第三十六章微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

第三十六章微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制第1頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三質(zhì)量評(píng)價(jià)。室內(nèi)質(zhì)量控制是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制訂并實(shí)施的，是保證每日工作質(zhì)量的核心和基礎(chǔ)。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)則是由實(shí)驗(yàn)室外部的組織或機(jī)構(gòu)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

第一節(jié)室內(nèi)質(zhì)量控制

室內(nèi)質(zhì)量控制—為保證臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性而在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)采取的一系列行之有效的措施。室內(nèi)質(zhì)量控制是微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制的核心，也是做好室間質(zhì)評(píng)的基礎(chǔ)和前提。主要包括以下幾個(gè)方面的內(nèi)容。一、對(duì)微生物檢驗(yàn)人員的要求、培訓(xùn)與組織管理第2頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（一）要求1.微生物實(shí)驗(yàn)室的負(fù)責(zé)人應(yīng)由專(zhuān)業(yè)理論水平較高、操作熟練、經(jīng)驗(yàn)豐富、有管理能力的微生物學(xué)專(zhuān)家擔(dān)任。2.微生物檢驗(yàn)人員除應(yīng)具有豐富的專(zhuān)業(yè)知識(shí)、熟練的操作技能、敏捷的思維判斷能力外，還應(yīng)具有嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度、高度的工作責(zé)任感和無(wú)私的獻(xiàn)身精神。3.微生物檢驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)常閱讀有關(guān)技術(shù)資料，及時(shí)掌握新知識(shí)、新技術(shù)和本專(zhuān)業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀及方向，不斷進(jìn)行專(zhuān)業(yè)技術(shù)的知識(shí)更新。4.微生物檢驗(yàn)人員應(yīng)不斷接受有關(guān)技術(shù)方面的繼續(xù)教育和培訓(xùn)。第3頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三（二）培訓(xùn)1.內(nèi)部培訓(xùn)

1）定期講課

2）考核鑒定能力

3）盲點(diǎn)檢測(cè)2.外部培訓(xùn)：走出去，請(qǐng)進(jìn)來(lái)兩種形式。二、編寫(xiě)微生物檢驗(yàn)操作手冊(cè)和卡片實(shí)驗(yàn)室內(nèi)必須具有一本根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室條件而編寫(xiě)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序手冊(cè)，間隔一段時(shí)間進(jìn)行修訂，刪減過(guò)時(shí)需淘汰的內(nèi)容，補(bǔ)充新的技術(shù)方法。并且賦予手冊(cè)近似于法律的地位，使之成為全體工作人員操作時(shí)共同遵守的標(biāo)準(zhǔn)程序，不得隨意更第4頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三改或簡(jiǎn)化。要求：內(nèi)容全面，文字簡(jiǎn)練，方便使用，不斷更新。操作手冊(cè)一般包括以下內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)室管理制度；本室開(kāi)展的檢驗(yàn)項(xiàng)目及最低鑒定要求；標(biāo)本的采集和處理指南；微生物鑒定的簡(jiǎn)易程序；試劑、染色液和培養(yǎng)基的制備方法；藥敏試驗(yàn)的方法和判讀標(biāo)準(zhǔn)；實(shí)驗(yàn)室的安全與防護(hù)；各類(lèi)參考數(shù)據(jù)；室內(nèi)及室間質(zhì)量控制；各類(lèi)細(xì)菌生化反應(yīng)簡(jiǎn)表。三、培養(yǎng)基的質(zhì)量控制目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都使用干粉培養(yǎng)基配置或使用成品培養(yǎng)基。對(duì)來(lái)自著名的微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)公司的成品培養(yǎng)基，質(zhì)量比較穩(wěn)定。只要按要求儲(chǔ)存，在有效期內(nèi)使用可獲得滿(mǎn)意效果。對(duì)自制第5頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制。（一）原材料的挑選:制作培養(yǎng)基的原材料成分復(fù)雜，應(yīng)選用成分穩(wěn)定的試劑，化學(xué)試劑應(yīng)選用分析純制作MH瓊脂的原材料，尚有對(duì)胸腺嘧啶和Ca2+、Mg2+等離子濃度的要求。使用干粉培養(yǎng)基配制時(shí)，應(yīng)對(duì)每一批號(hào)的干粉培養(yǎng)基進(jìn)行登記并進(jìn)行以下的質(zhì)控程序。（二）配制過(guò)程:按照實(shí)驗(yàn)室操作手冊(cè)中,培養(yǎng)基的配制方法、配制步驟和注意事項(xiàng)嚴(yán)格進(jìn)行。作好配制記錄及培養(yǎng)基上的標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基的名稱(chēng)、配制量、配方、配制者、配制日期及有效期。（三）質(zhì)量控制

1.培養(yǎng)基的外觀檢查：首先觀察其顏色和透明有第6頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三無(wú)異常，液體培養(yǎng)基應(yīng)清晰透明，若有混濁與沉淀，說(shuō)明培養(yǎng)基污染或成分析出；固體培養(yǎng)基應(yīng)光滑濕潤(rùn)、色澤均勻、無(wú)干裂，否則不能使用。普通瓊脂平板2~8℃可儲(chǔ)存1~2周，血平板至多儲(chǔ)存1周。培養(yǎng)基與容器邊緣分離則應(yīng)棄去不用。

