藥理實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

阿司匹林與可待因的聯(lián)合鎮(zhèn)痛作用研究2021/10/101聯(lián)系效果美國(guó)藥典收載有復(fù)方阿司匹林膠囊，由阿司匹林、可待因和咖啡因組成，其中的阿司匹林和磷酸可待因的比例為25：1，臨床用于各種疼痛和發(fā)燒，療效較好。相同鎮(zhèn)痛效果降低兩藥的使用劑量減輕了兩藥的副作用背景鄭惠玲2021/10/102、2021/10/103是美國(guó)政府對(duì)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢定方法作出的技術(shù)規(guī)定，也是藥品生產(chǎn)、使用、管理、檢驗(yàn)的法律依據(jù)。NF收載了美國(guó)藥典(USP)尚未收入的新藥和新制劑。美國(guó)藥典正文藥品名錄分別按法定藥名字母順序排列，各藥品條目大都列有藥名、結(jié)構(gòu)式、分子式、CAS登記號(hào)、成分和含量說(shuō)明、包裝和貯藏規(guī)格、鑒定方法、干燥失重、熾灼殘?jiān)?、檢測(cè)方法等常規(guī)項(xiàng)目，正文之后還有對(duì)各種藥品進(jìn)行測(cè)試的方法和要求的通用章節(jié)及對(duì)各種藥物的一般要求的通則。美國(guó)藥典2021/10/104★一個(gè)國(guó)家記載藥品標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)格的法典，一般由國(guó)家藥品監(jiān)督管理局主持編纂、頒布實(shí)施，國(guó)際性藥典則由公認(rèn)的國(guó)際組織或有關(guān)國(guó)家協(xié)商編訂。藥典由國(guó)家藥品監(jiān)督管理局主持編纂、頒布實(shí)施，國(guó)際性藥典則由公認(rèn)的國(guó)際組織或有關(guān)國(guó)家協(xié)商訂。制定藥典是從本草學(xué)、藥物學(xué)以及處方集的編著演化而來(lái)。藥典的重要特點(diǎn)是它的法定性和體例的規(guī)范化。特點(diǎn)2021/10/1052021/10/106我們根據(jù)國(guó)外上市品種的處方比例設(shè)計(jì)了復(fù)方阿司匹林片，并通過(guò)幾種動(dòng)物模型對(duì)阿司匹林與磷酸可待困的鎮(zhèn)痛協(xié)同作用進(jìn)行了研究。阿司匹林可待因2021/10/107阿司匹林的鎮(zhèn)痛機(jī)制唐廣博2021/10/108阿司匹林主要是通過(guò)抑制前列腺素及其他能使痛覺(jué)對(duì)機(jī)械性或化學(xué)性刺激敏感的物質(zhì)(如緩激肽、組胺)的合成，屬于外周性鎮(zhèn)痛藥。PG是一族含有一個(gè)五碳環(huán)和兩條側(cè)鏈的二十碳不飽和脂肪酸，多種細(xì)胞都可合成。細(xì)胞中的花生四烯酸以磷脂的形式存在于細(xì)胞膜中。多種刺激因素可激活磷脂酶A，使花生四烯酸從膜磷脂中釋放出來(lái)。

游離的花生四烯酸經(jīng)細(xì)胞微粒體內(nèi)環(huán)氧酶（COX)的催化生成各種PG，其中PGE2主要參與疼痛的調(diào)節(jié)。2021/10/109

