6非發(fā)酵菌鑒定

微生物檢驗技術

----非發(fā)酵菌鑒定案例導入1.掌握非發(fā)酵菌的生物學特性和微生物學檢測2.熟悉常見非發(fā)酵菌的臨床意義3.了解非發(fā)酵菌的分類學習目標單元細目要點要求科目非發(fā)酵革蘭陰性菌屬假單胞菌屬（銅綠假單胞菌、馬勒伯克霍爾德菌與偽馬勒伯克霍爾德菌、嗜麥芽窄食單胞菌、臨床常見的其他假單胞菌）（1）概述了解1，3（2）臨床意義熟悉2，3（3）生物學特征掌握1，3（4）微生物學檢測掌握3，4不動桿菌屬（1）分類了解1，3（2）臨床意義熟悉2，3（3）生物學特性掌握1，3（4）微生物學檢測掌握3，4產堿桿菌屬（1）分類了解1，3（2）臨床意義了解2，3（3）生物學特性了解1，3（4）微生物學檢測了解3，4臨床醫(yī)學檢驗技術考試大綱不動桿菌屬的鑒定假單胞菌屬的鑒定12產堿桿菌屬的鑒定3學習目錄1

假單胞菌屬的鑒定概述（了解）1-1生物學特性（掌握）1-3臨床意義（熟悉）1-2微生物學檢測（掌握）1-4概述1-0■非發(fā)酵菌，指一群不發(fā)酵糖類或僅以氧化形式利用糖類的需氧或兼性厭氧、無芽胞的革蘭陰性桿菌；多為條件致病菌。近年來由該類細菌引起感染的報告日益增多，已引起臨床醫(yī)學及檢驗醫(yī)學的重視?！龇前l(fā)酵革蘭陰性桿菌(NonfermentativeBacilli)包括20多個菌屬，其中假單胞菌屬、不動桿菌屬、產堿桿菌屬、黃桿菌屬、窄食單胞菌屬、伯克霍爾德菌屬、莫拉菌屬和軍團菌屬是臨床標本中常見的8個菌屬。概述1-0■非發(fā)酵菌生物學特性：氧化酶試驗：除不動桿菌和個別假單胞菌外，均為陽性O/F試驗：開管產酸，閉管不變動力：半固體培養(yǎng)基上觀察動力不明顯、以懸滴法為準概述1-0葡萄糖利用試驗檢測非發(fā)酵菌葡萄糖利用試驗的培養(yǎng)基是0/F培養(yǎng)基,其蛋白胨與糖類之比為0.2:1,而腸桿菌科糖發(fā)酵培養(yǎng)基蛋白胨與糖類之比則是2:1。原因是大部分非發(fā)酵菌生長緩慢,利用葡萄糖產生弱酸,而蛋白胨形成的產物即可升高培養(yǎng)基的pH值,中和非發(fā)酵菌產生的弱酸性產物,影響結果判斷。動力觀察細菌動力通常使用0.4%~1.0%瓊脂,一般腸桿菌科細菌多采用此法檢測其動力。但此法對于檢查非發(fā)酵菌的動力來說不適宜,因為非發(fā)酵菌只在瓊脂表面生長,穿刺接種半固體培養(yǎng)基必須在4mm以上,而且接種后培養(yǎng)4~6h就要觀察結果。大多數非發(fā)酵菌只在培養(yǎng)早期呈微弱模糊狀,延長時間將消失,故檢查非發(fā)酵菌的動力,最好采用懸滴鏡檢的方法,不僅快速,而且更準確。也可進行鞭毛染色來鑒別某些有動力的非發(fā)酵菌。概述1-0非發(fā)酵菌的基本特征在最初分離培養(yǎng)基上,如果有菌落生長并有下列三種情況之一,則可認為有非發(fā)酵菌的存在。若某種革蘭陰性桿菌在血瓊脂平板上生長而在麥康凱瓊脂平板上不生長或生長很差(如:艾肯菌屬、金氏桿菌屬、心桿菌屬等),菌落呈無色.針尖大或完全看不到生長則應懷疑為非發(fā)酵菌。在麥康凱瓊脂平板上生長的無色菌落(不發(fā)酵乳糖),若氧化酶試驗陽性則應懷疑為非發(fā)酵菌。但并非所有氧化酶陽性的革蘭陰性桿菌都是非發(fā)酵菌,如巴斯德菌屬,氣單胞菌屬、鄰單胞菌屬和弧菌屬等也是氧化酶陽性。值得注意的是,不能在麥康凱SS以及其他含糖的培養(yǎng)基上作氧化酶試驗,而應在營養(yǎng)瓊脂平板或半固體培養(yǎng)基上作氧化酶試驗,因糖分解產酸會影響氧化酶試驗的結果。革蘭陰性桿菌生長在克氏雙糖(KIA)或三糖鐵(TSI)培養(yǎng)基內,斜面、底層均不變色,表示該細菌不分解葡萄糖和乳糖,提示為非發(fā)酵菌。底層產酸、斜面不變,表示細菌能分解葡萄糖,提示為非發(fā)酵菌和腸桿菌科。概述（了解）

