2023學(xué)年完整公開課版藻種分離

生物餌料

培養(yǎng)技術(shù)

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藻種分離水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫意義：

為了要進(jìn)行某種藻類的科學(xué)研究或大量培養(yǎng)，有必要把某種藻類與其他生物分離。因?yàn)樵谂囵B(yǎng)和生產(chǎn)過程中要受敵害生物的污染，只有分離出”純種”進(jìn)行培養(yǎng)，才能獲得好效果。藻種分離主要有以下四種。離心法趨向運(yùn)動法稀釋法平板分離法將混合藻液放入離心管中離心，水中不同藻類和微生物都向離心管底部下沉，但下沉的速度不一樣，可將藻類分開。把不同時間下沉到管底的藻體取出鏡檢，選定含所需藻類較多的沉淀物，加培養(yǎng)液再離心，多次反復(fù)上述操作，可以獲得具有一定純度的所需藻種，但難以得到單一純度。1.離心法（1）優(yōu)點(diǎn)（2）缺點(diǎn)可消除細(xì)菌，并增加純粹分離的可能性，至少可作為藻種平板培養(yǎng)的準(zhǔn)備工作。另外，在水液中藻體含量較少時，可用此法集中藻體。不能做到使不同藻類完全分離。水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫

離心法某些藻類具有趨向性。在用光照射時，就會向光照處集中，這時即可把集中的藻體取出而移入另一容器中。對于有鞭毛的或具游動孢子的種類，如衣藻、鹽藻、扁藻等，都可利用此特性來分離藻種。將第一次獲得的藻體部分，移入已消毒的培養(yǎng)液中，再反復(fù)利用這種方法來分離，結(jié)果可得到有一定純度的藻體。這種分離效果較好，但只能用于運(yùn)動型微藻。2.趨向運(yùn)動法

把含有需要分離的藻類而又混雜有其他生物的水樣，取其一定量，用培養(yǎng)液稀釋。通過稀釋到適宜程度的方法，達(dá)到把原混雜生物單個分離培養(yǎng)的目的。3.稀釋法

稀釋法用已消毒的試管5根，第一管中裝培養(yǎng)液9毫升，第2-5管中各裝9毫升，高壓蒸汽滅菌冷卻后，向第一管中加入1毫升混合藻液，充分震蕩，使均勻稀釋。用滅過菌的吸管自第一管中吸?。?毫升混合液移入第2管中，震蕩使均勻稀釋。同法依次移入第3-5管中，并都充分震蕩均勻稀釋，將5個試管中的藻液分別取1毫升加入5個已滅菌的培養(yǎng)皿中，然后把加熱滅過菌冷卻而尚未凝固的瓊脂培養(yǎng)基加入培養(yǎng)皿，將加了培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿順時針轉(zhuǎn)三次，逆時針轉(zhuǎn)三次，前后搖動兩次，使藻液和培養(yǎng)基混勻。待凝固后，將培養(yǎng)皿放在漫射光下培養(yǎng)，一直到出現(xiàn)藻群落為止，一般來說，在20℃左右，約10天即可出現(xiàn)藻群落。此法操作比較簡單，容易成功。

稀釋法這個方法的培養(yǎng)基制備和分離方法，與菌類的平板分離法基本相同，只是培養(yǎng)基配方不同。也可將稀釋藻液裝入消毒過的小型噴霧器中（可使用醫(yī)用喉頭噴霧器），打開培養(yǎng)皿蓋，把藻液噴射在培養(yǎng)基平面上，形成分布均勻的薄層水珠。接種后，蓋上蓋，放在適宜的光、溫條件下培養(yǎng)。一般經(jīng)過十余天，就可在培養(yǎng)基上發(fā)生互相隔離的藻類群落，通過顯微鏡檢查，尋找需要的純藻群落，然后用消毒過的接種環(huán)移植到另一平板培養(yǎng)基培養(yǎng)，也可直接移植到裝有培養(yǎng)液并經(jīng)過滅菌的試管或小三角燒瓶中，加消毒棉花塞子，進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中每天輕輕搖動1-2次，搖動時避免培養(yǎng)液沾濕棉花塞。經(jīng)過一段時間培養(yǎng)，藻類生長繁殖數(shù)量較多，再經(jīng)一次顯微鏡檢查，如無其他生物混雜，才達(dá)到分離的目的。如還有其他生物混雜，則再分離，直到獲得單種培養(yǎng)為止。4.平板法水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)專業(yè)教學(xué)資源庫（1）平板培養(yǎng)基制備選擇恰當(dāng)?shù)臒o機(jī)培養(yǎng)液，加入1％瓊脂（剪成細(xì)條）放在培養(yǎng)液中浸泡加熱融化，攪拌，并且補(bǔ)充蒸發(fā)掉的水分分裝：冷卻后分裝在培養(yǎng)皿中，約0.3～0.5cm厚滅菌：高壓蒸氣滅菌，間歇蒸氣滅菌（2）噴霧法噴霧法：在無菌條件下用經(jīng)消毒的培養(yǎng)液把水樣稀釋到合適的濃度，裝入消毒好的醫(yī)用喉頭噴霧器中，打開培養(yǎng)皿蓋，把水樣噴射到培養(yǎng)基平面上，使水樣在培養(yǎng)基平面上形成分布均勻的一薄層水珠。蓋上蓋，放在合適的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)。（3）水樣稀釋程度水樣稀釋程度水樣噴射的培養(yǎng)基平面上必須相隔1厘米以上才有一個生物（或一個藻細(xì)胞），將來生長繁殖成一群體后容易分離取出。稀釋不夠，將來生成的藻細(xì)胞群落距離太近，不容易分離。（4）劃線法水樣不用稀釋，取金屬接種環(huán)在酒精燈火焰上滅菌后，在液體培養(yǎng)基中冷卻，蘸取水樣輕輕在培養(yǎng)基上做第一次平行劃線3條，轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿約70度，將接種環(huán)上剩余物燒掉，通過第一次劃線部位做第二次平行劃線，用同法再做第三次和第四次劃線。主要劃線部位不可重疊。由于沾到接種環(huán)上細(xì)胞較多，在第一次劃線部分藻細(xì)胞群落密集分離不開，但在第三、四次劃線部分，可分離出孤立的藻類群落。選直徑5mm的細(xì)玻璃管在酒精噴燈上拉成極細(xì)的微吸管（口徑0.008～0.16mm），將稀釋的藻液置于凹玻片上（或?qū)⑺畼釉谳d玻片上滴成綠豆粒大小的一些水滴，這樣可使每個水滴中有很少生物而便于分離）在解剖鏡下用微吸管吸出所需要的藻種放入另一凹玻片上（用蒸餾水或平衡礦物質(zhì)溶液沖洗數(shù)次），鏡檢這滴水中是否達(dá)到純的要求如不純要反復(fù)數(shù)次，直至達(dá)到分離的目的為止，然后移入滅菌的培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)（先導(dǎo)入有培養(yǎng)基的小培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，待生長旺盛后，再擴(kuò)大培養(yǎng)）。5.微吸管法此種方法適合于大型藻類和浮游動物。技術(shù)操作要求高，細(xì)心，吸取一個細(xì)胞要反復(fù)幾次才能成功。用微吸管吸取稀釋適度的藻液，滴到消毒過的載玻片上，水滴盡可能小，能在鏡下（低倍）看到整個視野的全部水滴或大部分，一個載玻片上放2～4滴，作直線排列，水滴間要有一定的距，如果一滴水內(nèi)有1至幾個所需要的同種藻細(xì)胞