2024屆 一輪復(fù)習(xí) 人教版 微生物的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用 課件 （137張）

第2課時(shí)微生物的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用目標(biāo)要求1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測定。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)考點(diǎn)二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)考點(diǎn)三分解纖維素的微生物的分離內(nèi)容索引重溫高考

真題演練課時(shí)精練考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1.培養(yǎng)基的配制(1)概念：人們按照微生物對(duì)

的不同需求，配制出供其________的營養(yǎng)基質(zhì)。(2)類型：按物理狀態(tài)分類歸納

夯實(shí)必備知識(shí)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途_____培養(yǎng)基不含

，呈

狀態(tài)工業(yè)生產(chǎn)

培養(yǎng)基含

，呈_____狀態(tài)微生物的分離、鑒定，活菌計(jì)數(shù)，菌種保藏營養(yǎng)物質(zhì)生長繁殖液體凝固劑

液體凝固劑(如瓊脂)

固體固體(3)成分成分含義作用來源碳源________________構(gòu)成生物體的細(xì)胞的物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些也是異養(yǎng)生物的能源物質(zhì)無機(jī)碳源：CO2、NaHCO3等；有機(jī)碳源：糖類、牛肉膏等氮源________________________________________無機(jī)氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機(jī)氮源：蛋白胨等提供碳元素的物質(zhì)提供氮元素的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)無機(jī)鹽為微生物提供除碳、氮之外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素為微生物提供無機(jī)營養(yǎng)，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH等無機(jī)化合物：KH2PO4、K2HPO4、NaCl等水生物體含量最高的無機(jī)化合物良好的溶劑，參與化學(xué)反應(yīng)等培養(yǎng)基、代謝產(chǎn)物特別提醒除了上述主要營養(yǎng)物質(zhì)外，還需要滿足微生物生長對(duì)__________________________的需求。例如，在培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)，需要在培養(yǎng)基中添加

；在培養(yǎng)霉菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至

；在培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至

；在培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)，需要提供

的條件。pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣維生素

酸性中性或微堿性無氧2.無菌技術(shù)(1)目的：獲得

。(2)關(guān)鍵：

。

純凈培養(yǎng)物防止外來雜菌的入侵(3)區(qū)別：消毒與滅菌的比較比較項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫和的__________方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸消毒法日常用品___________不耐高溫的液體______________操作空間、操作者的衣物和手等紫外線消毒法接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)

物理或化學(xué)巴氏消毒法化學(xué)藥物消毒法滅菌強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子_______________培養(yǎng)基、容器等____________玻璃器皿、金屬用具等____________接種工具等高壓蒸汽滅菌法干熱滅菌法灼燒滅菌法特別提醒選擇無菌技術(shù)的原則：一要考慮無菌技術(shù)的效果，滅菌的效果比消毒要好；二要考慮操作對(duì)象的承受能力，活體生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用滅菌。3.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基(1)計(jì)算①依據(jù)：配方比例②計(jì)算：配制

的培養(yǎng)基時(shí)，各種成分的用量↓(2)稱量①牛肉膏要放在

上稱量②牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱取后

及時(shí)蓋上瓶蓋↓一定體積稱量紙(3)溶化①牛肉膏連同

一同放入燒杯，加入少量水，加熱，牛

肉膏溶化后取出稱量紙②加入稱量好的

和氯化鈉，攪拌③加入

，加熱使其熔化，并不斷攪拌,④補(bǔ)加蒸餾水定容↓(4)滅菌①滅菌前：調(diào)節(jié)____②方法：

滅菌法。壓力為100kPa，溫度為121℃，滅菌時(shí)間為15～30min↓稱量紙蛋白胨瓊脂pH高壓蒸汽(5)倒平板①倒平板應(yīng)在_②滅菌方法是_③平板倒置操作需要等待平板冷卻凝固后才能進(jìn)行酒精燈火焰附近灼燒滅菌4.純化培養(yǎng)(1)方法：平板劃線法和

法。(2)菌落的概念：由

繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體。(3)平板劃線法分離純化大腸桿菌①接種在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，在搖床上___

℃下振蕩培養(yǎng)12h②劃線分離用

在接種有大腸桿菌的三角瓶中沾取菌液一次，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿③培養(yǎng)觀察將培養(yǎng)皿倒置，放在

℃恒溫箱中培養(yǎng)12～24h后，可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)_____稀釋涂布平板單個(gè)細(xì)胞37接種環(huán)37菌落(4)稀釋涂布平板法步驟①系列稀釋操作：該操作常用在將細(xì)胞接種到培養(yǎng)基之前，通過液體稀釋的方法分散細(xì)胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞得以分散。操作步驟：②涂布平板操作步驟源于選修1P18“旁欄小資料”(1)微生物的接種方法除平板劃線法和稀釋涂布平板法外，還包括_____接種、

接種等方法。(2)微生物接種的核心是

。斜面

穿刺防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度5.菌種的保藏方法主要方法臨時(shí)保藏法甘油管藏法保藏對(duì)象頻繁使用的菌種

的菌種方法步驟先接種到試管的

培養(yǎng)基上培養(yǎng)，然后放入4℃的冰箱中轉(zhuǎn)入滅菌后的

中，混勻后放在－20℃冷凍箱中保存固體斜面長期保藏甘油歸納總結(jié)兩種純化方法的比較項(xiàng)目平板劃線法稀釋涂布平板法分離結(jié)果

關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線①一系列的梯度稀釋；②涂布平板操作接種用具接種環(huán)涂布器歸納總結(jié)兩種純化方法的比較注意事項(xiàng)(1)接種環(huán)的灼燒：①第一次劃線前，避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)基；②再次劃線前，殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使每次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端；③劃線結(jié)束后，殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。(2)接種環(huán)灼燒后，要冷卻后才能接觸菌液，以免溫度太高殺死菌種。(3)劃線時(shí)用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破(1)在進(jìn)行稀釋操作時(shí)，每支試管及其中的9mL水、移液管均需滅菌；操作時(shí)，試管口和移液管應(yīng)在離酒精燈火焰1～2cm處。(2)涂布平板時(shí)：①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精消毒，取出時(shí)要讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃；②不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精；③酒精燈與培養(yǎng)皿距離要合適，移液管頭不要接觸任何其他物體歸納總結(jié)兩種純化方法的比較優(yōu)點(diǎn)可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征缺點(diǎn)不能計(jì)數(shù)操作較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延共同點(diǎn)都要用到固體培養(yǎng)基；都需進(jìn)行無菌操作；都會(huì)在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落；都可用于觀察菌落特征考向一培養(yǎng)基與無菌技術(shù)1.(2023·吉林長春高三質(zhì)檢)下表是某同學(xué)配制的一種培養(yǎng)基的配方，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是突破

