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種子生產(chǎn)與經(jīng)營專業(yè)教學(xué)資源庫《薯類種子生產(chǎn)技術(shù)》馬鈴薯莖尖脫毒技術(shù)目錄CONTENTS一二三外植體選取與消毒莖尖剝離與接種莖尖培養(yǎng)四脫毒苗鑒定1.外植體選取應(yīng)選用生產(chǎn)上主栽的、或具有某種特性(如抗馬鈴薯癌腫病)優(yōu)良品種塊莖的休眠芽或剛出土幼苗的莖尖、或田間成株上的葉芽作莖尖剝離材料。一、外植體選取與消毒2.外植體消毒將入選材料放入紗布袋,用自來水沖洗1h后,在無菌條件下,放入70%~75%酒精中浸5~30s,再用無菌水漂洗1~2次,再用0.1%升汞(每升加1滴吐溫)液消毒3~8min(或用3%次氯酸鈉液加2~4滴吐溫振蕩消毒15~20min),取出用無菌水漂洗3~5次,瀝干備用。一、外植體選取與消毒1.莖尖剝離用滅菌濾紙吸干材料表面水分,在體視解剖鏡下用手術(shù)刀等工具輕、準(zhǔn)、快速地剝?nèi)ビ兹~,切取帶1~2個(gè)葉原基(0.1~0.4mm大小)的生長點(diǎn)。一、外植體選取與消毒2.接種將切下的生長點(diǎn)迅速接入裝有莖尖分化培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)瓶中,每管(瓶)放1個(gè)生長點(diǎn)。注明品種,莖尖號(hào),接種期。二、莖尖剝離與接種1.試管苗培養(yǎng)日溫25℃,夜溫15℃,光照時(shí)數(shù)12~14h/d,光照強(qiáng)度2000~3000lx條件下培養(yǎng)。三、莖尖培養(yǎng)2.試管苗繼代培養(yǎng)三、莖尖培養(yǎng)1.馬鈴薯PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS等病毒,用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測(cè),無陽性反應(yīng)再用指示植物鑒定。2.紡錘塊莖類病毒(PSTVd)用往復(fù)雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳法(R)檢測(cè),鑒定篩選出不帶PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM、PVS和PSTVd的脫毒苗。經(jīng)鑒定脫毒苗可以進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)。四、脫毒苗鑒定ELISA雙抗體夾心測(cè)抗原(病毒)四、脫毒苗鑒定病毒種類指示植物表現(xiàn)癥狀馬鈴薯X病毒(PVX)千日紅、曼陀羅、辣椒、心葉煙脈間花葉馬鈴薯S病毒(PVS)莧色藜、千日紅、曼陀羅、昆諾阿藜葉脈深陷,粗縮馬鈴薯Y病毒(PVY)野生馬鈴薯、洋酸菜、曼陀羅隨品種而異,有些輕微花葉或粗縮,敏感品種反應(yīng)為壞死馬鈴薯卷葉病毒(PLRV)洋酸菜葉尖呈淺黃色,有些品種呈紫色或紅色幾種馬鈴薯病毒的指示植
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