腫瘤生物治療-CAPRI技術(shù)

腫瘤生物治療--CAPRI技術(shù).第一頁，共49頁。腫瘤生物治療腫瘤基因治療1腫瘤免疫細(xì)胞治療2細(xì)胞因子治療3分子靶向藥物治療4腫瘤疫苗5腫瘤生物治療定義：主要是通過機(jī)體防御機(jī)制或生物制劑的作用以調(diào)節(jié)機(jī)體自身的生物學(xué)反應(yīng)，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。第二頁，共49頁。腫瘤生物治療歷史………..4contents目錄腫瘤生物治療策略…….……......……..…14各種治療方式的不足……………….....…31CAPRI…….……..…………35

腫瘤的生物治療

CAPRI生物治療第三頁，共49頁。04030201開始階段19世紀(jì)末，腫瘤合并感染患者瘤體縮小嘗試階段（50S）制備腫瘤疫苗，TSA、TAA概念確立奠基階段（60-70S）非/特異性免疫治療；過繼免疫細(xì)胞治療發(fā)展階段（80S-）生物調(diào)節(jié)劑概念的提出，靶向及抗血管治療一、腫瘤生物免疫治療的歷史第四頁，共49頁。一、腫瘤生物免疫治療的歷史“科萊毒素”：1891年美國(guó)骨科醫(yī)師威廉.科萊創(chuàng)立的治療方法?；撴溓蚓驼迟|(zhì)沙雷菌替代治療腫瘤灶注射細(xì)菌感染基礎(chǔ)上改進(jìn)誘發(fā)與細(xì)菌相似的全身或局部反應(yīng)沒有急性化膿性感染的風(fēng)險(xiǎn)第五頁，共49頁。一、腫瘤生物免疫治療的歷史短小棒狀桿菌和卡介苗（BCG）等用于治療惡性腫瘤短小棒狀桿菌：（CP）G+，其表面的脂多糖具有較強(qiáng)的免疫刺激作用，釋放單核細(xì)胞活化因子，激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。試用于惡性黑色素瘤、乳腺癌及肺小細(xì)胞型未分化癌卡介苗（BCG）：能導(dǎo)致CK的分泌和DC的激活。臨床常通過皮膚劃痕法和皮內(nèi)注射法，膀胱腫瘤可采用膀胱內(nèi)灌注。惡性黑色素瘤、肺癌、急性白血病、惡性淋巴瘤等輔助治療。第六頁，共49頁。腫瘤細(xì)胞疫苗1基因疫苗2多肽疫苗3樹突狀細(xì)胞疫苗4CTL表位肽疫苗5一、腫瘤生物免疫治療的歷史腫瘤疫苗(1902S)

原理：利用腫瘤細(xì)胞或腫瘤抗原物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體的抗癌能力，阻止腫瘤的生長(zhǎng)、擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，以達(dá)到清除或控制腫瘤的目的。根據(jù)腫瘤疫苗的來源分類第七頁，共49頁。一、腫瘤生物免疫治療的歷史腫瘤抗原(50S)

腫瘤抗原（tumorantigen）泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中新出現(xiàn)或過度表達(dá)的抗原物質(zhì)。TSA(Tumor-specificAntigen)：腫瘤特異性抗原。只存在于某種癌變細(xì)胞表面而不存在于相應(yīng)正常細(xì)胞或其他種類腫瘤細(xì)胞表面的新抗原

細(xì)胞在癌變過程中由原癌基因激活或抑癌基因突變、缺失等所導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞表達(dá)的異常蛋白被認(rèn)為是TSA，如突變的Ras、EGFR、P53、DPC4等。

TSA在細(xì)胞內(nèi)被降解后，其抗原肽可與MHC

I類分子在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中結(jié)合，并共表達(dá)于細(xì)胞表面，被CD8+CTL所識(shí)別，因此是誘發(fā)T細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要腫瘤抗原。第八頁，共49頁。一、腫瘤生物免疫治療的歷史TAA（Tumor-associatedAntigen）

