過敏原檢測方法分析

過敏原檢測方法分析第1頁/共54頁過敏性疾病與臨床檢測

第2頁/共54頁2023/4/30Nameofpresentation3臨床常見過敏性疾病有過敏性鼻炎、哮喘、蕁麻疹、濕疹、食物過敏及過敏性休克等。近年來，過敏性疾病的發(fā)病率呈上升趨勢，國內(nèi)醫(yī)學(xué)界對這種疾病日益重視，其實(shí)驗(yàn)室診斷也得到充分發(fā)展。第3頁/共54頁過敏性疾病研究的歷史20世紀(jì)人們用動(dòng)物抗血清治療烈性傳染病時(shí)發(fā)現(xiàn)“血清病”1906年奧地利醫(yī)生ClemensvonPirquet發(fā)表“Allersie”(變態(tài)反應(yīng))一文，開拓了變態(tài)反應(yīng)臨床和實(shí)驗(yàn)研究新領(lǐng)域1963年Gell及Coombs根據(jù)變態(tài)反應(yīng)病的機(jī)理和特點(diǎn)，將其分為四型1966年石坂夫婦發(fā)現(xiàn)了速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)中的IgE抗體1967年Johansson從骨髓瘤病人中分離到純化的IgE并進(jìn)行了其分子結(jié)構(gòu)的研究第4頁/共54頁第5頁/共54頁通常過敏性疾病是由IgE介導(dǎo)的I型變態(tài)反應(yīng)所涉及的疾病也有例外，比如一些藥物（如多粘菌素、嗎啡、某些造影劑或阿斯匹林）引起的過敏性休克。IgE第6頁/共54頁Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的特點(diǎn)是反應(yīng)迅速、強(qiáng)烈、消退亦快，通常不遺留組織損傷，也稱為速發(fā)型超敏反應(yīng)有明顯的個(gè)體差異及時(shí)令性。好發(fā)于呼吸、消化、皮膚等系統(tǒng)。特征性病理變化以水腫，分泌物增多，平滑肌痙攣，嗜酸細(xì)胞增多為主第7頁/共54頁過敏性疾病的觸發(fā)因素

----過敏原（變應(yīng)原）第8頁/共54頁過敏性疾病常見的過敏原包括：藥物（如引起過敏性休克的青霉素類、多粘菌素、嗎啡、某些造影劑或阿斯匹林）粉塵螨、真菌（如曲霉屬和青霉屬的霉菌、以及交鏈孢霉和枝孢霉等）花粉（包括蒿屬、豚草、樹、牧草和雜草的花粉）、其他吸入過敏原（如引起哮喘的蠶絲、皮毛、羽毛、屋塵）食物（如引起食物過敏的牛奶、雞蛋、花生、豆類、堅(jiān)果、魚、蝦、肉類、貝類和谷物）化工材料（如造成接觸性皮炎的油漆、甲醛、乳膠、香料和染料等）第9頁/共54頁過敏性疾病的臨床診斷臨床癥狀、病史體檢及臨床試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室檢查第10頁/共54頁父母雙方均有變態(tài)反應(yīng)病者，或父母一方有變態(tài)反應(yīng)者，子代患變態(tài)反應(yīng)的機(jī)率較高父母雙方均無變態(tài)反應(yīng)病者，子代的發(fā)病機(jī)率少，一旦發(fā)病，臨床表現(xiàn)較輕，持續(xù)時(shí)間較短過敏的發(fā)生與后天的環(huán)境關(guān)系同樣非常密切，變態(tài)反應(yīng)的臨床表現(xiàn)并不一定符合遺傳規(guī)律。過敏體質(zhì)是導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)的內(nèi)因第11頁/共54頁過敏進(jìn)程食物過敏和特應(yīng)性皮炎在出生早期發(fā)病率較高，而呼吸道過敏性疾病在兒童期發(fā)病率較高。伴隨著兒童年齡增長，過敏性疾病的表現(xiàn)會(huì)發(fā)生階段性變化，各系統(tǒng)次序出現(xiàn)不同的過敏癥狀，此現(xiàn)象被稱為“過敏進(jìn)程”第12頁/共54頁過敏性疾病的臨床癥狀以一個(gè)典型的順序