2.無(wú)菌試驗(yàn)：培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)對(duì)每批培養(yǎng)基滅菌效果進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于分裝后進(jìn)行滅菌的培養(yǎng)基一般應(yīng)隨機(jī)抽取5%的量，置于35℃孵育箱中24h,無(wú)菌生長(zhǎng)為合格；對(duì)于無(wú)菌手續(xù)分裝的培養(yǎng)基則應(yīng)對(duì)全部培養(yǎng)基置于35℃孵育箱中24h，進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)；對(duì)選擇性培養(yǎng)基，應(yīng)取部分培養(yǎng)基加入10~20倍的無(wú)抑制性肉湯，稀釋抑制物質(zhì)，第7頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三置于35℃孵育箱中24h,無(wú)菌生長(zhǎng)為合格。3.培養(yǎng)基的量：在容器中裝入太多或太少的培養(yǎng)基均不合適。一般而言，斜面培養(yǎng)基的長(zhǎng)度不超過(guò)試管的2/3。雙糖鐵瓊脂培養(yǎng)基，高層最少要有1cm。MH瓊脂平板的厚度為4mm，即直徑為90mm的平皿，注入25ml的培養(yǎng)基即可。其它平板厚度一般為3mm，在90mm直徑平皿中注入15~20ml的培養(yǎng)基。4.培養(yǎng)基的pH:配制的培養(yǎng)基pH應(yīng)與規(guī)定的pH相差在±0.2之內(nèi)，應(yīng)在室溫條件下用pH測(cè)定。不宜用試紙法或目視比色法測(cè)定。5.性能試驗(yàn)：應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)基的種類(lèi)不同,分別用已知陽(yáng)性和陰性的標(biāo)準(zhǔn)菌株或參考菌株對(duì)每一批第8頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三新配制或新購(gòu)入的培養(yǎng)基進(jìn)行測(cè)試，符合要求方可使用。用于測(cè)定各種培養(yǎng)基性能的菌種如下：

培養(yǎng)基質(zhì)控菌株判斷標(biāo)準(zhǔn)羊血瓊脂平板金黃色葡萄球菌ATCC25923生長(zhǎng)生長(zhǎng)試驗(yàn)大腸埃希菌ATCC25922生長(zhǎng)溶血反應(yīng)肺炎鏈球菌ATCC19615生長(zhǎng)，α溶血化膿鏈球菌ATCC6305生長(zhǎng)，β溶血桿菌肽敏感化膿鏈球菌ATCC6305>10mm，敏感（紙片法）B群鏈球菌<10mm，耐藥

Optochin敏感肺炎鏈球菌ATCC19615>14mm，敏感（紙片法）涎鏈球菌<15mm，耐藥巧克力平板生長(zhǎng)淋病奈瑟菌，肺炎鏈球菌生長(zhǎng)

SS平板鼠傷寒沙門(mén)菌生長(zhǎng)，菌落中心黑色傷寒沙門(mén)菌，福氏志賀菌生長(zhǎng)，無(wú)色透明菌落大腸埃希菌部分抑制生長(zhǎng)，紅色菌落腸球菌部分抑制生長(zhǎng)需氧血液增菌液肺炎鏈球菌，化膿鏈球菌生長(zhǎng)厭氧血液增菌液脆弱類(lèi)桿菌生長(zhǎng)第9頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三培養(yǎng)基質(zhì)控菌株判斷標(biāo)準(zhǔn)麥康凱平板大腸埃希菌生長(zhǎng)，紅色混濁菌落傷寒沙門(mén)菌生長(zhǎng)，無(wú)色透明菌落中國(guó)藍(lán)瓊脂大腸埃希菌生長(zhǎng)，藍(lán)色菌落傷寒沙門(mén)菌生長(zhǎng)，無(wú)色菌落營(yíng)養(yǎng)瓊脂金黃色葡萄球菌大量生長(zhǎng)福氏志賀菌大量生長(zhǎng)厭氧血平板脆弱擬桿菌生長(zhǎng)產(chǎn)氣莢膜梭菌生長(zhǎng)，β溶血彎曲菌瓊脂空腸彎曲菌生長(zhǎng)大腸埃希菌部分抑制TCBS平板霍亂弧菌生長(zhǎng)，黃色菌落副溶血弧菌生長(zhǎng)，藍(lán)綠色菌落沙保弱瓊脂白色念珠菌生長(zhǎng)大腸埃希菌部分或完全抑制堿性蛋白胨水霍亂弧菌大量生長(zhǎng)大腸埃希菌抑制生長(zhǎng)第10頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三各種鑒別培養(yǎng)基需每批及每月測(cè)試一次各種鑒別培養(yǎng)基的測(cè)試菌種培養(yǎng)基陽(yáng)性對(duì)照菌陰性對(duì)照菌賴(lài)氨酸脫羧酶遲緩愛(ài)德華菌費(fèi)氏枸櫞酸桿菌鳥(niǎo)氨酸脫羧酶產(chǎn)氣腸桿菌費(fèi)氏枸櫞酸桿菌精氨酸雙水解酶陰溝腸桿菌普通變形桿菌蛋白胨水（靛基質(zhì)）大腸埃希菌陰溝腸桿菌葡萄糖磷酸鹽蛋白胨水MR大腸埃希菌陰溝腸桿菌V-P陰溝腸桿菌大腸埃希菌枸櫞酸鹽（西蒙氏）產(chǎn)氣腸桿菌遲緩愛(ài)德華菌苯丙氨酸脫氨酶雷極普羅威登菌費(fèi)氏枸櫞酸桿菌O-F試驗(yàn)管（葡萄糖）銅綠假單胞菌（氧化型）洛非不動(dòng)桿菌（不利用）大腸埃希菌（發(fā)酵型）硝酸鹽還原大腸埃希菌洛非不動(dòng)桿菌膽汁-七葉苷糞腸球菌化膿鏈球菌脫氧核糖核酸瓊脂粘質(zhì)沙雷菌表皮葡萄球菌氰化鉀肉湯產(chǎn)氣腸桿菌遲緩愛(ài)德華菌第11頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三培養(yǎng)基陽(yáng)性對(duì)照菌陰性對(duì)照菌丙二酸鹽產(chǎn)氣腸桿菌遲緩愛(ài)德華菌尿素瓊脂雷極變形桿菌（快）大腸埃希菌肺炎克雷伯菌（慢）半固體動(dòng)力試驗(yàn)大腸埃希菌肺炎克雷伯菌

