玉米種子鹽溶蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定

種子生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)專(zhuān)業(yè)電泳法測(cè)定品種純度的程序電泳法測(cè)定品種純度的程序藥品的配制樣品提取液凝膠溶液電極緩沖液樣品的提取凝膠的制備加樣和電泳染色和譜帶分析一、藥液的配制

不同電泳方法提取液和提取的程序不同，應(yīng)按具體方法配制提取液和操作。二、樣品的提取

不同電泳方法提取液和提取的程序不同，應(yīng)按具體方法配制提取液和操作。1、清蛋白

能溶于水。包括大多數(shù)酶蛋白。通?？捎猛っ鸽娪痉椒ㄨb定。

2、球蛋白

難溶于水，能溶于稀鹽溶液；玉米鹽溶蛋白電泳鑒定方法就是對(duì)球蛋白進(jìn)行鑒定。

3、醇溶蛋白

不溶于水，但能溶于70～80％的乙醇。小麥和大麥種子醇溶蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳。

4、谷蛋白

不溶于水、醇，可溶于稀酸、稀堿中。二、樣品的提取三、凝膠的制備連續(xù)電泳只有分離膠（小麥、大麥PAGE電泳）；不連續(xù)電泳有分離膠和濃縮膠（玉米鹽溶蛋白電泳鑒定方法）。以TEMED（四甲基乙二胺）為催化劑的凝膠系統(tǒng)，溫度低于20℃聚合變慢，可將密封好的玻璃板適當(dāng)預(yù)熱至30～35℃。樣品梳取出后，將槽內(nèi)殘余的溶液用針管吸出。三、凝膠的制備連續(xù)電泳只有分離膠（小麥、大麥PAGE電泳）；不連續(xù)電泳有分離膠和濃縮膠（玉米鹽溶蛋白電泳鑒定方法）。以TEMED（四甲基乙二胺）為催化劑的凝膠系統(tǒng)，溫度低于20℃聚合變慢，可將密封好的玻璃板適當(dāng)預(yù)熱至30～35℃。樣品梳取出后，將槽內(nèi)殘余的溶液用針管吸出。四、加樣和電泳加樣量應(yīng)根據(jù)提取液中蛋白質(zhì)的含量確定，一般10～30μl。四、加樣和電泳電泳時(shí)一般采用穩(wěn)壓（農(nóng)業(yè)部玉米鹽溶蛋白電泳鑒定方法：穩(wěn)壓500V）。一般以凝膠板在電泳時(shí)不過(guò)熱為準(zhǔn)。電泳時(shí)為了指示電泳的過(guò)程，可加入指示劑，根據(jù)指示劑移動(dòng)的速度確定電泳時(shí)間。（1）對(duì)陽(yáng)離子電泳系統(tǒng)（pH＜pI時(shí)，酸性電泳）：可用甲基綠作指示劑。（2）對(duì)陰離子電泳系統(tǒng)（pH＞pI時(shí)；堿性電泳）用溴酚藍(lán)作指示劑。五、染色蛋白質(zhì)目前用得較多的染色液是10％三氯乙酸（可以10～12％）、0.05～0.1％考馬斯亮藍(lán)R—250，該染色液染色后一般不需要脫色。六、譜帶分析根據(jù)蛋白譜帶的組成及帶型的一致性，區(qū)分本品種和異品種。雜種F1表現(xiàn)為雙親共顯性：即在父母本中所具有的蛋白質(zhì)譜帶，在F1代種子內(nèi)同時(shí)出現(xiàn)，沒(méi)有新的譜帶產(chǎn)生。（雙親中有差異的蛋白譜帶，同時(shí)在F1出現(xiàn)，稱(chēng)為互補(bǔ)帶）根據(jù)互補(bǔ)帶的有無(wú)區(qū)分自交粒和雜交粒。在互補(bǔ)帶存在的條件下：六、譜帶分析（1）如果同時(shí)出現(xiàn)了父母本所沒(méi)有的譜帶，可判為親本不純。

（2）如果互補(bǔ)帶的二條有其中一條缺失，則為自交粒。

（3）如果整個(gè)帶型與本品種有很大差異，則為雜粒。注意：電泳測(cè)定時(shí)，不同混雜率情況下，保證測(cè)定結(jié)果