飼料中基本營養(yǎng)成分測定標(biāo)準(zhǔn)

實(shí)際上，100多年來世界各國一直沿用的是由德國科學(xué)家Hennberg和Stohman所創(chuàng)立的Weende飼料分析體系。該分析體系是把飼料分成6種組分來分析測定：①水分(干物質(zhì))；②粗灰分(礦物質(zhì))；②粗蛋白(Nx6．25)；④粗脂肪(乙醚浸出物)⑤粗纖維；⑧無氮浸出物(NFE，計(jì)算值)。這種飼料分析體系顯然是飼料的概略分析(FeedProximateAnalysis)，但也是最基本的飼料成分分析。按照GB10648-1999飼料標(biāo)簽的規(guī)定：蛋白質(zhì)飼料、配合飼料、濃縮飼料和復(fù)合頂混料等飼料都要把水分、粗蛋白、粗纖維和粗灰分做為保證值項(xiàng)目進(jìn)行標(biāo)注。飼料組成成分的分析對飼料組成成分的分析是研究營養(yǎng)物質(zhì)的利用，評價(jià)飼料營養(yǎng)價(jià)值最基礎(chǔ)的工作。飼料中最重要的營養(yǎng)物質(zhì)有碳水化合物、蛋白質(zhì)、脂類、礦物質(zhì)和維生素。概略養(yǎng)分分析法把飼料組成成分分為水分、粗灰分、粗蛋白質(zhì)（CP）、粗脂肪或乙醚浸出物（EE）、粗纖維（CF）和無氮浸出物（NEF）。(一)水分飼料中的水分有兩種存在形式，游離水和結(jié)合水。飼料分析中經(jīng)常測定總水分，采用干燥失重的方法。對于不同飼料，干燥的方法應(yīng)考慮其理化性質(zhì)而有所區(qū)別。盡管飼料中的水分營養(yǎng)價(jià)值不大，但是測定飼料中的水分可得出飼料干物質(zhì)的含量，這與飼料的能量含量密切相關(guān)，因此水分的測定意義重大。本方法依據(jù)GB6435—86飼料中水分的測定，它適用于配合飼料和單一飼料水分含量的測定，但不適用于做飼料的奶制品、動(dòng)植物油中的水分測定。1.方法原理試樣在(105±2)℃烘箱內(nèi)和常壓條件下烘干至恒重的質(zhì)量為水分。2.儀器設(shè)備(1)植物樣品粉碎機(jī)或研缽；(2)試驗(yàn)篩：孔徑0.(3)分析天平：分度值0．0001g；(4)稱量皿：玻璃或鋁質(zhì)，直徑40mm、高25mm(5)電熱式恒溫烘箱：控制±2℃(6)干燥器：變色硅膠干燥劑3．樣品的制備(1)選取有代表性的原始樣品不少于1000g。按四分法縮分到250g，風(fēng)干或以60℃烘干，用植物樣品粉碎機(jī)碾細(xì)，過0.42mm(2)如果飼料樣品是含多汁的鮮樣，如青貯、牧草等，無法直接粉碎，應(yīng)進(jìn)行預(yù)干燥處理：稱取200-300g(準(zhǔn)確至0.01g)鮮樣，在105℃烘箱中烘殺15min，立即把溫度降至65℃，烘6-8h，取出，在空氣中冷卻4h，稱量。失重即初水分w0(H4測定步驟(1)將稱量皿洗凈，在(105±2)℃烘箱內(nèi)烘干1—2h，取出在干燥器內(nèi)冷卻30min，用分析天平稱量。再放入烘箱烘干30min，冷卻，稱量，直至兩次稱量之差小于0．0005g為恒重。(2)用分析天平稱取2-5g樣品，均勻平攤在已恒重的稱量皿中，厚度小于0．5cm。不蓋稱量皿蓋，在(105±2)℃恒溫烘箱內(nèi)烘干2—4h。取出，蓋上稱量皿蓋，放在干燥器內(nèi)冷卻30min，稱量，同樣再烘1h，冷卻、稱量。直至兩次稱量之差小于0．002g為恒重。5．