1-1假單胞菌屬（銅綠假單胞菌、馬勒伯克霍爾德菌與偽馬勒伯克霍爾德菌、嗜麥芽窄食單胞菌、臨床常見的其他假單胞菌） 假單胞菌屬分布廣泛，土壤、水和空氣中均有存在，人類非發(fā)酵菌感染中，假單胞菌占70％～80％，主要為銅綠假單胞菌，其他較為常見的菌種有嗜麥芽窄食單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、產堿假單胞菌等。這些菌種也是醫(yī)院感染的主要病原菌。本節(jié)重點介紹銅綠假單胞菌。臨床意義（熟悉）

1-2銅綠假單胞菌含有多種毒力因子，包括黏附素、內毒素、外毒素、多糖莢膜樣物質、綠膿菌素（pyocyanin）及侵襲性酶類等，在細菌的侵入、擴散和感染中發(fā)揮重要作用。臨床上，銅綠假單胞菌可引起傷口和創(chuàng)面感染、呼吸道感染、泌尿道感染、敗血癥等。重度感染可發(fā)生在局部組織損傷或抵抗力下降人群，如燒傷，長期臥床者，呼吸機使用者，應用廣譜抗生素、激素、抗腫瘤藥物及免疫抑制劑等藥物的患者，以及早產兒，囊性纖維化患者，艾滋病和老年患者等。對于燒傷患者的傷口感染，應特別注意防范膿毒癥的發(fā)生，以降低感染后的死亡率。除銅綠假單胞菌外，其他假單胞菌導致感染的情況不多見。但需要注意熒光假單胞菌的血流感染，特別是近期輸注過血液制品后出現的血流感染，因為該菌能在4℃生長，與血液制品的污染關系密切生物學特性（掌握）

1-3非發(fā)酵革蘭陰性桿菌包括假單胞菌屬、不動桿菌屬、產堿桿菌屬、莫拉菌屬、黃桿菌屬等。氧化酶試驗：除不動桿菌和個別假單胞菌外，均為陽性。O/F試驗：開管產酸，閉管不變動力：半固體培養(yǎng)基上觀察動力不明顯、以懸滴法為準。G-直或微彎、較細長、散在排列、無芽胞有莢膜、有端鞭毛或叢鞭毛。形態(tài)與染色生物學特性（掌握）

1-3專性需氧，生長溫度范圍廣,4℃不生長而42℃可生長是該菌的鑒別特點。最適生長溫度為35℃。普通培養(yǎng)基上生長，80～90％產生各種水溶性色素，如綠膿素和熒光素。對理化因素耐受性較強，對多種抗生素耐藥。培養(yǎng)特點生物學特性（掌握）

1-3本菌產生兩種色素，一種是綠膿素(pyocyanine)，溶于水和氯仿，為藍綠色色素，另一種是熒光素(fluorescence)，只溶于氯仿，為綠色熒光素。生物學特性（掌握）

1-3在血瓊脂平板上350C培養(yǎng)18~24h，形成大而扁平、濕潤、有金屬光澤、藍綠色、透明溶血環(huán)的菌落，有生姜味。生物學特性（掌握）

1-3典型型:菌落不規(guī)則，邊緣呈傘狀伸展大腸菌樣型:菌落圓形凸起，無色透明，似大腸埃希菌菌落生物學特性（掌握）

1-3粗糙型:菌落呈鈕扣狀，表面粗糙，或菌落中央隆起邊緣扁平黏液型:菌落光滑，隆起，呈蒙古液狀，嵌入培養(yǎng)基中，不易挑起，似肺炎克雷伯菌菌落，但是無色生物學特性（掌握）

