實驗一蛋白質(zhì)變性凝固及沉淀

關(guān)于實驗一蛋白質(zhì)變性凝固及沉淀第1頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗?zāi)康哪軌蛘f出蛋白質(zhì)變性、凝固反應(yīng)的原理及實驗方法能夠說出蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)的原理及實驗方法能夠運(yùn)用鹽析法及重金屬沉淀法第2頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月主要實驗內(nèi)容蛋白質(zhì)的加熱變性凝固蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)蛋白質(zhì)鹽析重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)第3頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月蛋白質(zhì)的變性(denaturation)

在某些理化因素的作用下，蛋白質(zhì)嚴(yán)格的空間結(jié)構(gòu)被破壞（不包括肽鍵的斷裂），從而引起若干理化性質(zhì)和生物學(xué)性質(zhì)改變的現(xiàn)象。第4頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月

變性后的蛋白質(zhì)稱變性蛋白,能使蛋白質(zhì)變性的物質(zhì)叫蛋白質(zhì)變性劑。變性因素物理因素高溫、高壓紫外線、X射線、電離輻射和超聲波等化學(xué)因素強(qiáng)酸、強(qiáng)堿有機(jī)溶劑、重金屬鹽高濃度尿素、鹽酸胍等變性實質(zhì)：

破壞了空間結(jié)構(gòu)，一級結(jié)構(gòu)不受影響（分子組成、分子量不變）。第5頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月變性的可逆性可逆變性：除去變性因素，蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)可以恢復(fù)原狀。不可逆變性：除去變性因素，蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)不能恢復(fù)原狀。利用消滅病原微生物蛋白質(zhì)制劑的保存保護(hù)體內(nèi)蛋白質(zhì)避免第6頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月

蛋白質(zhì)分子顆粒大小1-100nm之間,屬膠體顆粒范圍，在溶液中能形成穩(wěn)定的膠體。原因蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)及沉淀:表面形成水化層表面同種電荷的斥力

除去這兩個因素，就會發(fā)生沉淀。蛋白質(zhì)分子相互聚集而從溶液中析出的現(xiàn)象稱為沉淀。++++++++第7頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月++++++++++++++++--------蛋白質(zhì)膠體顆粒的沉淀

帶正電荷的蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在等電點的蛋白質(zhì)酸酸堿堿脫水脫水脫水不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)顆粒（沉淀）帶正電荷的蛋白質(zhì)（疏水膠體）帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)（疏水膠體）堿酸（親水膠體）（親水膠體）（親水膠體）--------第8頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月可逆沉淀不可逆沉淀結(jié)構(gòu)和性質(zhì)都不變適當(dāng)條件下可重新溶解是分離和純化的基本方法結(jié)構(gòu)和性質(zhì)都發(fā)生變化沉淀不再溶解于水蛋白質(zhì)的沉淀第9頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月蛋白質(zhì)變性沉淀并凝聚成塊狀稱為凝固。不可逆變性狀態(tài)蛋白質(zhì)的凝固第10頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月蛋白質(zhì)變性、沉淀與凝固的關(guān)系變性屬于蛋白質(zhì)本質(zhì)的變化，沉淀和凝固屬于一種現(xiàn)象變性不一定沉淀，變性蛋白質(zhì)只在等電點附近才沉淀變性蛋白易于沉淀，沉淀蛋白不一定變性沉淀的變性蛋白質(zhì)也不一定凝固第11頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月蛋白質(zhì)的加熱變性凝固蛋白質(zhì)分子受熱作用，分子空間結(jié)構(gòu)變化，疏水基團(tuán)暴露于分子表面，溶解度降低。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分子不帶電荷（處于等電點條件下），則蛋白質(zhì)發(fā)生聚集出現(xiàn)沉淀；當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分子帶電（處于非等電點條件下），則蛋白質(zhì)因靜電排斥作用而不出現(xiàn)沉淀；第12頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗內(nèi)容

