馬鈴薯脫毒培養(yǎng)

馬鈴薯脫毒培養(yǎng)作物生產技術/教學資源庫魏照信2014.042作物生產技術專業(yè)/教學資源庫微型薯作物生產技術專業(yè)/教學資源庫教學目標知識目標：

掌握馬鈴薯脫毒培養(yǎng)的大致過程，了解馬鈴薯脫毒苗的鑒定方法;掌握馬鈴薯的生物學習性：

能力目標：

認識馬鈴薯脫毒培養(yǎng)的特點；

熟悉微型薯的生產過程作物生產技術專業(yè)/教學資源庫馬鈴薯是一種全球性的重要經濟作物。適應性廣，營養(yǎng)價值高，耐貯藏適運輸，既是一種重要的糧食作物也是一種調節(jié)市場供應的重要蔬菜。馬鈴薯原產于拉丁美洲，當被發(fā)現可以食用后，很快傳到世界各地，成為栽培很廣的一種作物。但是，當馬鈴薯引種栽培1~2個周期后，明顯發(fā)現產量降低，植株變矮，并有卷葉的現象產生，經檢測證明這是由于病毒引起的退化現象。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫

危害馬鈴薯的病毒有17種之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花葉病毒、紡錘形塊莖病毒等。由于馬鈴薯是無性繁殖作物，病毒逐代積累，日益嚴重，引起嚴重退化。馬鈴薯病毒可使塊莖產量減少50%~80%。法國Morel和他的同事們，1955年從患病馬鈴薯植株中選取到了無病植株，為治療作物病毒開辟了新途徑。

作物生產技術專業(yè)/教學資源庫一、特性和生物學習性1、馬鈴薯的形態(tài)特性根馬鈴薯的根系由出生根和匍匐根兩部分組成。莖馬鈴薯分地上部分和地下部分，地上主莖在形成16片葉子后，由花芽封頂，并在花的下部發(fā)生兩個側枝，從而構成馬鈴薯的主要同化系統(tǒng)。地下莖包括主莖的地下部分、匍匐莖和塊莖。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫（3）葉馬鈴薯先出土的葉是初生葉，全緣，心臟形。以后發(fā)生的葉奇數羽狀全裂單葉，在葉柄基部與主莖相連處著生有托葉。（4）花馬鈴薯的花為聚傘花序，第一或第二花序開放，恰是塊莖強盛膨大之時，此時是需要不斷澆水的形態(tài)標志。(5)果實、種子馬鈴薯果實為球形或橢圓形漿果。種子小。扁平腎形。種子可用來繁殖，但后代性狀分離大。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫2、生物學習性馬鈴薯性喜冷氣候，不耐高溫和霜凍，解除休眠的塊莖4℃下發(fā)芽，發(fā)芽適溫為12~18℃。地上莖葉生長溫度為17~21℃，25℃以上時生長不良，葉變小，超過30℃和7℃以下莖葉停止生長，-1℃時受凍。塊莖形成要求晝溫14~24℃，夜溫12~14℃，土溫16~18℃。土溫20℃以上時塊莖形成緩慢，而且容易引起退化，高溫下養(yǎng)分多用于芽和匍匐莖生長不易形成塊莖，25~30℃時已經長成的塊莖也變成細長莖，結薯期要求12h左右的短日照和疏松、濕潤、肥沃以及通氣良好的土壤條件。土壤板結，薯塊表面粗糙和薯形不整。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫二、馬鈴薯脫毒技術馬鈴薯在營養(yǎng)繁殖時易受病毒的浸染，當條件適合時，病毒就會在植株內增殖，轉運和積累，隨著世代傳遞，病毒危害逐年加重，一般可造成減產50％以上。研究發(fā)現，有30多種病毒易感染馬鈴薯，并引起品種退化，嚴重影響馬鈴薯的生產。通過微莖尖組織培養(yǎng)技術能從馬鈴薯體內脫除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。因此，采用組織培養(yǎng)技術，通過一定良種繁殖體系，生產優(yōu)質種薯，是保證馬鈴薯高產、穩(wěn)產的一項有效措施。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫全國現有馬鈴薯播種面積300多萬公頃，且有逐步增加的趨勢，每年需合格種薯45億公斤，脫毒原種4億公斤，脫毒小薯或微型薯45億粒。因此，脫毒馬鈴薯推廣具有廣闊的市場前景，對于增加農民收入和發(fā)展馬鈴薯產業(yè)化生產具有十分重要的意義。二、馬鈴薯脫毒技術我國的馬鈴薯平均單產僅13.60噸/公頃，是世界單產最高國瑞士（48.80噸/公頃）的1/4。造成如此大的差別，最主要的因素就是種薯質量差，品種布局不合理。采用脫毒快繁技術，種用脫毒種薯，一般可增產30-50%，甚至成倍增產，充分發(fā)揮品種的潛能，提高馬鈴薯生產能力。如果我國現有馬鈴薯播種面積的1/3（即114萬公頃）用脫毒種薯，就可年增產糧食100多億公斤。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫二、馬鈴薯脫毒技術1．脫毒種薯生產程序采用微莖尖組織培養(yǎng)的方法，誘導出苗，采用聯免疫吸附試驗法或指示植物方法鑒定馬鈴薯病毒和類病毒，經鑒定后，無主要病毒及類病毒的試管苗可定為脫毒試管基礎苗。試管基礎苗在無菌條件下，采用固體、液體培養(yǎng)基相結合的方法，進行擴繁基礎苗，在防蟲網室栽植或封閉溫室扦插，生產出原原種（或稱脫毒小薯）。用原原種在一定隔離條件下產生原種1代，以后逐級稱為原種2代、良種1代、良種2代。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫二、馬鈴薯脫毒技術2．莖尖培養(yǎng)脫毒（1）取材和培養(yǎng)一般多采用在室內發(fā)芽，芽經熱處理（38℃）2周。然后取頂芽或側芽1厘米莖尖，在自來水下沖洗干凈，無菌條件下先用70％的酒精浸潤組織15-20秒，再用2％的次氯酸鈉溶液浸泡4--5min，然后用無菌水沖洗3次。把消毒好的芽放在解剖鏡下仔細剝離，逐層剝去幼葉，露出圓滑的生長點，可以留1-2個葉原基，0.2—0.3毫米，隨即接種于MS液體培養(yǎng)基上，每升加0.1mgNAA、0.2mgGA3、0.5BA，2%蔗糖，pH值5.8。培養(yǎng)條件：21~25℃、2000-3000lx、12h/d。2-3周愈傷，4-5周綠點，3--6月長成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫二、馬鈴薯脫毒技術2．莖尖培養(yǎng)脫毒（2）繼代和生根培養(yǎng)成功的馬鈴薯脫毒苗，經ELISA（試劑盒）鑒定后（試管苗應每3月檢測一次，每年4次）鑒定后，采用固體、液體培養(yǎng)基相結合方法擴繁。取試管苗單節(jié)切段扦插在（或平放）固體培養(yǎng)基上，每瓶可插20個左右莖段，經20d左右發(fā)育成5~10cm高小植株，繼續(xù)進行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，試管苗多節(jié)接種在液體培養(yǎng)基上，進行淺層靜止液體培養(yǎng)。培養(yǎng)基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸鈣10，3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，14-16小時光照，每3周繼代一次，單芽莖段約1厘米，可插也可平放，原則試管苗用2年—3年。

