【穿心蓮化學(xué)成分實(shí)驗(yàn)分析4000字（論文）】

穿心蓮化學(xué)成分實(shí)驗(yàn)分析目錄TOC\o"1-2"\h\u5888摘要 167481.穿心蓮的主要化學(xué)成分研究 152161.1穿心蓮概述 1312861.2化學(xué)成分 1277782.材料與方法 230462.1材料 2260612.2方法與步驟 379553.結(jié)果與分析 542893.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 5194243.2單因素試驗(yàn) 5286663.3正交試驗(yàn) 9126654.結(jié)論 106401參考文獻(xiàn) 11摘要穿心蓮是爵床科植物的干燥地上部分，臨床上主要用于治療感冒、咳嗽、發(fā)燒和發(fā)熱等上呼吸道感染疾病。穿心蓮作為國(guó)內(nèi)外知名的常用中草藥，其主要化學(xué)成分為二萜內(nèi)酯類成分及黃酮類成分。本文就對(duì)穿心蓮的主要化學(xué)成分的提取和分離進(jìn)行探究。為實(shí)現(xiàn)對(duì)穿心蓮的深度研發(fā)，本論文運(yùn)用常規(guī)技術(shù)與核心技術(shù)相結(jié)合的方法對(duì)穿心蓮中黃酮成分進(jìn)行提取研究，并對(duì)穿心蓮中黃酮量的超聲提取工藝進(jìn)行了探索。關(guān)鍵詞：穿心蓮；化學(xué)成分；提?。环蛛x1.穿心蓮的主要化學(xué)成分研究1.1穿心蓮概述穿心蓮作為常用中草藥，具有清熱解毒的功效，是治療感冒和氣管炎的良藥[1]。穿心蓮能夠?qū)芏嗉?xì)菌表現(xiàn)極強(qiáng)的敏感性，甚至擁有體外抑菌的能力，紙片擴(kuò)散法實(shí)驗(yàn)證明，在其浸出液中，大腸桿菌、金黃色葡糖桿菌活性很弱，繁殖能力也會(huì)大幅度降低[2]。1.2化學(xué)成分1.2.1二萜內(nèi)酯類成分穿心蓮內(nèi)酯是從穿心蓮中提取的二萜內(nèi)酯。外觀為白色結(jié)晶性粉末，無(wú)味，無(wú)味，不溶于水[3]。許多研究表明，穿心蓮內(nèi)酯可通過(guò)影響免疫功能、拮抗血小板活化因子及其受體、清除氧自由基和改善免疫功能來(lái)改善免疫功能，具有抗病原微生物、解熱、抗炎作用[4,5]。1.2.2黃酮類成分穿心蓮中黃酮類化合物主要存在于根中，而葉片中黃酮類化合物含量較低[6]。一種強(qiáng)抗氧化劑[7]，可有效地幫助清除體內(nèi)的各種氧自由基，以達(dá)到有效防止損害人體正常細(xì)胞的免疫功能發(fā)生退化、衰老，同時(shí)也可以阻止癌癥的發(fā)生，根據(jù)已有的文獻(xiàn)表明穿心蓮的黃酮含量較高，具有較大的研究?jī)r(jià)值[8]。1.2.3其他化合物穿心蓮還含有多種化合物，如咖啡酸、阿魏酸、綠原酸、反式肉桂酸等[9]。穿心蓮還含有環(huán)烯醚萜、甾醇、有機(jī)酸、生物堿等[10]。2.材料與方法2.1材料2.1.1原料及處理穿心蓮飲片購(gòu)于GAP基地，粉碎，備用。2.1.2試驗(yàn)藥品試驗(yàn)所用藥品如表1。表1試驗(yàn)用藥品2.1.3儀器與設(shè)備試驗(yàn)所用儀器與設(shè)備如表2。表2試驗(yàn)用儀器設(shè)備2.2方法與步驟2.2.1實(shí)驗(yàn)流程穿心蓮飲片→粉碎機(jī)粉碎→乙醇溶解→超聲萃取→真空抽濾→顯色→λ=390nm處測(cè)定吸光度→計(jì)算穿心蓮總黃酮得率2.2.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用蘆丁作標(biāo)樣，采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法。繪制標(biāo)曲：精確量取標(biāo)準(zhǔn)品蘆?。?.1mg/ml）0.15、0.2、0.25、0.3、0.4、0.5、0.6ml（蘆丁質(zhì)量15、20、25、30、40、50、60