出現(xiàn)在兒童期，并持續(xù)數(shù)年的自然進(jìn)程過敏進(jìn)程EugeneGWeinberg,MBChB.Theallergicmarch.CME2010;28(2).第13頁/共54頁P(yáng)rogressionoftheallergicmarchEugeneGWeinberg,MBChB.Theallergicmarch.CME2010;28(2).第14頁/共54頁明確過敏原，阻止過敏進(jìn)程EugeneGWeinberg,MBChB.Theallergicmarch.CME2010;28(2).兒童早期，明確過敏原，進(jìn)而規(guī)避過敏原，可阻止過敏進(jìn)程，改善患兒生活質(zhì)量第15頁/共54頁特應(yīng)性變應(yīng)原及可能誘因的回避是治療的基本原則如何明確過敏性疾病的過敏原？第16頁/共54頁過敏性疾病的診斷詳細(xì)的病史體檢及臨床試驗(yàn)第17頁/共54頁家族過敏史既往過敏史既往發(fā)生過敏時(shí)的臨床表現(xiàn)季節(jié)和室內(nèi)/外變化疑似過敏原種類、接觸頻率、接觸量、接觸時(shí)間生活環(huán)境、工作環(huán)境、精神壓力的影響其它因素詢問病史第18頁/共54頁 體內(nèi)試驗(yàn)貼斑試驗(yàn)（patchtest）點(diǎn)刺試驗(yàn)（pricktest）或挑刺試驗(yàn)（puncturetest）皮內(nèi)試驗(yàn)（intradermaltest或intracutaneoustest）眼結(jié)膜試驗(yàn)（conjunctivatest）鼻粘膜激發(fā)試驗(yàn)（nasalmucosaprovocationtest）或抗原鼻內(nèi)滴入試驗(yàn)（灌輸測試）第19頁/共54頁舌下試驗(yàn)（sublingualtest）G.Pfeiffer數(shù)十年一直用此法進(jìn)行診斷食物激發(fā)試驗(yàn)（foodprovocationtest），亦稱為白細(xì)胞減少指數(shù)試驗(yàn)第20頁/共54頁其他檢查影像學(xué)診斷：包括胸部透視和攝片、支氣管造影、鼻竇X線攝影、胃腸造影、B超、CT、核磁共振等。治療性診斷：某些病例經(jīng)各種檢查仍無法確認(rèn)時(shí)，可使用對變態(tài)反應(yīng)有良效的藥物（如腎上腺素、2受體興奮劑、抗組織胺類藥物及腎上腺皮質(zhì)激素類藥物等），進(jìn)行試探性治療。第21頁/共54頁特異性IgE測定有時(shí)也稱為“過敏原測定”特異性IgE的檢測主要是酶免疫分析根據(jù)標(biāo)記酶指示底物的不同分為：

熒光酶免疫分析（如ImmunoCAP）、

發(fā)光酶免疫分析（如Immulite和Access）

酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA）。第22頁/共54頁體內(nèi)試驗(yàn)和體外試驗(yàn)的比較第23頁/共54頁皮膚實(shí)驗(yàn)結(jié)果解釋如果病史提示敏感性還有皮膚實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性然后與抗原相關(guān)的可能性極強(qiáng)如果病史不提示敏感性皮膚實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性在高強(qiáng)度的自然暴露中觀察患者病史提示敏感性皮膚實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性1回顧患者用藥情況，抗組胺、抑郁藥

2回顧其他引起假陰性實(shí)驗(yàn)原因如：劣質(zhì)的實(shí)驗(yàn)材料和技術(shù)不恰當(dāng)

3在高強(qiáng)度自然暴露中觀察患者4進(jìn)行激發(fā)試驗(yàn)（很少做）

帕特深變態(tài)反應(yīng)性疾病人民衛(wèi)生出版社2004第24頁/共54頁sIgE體外檢測和皮試的比較不受患者皮膚條件的影響不受患者藥物治療的影響不受操作者技術(shù)的影響符合WHO標(biāo)準(zhǔn)第25頁/共54頁ImmunoCAP

全自動(dòng)

、體外過敏原特異性IgE檢測、全定量血液測定檢測原理：

熒光酶聯(lián)免疫分析法

FEIA熒光酶底物比顯色底物的靈敏度高10-1000倍。第26頁/共54頁ImmunoCAP固相載體抗原吸附能力是紙片法的3倍；是試管法的150倍。第27頁/共54頁ImmunoCAPTM全面的檢測項(xiàng)目總IgE