非腫瘤細(xì)胞特有，正常細(xì)胞上也存在的抗原，只是在細(xì)胞癌變時(shí)其含量明顯增加。腫瘤標(biāo)志物的影響因素肝腎功能、膽汁淤積標(biāo)本采集過程腫瘤病人自身狀況炎癥反應(yīng)導(dǎo)致假陽性或假陰性孕婦及吸煙等項(xiàng)目名稱臨床意義癌胚抗原（CEA）原發(fā)性結(jié)腸癌、胃癌、腸梗阻甲胎蛋白（AFP）原發(fā)性肝癌、胃癌、胰腺癌前列腺特異性抗原（PSA）前列腺癌糖鏈抗原CA-125廣譜卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，胃癌，肺癌糖鏈抗原CA-153多種腺癌乳腺癌、肺腺癌、卵巢癌糖鏈抗原CA-199消化道癌相關(guān)抗原結(jié)直腸癌胃癌膽囊癌等神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的特異性標(biāo)志

神經(jīng)母細(xì)胞瘤小細(xì)胞肺癌等第九頁，共49頁。某些真菌及多糖免疫低下治療免疫亢進(jìn)治療免疫雙向調(diào)節(jié)劑腎上腺皮質(zhì)激素硫唑嘌呤氨甲喋呤雷帕霉素ATG、ALG他克莫司（FK506）咪唑立賓免疫抑制劑胸腺制劑白介素2特異性免疫核糖核酸特異性轉(zhuǎn)移因子干擾素左旋咪唑云芝多糖豬苓多糖銀耳多糖等某些中藥如黨參、刺五加、靈芝免疫增強(qiáng)劑一、腫瘤生物免疫治療的歷史免疫調(diào)節(jié)劑增強(qiáng)及調(diào)節(jié)免疫功能的藥物多為生物制品，少數(shù)為人工合成化學(xué)藥物第十頁，共49頁。一、腫瘤生物免疫治療的歷史生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑（biologicalresponsemodifier,BMR)

凡某一類物質(zhì)主要通過免疫系統(tǒng)直接或間接增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤效應(yīng)，并對(duì)腫瘤有治療效果的藥劑或方法，都可稱為生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。直接增強(qiáng)宿主抗腫瘤反應(yīng)1

減少抑制性機(jī)制增強(qiáng)宿主抗腫瘤反應(yīng)2增強(qiáng)腫瘤免疫原性3增加機(jī)體對(duì)細(xì)胞毒物質(zhì)耐受性4預(yù)防或逆轉(zhuǎn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化5生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑第十一頁，共49頁。一、腫瘤生物免疫治療的歷史生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑細(xì)胞因子：天然或基因重組，IL,TNF,IFN,CSF。效應(yīng)細(xì)胞：抗腫瘤的各類體細(xì)胞和造血干細(xì)胞如LAK,骨髓干細(xì)胞、外周血或臍帶血干細(xì)胞?？贵w：包括各類抗腫瘤單克隆抗體、CD3抗體。免疫調(diào)節(jié)劑：某些菌類及其有效成分；BCG、短小棒狀桿菌（CP）、香菇多糖、左旋米唑、冬蟲夏草等。腫瘤疫苗⑧蛋白酶抑制劑癌變抑制和細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑⑨基因治療血管生成抑制劑⑩其他第十二頁，共49頁。一、腫瘤生物免疫治療的歷史BRM臨床應(yīng)用舉例卡介苗（BCG）

能導(dǎo)致CK的分泌和DC的激活臨床常通過皮膚劃痕法和皮內(nèi)注射法，膀胱腫瘤可采用膀胱內(nèi)灌注短小棒狀桿菌（CP）G(+)厭氧桿菌，具有免疫佐劑的作用激活MΦ，增強(qiáng)溶酶體活性，誘導(dǎo)IFN和提高NK細(xì)胞活性多糖類：香菇多糖、云芝多糖等能刺激單核巨噬細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)T和NK細(xì)胞活性免疫組織和細(xì)胞提取物：胸腺素、轉(zhuǎn)移因子，免疫核糖核酸等來源于免疫組織（胸腺、脾、淋巴結(jié)）和外周淋巴細(xì)胞促進(jìn)T細(xì)胞分化成熟和增強(qiáng)T細(xì)胞對(duì)抗原的應(yīng)答反應(yīng)，增強(qiáng)CTL和NK細(xì)胞活性協(xié)助T細(xì)胞功能低下者免疫功能的恢復(fù)，以及宿主抗病毒感染和抗腫瘤第十三頁，共49頁。二、腫瘤生物治療的的策略生物治療：是一個(gè)廣泛的概念，涉及一切應(yīng)用生物大分子治療的方法，種類十分繁多。

