2023學(xué)年完整公開課版瘧原蟲檢驗(yàn)

學(xué)習(xí)單元12：瘧原蟲的檢驗(yàn)?zāi)夸?Contents0102030405形態(tài)生活史致病性與免疫性實(shí)驗(yàn)室診斷流行與防治檢驗(yàn)技師考試大綱——瘧原蟲0102030405形態(tài)生活史致病性與免疫性實(shí)驗(yàn)室診斷流行與防治（熟練掌握）（掌握）（了解）（熟練掌握）（了解）案例患者江某，廣西務(wù)工一年歸來，間歇性反復(fù)寒戰(zhàn)、高熱二個(gè)月，指甲、黏膜、臉色蒼白，經(jīng)血常規(guī)檢查后發(fā)現(xiàn)其紅細(xì)胞偏低，白細(xì)胞明顯升高，脾明顯腫大，考慮可能患有血液病，取血清作瘧原蟲抗原ELISA，陽(yáng)性。采血作薄血片姬氏染色，觀察到寄生于紅細(xì)胞中的蟲體，確診為瘧疾。討論：瘧原蟲是怎樣感染的，有哪些臨床表現(xiàn)，如何進(jìn)行診斷、治療

和預(yù)防？分析：根據(jù)患者有被蚊叮咬史，間歇性發(fā)熱，初步懷疑為瘧原蟲感染，

經(jīng)實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)、病原檢查，確診。分析學(xué)習(xí)目標(biāo)1.該患者瘧疾發(fā)作等體征的描述，你是否考慮到為寄生蟲感染引起？寄生蟲檢驗(yàn)

技術(shù)有關(guān)認(rèn)知（寄生蟲、宿主、生活史、致病蟲期、診斷蟲期、檢查方法）2.醫(yī)生開出瘧原蟲等檢查申請(qǐng)單，送檢標(biāo)本到檢驗(yàn)科，你將如何進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備、

需要準(zhǔn)備哪些器材與試劑？3.你是否知道病原形態(tài)特征、診斷依據(jù)？檢出率最高方法項(xiàng)目是什么？4.你是否知道檢查中要注意的哪些問題？以提高檢出率；檢查后要注意的哪些問

題？以規(guī)避實(shí)驗(yàn)室污染，確保實(shí)驗(yàn)室生物生物安全。01瘧原蟲的形態(tài)

寄生在人體的瘧原蟲有4種：間日瘧原蟲(Plasmodiumvivax,Pv.)

（常見）惡性瘧原蟲(Plasmodiumfaciparum,Pf.)（常見）三日瘧原蟲(Plasmodiummalariae,Pm.)卵形瘧原蟲(Plasmodiumovale,Po.)瘧原蟲種類瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)間日瘧原蟲1惡性瘧原蟲2學(xué)習(xí)內(nèi)容:瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)

