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文檔簡介
高效液相色譜的法第1頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9一、液相色譜儀器
highperformanceliquidchromatograph第2頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9液相色譜儀(2)第3頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9液相色譜儀(3)第4頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9液相色譜儀(4)第5頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9二、高效液相色譜法的特點
featureofHPLC
特點:高壓、高效、高速高沸點、熱不穩(wěn)定有機及生化試樣的高效分離分析方法。第6頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9三、流程及主要部件
processandmainassemblyofHPLC1.流程第7頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/92.主要部件(1)高壓輸液泵主要部件之一,壓力:150~350×105
Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相(<10μm),液體的流動相高速通過時,將產(chǎn)生很高的壓力,因此高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。應具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性(動畫)第8頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9(2)梯度淋洗裝置外梯度:
利用兩臺高壓輸液泵,將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室,混合后進入色譜柱。內(nèi)梯度:一臺高壓泵,通過比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。第9頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9(3)進樣裝置
流路中為高壓力工作狀態(tài),通常使用耐高壓的六通閥進樣裝置,其結(jié)構(gòu)如圖所示:第10頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9(4)高效分離柱
柱體為直型不銹鋼管,內(nèi)徑1~6mm,柱長5~40cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。第11頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9(5)液相色譜檢測器
a.紫外檢測器應用最廣,對大部分有機化合物有響應。特點:
靈敏度高;線形范圍高;流通池可做的很?。?mm×10mm,容積8μL);
對流動相的流速和溫度變化不敏感;波長可選,易于操作;可用于梯度洗脫。
第12頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9b.光電二極管陣列檢測器紫外檢測器的重要進展;光電二極管陣列檢測器:1024個二極管陣列,各檢測特定波長,計算機快速處理,三維立體譜圖,如圖所示。第13頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9第14頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9光電二極管陣列檢測器第15頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9c.示差折光檢測器
(differentialrefractiveindexdetector)除紫外檢測器之外應用最多的檢測器;可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比;
通用型檢測器(每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù));
靈敏度低、對溫度敏感、不能用于梯度洗脫;偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種;第16頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9示差折光檢測器第17頁,共18頁,2023年,2月20日,星期四2023/5/9d.熒光檢測器
(fluorescencedetector)
高靈敏度、高
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