獸醫(yī)病理診斷技術(shù)：第四章 病理組織學(xué)檢驗(yàn)材料的采集、固定及送檢

第四章病理組織學(xué)檢驗(yàn)材料的采集、固定及送檢1.病理組織學(xué)檢查材料的選取2.病理組織材料的固定3.病理組織的包裝與運(yùn)送1.病理組織學(xué)檢查材料的取材取材要有全面性和代表性病變的器官或組織，選擇病變顯著或可疑病灶。同一塊組織中應(yīng)包括病灶和正常組織兩個(gè)部分且應(yīng)包括器官的重要結(jié)構(gòu)部分。在較大而重要病變處，可分別在不同部位采取組織多塊，以代表病變各階段的形態(tài)變化。遇病因不明的病例時(shí)，應(yīng)多選取組織。

選取病理材料時(shí),切勿擠壓或損傷組織組織塊在固定前最好不要用水沖取材要新鮮組織大小適中

取材要防擠壓和死后變化組織材料的大小厚度：不超過2～4毫米，才容易迅速固定。面積：不小于1.5-3平方厘米，以便盡可能全面地觀察病變。組織塊大?。和ǔｉL(zhǎng)寬1—1.5厘米，厚度為0.4厘米左右，必要時(shí)組織塊的大小可增大到1.5—3厘米，但厚度最厚不宜迢過0.5厘米，以便容易固定。

特殊組織材料的處理及標(biāo)記防止組織塊在固定時(shí)發(fā)生彎曲、扭轉(zhuǎn)；避免過多的壞死組織、血凝塊及雜物；相類似的組織應(yīng)分別置于不同的瓶中或切成不同的形狀或標(biāo)記；包埋方向的標(biāo)記。冰凍切片取材選取最有代表性的組織；液氮速凍；常規(guī)石蠟切片對(duì)照（“冰對(duì)”,“冰?！保?.病理組織材料的固定固定的意義保持細(xì)胞生活時(shí)的形態(tài)，防治自溶與腐敗；保持細(xì)胞內(nèi)特殊成分與生活狀態(tài)時(shí)相仿（蛋白凝固或沉淀）；不同物質(zhì)固定后折光率不同，燃料親和力不同－－便于區(qū)分不同的組織成分；硬化組織，利于切片。細(xì)胞內(nèi)成分與固定劑的關(guān)系

保存糖原－－Carnoy液免疫組織化學(xué)－－Bouin氏固定液原位雜交－－低濃度多聚甲醛

HBsAg－－不受固定液影響常用的固定方法蒸汽固定法：固定組織中的可溶性物質(zhì)、小而薄的標(biāo)本、涂片、凍干組織。注射、灌注固定法：固定大組織塊、整個(gè)臟器或動(dòng)物體，通過支氣管或動(dòng)脈灌注。細(xì)胞圖片的固定：浸入或滴加法。微波固定法：核膜清晰，染色質(zhì)均勻，組織收縮小。生理鹽水固定，固定溫度應(yīng)在60℃左右，時(shí)間2-3min。

固定液

單純固定液混合固定液?jiǎn)渭児潭ㄒ杭兹╢ormaldehyde）通過使蛋白質(zhì)分子發(fā)生交聯(lián)產(chǎn)生固定作用。長(zhǎng)時(shí)間固定的標(biāo)本，甲醛氧化產(chǎn)生的蟻酸與血紅蛋白結(jié)合產(chǎn)生棕色福爾馬林色素。用Schridde或Verocay法去除。Schridde法：脫蠟后置于75％酒精200ml＋1ml濃氨水溶液中處理30min，流水沖洗后染色。Verocay法：脫蠟后置于80％酒精100ml＋1％氫氧化鉀1ml濃氨水溶液中處理10min，流水沖洗5min/2次，80％酒精浸洗后染色。

在呈弱酸性、非緩沖的甲醛固定液中交聯(lián)反應(yīng)將會(huì)明顯減少，PH值低于5.7就可以形成色素。所以組織的固定首先應(yīng)是4%的中性甲醛磷酸緩沖液。其配方為：

甲醛

1000ml

自來水

9000ml

磷酸二氫鈉

2.7g

磷酸氫二鈉

36.5g

氯化鈉

76gPH值：

7.0-7.2（穩(wěn)定一個(gè)月時(shí)間）中性緩沖福爾馬林固定組織的重要性0.5%--2%甲醛可以使組織有限交聯(lián)狀態(tài)取得平衡，HE染色,免疫組化染色效果良好。

2%福爾馬林,微波方法固定標(biāo)本免疫組化標(biāo)記效果極佳，且此固定方法不需要做抗原修復(fù)。甲醛液導(dǎo)致DNA及RNA發(fā)生修飾，主要取決于固定劑的濃度、PH值和溫度。室溫下福爾馬林固定可導(dǎo)致DNA降解，而4℃條件下則不發(fā)生DNA降解。低濃度甲醛固定液對(duì)免疫組化、原位雜交的影響

重鉻酸鉀：1％－3％的水溶液，固定高爾基體和線粒體?？辔端幔汗潭ㄆつw。醋酸：固定染色體。鋨酸：1％－2％的水溶液，電鏡研究固定劑。丙酮：固定酶。酒精：80％－95％，用于糖原的固定。。。。。。?；旌瞎潭ㄒ?/p>

Bouin氏固定液（可用于組織學(xué)和免疫組織化學(xué)固定）：苦味酸飽和水溶液75ml

甲醛25ml

冰醋酸5ml

脂肪固定效果好，細(xì)胞核著色鮮明，細(xì)胞質(zhì)著色較差。Carnoy氏固定液（使用于染色體、DNA、

RNA、糖原的固定）

純酒精6份

冰醋酸1份

三氯甲烷3份

固定速度快，1－4h，不適于脂肪染色。Altmann液（固定線粒體、脂肪、白細(xì)胞）：

5％重鉻酸鉀水溶液10ml

10％鋨酸水溶液10ml

一般固定時(shí)間為24小時(shí)。

Aoyama液（固定高爾基體、神經(jīng)節(jié)、腺細(xì)胞）：

氯化鎘1g

甲醛15ml

蒸餾水85ml

固定3h后蒸餾水沖洗2次，1.5％硝酸銀5h，蒸餾水沖洗2次，還原液（對(duì)苯二酚1g，甲醛15ml，蒸餾水85ml）5h，流水沖洗。

甲醛－醋酸鈉－升汞液：固定胰腺組織。甲醛－鈣液：固定脂肪組織和組化染色。甲醛－溴化氨液：固定腦組織?？辔端幔蛩嵋海汗潭ㄅ咛?。乙醚－酒精液：細(xì)胞涂片固定。。。。。。。注意事項(xiàng)

病理組織材料應(yīng)及時(shí)固定可按要求進(jìn)行選擇合適的固定液