2023學(xué)年完整公開課版菌種保藏

第三節(jié)發(fā)酵工業(yè)微生物菌種的保藏菌種保藏基本原理原理采用物理或化學(xué)方法使微生物的生命活動處于半永久性的休眠狀態(tài)，使微生物的新陳代謝作用限制在最低的范圍內(nèi)。

菌體變異發(fā)生在細(xì)胞遺傳物質(zhì)的復(fù)制過程中。減少細(xì)胞繁殖次數(shù)，可以避免變異的發(fā)生。策略有針對性的創(chuàng)造干燥、低溫和隔絕空氣的環(huán)境條件，使微生物細(xì)胞代謝處于低水平或幾乎停止，是微生物菌種保藏的基本策略。保藏方法暫時保藏法長期保藏法斜面?zhèn)鞔ù┐谭ㄒ后w石蠟法甘油管法砂土管保藏法濾紙片保藏法冷凍干燥保藏法液氮冷凍法

注意：由于微生物的多樣性，不同的微生物往往對不同的保藏方法有不同的適應(yīng)性，因此，在具體選擇保藏方法時必須對被保藏菌株的特性、保藏物的使用特點(diǎn)及現(xiàn)有條件等進(jìn)行綜合考慮。菌種保藏方法菌種保藏方法生活態(tài)傳代培養(yǎng)保藏法連續(xù)在培養(yǎng)基上（內(nèi)）移種連續(xù)在活宿主上（內(nèi)）移種休眠態(tài)濕法干法固體斜面半固體瓊脂柱液體介質(zhì)（蒸餾水、糖液、其它溶液）藏在玻璃管內(nèi)吸附在合適的載體上1、斜面?zhèn)鞔２胤ò丫N接種到所需要的斜面培養(yǎng)基上，最適溫度下培養(yǎng)，長出豐滿的菌體細(xì)胞或孢子后，置于4℃的冰箱或冷庫中保藏。然后每隔一定時間重新移接一次，傳代保藏。移種時間因菌種不同而異，幾周到幾個月不等。優(yōu)點(diǎn)：方法簡單、存活率高，具有一定的保藏效果。缺點(diǎn)：菌種仍有一定的強(qiáng)度的代謝活動條件，保存時間不長，傳代多，菌種容易變異。適用菌種：細(xì)菌、酵母、防線菌、霉菌斜面?zhèn)鞔２胤?附圖)2、礦油（液體石蠟）保藏法1938年發(fā)明?；痉椒ê驮恚菏窃谛泵媾囵B(yǎng)或穿刺培養(yǎng)上加一層液體石蠟，液體石蠟可以防止失水干燥，隔絕空氣，降低菌種細(xì)胞代謝速率。此法適用于各類微生物，尤其是不形成芽孢或孢子的真菌，保藏期限2-10年。操作方法：礦油滅菌；菌種培養(yǎng)；灌注礦物油；低溫（5℃左右）保藏

3、砂管保藏法

把微生物附著在沙質(zhì)載體上，置干燥處進(jìn)行保藏，適合于保藏放線菌、芽孢細(xì)菌和某些真菌。保藏時間可達(dá)幾年到幾十年。制備砂管：河砂60目過篩—去雜質(zhì)漂洗—烘干分裝—滅菌—烘干。準(zhǔn)備菌種：在合適培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得孢子。接種：干法接種，直接將放線菌、真菌孢子接種于沙管中。濕法接種，先將斜面培養(yǎng)物制成菌懸液，吸取菌懸液于沙管中（每管約10滴）。干燥保藏：將含菌沙管放在含干燥劑的干燥器中吸水干燥。低溫或室溫下干燥處保藏。

4、冷凍真空干燥保藏法首先把加一定保護(hù)劑的菌懸液冷凍，然后在冷凍狀態(tài)下予以真空干燥，使微生物細(xì)胞處于半永久的休眠狀態(tài)，從而達(dá)到長久保藏的狀態(tài)。冷凍真空干燥操作流程配制保護(hù)劑滅菌菌種培養(yǎng)制備菌懸液分裝安培瓶洗凈烘干裝標(biāo)簽加棉塞預(yù)凍真空干燥測定水分熔封管口檢查真空度包藏5、液氮冷凍保藏技術(shù)

1、選擇冷凍保護(hù)劑，最常用的冷凍保護(hù)劑是二甲亞砜和甘油，最終使用濃度一般為甘油10％、二甲亞砜5％。2、制備待冷凍保藏菌種懸液，制成孢子及菌體細(xì)胞懸液；0.5～lml分裝玻璃安瓿或液氮冷藏專用塑料瓶。3、玻璃安瓿用酒精噴燈封口。4、以1-2℃/min的致冷速度降溫，直到溫度達(dá)到相對溫度之上幾度的細(xì)胞凍結(jié)點(diǎn)(通常為-30℃)5、將安瓿迅速移入液氮罐中于液相(-)96℃)或氣相(-156℃)中保存。6、復(fù)蘇：迅速將安瓿置于37-40℃水浴中，并輕輕搖動以加速解；其他保藏方法冷凍法：分低溫冷凍（－20℃）與超低溫冷凍（－196℃）兩種。適用于細(xì)菌、真菌、病毒等的保藏液態(tài)真空干燥法：菌體在恒溫液態(tài)條件下進(jìn)行真空干燥。適用于包括細(xì)菌、病毒，特別適用于冷凍干燥保藏效果不佳的菌種。瓊脂穿刺封口保藏法：適用于不產(chǎn)孢子細(xì)菌的保藏幾種常用菌種保藏方法的比較方法名稱主要措施適宜菌種保藏期評價冰箱保藏法（斜面）冰箱保藏法（半固體）石蠟油封藏法*沙土保藏法冷凍干燥法低溫低溫低溫、缺氧干燥、無營養(yǎng)干燥、無氧、低溫、有保護(hù)劑各大類細(xì)菌、酵母菌各大類**產(chǎn)孢子微生