強(qiáng)化關(guān)鍵能力成分蛋白胨乳糖K2HPO4伊紅美藍(lán)瓊脂含量/g10.05.02.00.412.0A.若用該培養(yǎng)基篩選土壤中的尿素分解菌時(shí)，應(yīng)將蛋白胨改成尿素B.該培養(yǎng)基含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)C.若根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基D.配制此培養(yǎng)基時(shí)先滅菌再調(diào)pH√由于蛋白胨可以提供氮源，所以用該培養(yǎng)基篩選土壤中的尿素分解菌時(shí)，需要將蛋白胨去掉，用尿素作為唯一的氮源，A正確；該培養(yǎng)基含有水、氮源(蛋白胨提供)、碳源(乳糖和蛋白胨提供)，無機(jī)鹽(K2HPO4)等營養(yǎng)物質(zhì)，B正確；從用途看此培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基，伊紅和美藍(lán)可用來鑒別大腸桿菌，C正確；配制此培養(yǎng)基時(shí)先調(diào)pH再滅菌，D錯(cuò)誤。2.請(qǐng)回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題：(1)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4顯色劑瓊脂含量10.0g5.0g5.0g2.0g0.2g12.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL該培養(yǎng)基屬于______(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的氮源是________。

固體蛋白胨在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中的蛋白胨是氮源。(2)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行_____(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和_____。

滅菌消毒滅菌是用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，所以對(duì)培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌；消毒是用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物，操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒。(3)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管扎成一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入________________中滅菌，溫度為121℃，時(shí)間為15～30min。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到大氣壓時(shí)，將試管取出。高壓蒸汽滅菌鍋將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到試管中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入高壓蒸汽滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃條件下，滅菌15～30min，若棉塞上沾有培養(yǎng)基，則培養(yǎng)基可能被污染，應(yīng)廢棄。(4)從一支試管向另一支試管接種時(shí)應(yīng)注意，接種環(huán)要在酒精燈_________________(填“火焰的不充分燃燒層”或“火焰的充分燃燒層”)滅菌，并且待接種環(huán)______后蘸取菌種。冷卻火焰的充分燃燒層酒精燈外焰(火焰的充分燃燒層)溫度更高，接種環(huán)要在酒精的外焰進(jìn)行滅菌，接種環(huán)冷卻后再蘸取菌種，以防溫度過高導(dǎo)致菌種死亡?？枷蚨⑸锏募兓?.(2023·甘肅平?jīng)龈呷M)下列關(guān)于微生物培養(yǎng)過程的說法，正確的是A.培養(yǎng)基中同一種物質(zhì)可能既做碳源又做氮源B.天然培養(yǎng)基是指直接取自自然界不需加工的培養(yǎng)基C.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放在一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上D.只有平板劃線法接種培養(yǎng)后可獲得單菌落√培養(yǎng)基中同一種物質(zhì)可能既做碳源又做氮源，如牛肉膏和蛋白胨，A正確；天然培養(yǎng)基是成分不明確的培養(yǎng)基，并不是不需加工配制的培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，防止雜菌污染，C錯(cuò)誤；無論用平板劃線法還是稀釋涂布平板法接種，在培養(yǎng)后均可獲得單菌落，D錯(cuò)誤。4.鯨死亡后會(huì)沉入海底，俗稱“鯨落”。“鯨落”后期會(huì)形成一個(gè)以厭氧菌和硫細(xì)菌等為主體的生態(tài)系統(tǒng)。厭氧菌以“鯨落”肌肉中的脂肪為食，同時(shí)產(chǎn)生一些硫化氫等硫化物。硫細(xì)菌將硫化物氧化成硫酸鹽，并以該過程中釋放的能量合成有機(jī)物。請(qǐng)回答相關(guān)問題：(1)在分離“鯨落”中的微生物時(shí)要制備固體培養(yǎng)基，在倒平板操作后，將平板倒置，這樣做的目的是______________________________________________________________________。

防止培養(yǎng)皿皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)皿造成污染；防止培養(yǎng)基水分蒸發(fā)過快(2)為了研究“鯨落”中含有微生物的情況，需將“鯨落”提取物加水稀釋，然后將稀釋水樣用涂布器分別涂布到固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，這種方法稱為________________。下面所示的四種菌落分布情況中，不可能由該方法得到的是___。稀釋涂布平板法D使用涂布器涂布接種微生物的方法為稀釋涂布平板法。稀釋涂布平板法接種的微生物會(huì)在培養(yǎng)基上形成均勻分布的菌落，而平板劃線法接種的微生物在劃線的起始部分菌落連在一起生長，由圖可知，A、B、C均形成了均勻分布的單個(gè)菌落，屬于稀釋涂布平板法接種的，而D中菌落是連在一起生長的，是通過平板劃線法接種的。(3)若想得到“鯨落”中某目標(biāo)菌種，可用平板劃線法進(jìn)行純化。若下圖甲是接種培養(yǎng)后的菌落分布圖，對(duì)應(yīng)的平板劃線操作示意圖為_____。圖甲中的③更易獲得單菌落，判斷依據(jù)是___________________________________________________________________________。丙

每次劃線的菌種都來自上一次劃線的末端，最后一次劃線結(jié)束時(shí)更容易獲得單菌落考點(diǎn)二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)1.區(qū)分選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基歸納