COX是前列腺素類(lèi)化合物生物合成的關(guān)鍵酶，在體內(nèi)有兩種同工酶：COX-1與COX-2，COX-1是結(jié)構(gòu)酶，正常生理情況下即存在，主要介導(dǎo)生理性前列腺素類(lèi)物質(zhì)形成。COX-2是誘導(dǎo)酶，在生理狀態(tài)下基本不表達(dá)，在炎性刺激（如發(fā)熱）的刺激下大量生成，介導(dǎo)花生四烯酸轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的PGE2和PGI2，具有很強(qiáng)的制痛作用。2021/10/1010可待因的鎮(zhèn)痛機(jī)制2021/10/1011在體內(nèi)存在有“抗痛系統(tǒng)”，它由腦啡肽神經(jīng)元、腦啡肽及阿片受體共同組成。去極化或刺激腦啡肽神經(jīng)通路可引起腦啡肽釋放，并依賴于鈣離子。在正常情況下約有20%～30%的阿片受體與腦啡肽結(jié)合，起著疼痛感覺(jué)的調(diào)控作用，維持正常痛閾，發(fā)揮生理性止痛機(jī)能，可待因的作用是激動(dòng)阿片受體，激活了腦內(nèi)“抗痛系統(tǒng)”，阻斷痛覺(jué)傳導(dǎo)，產(chǎn)生中樞性鎮(zhèn)痛作用。2021/10/1012脊髓水平上的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)、丘腦、大腦皮層等均參與疼痛的調(diào)節(jié)機(jī)制，其通路復(fù)雜，也需要多種神經(jīng)遞質(zhì)傳遞信號(hào)，在這些部位，阿片受體極為豐富，是可待因參與調(diào)節(jié)疼痛的重要基礎(chǔ)。2021/10/1013熱板致痛原理于帆2021/10/1014痛反應(yīng)閾值：又稱(chēng)痛閾值，是疼痛刺激引起應(yīng)激組織反應(yīng)的最低值，為臨界值的意思。也就是刺激生物體系時(shí)，雖然對(duì)小刺激不反應(yīng)，但當(dāng)超過(guò)某限度時(shí)就會(huì)激烈反應(yīng)的界限值。是機(jī)體對(duì)外力刺激最大的承受能力，痛閾值越高，承受疼痛的能力越強(qiáng)，反之越弱。間接測(cè)量2021/10/1015痛閾值提高是身體的正常調(diào)節(jié)機(jī)制，是合理的、有益的調(diào)節(jié)。痛閾值的提高，并不表示刺激也要相應(yīng)增強(qiáng)。如果刺激量超出了正常范圍，但尚未達(dá)到痛閾值，很有可能會(huì)在感覺(jué)不痛的情況下受傷。不可盲目用藥2021/10/1016將小鼠置于一定溫度的熱板上，熱刺激小鼠足部產(chǎn)生痛反應(yīng)，即舔足反應(yīng)。以小鼠出現(xiàn)舔足的時(shí)間作用為痛反應(yīng)指標(biāo)，判斷藥物鎮(zhèn)痛作用好壞。熱板致痛法控溫精確計(jì)時(shí)精確發(fā)熱均勻2021/10/1017選取生長(zhǎng)狀況相近且適于實(shí)驗(yàn)的小鼠并分組測(cè)定給藥前各組動(dòng)物的痛反應(yīng)閾值分別給予不同劑量的阿司匹林、磷酸可待因和復(fù)方混合物熱板測(cè)痛儀測(cè)其用藥后痛閾值（指標(biāo)）記錄并分析思路2021/10/1018實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、器材和藥品肖健林2021/10/1019實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雌性昆明小鼠（18g—22g)2021/10/1020一般實(shí)驗(yàn)選擇小鼠的原因：1.哺乳動(dòng)物，解剖和生理結(jié)構(gòu)與人較相似2.體型小，飼養(yǎng)管理方便3.生長(zhǎng)期短，成熟早，繁殖力強(qiáng)4.性情溫順，膽小怕驚，對(duì)環(huán)境變化敏感5.種系純，容易作比較，可以排除不同種系的干擾因素2021/10/1021選擇昆明小鼠（Kunmingmice，KM小鼠）的原因：來(lái)源：1926年美國(guó)Rockfeller研究所從瑞士引入白化小鼠培育成Swiss小鼠