在紅細(xì)胞內(nèi)期的形態(tài)：1.滋養(yǎng)體（早期、晚期）2.裂殖體（早期、晚期）3.配子體（雌、雄）

診斷形態(tài)紅細(xì)胞外期（肝細(xì)胞期）

紅細(xì)胞內(nèi)期瘧原蟲在人體的寄生包括2個(gè)時(shí)期：瘧原蟲的形態(tài)早期滋養(yǎng)體晚期滋養(yǎng)體滋養(yǎng)體早期裂殖體裂殖體晚期裂殖體雌配子體雄配子體配子體三體瘧原蟲的形態(tài)以間日瘧原蟲（Pv.）為例。吉氏或瑞氏染色。環(huán)狀體（小滋養(yǎng)體）大滋養(yǎng)體1.滋養(yǎng)體環(huán)狀體（早期/小滋養(yǎng)體）：胞質(zhì)環(huán)狀、藍(lán)色。細(xì)胞核1個(gè)，紅色。大滋養(yǎng)體（晚期滋養(yǎng)體）：胞質(zhì)增多，偽足、瘧色素（棕黃色）、薛氏小點(diǎn)（淡黃色）、環(huán)狀，被寄生的RBC脹大。胞核增大。瘧原蟲的形態(tài)間日瘧：胞漿肥厚，環(huán)較大，核1個(gè),占RBC直徑1/3，常見1個(gè)原蟲。環(huán)狀體（小滋養(yǎng)體）1.滋養(yǎng)體惡性瘧：環(huán)纖細(xì)，核1個(gè)或2個(gè)，占RBC直徑1/5至1/6，常見2個(gè)或多個(gè)原蟲。瘧原蟲的形態(tài)間日瘧：蟲體不規(guī)則，較大；阿米巴樣空泡明顯；瘧色素細(xì)小，黃褐色。大滋養(yǎng)體1.滋養(yǎng)體惡性瘧：外周血難查見。蟲體小，圓形；空泡??；早期瘧色素細(xì)小，金黃色，晚期結(jié)成塊狀，黑褐色。瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)早期裂殖體裂殖體晚期裂殖體以間日瘧原蟲（Pv.）為例。吉氏或瑞氏染色。（1）未成熟裂殖體（2）成熟裂殖體裂殖體：核分裂、胞質(zhì)也分裂，形成裂殖子。瘧色素成堆。被寄生RBC脹大明顯。瘧原蟲的形態(tài)惡性瘧原蟲裂殖體：外周血難查見。被寄生RBC小于正常紅細(xì)胞；裂殖子較小，8~26個(gè)，排列不規(guī)則；瘧色素成團(tuán)快狀，黑褐色。裂殖體間日瘧原蟲裂殖體：圓形核1個(gè)，被寄生RBC大于正常紅細(xì)胞；裂殖子12~24個(gè)，通常16個(gè)，排列不規(guī)則；瘧色素常集于一側(cè)，黃褐色充滿脹大RBC。瘧色素分散。瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)雌配子體雄配子體配子體1.雌配子體2.雄配子體以間日瘧原蟲（Pv.）為例。吉氏或瑞氏染色。雌（♀）配子體胞漿深蘭色，核偏于一邊，核周可見明顯不染色帶雄（♂）配子體胞漿淺蘭色，核較疏松，常位于中央。配子體：圓形或橢圓形，瘧色素分散，核增大，一個(gè)。胞質(zhì)占滿脹大RBC。瘧原蟲的形態(tài)惡性瘧原蟲1.雌配子體2.雄配子體

間日瘧原蟲瘧原蟲的形態(tài)間日瘧原蟲配子體：圓形核1個(gè)，充滿脹大RBC。瘧色分散。配子體惡性瘧原蟲配子體：臘腸形或新月形，核1個(gè)。瘧色素分散。瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)鑒別要點(diǎn)間日瘧原蟲被寄生紅細(xì)胞惡性瘧原蟲被寄生紅細(xì)胞

紅細(xì)胞大小及顏色脹大，色淺大小正?；蚵钥s小，色稍紫薄血膜中被瘧原蟲寄生的紅細(xì)胞形態(tài)特征薛氏點(diǎn)：鮮紅色，細(xì)小，數(shù)多茂氏點(diǎn)：紫紅色，粗大，數(shù)少紅細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)瘧原蟲的形態(tài)瘧原蟲的形態(tài)02瘧原蟲的生活史

寄生在人體的瘧原蟲有4種：間日瘧原蟲(Plasmodiumvivax,Pv.)