夯實(shí)必備知識(shí)種類特點(diǎn)用途舉例選擇培養(yǎng)基允許

，同時(shí)_______________________________從眾多微生物中分離所需的微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，進(jìn)而產(chǎn)生特定的顏色或其他變化鑒別不同種類的微生物用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌特定種類的微生物生長

抑制或阻止其他種類微生物生長特別提醒常見選擇培養(yǎng)基舉例：①缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。②含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。③無有機(jī)碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。2.微生物的數(shù)量測定方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(2)間接計(jì)數(shù)法——活菌計(jì)數(shù)法(即稀釋涂布平板法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。根據(jù)圖示回答以下問題：①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在

的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。②為什么用此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低？30～300提示因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。③某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測得平板上菌落數(shù)的平均值為234個(gè)(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)，那么稀釋倍數(shù)為106的試管中細(xì)菌的濃度是

個(gè)/mL，稀釋倍數(shù)為10的錐形瓶中細(xì)菌的濃度為__________個(gè)/mL，所以每克樣品中的細(xì)菌數(shù)是

個(gè)。2.34×1032.34×1032.34×1093.土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)操作(1)實(shí)驗(yàn)原理脲酶尿素(2)實(shí)驗(yàn)流程3～830～300稀釋涂布平板30～37菌落數(shù)目穩(wěn)定(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)對(duì)照的培養(yǎng)皿中無菌落生長對(duì)照的培養(yǎng)皿中有菌落生長30～300考向一微生物的選擇培養(yǎng)5.(2023·河南駐馬店高三質(zhì)檢)幽門螺桿菌(Hp)尿素呼氣試驗(yàn)是用同位素標(biāo)記的尿素做呼氣試驗(yàn)檢測幽門螺桿菌感染的方法，其原理為利用幽門螺桿菌有活性很高的脲酶這一特點(diǎn)。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，按如下步驟進(jìn)行分離培養(yǎng)。突破

強(qiáng)化關(guān)鍵能力下列敘述錯(cuò)誤的是A.在培養(yǎng)過程中需將培養(yǎng)皿倒置，若不倒置培養(yǎng)，將導(dǎo)致無法形成單菌落B.在培養(yǎng)基加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有脲酶，它能以尿素

作為氮源；若有Hp，則菌落變黑C.Hp能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和14CO2，臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測

人體是否感染HpD.在無菌條件下操作時(shí)，待平板冷凝后先將菌液稀釋，然后將菌液涂布

到培養(yǎng)基平面上，菌液稀釋的目的是為了獲得單菌落√在培養(yǎng)時(shí)，需將培養(yǎng)皿倒置，若不倒置培養(yǎng)，皿蓋上的冷凝水會(huì)滴入培養(yǎng)基，將導(dǎo)致單菌落無法形成，同時(shí)培養(yǎng)基會(huì)被污染，A正確；在配制培養(yǎng)基時(shí)，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因?yàn)镠p含有脲酶，它能以尿素作為氮源；若有Hp，則會(huì)產(chǎn)生脲酶，將尿素分解為氨，pH升高，遇酚紅指示劑變紅色，B錯(cuò)誤；臨床上用14C呼氣試驗(yàn)檢測人體是否感染Hp，其基本原理是Hp產(chǎn)生的脲酶能將14C標(biāo)記的尿素分解為NH3和14CO2，C正確。6.高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。研究者從熱泉中篩選高效產(chǎn)生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選過程如圖1所示。將得到的菌懸液轉(zhuǎn)接于同時(shí)含有葡萄糖和淀粉作碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用碘液作顯色處理，得到如圖2所示情況。下列敘述不正確的是A.過程①②合稱為稀釋涂布平板法B.甲、乙試管中的液體均為選擇培

養(yǎng)基C.Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上的接種方法為平板劃線法D.圖2中周圍不顯藍(lán)色的菌落含有所需菌種√根據(jù)Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上菌落分布均勻，可知過程①②為稀釋涂布平板法，A正確；甲、乙試管中的液體用于樣品稀釋，應(yīng)為無菌水，B錯(cuò)誤；由Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上的劃線區(qū)域可知，Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上的接種方法是平板劃線法，C正確；淀粉與碘液反應(yīng)呈藍(lán)色，能產(chǎn)淀粉酶的菌落可將周圍的淀粉水解，因此周圍不顯藍(lán)色的菌落含有所需菌種，D正確。考向二分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)7.(2023·吉林通化高三模擬)飼養(yǎng)動(dòng)物常用的植物飼料中含有難溶的植酸鈣等物質(zhì)，很難被動(dòng)物吸收利用，并且影響其他營養(yǎng)物質(zhì)的利用。若在飼料中添加植酸酶，則能催化植酸鈣水解成為可以被吸收利用的磷酸鹽等。如圖是科研人員從作物根部土壤中分離產(chǎn)植酸酶的菌株的過程示意圖。請(qǐng)分析回答問題：(1)實(shí)驗(yàn)室中篩選微生物的原理是______________________________________________________________________。配制培養(yǎng)基時(shí)各種成分在溶化后分裝前必須_________。

人為提供有利于目的菌株生長的條件，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(合理即可)調(diào)節(jié)pH(2)現(xiàn)將從100mL含有產(chǎn)植酸酶菌的土壤樣品溶液中取出的1mL樣品溶液稀釋104倍后，取0.1mL稀釋液均勻涂布在選擇培養(yǎng)基表面，測得菌落數(shù)的平均值為150，空白對(duì)照組平板上未出現(xiàn)菌落，則100mL原菌液中含有產(chǎn)植酸酶菌________個(gè)，該方法的測量值與實(shí)際值相比一般會(huì)______(填“偏大”“偏小”或“相等”)。1.5×109偏小100mL原菌液中含有產(chǎn)植酸酶菌(150÷0.1)×104×100＝1.5×109(個(gè))，因?yàn)閮蓚€(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，因此，稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目偏小?？键c(diǎn)三分解纖維素的微生物的分離土壤中分解纖維素的細(xì)菌的分離(1)纖維素酶組成及作用歸納