結(jié)果計(jì)算(1)飼料中水分含量按公式(3—1)計(jì)算式中：W(H2O)—飼料中水分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，％；m1—105℃m2一105℃m0—105℃(2)每個(gè)試樣應(yīng)取兩個(gè)平行樣測定，以算術(shù)平均值為測定結(jié)果。兩個(gè)平行樣的相對誤差應(yīng)小于0.2％。(二)粗灰分粗灰分是飼料中有機(jī)物被全部氧化除去后剩余的殘?jiān)?，主要為礦物質(zhì)氧化物和鹽類等無機(jī)物質(zhì)。粗灰分的測定方法為高溫灼燒法，即將飼料樣品放入別550℃±5℃的高溫電爐中灼燒，至灰白色，稱殘?jiān)闹亓俊y定飼料中的粗灰分含量，對評定飼料礦物質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值意義不大。(三)粗蛋白質(zhì)飼料中的一切合氮物質(zhì)的總稱為粗蛋白質(zhì)，用飼料中的含氮量乘以6.25進(jìn)行計(jì)算。粗蛋白質(zhì)包括真蛋白質(zhì)(TP)和非蛋白質(zhì)性含氮化合物。飼料總氮中的非蛋白氮(NPN）部分對水產(chǎn)動(dòng)物幾乎無用，評定飼料蛋白質(zhì)營養(yǎng)價(jià)值有時(shí)需要對飼料中真蛋白質(zhì)進(jìn)行分析，如蝦粉中含有大量的幾丁質(zhì)氮。本方法依據(jù)GB／T6432—94飼料中粗蛋白測定方法，適用于配合飼料、濃縮飼料和單一飼料中粗蛋白的測定。1原理凱氏法測定試樣蛋白質(zhì)含量，是在催化劑作用下用濃硫酸將含氮化合物轉(zhuǎn)化為硫酸銨，將生成的硫酸銨在強(qiáng)堿性條件下餾出氨，經(jīng)硼酸溶液吸收，再用標(biāo)準(zhǔn)酸溶液滴定，將測得的氮含量乘以換算系數(shù)6．25，即粗蛋白的含量。2儀器設(shè)備(1)植物樣品粉碎機(jī)或研缽。(2)試驗(yàn)篩：孔徑0，42mm(40目)。(3)分析天平：分度值0．0001g(4)專用消煮爐或可調(diào)電爐。(5)酸式滴定管：10mL或25mL。(6)專用消化管或250mL凱氏瓶。(7)凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式或半微量水蒸汽蒸餾也可采用專用定氮儀。(8)三角燒瓶：150mL或250mL。3試劑(1)硫酸(AR，ρ=1.84)。(2)混合催化劑：0.4硫酸銅(CuSO4·5H2O，AR)和6g硫酸鉀(K2SO4，AR)，磨細(xì)混均。(3)40％氫氧化鈉溶液：稱取40g氫氧化鈉(NaOH,CP)溶于1mL蒸餾水中。(4)2％硼酸溶液：稱取20g硼酸(H3BO3，AR)1000mL蒸餾水中。(5)混合指示劑：將0.1％甲基紅乙醇溶液與0.5％溴甲酚綠乙醇溶液，按1：1等體積混合。(6)0.1000mol/L鹽酸(HCl)標(biāo)準(zhǔn)溶液：取8．3mL鹽酸(AR)注入1000ml蒸餾水。用無水碳酸鈉(280℃烘干)法標(biāo)定準(zhǔn)確濃度。稱取0．2000g0.1mol/L鹽酸滴定至暗紅色。同時(shí)滴定空白，加以校正。(7)蔗糖(AR)(8)硫酸銨(AR)4操作步驟(1)選取有代表性的樣品用四分法縮分至200g，風(fēng)干或以65℃烘干后粉碎，過0.42mm(2)用分析天平準(zhǔn)確稱取0.3—1.0g制好的試樣，放入專用消化管或凱氏瓶中，加入混合催化劑2.0g和12mL硫酸，蓋好專用消化管蓋或凱氏瓶口蓋一漏斗，置于專用消煮爐或可調(diào)電爐上消煮，開始用小火加熱消煮，待泡沫消失后再加大火力保持微沸狀態(tài)，直至溶液透明呈藍(lán)綠色并繼續(xù)消煮2h.