特異性IgE嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白ECP（評估氣道炎癥狀態(tài)）IgG&IgG4（評價(jià)特異性免疫治療的反應(yīng)）類胰蛋白酶（嚴(yán)重過敏反應(yīng)的標(biāo)記物）自身免疫性疾病診斷

過篩試驗(yàn)單價(jià)S-IgE檢測多價(jià)S-IgE檢測組分過敏原診斷第28頁/共54頁總IgE（TotalIgE)IgE是介導(dǎo)I型變態(tài)反應(yīng)的抗體，血清IgE水平升高提示機(jī)體可能患有變態(tài)反應(yīng)性疾病。但是，總IgE不一定是過敏，過敏者總IgE也不一定高，過敏與否主要取決于sIgE的存在。影響總IgE的因素遺傳、年齡、性別、種族吸煙、寄生蟲感染測定患者血清中總IgE抗體的含量第29頁/共54頁特異性IgE（SpecificIgE,SIgE）如果對某種過敏原過敏，血清中便存在針對該過敏原的S-IgE。

單價(jià)S-IgE檢測多價(jià)S-IgE檢測過篩試驗(yàn)

常見的單價(jià)S-IgEd1戶塵螨

d2粉塵螨

i6蟑螂

f1雞蛋白

f2牛奶常見的多價(jià)S-IgE

mx1（m1,m2,m3,m6）

mx2（m1,m2,m3,m5,m6,m8）hx2（h2,d1,d2,i6）

過篩試驗(yàn)吸入性過敏原過篩試驗(yàn)（Phadiatop）食物過敏原過篩試驗(yàn)（Fx5）兒童吸入性過敏原過篩試驗(yàn)（PhadiatopInfant）第30頁/共54頁草類花粉：

w6（艾蒿）w22（葎草）樹木花粉：t11（梧桐）螨類：d1（屋塵螨）d2（粉塵螨）微生物：m6（交鏈孢霉）動(dòng)物皮毛：e1（貓毛皮屑）食物：f1（蛋白）f2（牛奶）屋塵：h1昆蟲/毒液：i6（蟑螂）藥物：c1（青霉素G）職業(yè)性過敏原等：k82（乳膠）超過600種的過敏原和80種以上的組分過敏原第31頁/共54頁特異性IgE（sIgE）結(jié)果判斷檢測范圍：0.35－100kUA/l高靈敏度：89%

高特異性：91%

定量結(jié)果分級標(biāo)準(zhǔn)及臨床意義：0級<0.35未檢出變應(yīng)原，無過敏1級 ≥0.35可疑或輕度過敏2級 ≥0.7 中度過敏3級 ≥3.5重度過敏4級 ≥17.5特重度過敏5級 ≥50 特重度過敏6級 >100 特別嚴(yán)重之過敏第32頁/共54頁全定量檢測特異性IgE——ImmunoCAPL.Soderstrom,G.Lilja,M.P.Borres,andC.Nilsson。Allergy2011;66:1058–1064.第33頁/共54頁過篩試驗(yàn)

吸入性過敏原過篩試驗(yàn)（Phadiatop）食物過敏原過篩試驗(yàn)（Fx5）兒童吸入性過敏原過篩試驗(yàn)（PhadiatopInfant）第34頁/共54頁P(yáng)hadiatop?吸入性過敏原過篩試驗(yàn)

含有95%常見吸入性過敏原篩查是否吸入性變應(yīng)原過敏臨床準(zhǔn)確率>90%21項(xiàng)研究，超過2700個(gè)病例靈敏度 91%

特異度 93%

準(zhǔn)確率 92%Reference:ErikssonNE.Allergy1990;45:285-292CrobachM.J.etal.Allergy1994;49:170-176第35頁/共54頁

包括6種最常見的食物變應(yīng)原 ——雞蛋白、牛奶、小麥、花生、大豆、魚檢測結(jié)果直接、客觀高靈敏度：89％高特異度：96％Fx5食物過敏原過篩試驗(yàn)第36頁/共54頁如何過篩過敏性疾病

推薦的檢測組合TPF：T-IgE+Phadiatop+Fx5第37頁/共54頁過敏原檢測流程臨床病史Phadiatop陽性螨、寵物、真菌系列三個(gè)花粉系列IgE檢測T-IgE+Phadiatop+fx5第38頁/共54頁過敏原檢測流程臨床病史fx5陽性分別測定單價(jià)特異性IgE食譜分析T-IgE+Phadiatop+fx5第39頁/共54頁ImmunoCAPTM系統(tǒng)