取三只小玻璃試管，各加入10%蛋白質(zhì)溶液10d，分別標(biāo)記為1、2和3號管；向1號管中加入：pH4.8緩沖液10d

。混勻，于酒精燈上緩慢加熱至沸點，觀察變化（

）；高溫下，蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆的變性并凝固。第13頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月向2號管中加入：H2O8d,0.1mol/LHCl2d?；靹颍诰凭珶羯暇徛訜嶂练悬c，觀察變化（

）停止加熱，向2號管中逐滴加入：0.1mol/LNaCO3

。搖勻后繼續(xù)滴加，一旦出現(xiàn)絮狀物即停止。將2號管于酒精燈上加熱，觀察現(xiàn)象（

）冷卻后，再加入：0.1mol/LHCl2d。觀察現(xiàn)象（

）蛋白質(zhì)變性不一定出現(xiàn)沉淀；蛋白質(zhì)變性后在特定條件下發(fā)生沉淀；沉淀加熱后發(fā)生不可逆變性并凝固。第14頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月向3號管中加入：H2O8d,0.1mol/LNaOH2d?；靹?，于酒精燈上緩慢加熱至沸點，觀察變化（

）；停止加熱，向3號管中逐滴加入：0.1mol/LHAC。一旦出現(xiàn)絮狀物即停止。繼續(xù)滴加：0.1mol/LHAC1d。觀察現(xiàn)象（

）將3號管于酒精燈上加熱，觀察現(xiàn)象（

）向3號管中加入：0.1mol/LNaOH。一旦出現(xiàn)絮狀物即停止。將3號管于酒精燈上加熱，觀察現(xiàn)象（

）冷卻后，再加入：0.1mol/LNaOH2d。觀察現(xiàn)象（

）蛋白質(zhì)變性不一定出現(xiàn)沉淀；蛋白質(zhì)變性后在特定條件下發(fā)生沉淀，并可逆；第15頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)蛋白質(zhì)的鹽析一定濃度中性鹽（(NH4)2SO4、Na2SO4等）可去除蛋白質(zhì)分子所帶電荷及其表面的水化層，從而使蛋白質(zhì)從溶液中聚集沉淀出來。利用這個原理使蛋白質(zhì)從溶液中沉淀出來的方法為鹽析。不同蛋白質(zhì)鹽析時所需的鹽濃度不同，可以通過不同濃度鹽溶液分離不同蛋白質(zhì)，就是分段鹽析。大部分蛋白質(zhì)都可用飽和(NH4)2SO4溶液鹽析出來。某些蛋白質(zhì)在半飽和(NH4)2SO4溶液中析出。鹽析是一個可逆沉淀反應(yīng)。第16頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗內(nèi)容取一只小玻璃試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液；加入等體積飽和(NH4)2SO4溶液，混勻后靜置3min。觀察現(xiàn)象（

）對該溶液進(jìn)行過濾，將濾液收集于一只干凈試管中，取部分轉(zhuǎn)入另一只試管中；向一只試管中加入結(jié)晶(NH4)2SO4粉末，直到粉末不再溶解（成為飽和(NH4)2SO4溶液）；比較兩只試管現(xiàn)象（

）第17頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)重金屬鹽沉淀蛋白質(zhì)在堿性條件下，重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶性蛋白鹽而沉淀。實驗內(nèi)容取一只小玻璃試管，加入1mL蛋白質(zhì)溶液；加入0.1mol/mLNaOH2d，混勻；逐滴加入CuSO4，搖勻，直至出現(xiàn)沉淀為止。第18頁，課件共20頁，創(chuàng)作于2023年2月蛋白質(zhì)沉淀反應(yīng)生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)在酸性條件下，蛋白質(zhì)可與生物堿試劑(如苦味酸、鎢酸、鞣酸)以及某些酸(如三氯醋酸、過氯酸、硝酸)結(jié)合成不溶性的鹽沉