μg）于5ml離心管中，加蒸餾水2ml，5%NaNO?溶液0.15ml，等待6min，加10%Al(NO3)3·9H2O溶液0.15ml，等待5min，加4%NaOH溶液2ml，補(bǔ)蒸餾水至體積5ml。搖晃均勻，等待30min。于510nm下測(cè)定。X軸為蘆丁含量（μg），Y軸為吸光度。2.2.3穿心蓮總黃酮萃取及其測(cè)定準(zhǔn)確稱取1.0000g制備后的穿心蓮粉末至250mL的碘量瓶中，根據(jù)料液比需要的不同來(lái)置入體積分?jǐn)?shù)不等的乙醇溶液，蓋上塞子以防乙醇揮發(fā)，置于超聲清洗儀中，設(shè)定不同超聲溫度、不同超聲萃取時(shí)間進(jìn)行萃取，萃取結(jié)束后抽濾，得樣品液。分別準(zhǔn)確移取0.30mL的樣品液至25mL比色管中，以試劑空白為參比，按2.2.2所述方法測(cè)定其在390nm處吸光度值A(chǔ)，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品液中穿心蓮總黃酮質(zhì)量，進(jìn)而計(jì)算穿心蓮總黃酮得率。每組試驗(yàn)平行測(cè)定3次。2.3.4單因素試驗(yàn)（1）料液比對(duì)黃酮得率的影響分別量取1.0000g已制備完全的穿心蓮粉末放入250mL的碘量瓶里，以1:10g/mL、1:15g/mL、1:25g/mL、1:40g/mL、1:50g/mL的料液比加50%的乙醇溶液，蓋上塞子，防止乙醇揮發(fā)，在超聲功率為200W、超聲溫度為50℃條件下振蕩浸提50分鐘，萃取結(jié)束，用循環(huán)水式真空泵進(jìn)行抽濾得樣品萃取液。分別移取0.30mL的樣品萃取液至25mL的比色管中，以試劑空白參比，按2.2.2所述方法測(cè)定其390nm處吸光度A，計(jì)算穿心蓮黃酮得率。（2）乙醇濃度對(duì)黃酮得率的影響分別量取1.0000g已制備完全的穿心蓮粉末放入250mL碘量瓶?jī)?nèi)，以1:40g/mL的料液比分別加入體積分?jǐn)?shù)15%、35%、50%、65%、80%的乙醇溶液，蓋上塞子，防止乙醇揮發(fā)，在超聲功率為200W、超聲溫度為50℃條件下振蕩浸提50分鐘，萃取結(jié)束，用循環(huán)水式真空泵進(jìn)行抽濾得樣品萃取液。分別移取0.30mL的樣品萃取液至25mL的比色管中，以試劑空白參比，按2.2.2所述方法測(cè)定其390nm處吸光度A，計(jì)算穿心蓮黃酮得率。（3）超聲時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響分別量取1.0000g已制備好的穿心蓮粉末放入250mL的碘量瓶里，以1:40g/mL的料液比加入體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇溶液，蓋上塞子，防止乙醇揮發(fā)，在超聲功率為200W、超聲溫度為50℃條件下分別振蕩浸提24分鐘、42分鐘、60分鐘、100分鐘、140分鐘，用循環(huán)水式真空泵進(jìn)行抽濾得樣品萃取液。分別移取0.30mL的樣品萃取液至25mL的比色管中，以試劑空白參比，按2.2.2所述方法測(cè)定其390nm處吸光度A，計(jì)算穿心蓮黃酮得率。（4）超聲溫度對(duì)黃酮得率的影響分別量取1.0000g經(jīng)過(guò)制備的穿心蓮粉末放入250mL的碘量瓶里，以1:40g/mL的料液比加入體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇溶液，蓋上塞子，防止乙醇揮發(fā)，在超聲功率為200W、超聲溫度分別為20℃、30℃、45℃、60℃、67℃條件下振蕩浸提50分鐘，用循環(huán)水式真空泵進(jìn)行抽濾得樣品萃取液。分別移取0.30mL的樣品萃取液至25mL的比色管中，以試劑空白參比，按2.2.2所述方法測(cè)定其390nm處吸光度A，計(jì)算穿心蓮黃酮得率。