——體外過敏原診斷金標(biāo)準(zhǔn)

檢測結(jié)果真實(shí)、可靠，重復(fù)性好；為臨床提供客觀的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)靈敏度高，特異性好；減少漏診、誤診全自動(dòng)化，減少實(shí)驗(yàn)工作量，提高檢測效率檢測結(jié)果全定量，指導(dǎo)臨床脫敏治療和兒童早期診斷完善的檢測項(xiàng)目，600多種過敏原和80多種組分過敏原，充分滿足臨床和科研需要第40頁/共54頁DiagnosisandIdentificationofCausativeAllergensConfirmationofallergyandidentificationofcausativeallergensarecrucialtocorrectlymanageallergicdiseasesPrecisediagnosisallowstheimplementationoftherapiesorientedtotheetiologicfactorsofallergicdiseases,suchasenvironmentalmeasuresandimmunotherapyWAOWhiteBookonAllergy2011-2012:ExecutiveSummary第41頁/共54頁Diagnosisbeginswithadetailedmedicalhistoryandphysicalexamination.Theidentificationofatemporalassociationbetweensymptomsandallergenexposureconstitutesthebasisforfurthertesting第42頁/共54頁ClinicalsuspicionisconfirmedbymeansofinvestigationofIgEantibodiesinvivo(skintests)orinvitro.Skintestsshouldincluderelevantllergensandtheuseofstandardizedallergenextracts.Invitrotestingisespeciallyusefulwhenskintestresultsdonotcorrelatewiththehistoryorcannotbeperformed.第43頁/共54頁Invitrotestscanbeappliedto“probabilityofdisease”predictioninfoodallergy.Thereisaneedforincreasedaccessibilitytoallergydiagnosisandtherapiesandimproveddiagnosticmethodologiesthatcansubstituteinvivoprovocationtestsfordrugandfoodallergy.第44頁/共54頁Theuseofunproventestsincreasestheunnecessarycostsofallergydiagnosis.使用未經(jīng)證實(shí)的測試增加了不必要成本過敏原的診斷第45頁/共54頁IgE與過敏性疾病IgE是血清中含量最少的一類免疫球蛋白，占血清總量的0．001%。致敏階斷，過敏原作用于機(jī)體，機(jī)體產(chǎn)生過敏原特異性IgE；當(dāng)機(jī)體再次接觸到過敏原時(shí)，過敏原特異性IgE抗體與過敏原結(jié)合，并且與肥大細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等結(jié)合，使其釋放組胺等生物活性物質(zhì)，進(jìn)而產(chǎn)生過敏癥狀。第46頁/共54頁所以，特異性IgE介導(dǎo)了過敏反應(yīng)的發(fā)生只有特異性IgE檢測才能認(rèn)為是過敏原的體外診斷IgE檢查具有高度的抗原特異性，如出現(xiàn)陽性反應(yīng)，表示對該物質(zhì)過敏第47頁/共54頁體外過敏原測定方法及檢測系統(tǒng)非IgE檢測生物共振（百康，摩拉）過敏原特異性IgE檢測熒光酶聯(lián)免疫法（ImmunoCAP）液相酶聯(lián)免疫法ELISA（Adaltis）酶聯(lián)免疫印跡法（Allergyscreen）酶聯(lián)免疫捕獲法（Dr.Fooke）第48頁/共54頁非IgE檢測生物共振

－－－百康

生物共振技術(shù)，通過紅外掃描檢測過敏原不是直接檢測體內(nèi)的IgE抗體檢測結(jié)果為定性據(jù)稱可檢測上百種過敏原檢測結(jié)果未通過WHO標(biāo)準(zhǔn)案不受學(xué)術(shù)支持的過敏原檢測產(chǎn)品第49頁/共54頁四種檢測儀器性能比較

---檢測原理與參數(shù)ImmunoCAPAdaltis敏篩Dr.Fooke備注檢測原理熒光酶聯(lián)免疫法液相酶聯(lián)免疫法酶聯(lián)免疫印跡法酶聯(lián)免疫捕獲法？檢測底物熒光底物顯色底物顯色底物顯色底物熒光法的靈敏度是顯色法的10～1000倍抗原載體ImmunoCAP專利載體微孔板（試管法）硝酸纖維素膜（紙片法）微孔板（試管