(3)將消化的試樣放冷，加入50-60mL蒸餾水，搖勻，冷卻。將蒸餾裝置冷凝管末端浸入內(nèi)裝25mL2％硼酸溶液的三角瓶底部，加入2滴混合指示劑。然后小心地向消化液內(nèi)加入50mL40％氫氧化鈉溶液，立即進(jìn)行加熱蒸餾，直至餾出液體體積為100mL為止。取下三角瓶使冷凝管末端離開液面，繼續(xù)蒸餾1-2min，并用蒸餾水沖洗冷凝管末端，停止蒸餾。(4)滴定：用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榧t色為終點(diǎn)。(5)空白測定：稱取0．5g蔗糖代替試樣，按上述操作步驟測定。5．結(jié)果計(jì)算(1)飼料中粗蛋白質(zhì)的含量按公式計(jì)算式中：w(CP)—飼料中粗蛋白的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，％；V—滴定試樣時(shí)所消耗的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液的體積，mLV0—滴定空白時(shí)所消耗的標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液體積，mLCB—標(biāo)準(zhǔn)溶液鹽酸的量濃度，MryLI0.0140—氮的摩爾質(zhì)量，kg/mol；m—試樣質(zhì)量，g(2)每試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測定，取平均值為分析結(jié)果方法允許相對偏差≤5％。6注意事項(xiàng)(1)方法的可靠程度可用硫酸銨代替試樣進(jìn)行測定氮含量，與化學(xué)式計(jì)量氮作比較，誤差應(yīng)為±0．2％。例如，準(zhǔn)確稱取0.2000g硫酸銨測定含氮量應(yīng)為(21.19±0．2)％(2)如果試樣中蛋白質(zhì)含量高，可適當(dāng)減少稱樣量，同時(shí)考慮蒸餾完全的問題，可適當(dāng)多蒸幾分鐘，以保證蒸餾完全，防止對下一個(gè)樣品造成的記憶效應(yīng)。(3)凱氏定氮法己沿用了l00多年，目前已有全自動(dòng)定氮儀，這類儀器從消化、蒸餾到滴定可自動(dòng)完成，但儀器價(jià)格較貴。目前國產(chǎn)半自動(dòng)定氮儀實(shí)際上是一套蒸餾裝置，消化、滴定還要另行試驗(yàn)。(4)GB6432—94國標(biāo)方法中規(guī)定樣品消化時(shí)要加入玻璃球以防爆沸，但我們的經(jīng)驗(yàn)證明，由于加入大量混合催化劑呈顆粒狀，不產(chǎn)生爆沸，故無需加入。另外，本實(shí)驗(yàn)考慮消化需要回流過程和減少蒸餾逸出造成的氨損失，建議消化管或凱氏瓶要加蓋消化。(5)國標(biāo)方法中使用鄰苯二甲酸氫鉀作為基準(zhǔn)物標(biāo)定鹽酸溶液。實(shí)際上使用無水碳酸鈉基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定鹽酸溶液也是很方便的。(四)粗脂肪粗脂肪包括了飼料中可溶于乙醚的所有成分，故又稱乙醚浸出物。通常用索氏抽提器回流浸提飼料樣品進(jìn)行粗脂肪的測定。