夯實(shí)必備知識(shí)纖維二糖(2)纖維素分解菌的篩選紅色復(fù)合物透明圈剛果紅透明圈纖維素(3)實(shí)驗(yàn)流程纖維素選擇培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌(源于選修1P28“旁欄思考”)在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌的原因是_________________________________________________________________________________________________________________________________。

由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)較高，從這種土樣中獲得目的微生物的概率要高于普通環(huán)境微生物的篩選與鑒別方法歸納總結(jié)(1)微生物的篩選方法單菌落挑取法利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養(yǎng)基表面，直接根據(jù)微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物選擇培養(yǎng)法利用選擇培養(yǎng)基對(duì)微生物進(jìn)行選擇培養(yǎng)，直接獲得目的微生物鑒定培養(yǎng)法利用鑒別培養(yǎng)基使目的微生物菌落呈現(xiàn)特有的特征，然后篩選目的微生物微生物的篩選與鑒別方法歸納總結(jié)(2)微生物的鑒別方法菌落特征鑒別法根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別指示劑鑒別法如培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種微生物后，培養(yǎng)基變紅說明該種微生物能夠分解尿素染色鑒別法如利用剛果紅染色法，根據(jù)培養(yǎng)基中出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈來鑒別分解纖維素的微生物考向分解纖維素的微生物的分離8.科學(xué)家從羊等食草動(dòng)物胃中篩選纖維素分解菌，并對(duì)其降解纖維素的能力進(jìn)行了研究。請(qǐng)回答下列問題：(1)若科學(xué)家在___________________平板上，發(fā)現(xiàn)以某種菌的菌落為中心的透明圈，則表明此種菌為纖維素分解菌。突破

強(qiáng)化關(guān)鍵能力纖維素剛果紅培養(yǎng)基(2)在纖維素分解菌的培養(yǎng)過程中應(yīng)保持恒溫箱中的溫度約為_____(填“4℃”“20℃”或“35℃”)?？茖W(xué)家采用稀釋涂布平板法分離、純化纖維素分解菌。在實(shí)驗(yàn)前，需要使用_____________法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌；在接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，目的是____________________________。35℃高壓蒸汽滅菌檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格4℃、20℃、35℃三個(gè)溫度中，35℃最接近纖維素分解菌的生活環(huán)境——羊胃的溫度，故培養(yǎng)過程中應(yīng)保持恒溫培養(yǎng)箱中的溫度約為35℃。(3)在接種的過程中，需要使用________(填“接種環(huán)”或“涂布器”)進(jìn)行接種?？茖W(xué)家欲將篩選得到的纖維素分解菌進(jìn)行大量培養(yǎng)，應(yīng)選用______(填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基，并以________為唯一碳源，配制此培養(yǎng)基時(shí)，______(填“能”或“不能”)使用牛肉膏作為氮源。涂布器液體纖維素不能科學(xué)家采用稀釋涂布平板法分離、純化纖維素分解菌，故需要使用涂布器進(jìn)行接種。四重溫高考真題演練1.(2020·全國Ⅰ，37)某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的有機(jī)物)難以降解，會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、水和S，乙的組分為無機(jī)鹽、水、S和Y。12341234回答下列問題：(1)實(shí)驗(yàn)時(shí)，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用_____________的方法進(jìn)行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是_____。甲、乙培養(yǎng)基均屬于______培養(yǎng)基。高壓蒸汽滅菌瓊脂

選擇乙培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，因此培養(yǎng)基中加入的是可使液體培養(yǎng)基凝固的瓊脂。甲、乙兩種培養(yǎng)基都是為了分離出可降解S的細(xì)菌，因此是選擇培養(yǎng)基。1234(2)實(shí)驗(yàn)中初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個(gè)/mL，若要在每個(gè)平板上涂布100μL稀釋后的菌液，且保證每個(gè)平板上長出的菌落數(shù)不超過200個(gè)，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋____倍。104設(shè)稀釋倍數(shù)為A,1mL＝1000μL，套用計(jì)算式：A×＝2×107(個(gè)/mL)，計(jì)算出A＝104。1234(3)在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時(shí)，某菌株對(duì)S的降解量反而下降，其原因可能是____________________________________(答出1點(diǎn)即可)。S的濃度超過某一值時(shí)會(huì)抑制菌株的生長在篩選降解S物質(zhì)的細(xì)菌的過程中，如果培養(yǎng)基中的S濃度過高，會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌培養(yǎng)基的滲透壓增大，細(xì)菌失水而代謝活性降低，對(duì)S的降解量反而下降(或者S改變了培養(yǎng)基的pH，導(dǎo)致細(xì)菌代謝活性降低)。1234(4)若要測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)，請(qǐng)寫出主要實(shí)驗(yàn)步驟：_____

__________________________________________________________。泥加入無菌水中，涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計(jì)數(shù)取淤測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)的主要步驟是①淤泥取樣，即取少量的淤泥加入無菌水中；②用稀釋涂布平板法涂布到乙培養(yǎng)基上；③微生物培養(yǎng)與觀察計(jì)數(shù)。1234(5)上述實(shí)驗(yàn)中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即________________________。水、碳源、氮源和無機(jī)鹽2.(2019·全國Ⅰ，37)已知一種有機(jī)物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會(huì)造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細(xì)菌(目標(biāo)菌)。Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X(5g/L)。Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(15g/L)。Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(45g/L)?；卮鹣铝袉栴}：(1)在Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基中，為微生物提供氮源的是_______________。Ⅱ、Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機(jī)物是____。1234牛肉膏、蛋白胨X牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，牛肉膏、蛋白胨為微生物生長提供了氮源，而Ⅱ、Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基中除X外的其他物質(zhì)均不含碳，所以能為微生物提供碳源的有機(jī)物是X。1234(2)若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號(hào)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，不能降解X的細(xì)菌比例會(huì)______，其原因是_______________________________________________________________。1234