（常見）惡性瘧原蟲(Plasmodiumfaciparum,Pf.)（常見）三日瘧原蟲(Plasmodiummalariae,Pm.)卵形瘧原蟲(Plasmodiumovale,Po.)瘧原蟲的生活史人雌性按蚊中間宿主終宿主寄生在人體的4種瘧原蟲生活史基本相同瘧原蟲的生活史瘧原蟲在人體內(nèi)瘧原蟲在蚊體內(nèi)瘧原蟲的生活史瘧原蟲的生活史瘧原蟲的生活史1.瘧原蟲在人體內(nèi)的發(fā)育瘧原蟲在肝細(xì)胞內(nèi)瘧原蟲在紅細(xì)胞內(nèi)4種瘧原蟲生活史基本相同，以間日瘧原蟲為例子孢子→紅外期裂殖體→紅外期裂殖子。裂殖子→小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體）→大滋養(yǎng)體→紅內(nèi)期裂殖體→紅內(nèi)期裂殖子→環(huán)狀體（數(shù)次裂體增殖后，部分形成配子體）。(紅外期)(紅內(nèi)期)瘧原蟲的生活史紅外期：子孢子→紅外期裂殖體→紅外期裂殖子。紅內(nèi)期：裂殖子→小滋養(yǎng)體（環(huán)狀體）→大滋養(yǎng)體→紅內(nèi)期裂殖體→紅內(nèi)期裂殖子→環(huán)狀體（數(shù)次裂體增殖后，部分形成配子體）。2.瘧原蟲在蚊體內(nèi)的發(fā)育配子體（♀♂）↓雌、雄配子↓合子↓動(dòng)合子↓卵囊（囊合子）↓子孢子瘧原蟲的生活史在人體內(nèi)

在蚊體內(nèi)遲發(fā)型

速發(fā)型子孢子裂殖體裂殖子子孢子裂殖體裂殖子RBC外期（在肝細(xì)胞內(nèi)）

RBC內(nèi)期（在紅細(xì)胞內(nèi)）

環(huán)狀體滋養(yǎng)體裂殖子♀♂配子體裂殖體（RBC破裂）

有性生殖無(wú)性生殖♀♂配子合子動(dòng)合子囊合子瘧原蟲的生活史生活史小結(jié)：1.按蚊是終宿主，在中國(guó)主要是嗜人按蚊、中華按蚊、微小按蚊、大劣按蚊。2.人是中間宿主。3.寄生部位：肝細(xì)胞和紅細(xì)胞。4.感染階段：蚊子涎腺內(nèi)成熟子孢子。5.感染途徑：經(jīng)雌蚊叮咬或輸血。6.繁殖方式：（1）含子孢子的雌性按蚊叮人吸血時(shí)，子孢子經(jīng)皮膚感染。（2）可經(jīng)輸血或器官移植感染。7.診斷階段：紅細(xì)胞內(nèi)期原蟲。8.致病階段：紅細(xì)胞內(nèi)期原蟲。

瘧原蟲的生活史感染階段子孢子感染途徑經(jīng)皮膚傳播媒介按蚊寄生部位肝細(xì)胞致病蟲期紅細(xì)胞內(nèi)期1-7診斷蟲期滋養(yǎng)體、裂殖體、配子體（均寄生在紅細(xì)胞內(nèi)）自我測(cè)試一下吧！03瘧原蟲的致病性與免疫性

寄生在人體的瘧原蟲有4種：間日瘧原蟲(Plasmodiumvivax,Pv.)