2.3.5正交試驗(yàn)從上述單因素試驗(yàn)所得結(jié)果進(jìn)行分析，選取正交因素水平來(lái)對(duì)正交試驗(yàn)方案進(jìn)行設(shè)計(jì)。2.3.6驗(yàn)證試驗(yàn)對(duì)正交試驗(yàn)優(yōu)化的最佳萃取工藝進(jìn)行驗(yàn)證。3.結(jié)果與分析3.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果如表3和圖1所示，y=1.2372X+0.0046，R2=0.9992。表3不同濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液管號(hào)123456蘆丁質(zhì)量（mg）0.000.160320.640.80.96吸光度值（A）0.000.13020.23070.34110.43340.63983.2單因素試驗(yàn)3.2.1料液比對(duì)黃酮得率的影響表4料液比對(duì)黃酮得率的影響料液比（g/mL）1:101:151:251:401:50黃酮得率（%）1.631.752.152.361.92由表4及圖2可得，料液比為1:10g/mL~1:40g/mL時(shí)，穿心蓮總黃酮得率隨萃取溶劑量的增加而增大，說(shuō)明料液比在此范圍內(nèi)，萃取溶劑體積越大，穿心蓮粉末與溶劑的接觸面積越大，總黃酮越容易溶解，料液比是1:40g/mL的條件下，穿心蓮總黃酮的萃取效果最好，黃酮得率可達(dá)最高水平，而當(dāng)料液比高于1:40g/mL時(shí)，穿心蓮總黃酮得率下降，這可能是由于，隨著萃取溶劑量的增加，溶劑吸收的超聲波增多，作用于細(xì)胞的超聲波相對(duì)減少；另外，萃取溶劑量增加，水分含量相對(duì)增加。所以，本試驗(yàn)選擇最佳料液比為1:40g/mL，選擇1:25g/mL、1:40g/mL、1:50g/mL進(jìn)行正交試驗(yàn)。3.2.2乙醇濃度對(duì)黃酮得率的影響表5乙醇濃度對(duì)黃酮得率的影響乙醇濃度(%)1535506580黃酮提取率(%)1.471.862.112.702.37乙醇濃度過(guò)高或過(guò)低都將降低與穿心蓮黃酮極性的相似性，不利于穿心蓮黃酮類化合物的溶出。因此，穿心蓮總黃酮萃取時(shí)，乙醇濃度最好是65%。選擇乙醇濃度50%、65%、80%進(jìn)行正交試驗(yàn)。3.2.3超聲時(shí)間對(duì)黃酮得率影響表6超聲時(shí)間對(duì)黃酮得率影響超聲提取時(shí)間（min）244260100140黃酮提取率（%）2.082.102.382.132.00從表6和圖4可以看出，超聲時(shí)間在24~60min范圍時(shí)，穿心蓮總黃酮得率隨超聲時(shí)間的增加不斷增大；超聲時(shí)間在60min的條件下，其得率最高；當(dāng)超聲時(shí)間超過(guò)60min，穿心蓮總黃酮得率下降。在60min時(shí)穿心蓮黃酮最大限度的溶解出，此時(shí)黃酮得率最大。所以，最佳超聲萃取時(shí)間為60min。選取超聲時(shí)間42min、60min、100min進(jìn)行正交試驗(yàn)。3.2.4超聲溫度對(duì)黃酮得率的影響表7超聲溫度對(duì)黃酮得率影響超聲提取溫度（℃）2030456067黃酮提取率（%）1.621.722.112.342.04隨溫度升高黃酮得率先增后減。是因?yàn)闇囟壬?，熱效率升高，分子運(yùn)動(dòng)速度加快，穿心蓮總黃酮更容易溶解出來(lái)。因此實(shí)驗(yàn)時(shí)超聲萃取溫度最好為60℃。選取超聲萃取溫度45℃、60℃、37℃進(jìn)行正交試驗(yàn)。3.3正交試驗(yàn)以穿心蓮總黃酮得率為考察指標(biāo)，選取單因素試驗(yàn)確定的因素水平進(jìn)行正交試驗(yàn)，對(duì)這四個(gè)因素于穿心蓮中總黃酮的萃取而言有何影響來(lái)進(jìn)行考察。