)診斷和預(yù)防中可能起重要作用。TP用普通染料不易著色；病灶取材直接檢查，可用不染色新鮮標(biāo)本在暗視野顯微鏡下觀察形態(tài)和運動方式。第45頁/共64頁1.3TP培養(yǎng)特性人工體外培養(yǎng)尚未成功。毒力株螺旋體能在家兔部分組織中繁殖，并保持其對人及家兔的致病力，但因其分裂繁殖緩慢，30-33小時才能分裂1次。第46頁/共64頁1.4TP抵抗力

梅毒螺旋體抵抗力極弱，對溫度和干燥特別敏感，離體后干燥1-2小時；血液中4℃放置3天；加熱50℃5分鐘即滅活；對化學(xué)消毒劑亦敏感，對青霉素、四環(huán)素、紅霉素或砷劑敏感。第47頁/共64頁1.5梅毒螺旋體抗體1、抗TP抗體（P15，P17，P47）當(dāng)補(bǔ)體存在時，可將螺旋體殺死或溶解，也對吞噬細(xì)胞發(fā)揮調(diào)理作用。在梅毒潛伏期即產(chǎn)生，一期梅毒時增高，主要是IgM型，二期梅毒時達(dá)到高峰，有IgG和IgM型，三期梅毒略降低，主要是IgG型，但不是保護(hù)性抗體，晚期梅毒或治療后仍保持陽性。2、抗心磷脂抗體，稱反應(yīng)素reagin。同生物組織中的脂質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)素?zé)o保護(hù)作用，僅可用作梅毒血清學(xué)診斷。一期梅毒時增高，二期梅毒時達(dá)到高峰，三期梅毒略降低。第48頁/共64頁1.6TP抗原

主要為外膜蛋白抗原：p47、p45、p17、p15。

p47具有強(qiáng)免疫原性，是梅毒螺旋體的主要優(yōu)勢抗原，與另外兩種密螺旋體有交叉反應(yīng)。

p17也具有梅毒螺旋體抗原特異性，與人類正常血成分無交叉反應(yīng)。第49頁/共64頁2梅毒螺旋體檢查法梅毒螺旋體顯微鏡檢查（直接查病原體）主要梅毒血清學(xué)檢查非密螺旋體抗原試驗快速反應(yīng)素試驗RPR甲苯胺紅不加熱血清試驗TRUST不加熱血清反應(yīng)素玻片試驗USR密螺旋體抗原試驗酶聯(lián)免疫吸附實驗ELISA梅毒螺旋體血凝集試驗TPHA熒光密螺旋體抗體吸收試驗FTA-ABS金標(biāo)快速試紙條法第50頁/共64頁2.1梅毒螺旋體檢測方法的評價RPR：用于普查，適用于一、二期梅毒反應(yīng)素檢測，有假陽性。FTA-ABS適用于診斷各期梅毒，敏感性和特異性都很高，狼瘡病有假陽性反應(yīng)。TPHA：敏感性和FTA-ABS相似，但特異性更高。不用于一期診斷，結(jié)締組織病、麻風(fēng)等可出現(xiàn)假陽性。WB：能檢出其四種特異性抗體，作為確認(rèn)試劑有較強(qiáng)的可靠性；ELISA：靈敏度和特異性好；TRUST：同時存在較高的假陽性及假陰性問題。第51頁/共64頁3檢測梅毒時常見問題生物學(xué)真陽性反應(yīng)密螺旋體屬的螺旋體均具有與梅毒螺旋體完全一樣的類脂質(zhì)抗原，產(chǎn)生的反應(yīng)素的生物學(xué)性狀與梅毒一樣。生物學(xué)假陽性反應(yīng)其他非密螺旋體疾病的病原體和其他致病因素所引起的反應(yīng)素反應(yīng)，如：瘧疾、斑疹傷寒、猩紅熱、乙肝、麻風(fēng)、紅斑狼瘡等。人為假陽性反應(yīng)采集標(biāo)本過程中注射器上有類脂質(zhì)，標(biāo)本運輸保存不當(dāng)，血液游離出脂肪酸，人血白蛋白增高等；試劑中膽固醇含量增高；檢驗人員技術(shù)水平和判斷誤差；反應(yīng)時間過長。第52頁/共64頁艾滋病的檢測技術(shù)第53頁/共64頁1艾滋病毒的生物學(xué)性狀形態(tài)與結(jié)構(gòu)基因結(jié)構(gòu)與功能病毒復(fù)制培養(yǎng)特性抵抗力HIV感染的免疫應(yīng)答第54頁/共64頁HIV

HIV基因組包括了逆轉(zhuǎn)錄病毒所共有的3個基因和6個