（常見）惡性瘧原蟲(Plasmodiumfaciparum,Pf.)（常見）三日瘧原蟲(Plasmodiummalariae,Pm.)卵形瘧原蟲(Plasmodiumovale,Po.)瘧原蟲的致病性瘧疾：瘧原蟲主要寄生于人體的紅細(xì)胞，引起的疾病統(tǒng)稱為瘧疾（俗稱打擺子，冷熱?。Ｋ姆N人體瘧原蟲寄生于人體引起的瘧疾分別稱為：間日瘧、惡性瘧、三日瘧和卵形瘧。重要性：瘧原蟲寄生于人體引起的瘧疾，是六大熱帶病之一，同時(shí)也是我國(guó)五大寄生蟲病之一。瘧原蟲的致病性指瘧原蟲侵入人體到出現(xiàn)臨床癥狀的間隔時(shí)間，包括紅外期原蟲發(fā)育的時(shí)間和紅內(nèi)期原蟲經(jīng)幾代裂體增殖達(dá)到一定數(shù)量所需的時(shí)間。潛伏期潛伏期各不相同：間日瘧11-25天，惡性瘧7-27天，三日瘧18-35天，卵形瘧10-20天。前期癥狀：疲乏、頭痛、全身不適、食欲減退、畏寒等瘧原蟲的致病性寒戰(zhàn)期高熱期出汗期1.瘧疾典型臨床表現(xiàn)由紅內(nèi)期裂體增殖所致，即瘧疾發(fā)作病人全身發(fā)抖，顏面蒼白，伴頭痛、惡心，可持續(xù)數(shù)分鐘至2小時(shí)體溫驟升，高熱，達(dá)39-40度，顏面緋紅，全身酸痛，頭痛加劇，惡性嘔吐，可持續(xù)2-4h大汗淋漓、體溫急降、乏力。機(jī)體進(jìn)入發(fā)作間歇階段，可持續(xù)2-4h瘧原蟲的致病性間日瘧三日瘧卵形瘧惡性瘧隔日發(fā)作（48小時(shí)）隔2天發(fā)作（72小時(shí)）隔日發(fā)作（48小時(shí)）36-48小時(shí)發(fā)作一次瘧原蟲的致病性間日瘧典型間日熱型瘧原蟲的致病性2.瘧疾的再燃與復(fù)發(fā)急性患者發(fā)作停止后，殘存于RBC內(nèi)的原蟲，重新大量繁殖，在無(wú)新的感染下，再次引起瘧疾發(fā)作。體內(nèi)殘留的少量紅內(nèi)期瘧原蟲所致。四種瘧原蟲都可發(fā)生再燃。血液中的原蟲全部被消滅，在無(wú)重新感染的情況下，經(jīng)一段時(shí)間，瘧疾癥狀又重新出現(xiàn)。Pf.和Pm.無(wú)復(fù)發(fā)（無(wú)遲發(fā)型子孢子）Pv.和Po.有復(fù)發(fā)（遲發(fā)型子孢子引起)瘧原蟲的致病性貧血脾大黑尿熱瘧性腎病腦型瘧3.并發(fā)癥瘧原蟲的致病性瘧原蟲的致病性固有免疫/先天性免疫由于種族的遺傳性不同，宿主對(duì)某種瘧原蟲種不易感。適應(yīng)性免疫/獲得性免疫瘧原蟲的免疫性瘧疾免疫指宿主防御瘧原蟲感染的能力。人體感染瘧原蟲或接種瘧原蟲疫苗后，抗原物質(zhì)刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫。人對(duì)其它的動(dòng)物瘧原蟲不易感。美國(guó)及西非Duffy血型陰性基因型的黑人，對(duì)間日瘧原蟲不易感。鐮刀型貧血患者及紅細(xì)胞中缺少葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6-PD）患者對(duì)惡性瘧原蟲不易感。瘧原蟲的免疫性固有免疫/先天性免疫瘧原蟲的免疫性適應(yīng)性免疫/獲得性免疫