1-3株儒型:生長緩慢，培養(yǎng)18h尚不見菌落，24h后才有細小菌落生物學特性（掌握）

1-3生化試驗氧化酶陽性氧化分解葡萄糖、木糖產酸不產氣液化明膠還原硝酸鹽產生氮氣吲哚陰性利用枸櫞酸鹽精氨酸雙水解酶陽性生物學特性（掌握）

1-3氧化酶試驗陽性（+）（-）生物學特性（掌握）

1-3氧化分解葡萄糖、木糖產酸不產氣生物學特性（掌握）

1-3枸櫞酸鹽利用試驗陽性生物學特性（掌握）

1-3精氨酸雙水解酶陽性對照陰性陽性

微生物學檢測（掌握）

1-4鑒別要點本菌特征：藍綠色或熒光色菌落有生姜味，動力和氧化酶試驗陽性,在4℃時不生長而在42℃時可以生長。與熒光假單胞菌和惡臭假單胞菌的鑒別：三者均可產生熒光色素但銅綠假單胞菌42℃能夠生長,后兩者則不能生長。與淺黃金色單胞菌、棲稻黃色單胞菌的鑒別：銅綠假單胞菌氧化酶陽性,可產生藍綠色色素;而淺黃金色單胞菌、棲稻黃色單胞菌氧化酶陰性。根據七葉苷試驗可將淺黃金色單胞菌和棲稻黃色單胞菌加以區(qū)別，前者為陽性,后者為陰性。標本增菌分離培養(yǎng)（血平板）最后鑒定可疑菌落（性狀、色素）初步鑒定涂片染色鏡檢血標本涂片鏡檢氧化酶菌落特征綠膿素氣味42℃生長分型生化鑒定：O/F

O枸櫞酸鹽利用＋精氨酸雙水解＋乙酰胺酶＋明膠液化＋微生物學檢測程序（掌握）

1-41.下列細菌中，哪種能產生水溶性綠色素和生姜氣味（

）A.變形桿菌B.銅綠假單胞菌C.大腸埃希菌D.葡萄球菌2.對銅綠假單胞菌進行鑒定時下列哪項說法有誤（

）A.能液化明膠B.分解尿素C.O/F試驗為（F型）D.氧化酶試驗陽性3.銅綠假單胞菌在血平板上的菌落特點不是（

）A.產生水溶性綠色素，有金屬光澤，有生姜氣味B.菌落扁平，邊緣呈毛玻璃狀C.有金屬光澤，有水果氣味D.有乙型溶血環(huán)4.下列細菌除哪個外均為非發(fā)酵菌（

）A.銅綠假單胞菌B.枸櫞酸桿菌C.醋酸鈣不動桿菌D.糞產堿桿菌5.下列特性與銅綠假單胞菌無關（

）A.生姜味B.革蘭陰性桿菌C.氧化酶陽性D.尿素陰性思考練習2

不動桿菌屬的鑒定分類（了解）2-1生物學特性（掌握）2-3臨床意義（熟悉）2-2微生物學檢測（掌握）2-4分類（了解）

2-1一群不發(fā)酵糖類，氧化酶陰性，無動力的革蘭陰性桿菌。廣泛存在于自然界，是引起醫(yī)院感染的病原菌之一。已命名的有六個種，即醋酸鈣不動桿菌、洛菲不動桿菌、溶血不動桿菌、鮑曼不動桿菌、瓊氏不動桿菌、約翰遜不動桿菌。臨床標本中分離到的不動桿菌絕大多數是鮑曼不動桿菌。臨床意義（熟悉）

2-2不動桿菌屬細菌廣泛存在于自然界和醫(yī)院環(huán)境，并能夠在人體皮膚表面、潮濕的環(huán)境中、甚至干燥的物體表面上生存。該菌可分離于血液、尿液、膿液、呼吸道分泌物及腦脊液等標本中，其臨床分離率僅次于假單胞菌屬。近年來，鮑曼不動桿菌感染呈上升趨勢，并不斷出現多重耐藥和泛耐藥菌株。生物學特性（掌握）