用于測(cè)試分離培養(yǎng)基的菌株，原則上應(yīng)使用預(yù)期最難生長(zhǎng)的細(xì)菌菌種，并且應(yīng)少量接種。如需觀察多種性能，可使用多種菌株來(lái)完成。如：羊血瓊脂平板，用已型溶血性鏈球菌觀察透明溶血情況。用翠綠鏈球菌觀察草綠色溶血情況。選擇性分離培養(yǎng)基，應(yīng)能使目的菌生長(zhǎng)，而其它菌受抑制不生長(zhǎng)。選擇性增菌培養(yǎng)基可使用一定比例的目的菌與其它菌的混合菌液接種，觀察目的菌是否增殖，而其它菌生長(zhǎng)受到抑制。四、試劑、抗血清和染色液的質(zhì)量控制第12頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三1.試劑及染色液：用于測(cè)定細(xì)菌各種生物學(xué)特性的試劑及染色液，必須注明配制或購(gòu)入日期并注意有效期及儲(chǔ)存條件。由于各種試劑及染色液的穩(wěn)定性不一致，測(cè)試時(shí)應(yīng)同時(shí)進(jìn)行陽(yáng)性和陰性對(duì)照試驗(yàn)。各種染色液的監(jiān)控菌株染色液陽(yáng)性對(duì)照菌陰性對(duì)照菌監(jiān)控頻度革蘭染色液金黃色葡萄球菌大腸埃希菌每天萋-納抗酸染色液結(jié)核分支桿菌每次異染顆粒染色液白喉棒狀桿菌每次莢膜染色液肺炎克雷伯菌每批鞭毛染色液普通變形桿菌福氏志賀菌每次第13頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三各種試劑的監(jiān)控菌種試劑陽(yáng)性對(duì)照菌陰性對(duì)照菌監(jiān)控頻度新鮮血漿（凝固酶）金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌每天3%過(guò)氧化氫金黃色葡萄球菌A群化膿鏈球菌每天新生霉素紙片金黃色葡萄球菌腐生葡萄球菌每批“Ⅹ、Ⅴ”因子試劑條流感嗜血桿菌嗜沫嗜血桿菌每批，以后每周氧化酶試劑銅綠假單胞菌大腸埃希菌每批，以后每次靛基質(zhì)試劑大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌每批，以后每天甲基紅試劑大腸埃希菌產(chǎn)氣腸桿菌每批，以后每周V-P試劑產(chǎn)氣腸桿菌大腸埃希菌每批，以后每周硝酸鹽還原試劑大腸埃希菌醋酸鈣不動(dòng)桿菌每批，以后每周苯丙氨酸脫氨酶試劑奇異變形桿菌大腸埃希菌每批，以后每周馬尿酸鈉水解試劑B群鏈球菌A群鏈球菌每批，以后每次10%去氧膽酸鈉肺炎鏈球菌涎鏈球菌每批，以后每周第14頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2.抗血清的質(zhì)量控制:抗血清的來(lái)源必須可靠,并根據(jù)使用說(shuō)明使用與保存,并在有效期內(nèi)使用。如使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)任何混濁或顏色改變，應(yīng)棄去不用。第一次使用需用標(biāo)準(zhǔn)菌株監(jiān)控，以后每月進(jìn)行一次測(cè)定。常用的抗血清和監(jiān)控菌株抗血清監(jiān)控菌株抗血清監(jiān)控菌株

肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌D群宋內(nèi)志賀菌鏈球菌A群化膿鏈球菌沙門(mén)菌AFO多價(jià)沙門(mén)菌屬、種

B群無(wú)乳鏈球菌A群：O2；a甲型副傷寒沙門(mén)菌

C群似馬鏈球菌B群：O4；b；1，2乙型副傷寒沙門(mén)菌

D群糞鏈球菌O4；i；1，2鼠傷寒沙門(mén)菌致病性大腸C1群：O6,7；K；1,2湯卜遜沙門(mén)菌埃希菌多價(jià)Ⅰ大腸埃希菌O26:B6O6,7;c;1,5;vi丙型副傷寒沙門(mén)菌多價(jià)Ⅱ大腸埃希菌O86:B7C2群：O6，8;d;1,2弗吉尼亞沙門(mén)菌多價(jià)Ⅲ大腸埃希菌O18:B21D1群：O9；d；vi傷寒沙門(mén)菌志賀菌屬A群痢疾志賀菌O9；gm腸炎沙門(mén)菌

B群福氏志賀菌E群：O3,15;eh;1,6鈕因頓沙門(mén)菌

C群鮑氏志賀菌F群：O11;i；1，2阿伯丁沙門(mén)菌

第15頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三五、抗生素與抗生素紙片的質(zhì)量控制在微生物實(shí)驗(yàn)室有許多用于診斷的抗生素紙片，貯存不當(dāng)易失效，應(yīng)貯存于-20℃條件中。效期為一年，日常使用的抗生素紙片可貯存于4℃冰箱中，效期為一周。臨床上常用的體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)有紙片擴(kuò)散法和稀釋法，這兩種方法操作繁瑣，影響因素多。因此抗菌藥物敏感試驗(yàn)的質(zhì)量控制顯得尤為重要。1.紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的質(zhì)量控制

1）培養(yǎng)基:應(yīng)使用合格的MH瓊脂,每購(gòu)進(jìn)一批新的MH

瓊脂要使用標(biāo)準(zhǔn)菌株、已知在控的藥敏紙片,用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行測(cè)試,符合要求才可使用。培養(yǎng)基的制作應(yīng)按照操作規(guī)程執(zhí)行，各平板厚第16頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三度應(yīng)為一致的4mm（相當(dāng)于在直徑為150mm的平皿中傾倒60~70ml,直徑為100mm的平皿中傾倒25~30ml培養(yǎng)基)，無(wú)菌試驗(yàn)合格。普通貯存條件下（2~8℃）可使用7天。使用前將平板置于35℃孵育箱中30min，使培養(yǎng)基表面過(guò)多的殘留水分蒸去。保存過(guò)久，脫水的平板不應(yīng)使用。室溫下的MH瓊脂的pH應(yīng)為7.2~7.4，pH值過(guò)低，可降低氨基糖苷類(lèi)和大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素的抗菌活性，增強(qiáng)青霉素類(lèi)抗生素的抗菌活性，使試驗(yàn)結(jié)果可信度降低。

