全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展

檢驗(yàn)儀器分析技術(shù)滄州醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校王鳳玲臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)儀器全自動(dòng)DNA測(cè)序儀全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展自沃森和克里克在1953年建立DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)以來(lái)，整個(gè)測(cè)序技術(shù)的發(fā)展歷程。全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展第一代DNA測(cè)序技術(shù)成熟的DNA測(cè)序技術(shù)始于20世紀(jì)70年代中期。●1977年Sanger發(fā)明了雙脫氧鏈終止法?！裢粫r(shí)期,Maxam和Gilbert報(bào)道了通過(guò)化學(xué)降解測(cè)定DNA序列的方法?！?0世紀(jì)90年代初出現(xiàn)的熒光自動(dòng)測(cè)序技術(shù)將DNA測(cè)序帶入自動(dòng)化測(cè)序的時(shí)代。這些技術(shù)統(tǒng)稱為第一代DNA測(cè)序技術(shù)。全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展第一代測(cè)序法的比較方法雙脫氧末端終止法化學(xué)降解法熒光自動(dòng)測(cè)序技術(shù)優(yōu)點(diǎn)操作簡(jiǎn)便，結(jié)果清晰可靠，一次能確定300-500個(gè)核苷酸序列，已成為最常用的DNA測(cè)序方法不需要進(jìn)行酶促反應(yīng)，可以分析甲基化等DNA的修飾情況自動(dòng)化程度高，高效率，精確度增加缺點(diǎn)花費(fèi)時(shí)間過(guò)久，成本較高一次最多只能分析250個(gè)核苷酸，所用的許多化學(xué)試劑有毒純化量小，不能純化較長(zhǎng)的片段全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展第二代DNA測(cè)序技術(shù)二代測(cè)序的核心思想是邊合成邊測(cè)序，即通過(guò)捕捉新合成的末端的標(biāo)記來(lái)確定DNA的序列?！ち_氏454公司的GSFLX測(cè)序平臺(tái)

·Illumina公司的SolexaGenomeAnalyzer測(cè)序平臺(tái)

·ABI公司的SOLiD測(cè)序平臺(tái)全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展

#三種第二代測(cè)序技術(shù)對(duì)比#測(cè)序技術(shù)454SolexaSOLiD上市時(shí)間200520072007價(jià)格（萬(wàn)美元，2007）504559單次反應(yīng)數(shù)據(jù)量0.42050讀長(zhǎng)（bp）40010050優(yōu)勢(shì)長(zhǎng)讀長(zhǎng)低測(cè)序成本，高性價(jià)比高通量，高準(zhǔn)確度全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展第三代DNA測(cè)序技術(shù)第二代測(cè)序技術(shù)在制備測(cè)序文庫(kù)的時(shí)候都需要經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增，而這一PCR過(guò)程可能引入突變或者改變樣品中核酸分子的比例關(guān)系。另外，第二代測(cè)序的讀長(zhǎng)普遍偏短，在進(jìn)行數(shù)據(jù)拼接時(shí)會(huì)遇到麻煩。為了克服這樣的缺點(diǎn)，業(yè)界發(fā)展出了以單分子實(shí)時(shí)測(cè)序和納米孔為標(biāo)志的第三代測(cè)序技術(shù)。

全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展三代測(cè)序技術(shù)的原理各有特點(diǎn)，適用范圍也不近相同。第一代測(cè)序技術(shù)憑借其長(zhǎng)的序列片段和高的準(zhǔn)確率，適合對(duì)新物種進(jìn)行基因組長(zhǎng)距框架的搭建以及后期GAP填補(bǔ)，但是成本昂貴，而且難以勝任微量DNA樣品的測(cè)序工作。全自動(dòng)DNA測(cè)序儀的發(fā)展三代測(cè)序技術(shù)的原理各有特點(diǎn)，適用范圍也不近相同。第二代測(cè)序技術(shù)中，454序列片段最長(zhǎng)，比較適合對(duì)未知基因組從頭測(cè)序，搭建主體結(jié)構(gòu)，但是在判斷連續(xù)單堿基重復(fù)區(qū)時(shí)準(zhǔn)確度不高。Solexa較454具有通量高、片段短、價(jià)位低的特點(diǎn)，可以用于大基因組和小基因組的測(cè)序和重測(cè)序。全自動(dòng)