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文檔簡介
生物餌料
培養(yǎng)技術(shù)
2341
藻種分離水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫意義:
為了要進(jìn)行某種藻類的科學(xué)研究或大量培養(yǎng),有必要把某種藻類與其他生物分離。因?yàn)樵谂囵B(yǎng)和生產(chǎn)過程中要受敵害生物的污染,只有分離出”純種”進(jìn)行培養(yǎng),才能獲得好效果。藻種分離主要有以下四種。離心法趨向運(yùn)動法稀釋法平板分離法將混合藻液放入離心管中離心,水中不同藻類和微生物都向離心管底部下沉,但下沉的速度不一樣,可將藻類分開。把不同時間下沉到管底的藻體取出鏡檢,選定含所需藻類較多的沉淀物,加培養(yǎng)液再離心,多次反復(fù)上述操作,可以獲得具有一定純度的所需藻種,但難以得到單一純度。1.離心法(1)優(yōu)點(diǎn)(2)缺點(diǎn)可消除細(xì)菌,并增加純粹分離的可能性,至少可作為藻種平板培養(yǎng)的準(zhǔn)備工作。另外,在水液中藻體含量較少時,可用此法集中藻體。不能做到使不同藻類完全分離。水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫
離心法某些藻類具有趨向性。在用光照射時,就會向光照處集中,這時即可把集中的藻體取出而移入另一容器中。對于有鞭毛的或具游動孢子的種類,如衣藻、鹽藻、扁藻等,都可利用此特性來分離藻種。將第一次獲得的藻體部分,移入已消毒的培養(yǎng)液中,再反復(fù)利用這種方法來分離,結(jié)果可得到有一定純度的藻體。這種分離效果較好,但只能用于運(yùn)動型微藻。2.趨向運(yùn)動法
把含有需要分離的藻類而又混雜有其他生物的水樣,取其一定量,用培養(yǎng)液稀釋。通過稀釋到適宜程度的方法,達(dá)到把原混雜生物單個分離培養(yǎng)的目的。3.稀釋法
稀釋法用已消毒的試管5根,第一管中裝培養(yǎng)液9毫升,第2-5管中各裝9毫升,高壓蒸汽滅菌冷卻后,向第一管中加入1毫升混合藻液,充分震蕩,使均勻稀釋。用滅過菌的吸管自第一管中吸?。?毫升混合液移入第2管中,震蕩使均勻稀釋。同法依次移入第3-5管中,并都充分震蕩均勻稀釋,將5個試管中的藻液分別取1毫升加入5個已滅菌的培養(yǎng)皿中,然后把加熱滅過菌冷卻而尚未凝固的瓊脂培養(yǎng)基加入培養(yǎng)皿,將加了培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿順時針轉(zhuǎn)三次,逆時針轉(zhuǎn)三次,前后搖動兩次,使藻液和培養(yǎng)基混勻。待凝固后,將培養(yǎng)皿放在漫射光下培養(yǎng),一直到出現(xiàn)藻群落為止,一般來說,在20℃左右,約10天即可出現(xiàn)藻群落。此法操作比較簡單,容易成功。
稀釋法這個方法的培養(yǎng)基制備和分離方法,與菌類的平板分離法基本相同,只是培養(yǎng)基配方不同。也可將稀釋藻液裝入消毒過的小型噴霧器中(可使用醫(yī)用喉頭噴霧器),打開培養(yǎng)皿蓋,把藻液噴射在培養(yǎng)基平面上,形成分布均勻的薄層水珠。接種后,蓋上蓋,放在適宜的光、溫條件下培養(yǎng)。一般經(jīng)過十余天,就可在培養(yǎng)基上發(fā)生互相隔離的藻類群落,通過顯微鏡檢查,尋找需要的純藻群落,然后用消毒過的接種環(huán)移植到另一平板培養(yǎng)基培養(yǎng),也可直接移植到裝有培養(yǎng)液并經(jīng)過滅菌的試管或小三角燒瓶中,加消毒棉花塞子,進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中每天輕輕搖動1-2次,搖動時避免培養(yǎng)液沾濕棉花塞。經(jīng)過一段時間培養(yǎng),藻類生長繁殖數(shù)量較多,再經(jīng)一次顯微鏡檢查,如無其他生物混雜,才達(dá)到分離的目的。如還有其他生物混雜,則再分離,直到獲得單種培養(yǎng)為止。4.平板法水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫(1)平板培養(yǎng)基制備選擇恰當(dāng)?shù)臒o機(jī)培養(yǎng)液,加入1%瓊脂(剪成細(xì)條)放在培養(yǎng)液中浸泡加熱融化,攪拌,并且補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分分裝:冷卻后分裝在培養(yǎng)皿中,約0.3~0.5cm厚滅菌:高壓蒸氣滅菌,間歇蒸氣滅菌(2)噴霧法噴霧法:在無菌條件下用經(jīng)消毒的培養(yǎng)液把水樣稀釋到合適的濃度,裝入消毒好的醫(yī)用喉頭噴霧器中,打開培養(yǎng)皿蓋,把水樣噴射到培養(yǎng)基平面上,使水樣在培養(yǎng)基平面上形成分布均勻的一薄層水珠。蓋上蓋,放在合適的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。(3)水樣稀釋程度水樣稀釋程度水樣噴射的培養(yǎng)基平面上必須相隔1厘米以上才有一個生物(或一個藻細(xì)胞),將來生長繁殖成一群體后容易分離取出。稀釋不夠,將來生成的藻細(xì)胞群落距離太近,不容易分離。(4)劃線法水樣不用稀釋,取金屬接種環(huán)在酒精燈火焰上滅菌后,在液體培養(yǎng)基中冷卻,蘸取水樣輕輕在培養(yǎng)基上做第一次平行劃線3條,轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70度,將接種環(huán)上剩余物燒掉,通過第一次劃線部位做第二次平行劃線,用同法再做第三次和第四次劃線。主要劃線部位不可重疊。由于沾到接種環(huán)上細(xì)胞較多,在第一次劃線部分藻細(xì)胞群落密集分離不開,但在第三、四次劃線部分,可分離出孤立的藻類群落。選直徑5mm的細(xì)玻璃管在酒精噴燈上拉成極細(xì)的微吸管(口徑0.008~0.16mm),將稀釋的藻液置于凹玻片上(或?qū)⑺畼釉谳d玻片上滴成綠豆粒大小的一些水滴,這樣可使每個水滴中有很少生物而便于分離)在解剖鏡下用微吸管吸出所需要的藻種放入另一凹玻片上(用蒸餾水或平衡礦物質(zhì)溶液沖洗數(shù)次),鏡檢這滴水中是否達(dá)到純的要求如不純要反復(fù)數(shù)次,直至達(dá)到分離的目的為止,然后移入滅菌的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)(先導(dǎo)入有培養(yǎng)基的小培養(yǎng)皿中培養(yǎng),待生長旺盛后,再擴(kuò)大培養(yǎng))。5.微吸管法此種方法適合于大型藻類和浮游動物。技術(shù)操作要求高,細(xì)心,吸取一個細(xì)胞要反復(fù)幾次才能成功。用微吸管吸取稀釋適度的藻液,滴到消毒過的載玻片上,水滴盡可能小,能在鏡下(低倍)看到整個視野的全部水滴或大部分,一個載玻片上放2~4滴,作直線排列,水滴間要有一定的距,如果一滴水內(nèi)有1至幾個所需要的同種藻細(xì)胞
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