MH培養(yǎng)基中胸腺嘧啶核苷和胸腺嘧啶含量盡可能低，以防止過(guò)量的胸腺嘧啶核苷和胸腺嘧啶抵消磺胺類(lèi)和甲氧芐胺嘧啶的抗菌效應(yīng)，抑菌環(huán)第17頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三縮小甚至消失，導(dǎo)致假性耐藥報(bào)告?？捎没前芳谆悋f唑/甲氧芐胺嘧啶紙片對(duì)糞腸球菌ATCC29212或ATCC33186在MH瓊脂平板上進(jìn)行測(cè)試，如有清晰的抑菌環(huán),直徑≥20mm，則為胸腺嘧啶核苷和胸腺嘧啶含量合格。對(duì)于在MH瓊脂平板上不能生長(zhǎng)的菌株應(yīng)使用改良的培養(yǎng)基,如嗜血桿菌屬用HTM培養(yǎng)基,肺炎鏈球菌和其他鏈球菌應(yīng)用加有5%羊血的MH瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

2）菌懸液的濃度標(biāo)準(zhǔn)：用于紙片擴(kuò)散法的菌懸液濃度為1.5×108CFU/ml,相當(dāng)于麥?zhǔn)蠞岫裙?.5管濁度。

3）含藥抗生素紙片：紙片的含藥量高低是影響第18頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三抑菌環(huán)大小的主要因素，紙片的直徑、厚度、吸水性、紙片本身的酸堿度等與紙片含藥量均有密切關(guān)系。以冷凍干燥法制備的質(zhì)量最好，每張紙片的含藥量一致。藥敏紙片含藥量檢測(cè)：取同一批號(hào)的藥敏紙片7片，按Kirby-Bauer法用適宜的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，分別測(cè)定其抑菌環(huán)直徑，然后確定是否合乎要求。合格的紙片應(yīng)該是：各個(gè)紙片抑菌環(huán)大小均在規(guī)定范圍內(nèi)；各紙片的抑菌環(huán)直徑與平均直徑之差不得超過(guò)1mm。第19頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三含藥紙片應(yīng)冷凍保存,從藥物制造之日起在-20℃最多可保存一年,少量正在使用的紙片可在2~8℃保存一周，某些不穩(wěn)定的抗生素如亞胺培南、頭孢克洛、棒酸復(fù)合制劑等應(yīng)冷凍保存至使用前。以盡量保持藥物的穩(wěn)定，保存過(guò)程中應(yīng)保持干燥?？股丶埰褂们皯?yīng)置室溫平衡1~2h，以防止紙片表面產(chǎn)生冷凝水，用后及時(shí)加蓋冷藏或冷凍保存，新購(gòu)入的紙片每批要用標(biāo)準(zhǔn)菌株及在控第20頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

培養(yǎng)基用標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行測(cè)定，符合要求方可使用。

4）實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果測(cè)量：配制好的菌懸液應(yīng)在15min內(nèi)接種至MH平板，接種后的平板應(yīng)在室溫平放3~5min，使平板表面多余水分被吸收，然后將抗生素紙片貼于平板，在150mm直徑平板上最多不能多于12張，100mm直徑平板上不能超過(guò)5張，以保證各紙片之間的中心距離不少于24mm，紙片與平板邊緣的距離不少于15mm。紙片一旦接觸瓊脂表面，則不能再移動(dòng)位置。貼好紙片的平板應(yīng)在15min內(nèi)翻轉(zhuǎn),置于35℃孵育箱中18~24h,在孵育箱中平板最多兩只疊放在一起，以保證受熱均勻。結(jié)果的測(cè)量應(yīng)使用帶表卡尺或精確度達(dá)1/10mm的其它量具。第21頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

5）質(zhì)控菌株：用于紙片擴(kuò)散法的質(zhì)控菌株有：金黃色葡萄球菌ATCC25923；大腸埃希菌ATCC25922、大腸埃希菌ATCC35218（用于β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合制劑)；銅綠假單胞菌ATCC27853；糞腸球菌ATCC29212;流感嗜血桿菌ATCC49247(用于HTM培養(yǎng)基)、49766；淋病奈瑟菌ATCC49226（用于GC瓊脂)；肺炎鏈球菌ATCC49619(用于5%羊血MH瓊脂）。

6）抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍：每一種抗生素紙片對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株結(jié)果應(yīng)符合規(guī)定范圍，這些范圍有

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%的可信區(qū)間，亦即連續(xù)20個(gè)試驗(yàn)結(jié)果只能有一個(gè)超出范圍，否則須尋找原因加以糾正。7）質(zhì)控測(cè)定次數(shù):每批新進(jìn)的MH瓊脂和抗生素第22頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三紙片必須用標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控菌株進(jìn)行檢測(cè)，繼而每天與常規(guī)標(biāo)本一起測(cè)定以監(jiān)控整個(gè)操作過(guò)程，只有符合以下條件時(shí)才可減少測(cè)定次數(shù)：①與常規(guī)標(biāo)本一起連續(xù)測(cè)定30日；②每種藥物與相應(yīng)的每種細(xì)菌的30個(gè)抑菌環(huán)直徑超出規(guī)定范圍的結(jié)果少于3個(gè)。達(dá)到以上要求后，可執(zhí)行每周一次檢測(cè)。如發(fā)現(xiàn)有一個(gè)不符合的結(jié)果，應(yīng)立即尋找原因，加以糾正后重新測(cè)定；如果不能發(fā)現(xiàn)原因，則須立即恢復(fù)每日檢測(cè)，直至問(wèn)題解決。

8）紙片擴(kuò)散法常見(jiàn)的錯(cuò)誤原因:偶然一次的質(zhì)控結(jié)果錯(cuò)誤，可視為統(tǒng)計(jì)學(xué)上的隨即變異。結(jié)果失控常見(jiàn)原因有：①質(zhì)控結(jié)果記錄錯(cuò)誤；②量取第23頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三抑菌環(huán)直徑時(shí)讀數(shù)錯(cuò)誤；③標(biāo)準(zhǔn)菌株被污染或其他改變；④接種的菌懸液過(guò)濃或過(guò)淡；⑤0.5管麥?zhǔn)蠞岫裙芪磽u勻或過(guò)期失效；⑥孵育箱溫度或氣體環(huán)境不正確；⑦M(jìn)H瓊脂質(zhì)量有問(wèn)題:⑧抗生素紙片失效。當(dāng)發(fā)現(xiàn)有結(jié)果失控時(shí)，首先觀察藥敏平板（厚度、紙片間距離),?？砂l(fā)現(xiàn)一些問(wèn)題。前4條原因經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)后一般都能解決。如果重復(fù)實(shí)驗(yàn)后仍為失控，，則必須恢復(fù)每日質(zhì)控，直至找出原因，問(wèn)題解決為止。2.稀釋法藥物敏感試驗(yàn)的質(zhì)量控制