。1944年3月17日由湯飛凡教授從印度Hoffkine研究所引進(jìn)Swiss小鼠，飼養(yǎng)在昆明中央防疫處。由于該小鼠起初引入地是昆明，故稱(chēng)之為昆明小鼠。解放后中央防疫處遷回北京天壇，更名為衛(wèi)生部生物制品研究所。1950年小鼠隨之引到北京天壇（檢定所現(xiàn)址），當(dāng)時(shí)保種9對(duì)。1953年10月移至北京東郊，1954年擴(kuò)種，相繼引到其他單位，現(xiàn)已遍布全國(guó)各地。2021/10/1022主要特性：KM小鼠是我國(guó)生產(chǎn)量、使用量最大的遠(yuǎn)交群小鼠。基因庫(kù)大，基因雜合率高，我國(guó)學(xué)者已從KM小鼠遠(yuǎn)交群中先后培育出不少近交系小鼠。經(jīng)50多年的選育，現(xiàn)在KM小鼠腫瘤自發(fā)率極低。不同地飼養(yǎng)的昆明小鼠封閉群的生長(zhǎng)發(fā)育與繁殖性能存在一定差異，但其共同特點(diǎn)是抗病力和適應(yīng)力很強(qiáng)，繁殖率和成活率高。它在我國(guó)生物醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中約為小鼠總用量的70%。2021/10/1023選擇雌性小鼠的一般原因1.雌鼠性情溫順，公鼠易打斗2.雌鼠免疫反應(yīng)強(qiáng)本實(shí)驗(yàn)選擇雌性小鼠的原因是？2021/10/1024實(shí)驗(yàn)器材YLS-6B智能熱板儀、1mL注射器、12號(hào)灌胃針頭三個(gè)關(guān)鍵1.表面的導(dǎo)熱性和光潔度2.溫度控制3.計(jì)時(shí)的準(zhǔn)確程度2021/10/1025藥品配制75mg/mL阿司匹林溶液、3mg/mL磷酸可待因溶液，兩者按1：1體積比配制混合溶液（25:1）、生理鹽水2021/10/1026實(shí)驗(yàn)步驟與分組宋毅涵2021/10/1027實(shí)驗(yàn)步驟與分組1）先測(cè)定給藥前各組動(dòng)物的痛反應(yīng)閾值，選取體重在18g一22g，痛閾值在5～30s的雌性小鼠，隨機(jī)分成15組,并編號(hào)1—20，每組20只小鼠。實(shí)驗(yàn)室溫度控制在20℃～25℃。2021/10/10282）1-5組、5-10組、11-15組、15-20組分別注射0.10mL、0.20mL、0.30mL、0.40mL、0.50mL的阿司匹林溶液（50mg/mL）、磷酸可待因溶液（2mg/mL）、混合溶液（25：1）和生理鹽水3）于給藥后1h分別將各組小鼠置于55℃±0．5℃的熱板測(cè)痛儀的金屬板上，以舔后足作為痛反應(yīng)指標(biāo)，記錄小鼠投入熱板至舔后足的時(shí)間作為痛反廟閨值，以痛反應(yīng)閾值超過(guò)60S作為有效指標(biāo)，計(jì)數(shù)痛反應(yīng)時(shí)間超過(guò)60s的動(dòng)物數(shù)，2021/10/1029小鼠捉拿從籠盒內(nèi)將小鼠尾部捉住并提起，放在籠蓋(或表面粗糙的物體)上，輕輕向后拉鼠尾，在小鼠向前掙脫時(shí)，用左手(熟練者也可用同一只手)拇指和食指抓住兩耳和頸部皮膚，無(wú)名指，小指和手掌心夾住背部皮膚和尾部，并調(diào)整好動(dòng)物在手中的姿勢(shì)。2021/10/1030小鼠灌胃1.

準(zhǔn)備灌胃針頭。一般可以從市場(chǎng)上面買(mǎi)到，實(shí)在沒(méi)有的話，可以用12號(hào)的針頭，剪去針尖，用砂紙將頭端磨平，也可以用。但是買(mǎi)的灌胃針頭的頭端用錫或者適宜的方法處理了針頭的銳口，自己用砂紙不可能將所有的銳口都磨掉，用這樣的針頭灌胃，損失小鼠食道的可能性比較大。2021/10/10312.

抓住小鼠，使其頭、頸和身體呈一直線。抓小鼠的動(dòng)作很簡(jiǎn)單，左手的小指和無(wú)名指抓住小鼠的尾巴，另外三個(gè)手指抓住小鼠的頸部即可。因?yàn)樾∈笫冀K在活動(dòng)中，若一次抓的感覺(jué)不是很順手，要放開(kāi)重新抓，不要逞強(qiáng)進(jìn)行下一步操作。2021/10/10323.

抓好小鼠就可以灌胃了，一般用1ml的注射器配灌胃針頭。灌胃針頭從小鼠的嘴角進(jìn)入，壓住舌頭，抵住上顎，輕輕向內(nèi)推進(jìn)，進(jìn)入食管后會(huì)有一個(gè)刺空感，進(jìn)入食道后就可以推注藥液了。4.灌胃容積一般是0.1～0.2ml/10g，最大0.35ml/10g，每只小鼠的灌胃最大容積不超過(guò)0.8ml。