細(xì)胞因子治療

1

免疫細(xì)胞治療2基因治療3分子靶向治療4腫瘤疫苗5第十四頁，共49頁。腫瘤的過繼免疫細(xì)胞治療腫瘤的過繼細(xì)胞免疫治療(ACI或AIT）

向腫瘤患者轉(zhuǎn)輸具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞直接殺傷腫瘤或激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)殺傷腫瘤細(xì)胞，達(dá)到治療腫瘤的目的。

簡(jiǎn)要?dú)v史回顧20世紀(jì)60年代：發(fā)現(xiàn)細(xì)胞免疫引起組織器官移植排斥啟發(fā)人們應(yīng)用過繼性細(xì)胞免疫治療腫瘤。20世紀(jì)80年代：85年，Rosenberg報(bào)道LAK/IL-2治療晚期惡性腫瘤具有療效。86年，報(bào)道TIL。第十五頁，共49頁。腫瘤的過繼免疫細(xì)胞治療歷史回顧《柳葉刀》報(bào)道76位根治性術(shù)后的肝癌患者接受了DC-CIK細(xì)胞免疫治療，其肝癌復(fù)發(fā)率比之于對(duì)照組降低了51%，衛(wèi)生部將自身免疫治療技術(shù)納入第三類醫(yī)療技術(shù)其他如iAPA-細(xì)胞、CAPRI細(xì)胞、粒福特、TCR、CAR-T、γδT細(xì)胞等。非特異性：NK,CIK,LAK等特異性：CTL,TIL等腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL）細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞樹突狀細(xì)胞淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞其他第十六頁，共49頁。細(xì)胞因子治療細(xì)胞因子（cytokines）是由細(xì)胞產(chǎn)生的可溶性蛋白。它們通過作用于細(xì)胞表面的相應(yīng)受體，影響自身細(xì)胞或其他細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝。目前FDA批準(zhǔn)臨床使用的細(xì)胞因子CK的抗腫瘤作用機(jī)制誘導(dǎo)免疫效應(yīng)細(xì)胞的激活、增殖與分化，增強(qiáng)免疫效應(yīng)細(xì)胞的功能與活性抑制腫瘤病毒的增殖和腫瘤細(xì)胞的分裂促進(jìn)腫瘤細(xì)胞抗原遞呈和共刺激分子表達(dá)直接殺傷腫瘤細(xì)胞或誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡抑制腫瘤血管生成，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化細(xì)胞因子適應(yīng)癥IFN-α毛細(xì)胞白血病、慢粒、Kaposi肉瘤、尖銳濕疣、慢性乙型、丙型肝炎IFN-β多發(fā)性硬化癥IFN-γ慢性肉芽腫性疾病IL-2轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌G-CSF中性粒細(xì)胞減少、非骨髓性惡性疾病GM-CSF淋巴瘤、急淋、骨髓移植EPO貧血第十七頁，共49頁。細(xì)胞因子治療副作用細(xì)胞因子流感樣癥狀：寒戰(zhàn)、發(fā)熱、肌痛、頭痛、乏力等多數(shù)CK毛細(xì)血管滲漏綜合征：低血壓、漿膜腔積液、組織水腫等IL-2，IL-11胃腸道反應(yīng)：惡心、食欲減退、嘔吐等IFN神經(jīng)精神癥狀：抑郁、躁狂、人格改變等IFN血液學(xué)毒性：白細(xì)胞減少，血小板減少，貧血IFN肝腎功能損害IFN骨痛G-CSF誘發(fā)自身免疫反應(yīng)IFN等CK的毒副反應(yīng)第十八頁，共49頁?；蛑委熗ㄟ^對(duì)人體遺傳物質(zhì)進(jìn)行修正、補(bǔ)充或改造以達(dá)到治療疾病的目的，或?qū)⑦z傳物質(zhì)導(dǎo)入人體組織或細(xì)胞所進(jìn)行的疾病治療方法?；蛑委煹牟呗?/p>