按照國標(biāo)GB／T6433—94，飼料中粗脂肪的測定方法適用于各種單一飼料、混合飼料和配合飼料的分析。1原理采用索氏(Soxhlet)脂肪提取器用乙醚抽提試樣，抽提物的總質(zhì)量為粗脂肪含量。2．儀器設(shè)備(1)植物樣品粉碎機(jī)或研缽.(2)試驗(yàn)篩：孔徑0．42mm(40目)(3)分析天平：分度值0.0001g(4)電熱恒溫水浴鍋：室溫-100℃(5)鼓風(fēng)電熱烘箱：50-200℃(6)索氏脂肪提取儀(帶球形冷凝管)100-150mL(7)濾紙或?yàn)V紙筒：中速，脫脂。(8)干燥箱：變色硅膠或無水氯化鈣作干燥劑3試劑無水乙醚（AR）4．分析步驟(1)選取有代表性的試樣，用四分法縮分至200g，風(fēng)干或以65℃烘干后粉碎，過0.42mm(2)索氏提取器應(yīng)干燥無水，把抽提瓶(內(nèi)裝數(shù)粒沸石)在(150±2)℃烘箱內(nèi)烘干1—2h，取出放入干燥器內(nèi)冷卻30min，稱量。再烘30min，同樣冷卻，稱重。兩次稱量之差小于0．0008g為恒重。(3)視飼料中脂肪含量稱取l—5g(準(zhǔn)確至0．0002g)置于濾紙筒內(nèi)，或用濾紙包好，放入l05℃烘干1—2h，取出放入抽提器內(nèi)，濾紙包應(yīng)完全浸入乙醚，向抽提瓶內(nèi)加60-100mL乙醚，裝好回流裝置，在65-75取出試樣，仍用原抽提瓶回收乙醚，取抽提瓶，在水浴上蒸除殘存乙醚。(4)將抽提瓶外水分擦干，放入(150±2)℃烘箱內(nèi)烘干2h，取出放入干燥器內(nèi)冷卻30min，稱量。同樣再烘lh，冷卻，稱量。兩次稱量之差小于0.001g為恒重。5結(jié)果計(jì)算(1)飼料中粗脂肪的含量按公式計(jì)算式中：w(EE)——飼料中粗脂肪的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，％：m2——己恒重的抽提瓶質(zhì)量，g；ml——己恒重的拍提瓶和粗脂肪的總質(zhì)量m——風(fēng)干試樣質(zhì)量，g。(2)母個(gè)試秤取兩個(gè)平行樣測定，取平均值作為分析結(jié)果相對誤差應(yīng)小于5％。6．注意事項(xiàng)(1)本文介紹的方法又稱為油重法，GB/T6433—94中稱為仲裁法。如果樣品數(shù)量多，又不作為仲裁，可采用減重法。將風(fēng)干樣稱量裝入于105℃烘干恒重的濾紙筒內(nèi)，包好，在105℃烘干，冷卻稱量。放入拍提瓶內(nèi)抽提50—70次。取出濾紙包，吹干乙醚，放入(105±2)(2)目前，全自動(dòng)脂肪測定儀已有銷售，使用這類儀器可按儀器說明書操作。(五)粗纖維粗纖維是植物細(xì)胞壁的主要組成成分，它包括纖維素、半纖維素、多縮戊糖、木質(zhì)素及角質(zhì)素等成分。粗纖維影響飼料的消化，但適宜的水平對動(dòng)物是必需的。測定飼料中粗纖維的含量是控制飼料中適宜的粗纖維水平的前提。通常用稀硫酸和稀Na0H溶液溶解飼料樣品，不溶性殘?jiān)鼮榇掷w維。概略養(yǎng)分分析法測定粗纖維時(shí)，由于部分半纖維素、木質(zhì)素溶解于酸、堿中，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)誤差。VanSoest(1976)騰出了改進(jìn)方案，用中性洗滌纖維（NDF）、酸性洗滌纖維(ADF)、酸性洗滌木質(zhì)素(ADL)，作為測定飼料中纖維性物質(zhì)的指標(biāo)。