1）培養(yǎng)基:應(yīng)使用MH肉湯，pH調(diào)整為7.2~7.4，并將Ca2+濃度調(diào)節(jié)至

25mg/L,Mg2+濃度調(diào)節(jié)至10~12.5mg/L，可用銅綠假單胞菌ATCC27853株第24頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三對(duì)慶大霉素的MIC測(cè)定值與規(guī)定的預(yù)期值比較來(lái)確定培養(yǎng)基中Ca2+、Mg2+的濃度，如果MIC值偏低，則應(yīng)添加。每一批新配制的培養(yǎng)基均應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行測(cè)定,MIC值應(yīng)符合規(guī)定范圍，否則應(yīng)棄去不用。

2）抗微生物藥物:抗微生物藥物的標(biāo)準(zhǔn)品或參考品應(yīng)來(lái)自國(guó)家權(quán)威鑒定機(jī)構(gòu)，如中國(guó)生物制品鑒定所，也可應(yīng)用來(lái)自生產(chǎn)廠(chǎng)商提供的標(biāo)明效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)品或參考品。但不能應(yīng)用口服藥、外用藥的制成品做藥物敏感試驗(yàn)。

3）接種量:在液體培養(yǎng)基中不宜大量接種細(xì)菌，因?yàn)闃O少數(shù)的耐藥菌生長(zhǎng)，可造成結(jié)果判斷錯(cuò)誤，可以接受的最終測(cè)試濃度為5×105CFU/ml，微量第25頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三稀釋法為5×104CFU/ml。

4）質(zhì)控菌株:用于稀釋法藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制的理想質(zhì)控菌株的MIC值應(yīng)落在一系列被測(cè)抗微生物藥物濃度的中間濃度附近。金黃色葡萄球菌ATCC25923對(duì)大多數(shù)抗微生物藥物極其敏感，因而不適宜用于稀釋法質(zhì)控。常用于稀釋法質(zhì)控的菌株有：大腸埃希菌ATCC25922、35218；銅綠假單胞菌ATCC27853；金黃色葡萄球菌

ATCC29213、43300；糞腸球菌ATCC29212、51299；流感嗜血桿菌

ATCC49247、49766;淋病奈瑟菌ATCC49226；肺炎鏈球菌ATCC49619。

大腸埃希菌

ATCC35218用于β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合制劑的質(zhì)控;金黃色葡萄球菌ATCC29213、第26頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

43300可用于苯唑西林鹽瓊脂篩選試驗(yàn)的質(zhì)控；糞腸球菌ATCC29212、51299可用于氨基糖苷類(lèi)高水平藥敏和萬(wàn)古霉素耐藥篩選的質(zhì)控。六、儀器的質(zhì)量控制1.高壓滅菌器和干熱滅菌器最好在滅菌器上安裝溫度記錄裝置，以保證整個(gè)滅菌過(guò)程中保持合適的溫度。為了保證滅菌的徹底，可用生物指示劑，如嗜熱脂肪芽胞桿菌（B.Stearothermophilus)ATCC7953、12980

的培養(yǎng)液或菌片（含菌量為5×106CFU/片）來(lái)監(jiān)測(cè)滅菌效果，也可使用化學(xué)指示劑如變色的指示帶來(lái)監(jiān)控。環(huán)氧乙烷滅菌器的質(zhì)控應(yīng)使用枯草芽胞桿菌（B.Subtilis)ATCC9372

為生物指示劑。對(duì)新第27頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三購(gòu)買(mǎi)的滅菌器必須進(jìn)行滅菌性能檢測(cè)，以后定期檢測(cè)，對(duì)大容量的滅菌器還應(yīng)在不同部位放置滅菌指示劑，以全面評(píng)價(jià)滅菌性能。2.一般培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱應(yīng)在每日工作開(kāi)始和結(jié)束時(shí)記錄溫度。如不符合要求，則應(yīng)及時(shí)進(jìn)行調(diào)整。一般在這些儀器上應(yīng)裝置報(bào)警功能，以便及時(shí)提醒。隔水式培養(yǎng)箱和水浴箱需定期加水，冰箱定期除霜。3.二氧化碳培養(yǎng)箱須每天檢查箱內(nèi)的二氧化碳含量，可用二氧化碳測(cè)量?jī)x，也可用血?dú)夥治鰞x測(cè)定。除直接測(cè)定二氧化碳外，可用淋病奈瑟菌或腦膜炎奈瑟菌等二氧化碳依賴(lài)細(xì)菌進(jìn)行生長(zhǎng)試驗(yàn)。第28頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三4.厭氧罐或厭氧箱在罐中或厭氧箱中用美蘭或刃天青作為指示劑，無(wú)氧時(shí)均無(wú)色，也可用諾維梭菌作為生物指示劑進(jìn)行生長(zhǎng)試驗(yàn)。罐中的催化劑鈀顆粒須經(jīng)常置于160℃1.5h重新活化。5.生物安全柜若須更換濾網(wǎng)，須由專(zhuān)門(mén)技術(shù)人員進(jìn)行操作。對(duì)其中安裝的紫外線(xiàn)管必須三個(gè)月檢測(cè)一次消毒性能。6.細(xì)菌培養(yǎng)儀對(duì)每個(gè)批號(hào)的培養(yǎng)瓶須進(jìn)行少量生長(zhǎng)試驗(yàn)。應(yīng)保證在有效期內(nèi)使用。對(duì)儀器的每個(gè)瓶位應(yīng)定期進(jìn)行校正，保證應(yīng)有的靈敏度。第29頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三7.微生物鑒定儀應(yīng)及時(shí)更新系統(tǒng)操作軟件，使之能與微生物學(xué)的發(fā)展同步，能夠識(shí)別最新認(rèn)識(shí)的微生物，定期對(duì)儀器的探測(cè)部位進(jìn)行清潔，使用標(biāo)準(zhǔn)摸板進(jìn)行校正。對(duì)每個(gè)批號(hào)的鑒定卡、鑒定板用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行一次測(cè)試，并核對(duì)生化反應(yīng)和藥敏試驗(yàn)結(jié)果。七、臨床檢驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量控制為了使微生物學(xué)的檢驗(yàn)結(jié)果符合臨床病人的病情，指導(dǎo)臨床用藥，微生物實(shí)驗(yàn)室除了對(duì)儀器、試劑、檢驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行質(zhì)控，對(duì)工作人員進(jìn)行培訓(xùn)以外，還應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)標(biāo)本的采集和運(yùn)送過(guò)程進(jìn)行全面的質(zhì)量控制。1.檢驗(yàn)項(xiàng)目的申請(qǐng)、標(biāo)本的采集和運(yùn)送第30頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