基因替換基因修飾基因添加和補(bǔ)充基因封閉目的基因免疫相關(guān)基因抑癌基因和癌基因抗血管生成基因自殺基因其它基因基因?qū)敕椒ǚ遣《据d體：B.病毒載體：非病毒載體①裸DNA直接注射②脂質(zhì)體共轉(zhuǎn)染③受體介導(dǎo)基因?qū)氩《据d體①逆轉(zhuǎn)錄病毒載體②腺病毒載體③腺相關(guān)病毒載體④單純皰疹病毒載體⑤痘病毒載體第十九頁，共49頁?；蛑委熁蛑委煈?yīng)用舉例今又生重組人P53腺病毒安柯瑞今又生對(duì)晚期鼻咽癌40余種人類主要實(shí)體瘤有明確療效術(shù)中、術(shù)后使用可消滅殘留癌，預(yù)防復(fù)發(fā)與放/化療聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用藥途徑為瘤內(nèi)注射以5-FU、順鉑化療方案進(jìn)行姑息治療的晚期鼻咽癌患者可聯(lián)合試用本品與化療藥物同步使用，直接瘤內(nèi)注射限于鼻咽癌高發(fā)地區(qū)三級(jí)甲等醫(yī)院使用E1B缺陷腺病毒第二十頁，共49頁。腫瘤疫苗定義：利用腫瘤抗原，通過主動(dòng)免疫方式誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗腫瘤效應(yīng),激發(fā)機(jī)體自身的免疫保護(hù)機(jī)制,達(dá)到治療腫瘤或預(yù)防復(fù)發(fā)的作用。主動(dòng)免疫抗原＋佐劑目前除了治療晚期前列腺癌的疫苗Provenge及治療晚期惡性黑色素瘤的抗CTL-4單抗Ipilimumab外，腫瘤疫苗尚未廣泛應(yīng)用。腫瘤疫苗設(shè)計(jì)策略選擇合適的腫瘤抗原選擇腫瘤抗原的給予方式第二十一頁，共49頁。腫瘤疫苗腫瘤疫苗來源于自體或異體腫瘤細(xì)胞或其粗提取物，帶有TSA或TAA經(jīng)滅活處理后喪失致瘤性，但仍保持其免疫原性對(duì)機(jī)體進(jìn)行主動(dòng)免疫蛋白/多肽疫苗抗獨(dú)特型抗體疫苗

病毒疫苗

DNA疫苗DC疫苗全細(xì)胞腫瘤疫苗第二十二頁，共49頁。分子靶向治療腫瘤分子靶向治療：利用腫瘤組織或細(xì)胞所具有的特異性結(jié)構(gòu)分子作為靶點(diǎn)，使用某些能與這些靶分子特異結(jié)合的抗體、配體等達(dá)到直接治療或?qū)蛑委熌康牡囊淮箢愔委煼椒?。分子靶向治療的靶點(diǎn)細(xì)胞受體

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞周期血管生成第二十三頁，共49頁。單克隆抗體目前上市的腫瘤分子靶向藥物主要有單克隆抗體和小分子化合物單克隆抗體單克隆抗體裸單抗抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC效應(yīng)）聚集和活化宿主的效應(yīng)細(xì)胞通過補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（CDC效應(yīng)）阻斷受體-配體的相互作用誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等機(jī)制殺傷腫瘤細(xì)胞修飾的單抗不具有裸抗體的免疫效應(yīng)和直接殺傷腫瘤的作用通過自身對(duì)腫瘤抗原的識(shí)別，將偶聯(lián)上的放射性同位素、毒素、藥物、酶等帶至腫瘤局部，起到特異性載體作用。第二十四頁，共49頁。單克隆抗體名稱主要靶點(diǎn)類型適應(yīng)癥裸單抗利妥昔單抗（rituximab）美羅華CD-20人/鼠嵌合抗體