不能降解X的細(xì)菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的細(xì)菌能夠增殖下降因?yàn)棰蛱?hào)培養(yǎng)基中碳源只有X，屬于選擇培養(yǎng)基，只有能降解X的細(xì)菌才能增殖，而不能降解X的細(xì)菌因缺乏碳源不能增殖。(3)Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標(biāo)菌并對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，接種時(shí)，應(yīng)采用的方法是______________。(4)假設(shè)從Ⅲ號(hào)培養(yǎng)基中得到了能高效降解X的細(xì)菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供_____和___________________。1234稀釋涂布平板法合成其他物質(zhì)的原料能量3.(2022·河北，23)番茄灰霉病菌嚴(yán)重影響番茄生產(chǎn)，枯草芽孢桿菌可以產(chǎn)生對(duì)多種病原菌具有抑制作用的蛋白質(zhì)。為探究枯草芽孢桿菌能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者設(shè)計(jì)了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。回答下列問題：(1)檢測枯草芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病菌的抑制作用時(shí)，取適量_____________菌液涂布于固體培養(yǎng)基上，將無菌濾紙片(直徑5mm)在____________菌液中浸泡后覆蓋于固體培養(yǎng)基中心，數(shù)秒后取出濾紙片，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)后測量_______大小以判定抑菌效果。1234枯草芽孢桿菌番茄灰霉病菌透明圈1234要檢測枯草芽孢桿菌對(duì)番茄灰霉病菌的抑制作用，先把適量的番茄灰霉病菌菌液涂布于固體培養(yǎng)基上，將無菌濾紙片在枯草芽孢桿菌菌液中浸泡后覆蓋于固體培養(yǎng)基中心，若對(duì)番茄灰霉病菌有抑制作用，被覆蓋的位置的番茄灰霉病菌就會(huì)被殺死，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)后會(huì)出現(xiàn)透明圈，測量透明圈大小以判定抑菌效果強(qiáng)弱。(2)枯草芽孢桿菌為好氧微生物，液體培養(yǎng)時(shí)應(yīng)采用__________(填“靜置”或“搖床震蕩”)培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中抽樣檢測活菌數(shù)量時(shí)，應(yīng)采用_______________(填“稀釋涂布平板法”或“顯微鏡直接計(jì)數(shù)法”)，其原因是__________________________________________________________________________________________________________________。1234搖床震蕩稀釋涂布平板法

用稀釋涂布平板法在培養(yǎng)基上看到的每一個(gè)菌落都來自一個(gè)活細(xì)胞，而顯微鏡直接計(jì)數(shù)法會(huì)將死亡的枯草芽孢桿菌也計(jì)算在內(nèi)1234枯草芽孢桿菌為好氧微生物，采用搖床震蕩培養(yǎng)可增大培養(yǎng)液的溶氧量，有利于枯草芽孢桿菌的生長繁殖。培養(yǎng)過程中要抽樣檢測活菌數(shù)量，應(yīng)該采用稀釋涂布平板法，用稀釋涂布平板法在培養(yǎng)基上看到的每一個(gè)菌落都來自一個(gè)活細(xì)胞，而顯微鏡直接計(jì)數(shù)法會(huì)將死亡的酵母菌也計(jì)算在內(nèi)。(3)電泳分離蛋白質(zhì)混合樣品的原理是__________________________________________________________________________________________________________________________________。利用SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳測定枯草芽孢桿菌的抗菌蛋白分子量時(shí)，SDS的作用是______________________________________________________________________________________________________________________。1234

利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異及分子本身的大小、形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離SDS帶有大量的負(fù)電荷，且能使蛋白質(zhì)變性成為肽鏈，使蛋白質(zhì)的遷移速率只與蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量有關(guān)，而與所帶電荷性質(zhì)無關(guān)(4)枯草芽孢桿菌長期保藏時(shí)，常以其_____作為保藏對(duì)象。1234菌液長期保藏枯草芽孢桿菌，應(yīng)該將培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到滅菌的甘油瓶中，與甘油充分混合，放在－20℃的冷凍箱中保存。4.(2022·全國甲，37)某同學(xué)從被石油污染的土壤中分離得到A和B兩株可以降解石油的細(xì)菌，在此基礎(chǔ)上采用平板培養(yǎng)法比較二者降解石油的能力，并分析兩個(gè)菌株的其他生理功能。實(shí)驗(yàn)所用的培養(yǎng)基成分如下：培養(yǎng)基Ⅰ：K2HPO4、MgSO4、NH4NO3、石油。培養(yǎng)基Ⅱ：K2HPO4、MgSO4、石油。1234操作步驟：①將A、B菌株分別接種在兩瓶液體培養(yǎng)基Ⅰ中培養(yǎng)，得到A、B菌液；②液體培養(yǎng)基Ⅰ、Ⅱ中添加瓊脂，分別制成平板Ⅰ、Ⅱ，并按圖中所示在平板上打甲、乙兩孔?；卮鹣铝袉栴}：(1)實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基中作為碳源的成分是______。培養(yǎng)基中NH4NO3的作用是為菌株的生長提供氮源，氮源在菌體內(nèi)可以參與合成____________________(答出2種即可)等生物大分子。1234石油DNA、RNA、蛋白質(zhì)1234培養(yǎng)基的成分有碳源、氮源、無機(jī)鹽和水等，從組成培養(yǎng)基的物質(zhì)所含化學(xué)元素可知，作為碳源的成分是石油。生物大分子DNA、RNA、蛋白質(zhì)都含有N元素，故氮源在菌體內(nèi)可以參與合成這些物質(zhì)。(2)步驟①中，在資源和空間不受限制的階段，若最初接種N0個(gè)A細(xì)菌，繁殖n代后細(xì)菌的數(shù)量是________。1234N0·2n由題意“資源和空間不受限制”可知，細(xì)菌的增殖呈“J”型曲線，由于DNA的半保留復(fù)制，細(xì)菌每繁殖一代就是上一代的2倍，根據(jù)公式Nt＝N0·λt，λ＝2，繁殖n代后細(xì)菌的數(shù)量是N0·2n。(3)為了比較A、B降解石油的能力，某同學(xué)利用步驟②所得到的平板Ⅰ、Ⅱ進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表所示(“＋”表示有透明圈，“＋”越多表示透明圈越大，“－”表示無透明圈)，推測該同學(xué)的實(shí)驗(yàn)思路是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。1234菌株透明圈大小平板Ⅰ平板ⅡA＋＋＋＋＋B＋＋－

