(SOP)時間分辨熒光免疫分析實驗操作指南

時間分辨熒光免疫分析實驗操作指南以及注意事項第一節(jié) 時間分辨反應過程圖TRFIA的操作要點TRFIA件。下面列出TRFIA各個操作步驟的注意要點，嚴格遵照規(guī)定操作.1、樣本的采取和保存TRFIAEDTA會影響測值。2℃-8℃3-5－20℃保存，避免482、試劑的準備整個實驗過程應盡量在干凈無塵的環(huán)境下進行實驗前應檢查試劑盒的出廠日期以確定試劑盒是否過期，一般自產(chǎn)品檢驗合格出廠日期起有效期為一年。按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。TRFIA試劑盒中的標準品或銪標試劑若是凍干的狀態(tài)，第一次開盒做實驗在加去離10后再開始。板條若未能一次用完，剩余板條用塑料袋（內(nèi)有干燥劑）封口后密封保存。TRFIA受反應溫度的不恒定、操作誤差以及銪標記物的穩(wěn)定性等因素的影響，不同日期的熒光值會有所波動，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。3、加樣TRFIA3所加物加在微孔板的底部，避免加在孔壁上部，不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。免發(fā)生交叉污染。加銪標記和增強液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。連續(xù)加樣器使用時要連續(xù)流暢，并不是加樣越慢越好！加樣時檢測吸嘴是否堵塞，加量是否足夠，注意吸頭之間是有差異的。12不容易出錯。注意按操作步驟計算試劑的量是否充足，特別是使用全自動儀器時！使用干凈的一次性容器配制銪標記物。銪標記物的污染是造成實驗本底增高的首要原因。注意銪標記物的瓶蓋不要與標準品瓶蓋混用；所有接觸過銪標記物的用品使用完畢應該丟棄，不能重復使用。注意銪標記物原液和工作不要污染實驗臺面、加樣槍及試劑盒中的其他組份。4、孵育TRFIA應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為孵育，或者溫育。TRFIATRFIA一定時間的孵育。20-25℃TRFIA程在一個恒溫（25℃）的孵育器內(nèi)完成，熒光值比較恒定。如果使用半自動儀器，孵育過程需要加蓋封片，防止污染和液體的揮發(fā)。TRFIA的幅度太大、頻率太高，微孔板內(nèi)液體可能溢出，影響實驗結果；振蕩的幅度太小、頻率太低，抗原抗體反應不完全，也可能影響實驗的結果。振蕩器上的微孔反應板不宜疊加堆放。疊加可能造成反應板的灑落，同時可能造成反應的不均勻。孵育的溫度和時間應嚴格遵照說明書規(guī)定。不同的檢測項目，待測物質(zhì)的性質(zhì)不同，反應的時間是有差別的。5、洗滌TRFIATRFIA抗原或抗體結合的物質(zhì)，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物TRFIA洗板機在每天使用時應進行校正注液量和殘留量，注意管道是否通暢。洗滌時，確認每孔中的洗滌液都注滿微孔，洗滌后，需將板倒扣在無塵吸水紙上拍干，拍干完畢，將反應板對光檢查，孔底內(nèi)外側均必須無殘留液體。注意微孔反應板的底部不要弄臟或劃傷，不要用手摸微孔反應板的底部。6、加增強液TRFIA100加增強液時，最好能每次吸取增強液都更換槍頭，如果不更換槍頭，加增強液時應懸空加入，千萬不要讓吸頭碰到小孔邊緣或其中試劑而造成增強液污染。增強液的體積數(shù)應嚴格按說明書的要求；加完后增強液不能灑出；一旦灑出，此次實驗無效，需要重做。第二節(jié) 時間分辨試劑盒的組成包括包被反應板：一塊，96孔。銪標記抗抗體：一瓶，凍干品，用時每瓶以1ml去離子水溶解緩沖液參考標準品：共六瓶。增強液：一瓶，50ml。濃縮洗液25：一瓶，50ml，1:25分析緩沖液：一瓶，50ml。說明書：一份。第三節(jié) 時間分辨操作基本步驟(1)標記的二抗→加入增強液→檢測例如：TRFIA(AFP)1.試劑的準備去離子水溶解。50ml1200ml1ml1:75液。將所需數(shù)量的包被反應條置室溫平衡。25la25l所以加樣量要求非常準確。b4從而達到吸樣時進一步減少誤差。c、將樣品加入到反應孔中要注意槍要垂直輕輕靠在孔壁上打入樣品，要保持一個樣品一只槍頭，這樣可以避免加樣污染和孔內(nèi)包被物不受加樣影響。200l1a、剪一張與加樣條大小相似的封口膜平穩(wěn)封上加板條，寫上標記。b、將樣品板放入震蕩器時注意，減速、平穩(wěn)、輕巧、放入震蕩器中。5.用洗滌液沖洗4次。a、洗板時要注意板一定要與洗板機的樣品架吻合。200l,1a、銪標是是實驗最關鍵的第二個步驟，所以配銪標時一定要保證，比例準確、充分混勻、加樣量準確。6a、洗板時要注意板一定要與洗板機的樣品架吻合。8.每孔加增強液200l，振蕩孵育5分鐘。a、增強液是實驗最關鍵的第三個步驟，雖然增強液是一個不要做任何處理就強液槍頭不能碰樣品孔、吸增強液手法要輕柔避免液體反壓力過大回流到加樣器內(nèi)。9.測定。夾心法，濃度與熒光值成正比。雙抗體夾心法標準曲線圖1（LOG LOGB擬合方式）（2）競爭法(檢測抗體)：例如：TRFIA（TT3)驗方法抗原包被、封閉→加入一抗/檢測樣品→加入Eu3+標記的二抗→加入增強液→檢測試劑的準備1ml50ml1200ml1ml1:50液。將所需數(shù)量的包被反應條置室溫平衡。50μl100μl100μl作液。a50l100l一步，所以加樣量要求非常準確。b4而達到吸樣時進一步減少誤差。c、將樣品加入到反應孔中要注意槍要垂直輕輕靠在孔壁上打入樣品，要保持一個樣品一只槍頭，這樣可以避免加樣污染和孔內(nèi)包被物不受加樣影響。1.5a、剪一張與加樣條大小相似的封口膜平穩(wěn)封上加板條，寫上標記。b、將樣品板放入震蕩器時注意，減速、平穩(wěn)、輕巧、放入震蕩器中。5用洗滌液沖洗6次，拍干。a、洗板時要注意板一定要與洗板機的樣品架吻合。200μl，5a、增強液是實驗最關鍵的第二步，雖然增強液是一個不要做任何處理就可以直接使用，但它是一個最形容污染的液體，所以加增強液時一定要注意，加增強液槍頭不能碰樣品孔、吸增強液手法要輕柔避免液體反壓力過大回流到加樣器內(nèi)。測定。競爭抑制法，濃度與熒光值成反比。競爭抑制標準曲線圖1（LOG B/Bmax擬合方式）結果判斷時，首先核對不同廠