B-NHL曲妥珠單抗（trastuzumab）HER-2人源化抗體

乳腺癌貝伐珠單抗（bevacizumab）VEGF人源化抗體CRC、NSCLC乳腺癌西妥昔單抗（cetuximab）EGFR人/鼠嵌合抗體NSCLC、CRCHNSCC修飾的單抗替伊莫單抗（90Y-ibritumomab）CD-20放射性物質(zhì)標(biāo)記的鼠源性抗體

B-NHL托西莫單抗（131I-tositumomab）CD-20放射性物質(zhì)標(biāo)記的鼠源性抗體

B-NHL第二十五頁，共49頁。單克隆抗體腫瘤抗體靶向治療的發(fā)展歷史鼠源性多克隆抗血清是最早被用于治療腫瘤的抗體分子1975年利用雜交瘤技術(shù)成功地制備McAb，大大推動(dòng)了腫瘤生物靶向治療的進(jìn)展近十年來已研究制備出人鼠嵌合抗體、人源化抗體和完全人源抗體通過克隆化可使雜交細(xì)胞成為單純的細(xì)胞系，由此單克隆系就可以獲得結(jié)構(gòu)與各種特性完全相同的高純度抗體，即單克隆抗體（MonoclonalAntiboby,McAb）。第二十六頁，共49頁。單克隆抗體抗體的基本結(jié)構(gòu)人-鼠嵌合抗體人源化抗體完全人源化抗體第二十七頁，共49頁。單克隆抗體人-鼠嵌合抗體人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區(qū)與人抗體的恒定區(qū)融合而得到的抗體人源化抗體進(jìn)一步降低抗體的鼠源成分，發(fā)展出CDR移植技術(shù)。

CDR移植即把鼠抗體的CDR序列移植到人抗體的可變區(qū)內(nèi)完全人源化抗體將人類抗體基因通過轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體技術(shù)，將人類編碼抗體的基因全部轉(zhuǎn)移至基因工程改造的抗體基因缺失動(dòng)物中，使動(dòng)物表達(dá)人類抗體，達(dá)到抗體全人源化的目的.第二十八頁，共49頁。小分子化合物酪氨酸激酶抑制劑（TKI）名稱主要靶點(diǎn)適應(yīng)癥Gefitinib（Iressa）EGFR-TKNSCLCErlotinib（Tarceva）EGFR-TKNSCLCImatinib（Gleevec）Bortezomib（Velcade)萬珂Bcr/Abl,c-kit,PDGFR蛋白酶體CMLGISTMMSorafenib（Nexavar）多吉美C-Raf，B-Raf，VEGFR,PDGFR、FLT-3，c-KITRCC,HCCSunitinib（Sutent）舒尼替尼VEGFR/PDGFR、FLT-3,KIT,FMSRCC,GIST第二十九頁，共49頁。分子靶向治療在臨床應(yīng)用方面，抗腫瘤單抗分子質(zhì)量大，半衰期長(zhǎng)，但易受胃液酸性環(huán)境的破壞，故常采用靜脈每1~3周給予1次。因其單藥治療療效不理想，多與化療聯(lián)合應(yīng)用。小分子化合物的半衰期短，口服穩(wěn)定，且多數(shù)臨床研究未顯示出與化療的協(xié)同作用，故常單藥每日1次口服。第三十頁，共49頁。三、各種治療方式的不足過繼性免疫療法存在的問題由于腫瘤細(xì)胞的不均一性及效應(yīng)細(xì)胞的異質(zhì)性造成療效的不確定性;體外大量擴(kuò)增過繼免疫細(xì)胞技術(shù)有待開發(fā)；輸注的細(xì)胞向腫瘤組織的聚集性弱;體內(nèi)過繼免疫機(jī)制的進(jìn)一步明確；與其它腫瘤治療方法的有機(jī)整合需要進(jìn)一步完善；缺乏統(tǒng)一的能指示臨床轉(zhuǎn)歸的的免疫檢測(cè)指標(biāo)；第三十一頁，共49頁。三、各種治療方式的不足腫瘤單克隆抗體靶向治療的缺點(diǎn)①一是實(shí)體腫瘤的細(xì)胞被致密的基質(zhì)包裹，抗體難以穿透這一屏障；大多數(shù)實(shí)體腫瘤都存在淋巴回流障礙，導(dǎo)致間質(zhì)內(nèi)壓力升高，阻止了抗體進(jìn)入腫瘤實(shí)質(zhì)。②二是由于治療腫瘤的抗體需要量極多，要求產(chǎn)品純度極高，目前的生物工程生產(chǎn)比較困難，因此其產(chǎn)品生產(chǎn)成本及價(jià)格均非常昂貴