在無菌條件下，將等量等濃度的A菌液和B菌液分別接種到平板Ⅰ的甲和乙兩孔處，平板Ⅱ也進(jìn)行同樣的操作，在相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，比較兩個(gè)平板的兩孔處的透明圈大小并作記錄，根據(jù)透明圈大降解能力強(qiáng)，透明圈小降解能力弱，進(jìn)而比較A、B降解石油的能力1234分析表格數(shù)據(jù)可知，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是：在平板Ⅰ上，A菌株降解石油的能力高于B菌株；在平板Ⅱ上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，根據(jù)實(shí)驗(yàn)的單一變量和對(duì)照原則，推測該同學(xué)的思路是：在無菌條件下，將等量等濃度的A菌液和B菌液分別接種到平板Ⅰ的甲和乙兩孔處，平板Ⅱ也進(jìn)行同樣的操作，在相同且適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，比較兩個(gè)平板的兩孔處的透明圈大小并作記錄，根據(jù)透明圈大降解能力強(qiáng)，透明圈小降解能力弱，進(jìn)而比較A、B降解石油的能力。(4)現(xiàn)有一貧氮且被石油污染的土壤，根據(jù)上表所示實(shí)驗(yàn)結(jié)果，治理石油污染應(yīng)選用的菌株是____，理由是_______________________________________________________________________。1234AA菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在沒有添加氮源的培養(yǎng)基中也能生長菌株透明圈大小平板Ⅰ平板ⅡA＋＋＋＋＋B＋＋－1234由表格數(shù)據(jù)可知，在平板Ⅱ(無氮源的培養(yǎng)基)上，A菌株仍然能降解石油，而B菌株不能降解，所以要治理貧氮且被石油污染的土壤，應(yīng)該選用A菌株，因?yàn)锳菌株降解石油的能力高于B菌株，并且在沒有添加氮源的培養(yǎng)基中也能生長。菌株透明圈大小平板Ⅰ平板ⅡA＋＋＋＋＋B＋＋－√五分鐘查落實(shí)×一、易錯(cuò)辨析1.消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害(

)2.倒平板就是等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置(

)3.倒平板時(shí)，應(yīng)將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(

)4.為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(

)5.分解尿素的細(xì)菌在分解尿素時(shí)，可以將尿素轉(zhuǎn)化為氨，使得培養(yǎng)基的酸堿度降低(

)×××二、填空默寫1.(選修1P14)培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括

等。2.(選修1P15)獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵是

，無菌技術(shù)除了用來

外，還能

。3.(選修1P15)消毒是指____________________________________________________________。4.(選修1P15)滅菌是指__________________________________________________________。水、無機(jī)鹽、碳源、氮源防止外來雜菌的入侵防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染有效避免操作者自身被微生物感染

使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物

使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子5.(選修1P18)菌落是指

。采用

法和

法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。6.(選修1P22)選擇培養(yǎng)基是指_____________________________________________________________________________________。7.(選修1P17)平板冷凝后，要將平板倒置的原因是_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體平板劃線

稀釋涂布平板

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基

平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以減少培養(yǎng)基中的水分過快地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染8.(選修1P18)操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了_________________________________________；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了___________________________________________________________________________________________________，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能__________________________________________________________。9.(選修1P18)在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃線的原因是______________________________。

避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物

殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種10.(選修1P18)在第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線的原因是_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。11.(選修1P22)當(dāng)_______________________________________________________，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。12.(選修1P22)除活菌計(jì)數(shù)法外，

直接計(jì)數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法。

劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落

兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落顯微鏡13.(選修1P22)絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以

作為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。14.(選修1P25)檢測培養(yǎng)物中是否有雜菌污染的方法是___________________________________________________。判斷選擇培養(yǎng)基是否起到篩選作用的方法是___________________________________________________________________________________________________。尿素同時(shí)培養(yǎng)滅菌后的未接種的培養(yǎng)基，觀察是否有菌落產(chǎn)生

配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照，觀察選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)是否遠(yuǎn)少于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目五課時(shí)精練一、選擇題1.(2023·南通高三模擬)取9個(gè)潔凈培養(yǎng)皿，均分為三組(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，各組分別加入等量的不同培養(yǎng)基，每個(gè)平板均接種0.1mL大腸桿菌菌液，37℃培養(yǎng)36h后，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)(見下表)。1234567891011組別培養(yǎng)基各平板的菌落數(shù)123Ⅰ瓊脂、C6H12O6、NH4NO3303127Ⅱ瓊脂、C6H12O6、NH4NO3、維生素169178193Ⅲ瓊脂、NH4NO3、維生素001下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是A.Ⅰ組和Ⅱ組結(jié)果說明維生素可以促進(jìn)大腸桿菌生長繁殖B.Ⅱ組和Ⅲ組結(jié)果說明大腸桿菌正常生長需要葡萄糖C.三組實(shí)驗(yàn)均采用了稀釋涂布平板法，以便菌落計(jì)數(shù)D.三組實(shí)驗(yàn)所使用的培養(yǎng)基均需62℃、30min滅菌√12345678910111234567891011Ⅰ組和Ⅱ組培養(yǎng)基成分的差異是有無維生素，結(jié)果說明維生素可以促進(jìn)大腸桿菌的生長繁殖，A正確；Ⅱ組和Ⅲ組的差異是有無葡萄糖，結(jié)果說明沒有葡萄糖大腸桿菌不能正常生長，B正確；采用稀釋涂布平板法接種大腸桿菌便于菌落計(jì)數(shù)，C正確；將培養(yǎng)基加熱到62℃不能徹底滅菌，應(yīng)采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，D錯(cuò)誤。2.(2023·甘肅酒泉高三調(diào)研)下列有關(guān)消毒和滅菌的說法，錯(cuò)誤的是A.水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過氯氣消毒的B.使用高壓蒸汽滅菌鍋時(shí)，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相

