TNAASS 059-2023 牛呼吸道合胞體病毒病競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體檢測技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.30CCSA0311NAASS寧夏回族自治區(qū)農(nóng)學(xué)會團體標(biāo)準T/NAASS059—2023牛呼吸道合胞體病毒病競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體檢測技術(shù)規(guī)程TechnicalspecificationfordetectionofcompetitiveELISAantibodiesagainstbovinerespiratorysyncytialvirus2023-03-22發(fā)布 2023-04-25實施寧夏回族自治區(qū)農(nóng)學(xué)會??發(fā)布T/NAASS059T/NAASS059—2023II前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。專利免責(zé)申明：本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由寧夏回族自治區(qū)科科學(xué)技術(shù)廳提出。本文件由寧夏回族自治區(qū)農(nóng)學(xué)會歸口。T/NAASS059T/NAASS059—2023PAGEPAGE1牛呼吸道合胞體病毒病競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體檢測技術(shù)規(guī)程范圍本文件適用于牛呼吸道合胞體病毒病競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體檢測。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T6682 分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。牛呼吸道合胞體病毒Bovinerespiratorysyncytialvirus,BRSV牛呼吸道合胞體病毒是單股負鏈RNA病毒，屬副粘病毒科、肺病毒屬。感染奶牛和肉牛后可引起急性呼吸道疾病綜合征。3.2競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗Competitiveenzymelinkedimmunosorbentassay,cELISA競爭性ELISA法是將已知的特異性抗原包被在固相載體上，加入待測樣本和酶結(jié)合物，其中的相應(yīng)競爭性酶聯(lián)免疫吸附試驗試驗準備6682的要求。檢測樣品無菌采集牛靜脈血2mL～3mL,自然凝固1h～2h，1500rpm/min~2000rpm/min離心5min，收集血清于1.5mL離心管中。操作程序使用前將所有試劑（結(jié)合物除外）恢復(fù)至室溫（20℃～25℃），輕輕搖動或旋轉(zhuǎn)，使試劑混合均勻。取板～8加樣按照試劑盒說明書規(guī)定濃度，稀釋血清樣品，每孔加入待檢樣品，按照板孔布局加陰性和陽性對照。稀釋酶結(jié)合物用稀釋液將酶結(jié)合物稀釋至所需要的量。加酶結(jié)合物每孔加入酶結(jié)合物，搖勻。感作將微孔板密封后，37oC孵育。洗板300μL左右的洗滌液洗滌每個板孔6加底物每孔加入底物溶液。避光室溫孵育。加終止液每孔加入終止液終止反應(yīng)。測定吸光值（OD）酶標(biāo)儀預(yù)熱15min，在加入終止液5min內(nèi)讀取波長的吸光度值。實驗有效性檢測只有當(dāng)滿足試劑盒說明書規(guī)定