1）檢驗(yàn)項(xiàng)目的申請(qǐng):臨床醫(yī)師應(yīng)準(zhǔn)確把握檢驗(yàn)項(xiàng)目的適用范圍，結(jié)合病情，選擇合理的檢驗(yàn)項(xiàng)目，正確填寫(xiě)申請(qǐng)單。

2）標(biāo)本的采集:①采集時(shí)間：應(yīng)在病程的早期、急性期、典型癥狀出現(xiàn)時(shí)以及抗生素應(yīng)用之前。②根據(jù)目的菌的種類(lèi)采用不同的采集方法,如厭氧菌、需氧菌或真菌以及L型細(xì)菌而采用不同的方法。③根據(jù)標(biāo)本的不同采集方法也有不同：除痰、大便、肛拭子、咽拭子及結(jié)核分枝桿菌的細(xì)菌檢驗(yàn)外,均應(yīng)無(wú)菌操作并盛于無(wú)菌容器內(nèi)。④采集標(biāo)本的量不得過(guò)少,應(yīng)有代表性。⑤標(biāo)本的采集過(guò)程要注意安全防止污染、傳播和自身感染。

3）標(biāo)本的運(yùn)送:最好是床邊接種，必須運(yùn)送時(shí)，第31頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三須根據(jù)標(biāo)本情況和培養(yǎng)目的作保溫、冷藏、厭氧運(yùn)送或?qū)?biāo)本接種于運(yùn)送培養(yǎng)基中送檢。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后應(yīng)核對(duì)申請(qǐng)單與標(biāo)本是否相符，送檢標(biāo)本是否符合要求，如不符應(yīng)注明理由退回。2.直接涂片除血液標(biāo)本外幾乎所有的臨床標(biāo)本在培養(yǎng)前的直接涂片都非常必要，可以提供很多有用的信息。直接涂片的意義在于：

1）能及時(shí)發(fā)現(xiàn)標(biāo)本中存在的微生物,尤其是形態(tài)典型者，可作為初步報(bào)告給臨床醫(yī)師，采取相應(yīng)的治療措施。

2）對(duì)痰液標(biāo)本的直接涂片,可確定標(biāo)本是否合第32頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三格。并發(fā)現(xiàn)病原體。

3）直接涂片的檢查結(jié)果對(duì)選擇適宜的培養(yǎng)基和合適的培養(yǎng)方法具有指導(dǎo)意義，并可協(xié)助病原菌的分離與鑒定。

4）對(duì)尿液標(biāo)本的直接涂片可發(fā)現(xiàn)病原體并進(jìn)行初步計(jì)數(shù)，為直接藥敏試驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。3.分離培養(yǎng)與鑒定

1）分離培養(yǎng)：為有效檢出臨床標(biāo)本中的未知病原菌，對(duì)不同的臨床標(biāo)本，應(yīng)采用多種適合于可疑病原菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件或根據(jù)標(biāo)本直接涂片結(jié)果選擇不同的培養(yǎng)方法，如對(duì)呼吸道標(biāo)本應(yīng)同時(shí)接種羊血瓊脂平板、巧克力血平板、麥康凱平板和沙保弱瓊脂，并將巧克力血平板置于第33頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三5~10%CO2、35℃環(huán)境中培養(yǎng)；糞便標(biāo)本應(yīng)同時(shí)接種SS平板、麥康凱平板或中國(guó)藍(lán)平板;在血液增菌培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)至少在24~48h盲目轉(zhuǎn)種一次，以后有細(xì)菌生長(zhǎng)跡象時(shí)即刻轉(zhuǎn)種，以盡早發(fā)現(xiàn)病原菌。

2）鑒定：應(yīng)按照鑒定程序執(zhí)行，尤其不可省略菌落形態(tài)觀察和涂片染色鏡檢，正確引導(dǎo)下一步鑒定。氧化酶試驗(yàn)不應(yīng)在糖類(lèi)發(fā)酵選擇性平板上進(jìn)行，以免出現(xiàn)假陰性，在血平板上挑取菌落時(shí)，要注意不要碰到下面的血瓊脂，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。在腸道選擇培養(yǎng)基上出現(xiàn)的可疑菌落應(yīng)首先做生化反應(yīng)，生化反應(yīng)符合，血清學(xué)凝集陽(yáng)性者可確認(rèn)報(bào)告，單憑血清學(xué)凝集或直接從腸道選擇培養(yǎng)第34頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三培養(yǎng)基上挑取菌落進(jìn)行血清學(xué)凝集，會(huì)因?yàn)榻徊婵乖拇嬖诨蚩乖膩G失而導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性。每次進(jìn)行血清學(xué)凝集時(shí)，應(yīng)以生理鹽水作對(duì)照。防止粗糙型菌落造成的假凝集。使用自動(dòng)化鑒定儀或編碼方式鑒定的結(jié)果，必須與標(biāo)本的來(lái)源、臨床診斷、原始平板上菌落的形態(tài)與染色結(jié)果進(jìn)行核對(duì)，以防止錯(cuò)誤的報(bào)告發(fā)出。八、室內(nèi)全面質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室人員要對(duì)以上各項(xiàng)質(zhì)量控制進(jìn)行全面實(shí)施，對(duì)工作人員進(jìn)行全面培訓(xùn)，設(shè)立實(shí)驗(yàn)室審核人員，對(duì)標(biāo)本和結(jié)果進(jìn)行核對(duì)，并負(fù)責(zé)在日常標(biāo)本中摻入模擬標(biāo)本，進(jìn)行盲點(diǎn)試驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)誤差，第35頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三及時(shí)找出原因，進(jìn)行改進(jìn)。九、質(zhì)控用標(biāo)準(zhǔn)菌株的來(lái)源與保存方法1.作為標(biāo)準(zhǔn)菌株應(yīng)具備的條件