應(yīng)溫度，最可能的原因是未將鍋內(nèi)冷空氣排盡C.玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具不可以放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌D.牛奶的消毒常采用巴氏消毒法，不僅可以達(dá)到消毒目的，同時(shí)營養(yǎng)物

質(zhì)損失較少√12345678910111234567891011水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過氯氣消毒的，因?yàn)槁葰馊苡谒纱温人?，次氯酸能殺死水里的?xì)菌，同時(shí)氯氣具有極強(qiáng)揮發(fā)性，不至于對(duì)人體造成較大的傷害，A正確；玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具可以放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌，C錯(cuò)誤。12345678910113.在純化培養(yǎng)的過程中，關(guān)于倒平板的描述正確的是A.等培養(yǎng)基冷卻至40℃左右時(shí)，方可進(jìn)行倒平板B.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在桌面上，打開培養(yǎng)皿蓋C.等待平板冷卻5～10s，將平板倒過來放置D.倒平板后無需將培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌√1234567891011等培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，在酒精燈火焰附近倒平板，防止雜菌污染，A項(xiàng)錯(cuò)誤；用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不能打開皿蓋，B項(xiàng)錯(cuò)誤；等待平板冷卻凝固后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上，C項(xiàng)錯(cuò)誤；滅菌應(yīng)在倒平板之前進(jìn)行，D項(xiàng)正確。4.如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5，下列操作方法錯(cuò)誤的是A.每次劃線操作后要將接種環(huán)放在火焰上灼燒滅菌B.劃線操作應(yīng)在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行C.第3次劃線操作可從第2次開始劃出，也可從第1次開始D.在第4次劃線區(qū)域中也可以得到菌落√1234567891011結(jié)合題干信息，劃線的順序?yàn)?、2、3、4、5，平板劃線過程要保證每次劃線的菌種來自上一次劃線的末端，C錯(cuò)誤。5.(2023·云南昭通高三模擬)汞污染對(duì)環(huán)境和人類危害極大，有些微生物對(duì)其具有抗性，可用于修復(fù)受汞污染的環(huán)境。某科研小組從土壤中分離純化出一株高抗汞細(xì)菌，它具有對(duì)汞污染環(huán)境的生物修復(fù)的應(yīng)用能力。培養(yǎng)基成分：氯化鈉(10g/L)、酵母浸粉(5g/L)、蛋白胨(10g/L)、20mg/L的氯化汞溶液、瓊脂，上述成分按一定比例配制。下列敘述錯(cuò)誤的是A.為了快速獲得高抗汞細(xì)菌，應(yīng)從重金屬污染的土壤中分離純化B.蛋白胨為高抗汞細(xì)菌提供的主要營養(yǎng)為碳源、氮源和維生素C.為了純化并計(jì)數(shù)高抗汞細(xì)菌，常用平板劃線法D.平板劃線純化培養(yǎng)時(shí)，在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端

開始劃線√12345678910111234567891011蛋白胨來源于生物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)，故蛋白胨為高抗汞細(xì)菌提供的主要營養(yǎng)為碳源、氮源和維生素，B正確；平板劃線法不能用于細(xì)菌計(jì)數(shù)，為了純化并計(jì)數(shù)高抗汞細(xì)菌常用稀釋涂布平板法，C錯(cuò)誤。6.(2023·寧夏銀川高三期中)漆酶屬于木質(zhì)素降解酶類，在環(huán)境修復(fù)、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)等領(lǐng)域有著廣泛用途。下圖是分離、純化和保存漆酶菌株的過程，下列相關(guān)敘述不正確的是A.生活污水中含有大量微生物，是

分離產(chǎn)漆酶菌株的首選樣品B.選擇培養(yǎng)基中需要加入漆酶的底

物，通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落C.在涂布平板上長出的菌落，再通過劃線進(jìn)一步純化D.斜面培養(yǎng)基中含有大量營養(yǎng)物質(zhì)，可在適宜溫度下臨時(shí)保存菌株1234567891011√1234567891011漆酶能降解木質(zhì)素，則漆酶菌株多存在于木質(zhì)素豐富的場所，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有產(chǎn)漆酶的菌株，A錯(cuò)誤；產(chǎn)漆酶菌株可降解木質(zhì)素，在選擇培養(yǎng)基中加入木質(zhì)素可篩選產(chǎn)漆酶的菌株，篩選時(shí)可通過菌落特征挑出產(chǎn)漆酶的菌落，B正確；短期保存可利用試管斜面培養(yǎng)基，在4℃冰箱中保藏，長期保存菌株是在－20℃用甘油管藏，D正確。1234567891011二、非選擇題7.為了檢測牛奶中是否含有某種微生物，配制的培養(yǎng)基的配方如下，請(qǐng)分析回答下列問題(注：伊紅美藍(lán)是由兩種染色劑組成的細(xì)胞染料)：蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4伊紅美藍(lán)蒸餾水10g5g5g2g0.4g0.065g1000mL將培養(yǎng)基pH調(diào)至7.2(1)根據(jù)配方，該培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)______(填“細(xì)菌”“霉菌”或“細(xì)菌與霉菌”)，其所含氮源的功能是__________________________。細(xì)菌主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸1234567891011蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4伊紅美藍(lán)蒸餾水10g5g5g2g0.4g0.065g1000mL將培養(yǎng)基pH調(diào)至7.2(2)該微生物在同化作用上的代謝類型是______型，其在培養(yǎng)基上產(chǎn)生的單個(gè)菌落在生態(tài)學(xué)中被稱為______。(3)接種好的培養(yǎng)皿在恒溫箱中培養(yǎng)時(shí)要倒置，目的是___________________________________________。種群異養(yǎng)防止冷凝水滴落在培養(yǎng)基上；避免水分過快蒸發(fā)1234567891011(4)有同學(xué)為統(tǒng)計(jì)消毒后的牛奶中該微生物的含量，取5mL牛奶樣液進(jìn)行了下圖操作，每個(gè)平板中的統(tǒng)計(jì)結(jié)果為87、83、85，則經(jīng)過消毒后的牛奶中該微生物的含量大約是________________個(gè)·mL－1。用該方法統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)時(shí)_____(填“是”或“否”)需要設(shè)置空白對(duì)照組，目的是__________________________。85000(8.5×104)是用于判斷培養(yǎng)基是否被污染1234567891011由圖可知，牛奶樣液稀釋了103倍，則消毒后牛奶中每毫升含細(xì)菌數(shù)為(87＋83＋85)÷3÷1×103＝8.5×104(個(gè))。統(tǒng)計(jì)樣本菌落數(shù)的該方法叫稀釋涂布平板法，統(tǒng)計(jì)樣本菌落時(shí)，需要設(shè)置空白對(duì)照，目的是用于判斷培養(yǎng)基是否被污染。8.下表為某生物興趣小組的同學(xué)在培養(yǎng)某種微生物時(shí)制定的培養(yǎng)基組分，回答下列問題：1234567891011KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2OKNO3蒸餾水1.4g2.1g0.2g2.0g定容至100mL(1)該培養(yǎng)基缺少的營養(yǎng)成分是_____，只能用來培養(yǎng)_______微生物，若要分離土壤中的尿素分解菌，對(duì)該培養(yǎng)基中的成分需進(jìn)行的調(diào)整是___________________________________。加入尿素、葡萄糖、瓊脂，去掉KNO3碳源自養(yǎng)型1234567891011分析表格中的成分可知，該培養(yǎng)基的成分缺少碳源，只能用來培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物，若要分離土壤中的尿素分解菌，需要使用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，且需要加入不含氮元素的碳源(葡萄糖)和瓊脂，同時(shí)去掉表中含氮物質(zhì)KNO3。KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2OKNO3蒸餾水1.4g2.1g0.2g2.0g定容至100mL1234567891011KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2OKNO3蒸餾水1.4g2.1g0.2g2.0g定容至100mL(2)在接種前，某同學(xué)隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，結(jié)果發(fā)現(xiàn)空白平板上出現(xiàn)了5個(gè)菌落，請(qǐng)分析兩種可能的原因：_______

