2023學(xué)年完整公開課版薄層色譜法

薄層色譜法永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院王文淵薄層色譜法一.概述1、定義：將固定相（如吸附劑）均勻涂布在表面光滑的平板上形成薄層而進(jìn)行色譜分離和分析的方法。鋪好固定相的板稱為薄板，樣品的分離就在薄板上進(jìn)行。與柱色譜不同，薄層色譜法和紙色譜法都是在平面上進(jìn)行分離,因此稱為平面色譜。2．特點(diǎn)：分析快速、靈敏、顯色方便。3．應(yīng)用：藥物的定性鑒別、雜質(zhì)(純度)檢查薄層色譜法因其分離效率較低，主要用于中藥及其制劑的定性鑒別上，如《中國(guó)藥典》2010年版收錄的藥材及飲片342種；植物油脂和提取物15種;成方制劑和單方制劑12種均采用薄層色譜法鑒別。二、基本原理1.分類：薄層色譜法按其分離原理可分為吸附、分配、離子交換和凝膠色譜法。其中，吸附薄層色譜法應(yīng)用最廣。固定相為吸附劑的薄層色譜法就是吸附薄層色譜法。SiO2

將的試樣溶液(含A、B組分)點(diǎn)在薄板的一端,然后在密閉的色譜缸中用適當(dāng)?shù)恼归_劑(流動(dòng)相)展開.由于A、B兩組分的極性不同,即吸附劑對(duì)兩組分的吸附能力有差別,當(dāng)展開劑攜帶樣品通過吸附劑時(shí),展開劑對(duì)兩組分的解吸能力也不同,即吸附平衡常數(shù)K值不同,各組分移動(dòng)的速度不同.經(jīng)過一段時(shí)間,A、B組分的距離逐漸拉開而被完全分離.2.分離原理：三、操作方法1、制板、活化

將吸附劑涂鋪于光滑平整的玻璃板上使成厚度均勻一致的薄層叫做制板.制成的薄板有兩種:

軟板:不加黏合劑硬板:加入黏合劑制備好的板應(yīng)在105～110℃活化1小時(shí),冷卻后備用。

制板的方法:實(shí)驗(yàn)課講述硅膠G——自含粘和劑硅膠H——不含粘和劑，鋪板時(shí)另加入CMC-Na硅膠HF254——含熒光劑，254nm紫外光照發(fā)綠光硅膠HF365——含熒光劑，365nm紫外光照發(fā)光常用的硅膠薄板：

距板一端2cm處用鉛筆畫一細(xì)線作為起始線,畫“×”示點(diǎn)樣位置，用平頭毛細(xì)管或微量注射器點(diǎn)1～2滴試樣溶液于“×”處(點(diǎn)樣斑點(diǎn)稱為原點(diǎn)).斑點(diǎn)直徑不超過2～3mm,斑點(diǎn)間的距離為2cm點(diǎn)樣后用電吹干燥。點(diǎn)樣時(shí)間不超過10分鐘2、點(diǎn)樣

點(diǎn)樣:薄層色譜板條狀點(diǎn)樣。起始線3、展開

選擇合適的色譜缸,加入展開溶劑(相當(dāng)于柱色譜中的流動(dòng)相),蒸氣飽和色譜缸后,將點(diǎn)了樣的薄板下端浸入展開劑中進(jìn)行展開(點(diǎn)樣點(diǎn)不得浸入展開劑中)，待展開劑展開到薄板的3/4高度時(shí),取出薄板,標(biāo)記好前沿線,取出晾干.薄層色譜法點(diǎn)樣及展開過程4、顯色展開完畢,取出薄板,檢查斑點(diǎn)有無顏色,如果沒有色斑則用合適的顯色劑顯色,然后標(biāo)出位置和斑點(diǎn)大小.常用的顯色劑有:碘,硫酸溶液,熒光黃溶液,茚三酮,三氯化鐵—鐵氰化鉀試劑。顯色后的后期處理1：找到“兩個(gè)點(diǎn)”和“兩個(gè)距離”原點(diǎn)：斑點(diǎn)：溶劑前沿：原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離：原點(diǎn)到溶劑前沿的距離：5、量距離、計(jì)算比移值起始線前沿線點(diǎn)樣點(diǎn)組分A斑點(diǎn)組分B斑點(diǎn)1、比移值Rf原點(diǎn)到斑點(diǎn)中心的距離/原點(diǎn)到溶劑前沿的距離叫做比移值用“Rf”

表示。

若試樣中含有A、B組分,它們移動(dòng)的距離分別是a、b,原點(diǎn)到溶劑前沿的距離是c(起始線到前沿線的距離),則Rf值分別是:

Rf(A)=a/cRf(B)=b/c

薄層色譜分離中一般要求各斑點(diǎn)的Rf值在0.2～0.8之間,Rf值之間應(yīng)相差0.05以上.吸附劑的選擇原則:

根據(jù)被分離組分的極性選擇吸附劑：被分離組分的極性強(qiáng)——弱極性吸附劑；被分離組分的極性弱——強(qiáng)極性吸附劑吸附劑顆粒的大小與分離效能的關(guān)系:

顆粒大,展開速度快,分離效果差,斑點(diǎn)較寬；顆粒小,展開速度慢,分離效果好但產(chǎn)生拖尾對(duì)吸附劑顆粒的要求:大小適宜,顆粒均勻常用的吸附劑:硅膠,氧化鋁,聚酰胺,硅藻土,纖維素四、吸附劑的選擇1、與柱色譜中的洗脫劑的選擇一樣,根據(jù)被分離組分的極性選擇展開劑.

被分離組分的極性強(qiáng)——極性大的展開劑

被分離組分的極性弱——極性小的展開劑2、薄層色譜分離中一般要求各斑點(diǎn)的Rf值在0.2～0.8之間,Rf值之間應(yīng)相差0.05以上.3、如果單一展開劑分離效果不好，可用兩種或兩種以上的單一溶劑按照一定比例混合而成的溶劑展開,可以達(dá)到較好的分離效果.五、展開劑的選擇原則被測(cè)組分、吸附劑和展開劑選擇原則

色譜條件一定時(shí),物質(zhì)的Rf

值是一常數(shù)。

Rf值是定性參數(shù)，在0～1之間變化.確定斑點(diǎn)之后,