1）生物學(xué)特征典型。

2）實(shí)驗(yàn)室鑒定結(jié)果重復(fù)性好。

3）形態(tài)穩(wěn)定、不易變異。2.來(lái)源質(zhì)控用標(biāo)準(zhǔn)菌株均來(lái)源于世界上專(zhuān)門(mén)保持菌株權(quán)威機(jī)構(gòu)。這些機(jī)構(gòu)收藏的菌種都有一定的編號(hào)，為國(guó)際所公認(rèn)，其中較為著名的有：美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)菌株收藏中心（ATCCAmerricanType

CultureCollection)；英國(guó)公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)中心的菌種收藏第36頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三中心（NCTCNationalCollectionTypeCulture);以及我國(guó)的衛(wèi)生部藥品生物制品菌種保藏中心。此外,還有一些專(zhuān)門(mén)保存某一種細(xì)菌菌種的機(jī)構(gòu)，如：設(shè)在法國(guó)巴黎的“國(guó)際沙門(mén)氏菌保藏中心”（ISCInternationalSalmonellaCenter)目前我國(guó)使用的多為ATCC的三株標(biāo)準(zhǔn)菌株，即：大腸埃希菌ATCC25922；銅綠假單胞菌ATCC27853；金黃色葡萄球菌ATCC29213。3.菌種保存方法

1）應(yīng)用菌株保存法:應(yīng)用菌株取用方便,適于日常質(zhì)控。常采用固體或半固體培養(yǎng)基4℃冰箱保存。按照細(xì)菌生長(zhǎng)情況作定期移種（1~3個(gè)月移種一次)。此法是保存菌種最簡(jiǎn)單的方法,為防第37頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三止細(xì)菌變異,一般移種6次后即不再使用，應(yīng)重新從儲(chǔ)存菌株中移種備用。對(duì)嬌弱易死或有特殊營(yíng)養(yǎng)要求的細(xì)菌，應(yīng)根據(jù)細(xì)菌的特性和營(yíng)養(yǎng)要求進(jìn)行保存。如：鏈球菌、肺炎鏈球菌應(yīng)接種于血瓊脂斜面上，35℃培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,4℃冰箱保存。鏈球菌15~30d移種一次；肺炎鏈球菌新分離株2~3d移種一次，以后逐漸延長(zhǎng)移種間隔時(shí)間。腦膜炎奈瑟氏菌宜用巧克力血瓊脂斜面，35℃保存，每2~4d移種一次。為了延長(zhǎng)菌種保存時(shí)間，可在培養(yǎng)基管內(nèi)加滅菌液體石蠟1cm厚度，以防止培養(yǎng)基水分揮發(fā)，干燥皺裂。第38頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三

2）真空冷凍干燥法：將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌轉(zhuǎn)種在脫脂牛乳或含有15%甘油的營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，生長(zhǎng)后分裝于凍干管中，每管0.25~0.5ml，使用真空冷凍干燥機(jī)在低溫（-70℃左右)、真空條件下迅速脫水，使凍結(jié)的菌懸液不經(jīng)液相直接升華為蒸汽。蒸汽被收集在冷凝器中，因升華過(guò)程中吸收大量熱，從而排除水分，濃縮成干燥狀態(tài)。最后密封保存。該法可保存數(shù)年。

3）超冰凍法：取一接種環(huán)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌，混懸于含有無(wú)菌脫纖維羊血0.5~1.0ml及數(shù)粒無(wú)菌玻璃珠的小瓶?jī)?nèi)，加蓋密封后放入液氮管或超低溫冰箱中速凍，然后放入-40℃低溫冰箱保存，此時(shí)玻璃珠表面可被菌液覆蓋。需用時(shí)，迅速開(kāi)第39頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三啟小瓶，取出一粒玻璃珠放入合適的液體培養(yǎng)基中，于37℃水浴箱中幾分鐘即融化，細(xì)菌即可復(fù)蘇。剩余不用的玻璃珠迅速放回低溫冰箱中保存。第40頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三第二節(jié)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)一、機(jī)構(gòu)

室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)是由衛(wèi)生部及各級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)或受其委托的權(quán)威實(shí)驗(yàn)室所組織的活動(dòng)。在我國(guó)負(fù)責(zé)臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量評(píng)價(jià)的部門(mén)是各級(jí)臨床檢驗(yàn)中心和參考實(shí)驗(yàn)室，負(fù)責(zé)定期或不定期地通過(guò)各項(xiàng)熟練程度考核和盲點(diǎn)試驗(yàn)檢查各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的工作質(zhì)量和水平，從而對(duì)各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)條件、儀器設(shè)備、人員素質(zhì)等作出評(píng)價(jià)的一種學(xué)術(shù)活動(dòng)。同時(shí)要進(jìn)行總結(jié)和評(píng)估，針對(duì)各薄弱環(huán)節(jié)，舉辦各種培訓(xùn)班。通過(guò)定期或不定期舉辦各種學(xué)習(xí)班，提高各級(jí)技術(shù)人員的技術(shù)水平，了解新的知識(shí)。第41頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三各級(jí)實(shí)驗(yàn)室可同時(shí)接受?chē)?guó)內(nèi)國(guó)際多個(gè)質(zhì)量評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)或參考實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量評(píng)價(jià)。二、室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的一般性檢查項(xiàng)目各級(jí)臨床檢驗(yàn)中心對(duì)各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)性的檢查，包括是否制定各種制度以及執(zhí)行情況。1.培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存方法、滅菌質(zhì)量和有效期。2.室內(nèi)全面質(zhì)量控制的建立，室內(nèi)工作人員操作熟練程度的考核和盲點(diǎn)試驗(yàn)的進(jìn)行情況。3.細(xì)菌檢驗(yàn)的操作手冊(cè)以及操作的規(guī)范性。4.設(shè)備的操作卡的建立，工作人員的操作水平，設(shè)備的使用、保養(yǎng)和維修記錄。第42頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三三、活動(dòng)的名稱(chēng)過(guò)去曾用室間質(zhì)量調(diào)查、室間質(zhì)量比較外部質(zhì)量和室間質(zhì)量控制等名稱(chēng)?，F(xiàn)世界衛(wèi)生組織推薦統(tǒng)一使用“室間質(zhì)量評(píng)價(jià)”這一術(shù)語(yǔ)。四、歷史