(1)瘧原蟲抗原：產(chǎn)生的抗體及致敏的淋巴細(xì)胞可使裂殖子凝集，阻止其侵入紅細(xì)胞等免疫效應(yīng)。(2)體液免疫：瘧原蟲的特異性抗體主要是IgM，在瘧疾免疫中起重要作用。(3)細(xì)胞免疫：細(xì)胞免疫在紅外期感染階段的免疫起主要作用。(4)帶蟲免疫：機(jī)體對(duì)瘧原蟲的紅內(nèi)期發(fā)育具免疫抑制作用，使血液及組織中瘧原蟲密度降低，患者瘧疾發(fā)作停止，形成低感染的帶蟲免疫。(5)免疫逃避：部分瘧原蟲具有逃避宿主免疫力的能力，這種逃避宿主免疫力的現(xiàn)象又稱為免疫逃避。04瘧原蟲的實(shí)驗(yàn)室診斷病原學(xué)檢查免疫學(xué)檢查1.血膜染色法2.溶血離心沉淀法3.血沉棕黃層定量分析法1.循環(huán)抗體檢測(cè)2.循環(huán)抗原檢測(cè)分子生物學(xué)檢測(cè)1.核酸探針（DNA探針）2.聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）瘧原蟲的實(shí)驗(yàn)室診斷檢查方法血膜染色法溶血離心沉淀法血沉棕黃層定量分析法應(yīng)用顯微鏡檢查血液，查到瘧原蟲，是目前瘧疾確診的依據(jù)。病原學(xué)檢查標(biāo)本來源血液（同絲蟲檢查）采血時(shí)間惡性瘧原蟲——在發(fā)作開始，間日瘧原蟲——在發(fā)作后數(shù)小時(shí)至10小時(shí)。病原學(xué)檢查（1）血膜染色法：優(yōu)點(diǎn)：薄血膜便于觀察蟲體形態(tài)，可以鑒別蟲種；厚血膜蟲體集中，檢出率高，常用于篩查。缺點(diǎn)：薄血膜檢出率低，檢查費(fèi)時(shí)，感染率低者易漏檢；厚血膜不宜觀察蟲體形態(tài)特點(diǎn)，故不能用于鑒別蟲種。同時(shí)制備厚、薄血膜，常用瑞氏染色采血時(shí)間：惡性瘧原蟲——在發(fā)作開始，間日瘧原蟲——在發(fā)作后數(shù)小時(shí)至10小時(shí)。病原學(xué)檢查厚血膜法病原學(xué)檢查皮膚消毒針刺采血取末梢血一滴推片制成薄血片病原學(xué)檢查薄血膜法厚薄組合片溶解厚膜紅細(xì)胞溶后厚雪膜灰白色瑞氏染色病原學(xué)檢查染色鏡檢裂殖體配子體滋養(yǎng)體間日瘧原蟲薄血片鏡下觀病原學(xué)檢查惡性瘧原蟲薄血片鏡下觀病原學(xué)檢查不需特殊儀器設(shè)備，操作簡(jiǎn)便、快速，可提高檢出率。適用于基層醫(yī)院使用。（2）溶血離心沉淀法病原學(xué)檢查此法通過濃縮作用，其敏感性高。費(fèi)用較高，對(duì)實(shí)驗(yàn)器材有特殊要求。（3）血沉棕黃層定量分析法病原學(xué)檢查即檢測(cè)瘧原蟲抗原或抗體的方法，在臨床上僅作輔助診斷。檢查方法間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）免疫學(xué)檢查敏感性較高，可鑒別蟲種。但操作較費(fèi)時(shí)，需要較高的實(shí)驗(yàn)室條件，故難推廣應(yīng)用。檢查方法核酸探針（DNA探針）聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分子生物學(xué)檢測(cè)05瘧原蟲的流行與防治流行概況流行間日瘧原蟲溫帶地區(qū)惡性瘧原蟲熱帶和亞熱帶三日瘧原蟲非洲局部卵形瘧原蟲非洲西海岸小范圍我國(guó)瘧疾以間日瘧最常見，其次是惡性瘧，三日瘧和卵形瘧少見。瘧原蟲的流行與防治流行環(huán)節(jié)流行3.傳播途徑2.傳播媒介1.傳染源——外周血中有配子體的患者和帶蟲者.——按蚊，我國(guó)有中華按蚊、嗜人按蚊和大劣按蚊。蚊蟲種群數(shù)量、壽命、嗜血習(xí)性、吸血次數(shù)與瘧疾流行有關(guān)。——雌性按蚊叮人皮膚，也可經(jīng)胎盤和輸血。4.易感人群——普遍易感間日瘧原蟲配子體常在原蟲血癥后2-3天出現(xiàn)，在發(fā)病早期即具有傳染性；惡性瘧原蟲配子體常在原蟲血癥后7-11天出現(xiàn)，在臨床發(fā)作停止后的一段時(shí)間里才能感染蚊媒。還受自然因素和社會(huì)因素的影響自然因素：溫度、雨量社會(huì)因素：政治、經(jīng)