作物生產技術專業(yè)/教學資源庫二、馬鈴薯脫毒技術2．莖尖培養(yǎng)脫毒(3)馴化為增強試管苗對溫室內環(huán)境條件的適應能力，移植前對試管苗要進行光、溫鍛煉。煉苗期溫室內的溫度：白天23~27℃，夜間不低于14℃。煉苗的具體方法是：移植前7d左右，將長有3~5片葉、高2~3cm的試管苗，在不開瓶口的狀態(tài)下，從培養(yǎng)室移至溫室排好。為防止強光、高溫灼傷試管苗，在溫室頂上加蓋一層黑色遮陽網。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫二、馬鈴薯脫毒技術3.脫毒苗切繁基礎苗成活進入正常后便可切繁，但切繁量的多少和質量的高低，除與前邊提到的水與溫濕度條件有關外，能否掌握正確的切繁方法和適宜的切繁苗齡也是非常重要的。脫毒苗切繁主要是剪取頂部芽尖莖段（主莖芽尖和腋芽芽尖）直接扦插。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫二、馬鈴薯脫毒技術4.微型薯生產：網室內，鋪6厘米蛭石，3%撒可富稀釋一倍，噴潮濕即可。插前澆水濕潤，插后澆透。覆膜一周（但不要壓緊），濕度80%以上，期間噴水2次。揭膜后噴營養(yǎng)液撒可富3%，噴水沖洗（每周2次），每周噴一次0.5%硫酸銅（葉面），中后期噴藥防病，防早疫、晚疫病，連續(xù)噴2-3-4次。噴辛硫磷防害蟲。苗高6—8厘米培蛭石防綠薯，1-2厘米厚，約35-40天出現氣生薯，不斷蓋蛭石。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫三、馬鈴薯無病毒苗的鑒定材料1、指示植物鑒定在馬鈴薯的病毒鑒定中，汁液鑒定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和紡錘塊狀病毒很容易通過汁液來接種。2、鑒定寄主的準備馬鈴薯常用的鑒定寄主植物有莧科的千日紅，茄科的洋酸漿、毛曼佗羅等。寄主植物應在無蟲網室中培養(yǎng)。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫三、馬鈴薯無病毒苗的鑒定材料３.接種液制備及接種葉片洗凈后。在消毒的研缽中研成糊狀，用紗布濾出汁液，再用蒸餾水稀釋１０倍作為接種物，在鑒定寄主植物的葉面，６００目的金剛砂混入接種物中，然后用左手心緊靠在寄主的背面，以右手實指蘸取接種液，均勻的在葉背面擦過，以不造成葉片產生傷痕為度，最后把葉面上多余的接種物用清水沖洗干凈，放置在１５～２４的防蟲室中，一般５－１０天可發(fā)病。作物生產技術專業(yè)/教學資源庫四、馬鈴薯無病毒株的繁殖和保存1．無病毒株的繁殖通過莖尖培養(yǎng)只能得到很少的無病毒植株，而生產上需要數以萬計的健康種薯。同時無病毒植株并沒有對該病毒獲得免疫能力，仍會在繁殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒再侵