1966年，美國(guó)開(kāi)展了此項(xiàng)工作，并召開(kāi)了第一次臨床微生物學(xué)質(zhì)量控制會(huì)議。1967年頒布了聯(lián)邦法規(guī)，即《臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)條例》，此后，由CDC認(rèn)可,相繼建立了臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。質(zhì)量評(píng)價(jià)管理機(jī)構(gòu)為CDC、美國(guó)病理學(xué)家學(xué)院和各州的衛(wèi)生行政部門(mén)。

70年代，加拿大、澳大利亞、英國(guó)等相繼開(kāi)展了這項(xiàng)工作。英國(guó)的微生物學(xué)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)開(kāi)始第43頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三于1971年,由英國(guó)公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)組織。1974年正式建立了微生物質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室，由其中央公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室領(lǐng)導(dǎo)。世界衛(wèi)生組織為促進(jìn)發(fā)展中國(guó)家的此項(xiàng)工作，也于80年代初組織一些國(guó)家進(jìn)行此項(xiàng)活動(dòng)。參考實(shí)驗(yàn)室設(shè)在比利時(shí)。我國(guó)1982年有8個(gè)實(shí)驗(yàn)室參加，1983年增加到23個(gè)實(shí)驗(yàn)室。國(guó)內(nèi)于1985年由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心正式組織了全國(guó)性的微生物學(xué)室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)。各省、市、自治區(qū)于1983年相繼開(kāi)展了此項(xiàng)工作。河南省于1989年正式開(kāi)展了此項(xiàng)工作。五、活動(dòng)目的通過(guò)室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)可對(duì)各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)狀第44頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三況、操作方法、儀器性能及個(gè)人操作水平等作出評(píng)價(jià)。當(dāng)然這種評(píng)價(jià)是回顧性的，因?yàn)樗豢赡軐?duì)已發(fā)出的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制,它的主要目的是對(duì)各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室自己不能發(fā)現(xiàn)的誤差進(jìn)行評(píng)價(jià)而不是控制。六、臨床微生物學(xué)室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)的方法1.定期發(fā)放質(zhì)控物此種方法一般每年進(jìn)行三到四次，每次發(fā)放三到五株各實(shí)驗(yàn)室未知的菌株。每株菌株事先編號(hào)，交由參評(píng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)。其具體步驟如下：發(fā)放菌株——實(shí)驗(yàn)室鑒定、匯報(bào)結(jié)果

——統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)、反饋結(jié)果——總結(jié)分析、查找原因、得到提高。第45頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三這種質(zhì)評(píng)方法是由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)發(fā)放模擬標(biāo)本或菌種，接受實(shí)驗(yàn)室知道菌株的來(lái)源、檢驗(yàn)的內(nèi)容和時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室完成鑒定后在規(guī)定時(shí)間內(nèi)將結(jié)果反饋至檢驗(yàn)中心或參考實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行評(píng)價(jià)。此方法容易組織，費(fèi)用低，能節(jié)省人力物力。是其優(yōu)點(diǎn)。但這種方法有很大的缺陷，受試實(shí)驗(yàn)室知道那份標(biāo)本是質(zhì)控標(biāo)本，會(huì)給予特別的重視，采用超過(guò)常規(guī)操作標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行鑒定，使結(jié)果不能準(zhǔn)確反映實(shí)驗(yàn)室的真實(shí)水平；另一方面，有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室為取得好成績(jī)，將質(zhì)控與日常工作割裂開(kāi)來(lái)，對(duì)質(zhì)控菌特殊對(duì)待、反復(fù)比較、互通信息，失去了質(zhì)評(píng)工作的真正意義。第46頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三2.盲點(diǎn)檢測(cè)為了準(zhǔn)確反映受試實(shí)驗(yàn)室日常處理臨床標(biāo)本的實(shí)際水平及能力，較好的方法是進(jìn)行未知標(biāo)本的盲點(diǎn)質(zhì)量控制（qualitycontrolblindunknown)。具體操作是將質(zhì)控物制成模擬標(biāo)本，在受試實(shí)驗(yàn)室不知情的情況下由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)混入臨床普通標(biāo)本中，送入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)鑒定。實(shí)驗(yàn)室主管及實(shí)際操作者不知道那一個(gè)標(biāo)本是來(lái)自質(zhì)控機(jī)構(gòu)，試驗(yàn)結(jié)果由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)收回，進(jìn)行評(píng)價(jià)。這樣做最初實(shí)驗(yàn)室所做的結(jié)果可能與實(shí)際有較大差距，但可使質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)真實(shí)地了解參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的能力與水平。久之，各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)第47頁(yè)，共53頁(yè)，2023年，2月20日，星期三水平將會(huì)有很大的提高，質(zhì)評(píng)結(jié)果將會(huì)真實(shí)地反映出日常工作水平，使質(zhì)評(píng)工作落到實(shí)處。例1：美國(guó)學(xué)者Porres報(bào)告,將25株細(xì)菌直接發(fā)給各參評(píng)實(shí)驗(yàn)室，除了有一種鑒定錯(cuò)誤外，其余均鑒定正確，鑒定正確率為96%；而將混有質(zhì)控菌株的198份標(biāo)本，隨臨床標(biāo)本一起送到參評(píng)實(shí)驗(yàn)室，則分離出細(xì)菌并能正確鑒定者，只有67份標(biāo)本，檢出率僅占33.83%。例2：上海市1986、1987年盲點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果年份細(xì)菌名稱(chēng)模擬標(biāo)本調(diào)查單位數(shù)正確單位86甲型副傷寒沙門(mén)菌糞便10086溫和氣單胞菌糞便10087宋內(nèi)志賀菌糞便10