_______________________________。培養(yǎng)基滅菌不合格；倒平板過程中被污染培養(yǎng)基配制完成后需要先進(jìn)行滅菌，然后檢測是否滅菌合格，方法為取若干滅菌后的空白平板在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間，如果平板上出現(xiàn)菌落，說明培養(yǎng)基滅菌不合格或者在倒平板過程中被污染。1234567891011(3)某同學(xué)取10g土壤樣品加90mL無菌水制成稀釋液，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為105的溶液中取0.1mL接種到3個(gè)正常的細(xì)菌培養(yǎng)基上，該過程需要使用的接種工具是_______，培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)出平板上的細(xì)菌菌落數(shù)分別為156、178和191，則每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量約為_________個(gè)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是_________________________________________________________。涂布器1.75×108

當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落1234567891011根據(jù)題意可知，該同學(xué)用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，因此接種工具為涂布器，培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)出平板上的細(xì)菌菌落數(shù)分別為156、178和191，則每克土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)量約為(156＋178＋191)÷3×105÷0.1＝1.75×108(個(gè))。稀釋涂布平板法是根據(jù)菌落數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)的，當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，因此導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。9.(2023·四川宜賓高三模擬)某生物興趣小組的同學(xué)計(jì)劃調(diào)查某快餐店的冰塊中大腸桿菌的含量。具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：第一步：配制培養(yǎng)基(成分：蛋白胨、氯化鈉、乳糖、水、X和Y)。第二步：制作無菌平板(含成分Y)。第三步：設(shè)置空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，對(duì)照組接種①，實(shí)驗(yàn)組接種②。第四步：將各組平板置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)一段時(shí)間，統(tǒng)計(jì)各組平板上菌落的平均數(shù)。1234567891011回答下列問題：(1)培養(yǎng)基中的乳糖可以為大腸桿菌提供_______。為了方便大腸桿菌的鑒定，需要在培養(yǎng)基中添加成分X__________，在該培養(yǎng)基表面，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)_______(填顏色)。為了完成步驟二，該培養(yǎng)基中的成分Y通常是______。1234567891011碳源伊紅美藍(lán)黑色瓊脂乳糖是糖類物質(zhì)，不含氮元素，所以培養(yǎng)基中的乳糖可為大腸桿菌提供碳源。鑒定大腸桿菌時(shí)，常使用伊紅美藍(lán)試劑，菌落出現(xiàn)的顏色是黑色。所以在培養(yǎng)基中添加的成分X是伊紅美藍(lán)。制作無菌平板是制作固體培養(yǎng)基，所以該培養(yǎng)基中還應(yīng)加入瓊脂，即成分Y是瓊脂。1234567891011(2)完善步驟三，①是___________，②是__________________________。1234567891011適量無菌水

取自該快餐店的等量冰塊水本實(shí)驗(yàn)是調(diào)查某快餐店的冰塊中大腸桿菌的含量，故實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組應(yīng)接種適量無菌水，實(shí)驗(yàn)組應(yīng)接種取自該快餐店的等量冰塊水。(3)在純化大腸桿菌前，將滅菌后的空平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，目的是___________________________。劃線的某個(gè)平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域長滿了菌落，第二劃線區(qū)域卻無菌落產(chǎn)生，可能的原因是__________________________________________________________。1234567891011接種環(huán)灼燒后未冷卻便進(jìn)行劃線(或劃線未從第一區(qū)域末端開始)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，常在純化大腸桿菌前，將滅菌后的空平板先培養(yǎng)一段時(shí)間，若平板上有菌落生長，說明滅菌不合格。接種環(huán)在平板內(nèi)的每一次劃線前，都要先灼燒滅菌冷卻后再劃線，而且要從上一次劃線末端而非空白處劃線，若不冷卻會(huì)燙死上次劃線末端的菌株，使以后的劃線處沒有菌落生長，若從空白處劃線也不會(huì)有菌落生長。1234567891011(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長速度快。分析其原因是振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中__