2-3形態(tài)與染色不動桿菌為一群不發(fā)酵糖類、氧化酶陰性、不能運動的G-桿菌、多為球桿菌，常成雙排列，革蘭染色不易脫色。無鞭毛、多數有莢膜、無芽胞。常分離到的菌種有醋酸鈣不動桿菌、洛菲不動桿菌、溶血不動桿菌等。生物學特性（掌握）

2-3培養(yǎng)特性專性需氧，營養(yǎng)要求不高。最適溫度：35℃，鮑曼不動桿菌42℃可生長血平板上菌落圓形凸起，中等大小，光滑、邊緣整齊、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液狀，不產色素。有的可產生β-溶血環(huán)。麥康凱平板上形成粉紅色菌落。生物學特性（掌握）

2-3在血瓊脂平板上350C培養(yǎng)18~24h，形成直徑2~3mm、圓形、灰白色、光滑、邊緣整齊的菌落，部分菌落呈黏液狀。生物學特性（掌握）

2-3在麥康凱瓊脂等平板上350C培養(yǎng)18~24h，形成粉紅色菌落，48h后菌落呈深紅色，部分菌株呈黏液型菌落。微生物學檢測（掌握）

2-4醋酸鈣不動桿菌鮑曼不動桿菌溶血不動桿菌瓊氏不動桿菌約翰遜不動桿菌洛菲不動桿菌葡萄糖氧化＋＋＋／－－－－木糖氧化－＋＋／－－－－乳糖氧化＋＋－＋＋＋精氨酸雙水解酶＋＋＋＋－／＋－鳥氨酸脫羧酶＋＋－－－－苯丙氨酸脫氨酶＋＋－－－－丙二酸鹽利用試驗＋＋＋－－／＋－檸檬酸鹽利用試驗＋＋＋＋／－＋－明膠液化－－＋－－－37℃生長＋＋＋＋－＋42℃生長－＋－－－－1.不動桿菌的生物學特征中“三陰”是指

ADNA酶陰性，氧化酶試驗陰性，動力陰性

B氧化酶試驗陰性．動力陰性，硝酸鹽還原試驗陰性

C動力陰性，硝酸鹽還原試驗陰性，DNA酶陰性

D氧化酶試驗陰性，硝酸鹽還原試驗陰性，DNA酶陰性

E氧化酶試驗陰性，硝酸鹽還原試驗陰性，凝固酶陰性2.鮑曼不動桿菌的培養(yǎng)特性有

A在血平板上產生清晰的β-溶血環(huán)；

B42oC生長

C在血平板上菌落較小

D產生色素

E形成邊緣不整齊的菌落思考練習3

產堿桿菌屬的鑒定分類（了解）3-1生物學特性（了解）3-3臨床意義（了解）3-2微生物學檢測（了解）3-4分類（了解）

3-1產堿桿菌屬是一群專性需氧、有動力、不分解糖類的革蘭陰性桿菌。自然界廣泛存在，在人和動物的腸道中屬正常菌群。許多菌株已從臨床標本的血、尿、糞便、腦脊液、化膿性耳膿汁和傷口中分離出，常引起人的條件感染。伯杰系統(tǒng)細菌手冊中分為2個種：木糖氧化產堿桿菌木糖氧化亞種脫硝亞種糞產堿桿菌：典型菌種臨床意義（了解）

3-2

產堿桿菌屬在自然界分布廣泛，可在水、土壤、人體及動物腸道中分離出該菌，是人體的正常菌群，也是醫(yī)院感染的病原菌之一。糞產堿桿菌最為常見，其多發(fā)于抵抗力低下患者，呼吸道、尿液、血液及腦脊液中均有分離。生物學特性（了解）

3-3G-桿菌，短桿狀，常成單、成對或鏈狀排列，具有周鞭毛、無芽胞，多數無莢膜。形態(tài)與染色革蘭染色生物學特性（了解）

3-3培養(yǎng)特性專性需氧，對營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上18～24h形成無色透明菌落。氧化酶及觸酶均陽性，不分解任何糖類。血皿上形成灰白色、扁平、有水果味的較大菌落。MAC和SS平板上，形成不發(fā)酵乳糖的無色透明菌落。最適生長溫度25－35℃。生物學特性（了解）

3-3生化反應氧化酶+，觸酶+不分解任