血漿蛋白質(zhì)的臨床檢測

血漿蛋白質(zhì)的臨床檢測生理因素生活習性藥物影響一、患者的準備情緒1、生理影響因素：年齡性別種族妊娠2、生活習性影響因素：飲食饑餓運動吸煙飲酒飲茶、咖啡蛋白、脂類、糖、K↑蛋白、脂類、糖↓AST、ALT、GGT↑激素↑，IgG↓Glu↑CK、K、Na、Ca、ALP、糖、白蛋白↑3、藥物的影響：所有藥物都會對病人的某些檢驗項目的結(jié)果產(chǎn)生或大或小的影響，它是通過以下途徑發(fā)生的：

(1)藥理作用：首先是對生理病理過程產(chǎn)生影響。其次是藥物的毒副作用

(2)對測定方法產(chǎn)生影響：有些影響是物理性有的藥物參與化學反應(yīng)二、標本采集標本采集原則：l采樣時間的控制2采取具代表性的標本3采取最合乎要求的標本4唯一性標志5采樣量抗凝劑防腐劑標本的分離儲存和轉(zhuǎn)運三、樣本處理醫(yī)生填寫檢驗申請單靜脈采血、標本留取傳送標本至檢驗科樣品編號按檢驗項目要求處理標本自動生化開機前檢查質(zhì)控操作下達常規(guī)操作指令常規(guī)標本實施急診登記及操作結(jié)果查詢及傳輸關(guān)機醫(yī)院檢驗科常規(guī)檢驗項目工作流程：四、體液蛋白質(zhì)檢測

生化檢驗中測定蛋白質(zhì)的方法很多，主要利用蛋白質(zhì)的分子組成，結(jié)構(gòu)或性質(zhì)進行。一、血清總蛋白測定及評價（一）凱氏定氮法：是測定蛋白質(zhì)的經(jīng)典方法，1883年Kjeldahl首創(chuàng)，精密度準確度高，但操作復(fù)雜、費時、技術(shù)性強，不適合臨床常規(guī)檢測，一般用于標準血清的標定和校正。（二）雙縮脲法

【原理】蛋白質(zhì)分子中的肽鏈在堿性條件下能與二價銅離子作用生成紫紅色的絡(luò)合物，產(chǎn)生的顏色強度在一定范圍內(nèi)與蛋白質(zhì)的含量成正比，但雙縮脲反應(yīng)并非蛋白質(zhì)特有的顏色反應(yīng)，分子中含二個以上肽鍵者均有此反應(yīng)。

【試劑】雙縮脲試劑未失結(jié)晶水的硫酸銅（CuSO4·5H2O）3.0g溶于500ml新鮮制備的蒸餾水或剛煮沸冷卻的去離子水中，加酒石酸鉀鈉（NaKC4O4H6·4H2O）9.0g，碘化鉀5.0g，待完全溶解后加入6mol/LNaOH溶液100ml，最后加蒸餾水至1L，置聚乙烯瓶內(nèi)蓋緊保存。酒石酸鉀鈉的作用是絡(luò)合銅離子，維持銅離子在堿性溶液中的溶解度，碘化鉀防止兩價銅離子還原。

【參考范圍】60～80g/L

（一）血清總蛋白增高

1.血液濃縮嚴重腹瀉、嘔吐、高燒

2.合成增加主要見于球蛋白合成增加，多發(fā)性骨髓瘤。（二）血清總蛋白降低

1.血液稀釋靜脈滴注過多低滲溶液，各種原因所引起的水鈉潴留。

2.攝入不足和消耗增加營養(yǎng)不良，慢性胃腸道疾病引起的消化吸收不良，消耗性疾病，結(jié)核病、甲亢、惡性腫瘤。

3.合成障礙主要見于肝臟疾患。

4.蛋白質(zhì)丟失嚴重燒傷，大量血漿滲出，腎病綜合癥。二、血清白蛋白測定及評價（溴甲酚綠法）

【原理】溴甲酚綠（BCG）在pH4.2的環(huán)境中，在有非離子去垢劑（Brij-35）存在時，可與清蛋白結(jié)合形成藍綠色復(fù)合物，顏色的深淺在一不定范圍內(nèi)與清蛋白含量成正比。

BCG與清蛋白結(jié)合的特異性較低，它不僅與Alb結(jié)合呈色，還可與其他蛋白質(zhì)呈色，其中α1-球蛋白，TRF、Hp最明顯，但反應(yīng)速度不同，Alb可立即反應(yīng)（快反應(yīng)），其他蛋白質(zhì)反應(yīng)慢（慢反應(yīng)）。

【試劑】1.10mmol/LBCG貯存液BCG1.75g，溶于5ml1mol/LNaoH溶液中，加蒸餾水至250ml。

2.0.5mol/L琥珀酸緩沖貯存液（pH4.0）NaoH10g，琥珀酸56g，溶解于800ml蒸餾水中，用1mol/LNaoH溶液調(diào)pH至4.10±0.05加蒸餾水至1L。

3.疊氮鈉貯存液疊氮鈉40g溶于1000ml蒸餾水中。

4.Brij-35溶液Brij-3529g，加蒸餾水80ml，置80ml左右水溶使其溶解，然后加水至100ml。5.BCG試劑于IL容量瓶內(nèi)加蒸餾水400ml，琥珀酸緩沖貯存液100ml，BCG貯存液8ml，疊氮鈉貯存液2.5ml，Brij-35溶液2.5ml，加蒸餾水至刻度，配好的BCG試劑的pH應(yīng)為4.15±0.05。

Brij-35可提高蛋白質(zhì)與染料的結(jié)合力及溶解度，提高呈色穩(wěn)定性，如無Brij-35可用吐溫-20代替，疊氮鈉有防腐作用?！緟⒖挤秶?5～55g/L。【臨床意義】三、血漿纖維蛋白原測定及評價

血漿纖維蛋白原（Fib）是一種參與血液凝固的糖蛋白，又稱凝血因子Ⅰ，分子量34萬，在肝臟合成，電泳時位于β球蛋白區(qū)帶。血漿纖維蛋白原測定對于出血性疾病和肝臟損傷的診斷有重要意義。測定血漿纖維蛋白原的方法有多種，主要有：

1.復(fù)鈣雙縮脲法在稀釋血漿中加入鈣離子使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為不溶性纖維蛋白凝塊，將凝塊分離后用雙縮脲法測定纖維蛋白含量。

2.鹽析雙縮脲法在血漿中加入12.5%的亞硫酸鈉使纖維蛋白原沉淀而與其他血漿蛋白質(zhì)分離，將纖維蛋白原用雙縮脲試劑顯色，求出其含量。

3.比濁法在pH7.0時，用13.3%的硫酸銨溶液沉淀纖維蛋白原，而血漿中其他蛋白質(zhì)保持溶解狀態(tài)，此時溶液的濁度完全由纖維蛋白原產(chǎn)生，通過比濁可求得其含量。

4.免疫化學法用人纖維蛋白原免疫動物獲得抗人纖維蛋白原抗體，應(yīng)用免疫電泳法、免疫擴散法和ELISA法測定纖維蛋白原含量。

【參考范圍】2.0～4.0g/L

【臨床意義】1.纖維蛋白原增加纖