2021/10/1033結(jié)果分析張敏潔2021/10/1034結(jié)果分析生理鹽水（mg/kg）痛反應(yīng)時(shí)間超過(guò)60S的動(dòng)物數(shù)（只）鎮(zhèn)痛有效率（%）表1.生理鹽水灌胃小鼠熱板致痛反應(yīng)（n=20）2021/10/1035結(jié)果分析阿司匹林（mg/kg）痛反應(yīng)時(shí)間超過(guò)60S的動(dòng)物數(shù)（只）鎮(zhèn)痛有效率（%）表2.阿司匹林對(duì)小鼠熱板致痛反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用（n=20）2021/10/1036結(jié)果分析磷酸可待因（mg/kg）痛反應(yīng)時(shí)間超過(guò)60S的動(dòng)物數(shù)（只）鎮(zhèn)痛有效率（%）表3.磷酸可待因?qū)π∈鬅岚逯峦捶磻?yīng)的鎮(zhèn)痛作用（n=20）2021/10/1037結(jié)果分析復(fù)方混合物（阿司匹林：磷酸可待因=25：1）（mg/kg）痛反應(yīng)時(shí)間超過(guò)60S的動(dòng)物數(shù)（只）鎮(zhèn)痛有效率（%）表4.復(fù)方混合物對(duì)小鼠熱板致痛反應(yīng)的鎮(zhèn)痛作用（n=20）2021/10/1038對(duì)比表1.表2.&表3.若復(fù)方混合物的鎮(zhèn)痛有效率大于阿司匹林、磷酸可待因的鎮(zhèn)痛有效率，則兩種藥物之間具有協(xié)同鎮(zhèn)痛作用。若復(fù)方混合物的鎮(zhèn)痛有效率小于阿司匹林、磷酸可待因的鎮(zhèn)痛有效率，則兩種藥物之間具有拮抗鎮(zhèn)痛作用。若復(fù)方混合物的鎮(zhèn)痛有效率等于阿司匹林、磷酸可待因的鎮(zhèn)痛有效率，則兩種藥物之間無(wú)相互作用。

在對(duì)應(yīng)藥物劑量比條件下，比較鎮(zhèn)痛有效率。2021/10/1039結(jié)果分析受試藥品名ED50（mg/kg）95%可倍限（mg/kg）阿司匹林磷酸可待因復(fù)方混合物生理鹽水表5.阿司匹林、磷酸可待因以及兩者的復(fù)方對(duì)小鼠熱板致痛反應(yīng)的鎮(zhèn)痛ED50ED50：半數(shù)有效量。在量反應(yīng)中指能引起50%最大反應(yīng)強(qiáng)度的藥量，在質(zhì)反應(yīng)中指引起50%實(shí)驗(yàn)對(duì)象出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)的藥量。LD50：半數(shù)驚厥量或半數(shù)致死量。（藥物的ED50越小，LD50越大說(shuō)明藥物越安全。）95%可倍限：在此劑量范圍內(nèi)95%的實(shí)驗(yàn)對(duì)象出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。2021/10/1040注意事項(xiàng)選擇雌性小鼠以避免雄性小鼠陰囊與Woolfe熱板接觸而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果為盡量減少個(gè)體差異，應(yīng)事先篩選痛閾小于30秒的小鼠作為實(shí)驗(yàn)鼠實(shí)驗(yàn)室室溫應(yīng)在15℃左右，Woolfe熱板溫度55℃左右；痛閾超過(guò)60秒的小鼠應(yīng)立即取出以免燙傷各組給藥后觀察痛閾的時(shí)間要一致吳紫薇2021/10/1041可行性分析羅欣然2021/10/10421.本實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，不需要過(guò)多的專(zhuān)業(yè)操作技術(shù)；通過(guò)舔后足、扭體反應(yīng)和痛反應(yīng)時(shí)間作為效應(yīng)指標(biāo)，直觀、易測(cè)；2.熱板測(cè)痛儀能較精確地調(diào)定溫度，且溫度較恒定，不會(huì)因?yàn)闇囟冗^(guò)高而使小鼠提前死亡，同時(shí)能較少實(shí)驗(yàn)誤差；3.阿司匹林和可待因有較好的鎮(zhèn)痛作用，效果明顯，而且有明顯的濃度梯度差異，在本實(shí)驗(yàn)中能在較短時(shí)間內(nèi)觀察到隨著濃度變化而變化的鎮(zhèn)痛有效率。技術(shù)可行性2021/10/10431.本實(shí)驗(yàn)用的昆明種小鼠和Wistar大鼠容易購(gòu)得、繁殖能力強(qiáng)，個(gè)體差異相對(duì)較小，適合用于本實(shí)驗(yàn)；2.阿司匹林和可待因是常用鎮(zhèn)痛藥，價(jià)格低廉，容易獲得，可購(gòu)置充足藥品用于實(shí)驗(yàn)；經(jīng)濟(jì)可行性2021/10/1044討論&小結(jié)閆睿2021/10/1045

熱板致痛模型主要用于篩選中樞性鎮(zhèn)痛藥，對(duì)于解熱鎮(zhèn)痛藥的篩選可使用化學(xué)性致痛模型----扭體反應(yīng)模型。2021/10/1046

扭體反應(yīng)

將某些化學(xué)物質(zhì)，如強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、鉀離子、緩激肽等，涂