正交因素水平見(jiàn)表8。正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表9。表8正交試驗(yàn)因素水平表水平因素ABCD料液比（g/mL）乙醇濃度（%）超聲時(shí)間（min）超聲溫度（℃）11:2550424521:4065606031:508010067表9正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及數(shù)據(jù)處理因素ABCD黃酮得率實(shí)驗(yàn)11（1:25）1（50）1（42）1（45）0.81實(shí)驗(yàn)21（1:25）2（65）2（60）2（60）2.07實(shí)驗(yàn)31（1:25）3（80）3（100）3（67）2.13實(shí)驗(yàn)42（1:40）1（50）2（60）3（67）2.57實(shí)驗(yàn)52（1:40）2（65）3（100）1（45）1.3實(shí)驗(yàn)62（1:40）3（80）1（42）2（60）2.04實(shí)驗(yàn)73（1:50）1（50）3（100）2（60）2.13實(shí)驗(yàn)83（1:50）2（65）1（42）3（67）2.38實(shí)驗(yàn)93（1:50）3（80）2（60）1（45）1.48均值K11.6701.8371.7431.197均值K21.9701.9172.0402.080均值K31.9971.8831.8532.360極差R0.3270.0800.2971.163優(yōu)化A3B2C2D3由表9中極差（R）可知，超聲溫度（D）極差最大，料液比（A）其次，超聲時(shí)間（C）隨后,乙醇濃度（B）最小，故影響穿心蓮總黃酮得率因素主次順序?yàn)镈＞A＞C＞B，也就是超聲溫度>料液比>超聲時(shí)間>乙醇濃度。從4個(gè)因素的水平之和K1、K2、K3看，最佳萃取工藝條件為A3B2C2D3，即料液比1:50g/mL，乙醇濃度65%，超聲時(shí)間60min，超聲溫度67℃。從黃酮得率來(lái)看，最佳萃取工藝條件為A2B1C2D3，即料液比1:40g/mL，乙醇濃度50%，超聲時(shí)間60min，超聲溫度67℃，此時(shí)黃酮得率為2.57%。4.結(jié)論本論文以穿心蓮為原料，對(duì)穿心蓮總黃酮含量進(jìn)行研究。通過(guò)超聲波輔助萃取得出其最好的萃取條件是料液比為1:50g/mL，乙醇濃度65%，超聲時(shí)間60min，超聲溫度67℃，基于這些條件，再進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，獲得的穿心蓮總黃酮得率達(dá)到3.02%。本研究不僅能夠高效的提取穿心蓮總黃酮，提高穿心蓮的利用率，使資源得到更好的開(kāi)發(fā)，而且對(duì)于改善生態(tài)環(huán)境也有一定意義。參考文獻(xiàn)[1]靳鑫,時(shí)圣明,張東方,等.穿心蓮化學(xué)成分的研究[J].中草藥,2012,43(001):164-169.[2]王國(guó)才,胡永美,張曉琦,等.穿心蓮的化學(xué)成分研究[C]//第八屆全國(guó)中藥和天然藥物學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第五屆全國(guó)藥用植物和植物藥學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì).0.[3]陳麗霞.穿心蓮的化學(xué)成分及穿心蓮新苷微生物轉(zhuǎn)化研究.沈陽(yáng)藥科大學(xué).[4]朱艷玲.穿心蓮化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2013,7(14):2.[5]陳艷,陳鍵.穿心蓮總黃酮乙醇提取工藝的研究[J].安徽化工,2009,35(2):4.[6]唐睿