國標(biāo)GB／T6434-94飼料中粗纖維的測定方法適用于各種混合飼料、配合飼料、濃縮飼料和單一飼料。牧草、青貯等飼料中粗纖維高達(dá)60％—80％(干物質(zhì)計(jì))，而精料中，如玉米、豆粕中粗纖維不過2％—4％。1原理飼料用稀酸和稀堿在規(guī)定條件下分別進(jìn)行消煮，再用乙醇除去可溶物，經(jīng)高溫灼燒后扣除礦物質(zhì)所剩余的物質(zhì)總稱。主要包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素和少量雜質(zhì)，如果膠等。2儀器設(shè)備(1)植物樣品粉碎機(jī)或研缽。(2)試驗(yàn)篩：孔徑1mm。(3)分析天平：分度值0．0001g。(4)可調(diào)電爐。(5)高溫電阻爐。(6)電熱恒溫箱。(7)消煮器：有冷凝球的600mL高型杯或有冷凝管的瓶。(8)抽濾裝置：包括真空泵、吸濾瓶和30ML濾堝(內(nèi)鋪孔徑0.42mm不銹鋼網(wǎng))或G2玻璃砂濾堝。(9)干燥器：變色硅膠或無水氯化鈣作干燥劑。3．試劑(1)0.225mol／L硫酸(1/2H2SO4)溶液：將6.93mL硫酸(AR，98％)移入500mL蒸餾水，冷卻后定容至1000mL。用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定其濃度，允許誤差±0.005mol/L。(2)0.313mol/L氫氧化鈉(NaOH)溶液：準(zhǔn)確稱取12.52g氫氧化鈉溶于500mL蒸餾水，冷卻后定容至1000mL。該溶液可用鄰苯二甲酸氫鉀基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定，濃度允許誤差±0.005mol/L。標(biāo)定方法：稱取1.8000g105-110℃式中：c(NaOH)—NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mol/Lm—鄰苯二甲酸氫鉀的質(zhì)量，gV1—滴定時(shí)所用NaoH溶液體積，mL；V0—滴定空白時(shí)所用NaoH溶液體積，mL：0.2042—鄰苯二甲酸氫鉀的摩爾質(zhì)量，kg/mL。(3)酸洗石棉：將市售的酸洗石棉先用鹽酸溶液(1+3)煮沸30min，過濾烘干后于550℃高溫電阻爐內(nèi)灼燒16h。用0.255mol/L硫酸(1/2H2SO4)溶液浸泡并煮沸30min，過濾，用水洗凈，再用0．313nDl／L氫氧化鈉(NaOH)溶液煮沸30min，過濾，可先用少量酸洗一次，再用水沖洗至中性，烘干后于550℃高溫電阻爐內(nèi)灼燒2h。冷卻裝瓶備用，此酸洗石棉空白試驗(yàn)每克含粗纖維值應(yīng)小于(4)95％乙醇(CP)(5)乙醚(CP)(6)正辛醇：(AR)。4．測定步驟(1)取有代表性飼料樣品用四分法縮至200g，風(fēng)干或以65℃(2)用分析天平準(zhǔn)確稱取1—2g試樣，放入消煮器內(nèi)，加入200mL0.255mol/L硫酸(1/2H2SO4)溶液和一滴正辛醇，裝好冷凝球或冷凝管立即快速加熱至沸，調(diào)節(jié)加熱器保持微沸狀態(tài)30min。立即抽濾(古氏坍塌內(nèi)鋪孔徑6.5μm尼龍布)。殘?jiān)谜麴s水洗至中性，抽干，用200mL0．313mol/L氫氧化鈉(Na0H)溶液將殘?jiān)耆D(zhuǎn)入原消煮溶器內(nèi)，同樣煮沸3