③三是腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性，目前的抗體治療是針對(duì)腫瘤細(xì)胞某個(gè)特異性受體，而腫瘤細(xì)胞并非均一，因此單一清除含有某種受體的腫瘤細(xì)胞并不代表能治愈了腫瘤，

目前一些治療方法是在抗體中標(biāo)上同位素或毒素，盡管提高療效，但其副作用亦隨著增加。

第三十二頁，共49頁。三、各種治療方式的不足基因治療的不足安全性是基因治療的第一要素。有接受以腺病毒為載體的OTC基因治療4天后死亡。體內(nèi)靶向基因治療辦法不多。若治療基因不只進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，也進(jìn)入正常細(xì)胞，使后者功能異常。治療基因若誤入生殖細(xì)胞，影響將傳給下一代。

大力加強(qiáng)外源基因在不同組織學(xué)類型腫瘤中特異表達(dá)和調(diào)控途徑的研究，當(dāng)下的艱巨任務(wù)。第三十三頁，共49頁。三、各種治療方式的不足腫瘤疫苗的潛在危險(xiǎn)以照射、病毒感染、基因重組后的腫瘤細(xì)胞為疫苗者，腫瘤細(xì)胞的致瘤性雖大大降低，但也不完全排除其注入體內(nèi)致瘤的可能性；各種疫苗載體注入體內(nèi)，有將傳染性或其他毒性分子帶給病人的潛在危險(xiǎn)；機(jī)體產(chǎn)生的腫瘤抗原抗體有引起自身正常組織產(chǎn)生過敏反應(yīng)或自身免疫性疾病的可能；利用基因工程腫瘤疫苗時(shí)，外源基因持續(xù)表達(dá)外源抗原或插入激活內(nèi)源性致癌基因，有引起新的疾病和致癌的可能。第三十四頁，共49頁。四、CAPRI鏈?zhǔn)郊せ畹拿庖呒?xì)胞（cascadeprimedimmunecells，CAPRI）徳國(guó)慕尼黑大學(xué)醫(yī)學(xué)院免疫研究所RudolfWank教授的一項(xiàng)用于腫瘤生物治療的專利技術(shù)該技術(shù)是應(yīng)用患者的外周血淋巴細(xì)胞，經(jīng)活化刺激，獲得對(duì)腫瘤的特異性殺傷功能，回輸后可在體內(nèi)殺傷腫瘤。第三十五頁，共49頁。CAPRI細(xì)胞治療療效的限制因素確定誘導(dǎo)免疫反應(yīng)和應(yīng)答的抗原是哪一種抗原是很困難的。既使這個(gè)問題得到解決，腫瘤細(xì)胞經(jīng)常選擇性地丟失腫瘤特異性抗原腫瘤細(xì)胞可在局部產(chǎn)生細(xì)胞因子來降低效應(yīng)細(xì)胞的殺腫瘤能力需要大量細(xì)胞因子的參與和刺激免疫效應(yīng)，傳統(tǒng)方法里面，刺激因子是不充分的

因此，難以達(dá)到理想的殺傷效果。第三十六頁，共49頁。CAPRI針對(duì)以上問題，Wank教授發(fā)明了通過級(jí)聯(lián)引發(fā)的刺激外周血單個(gè)核細(xì)胞的CAPRI細(xì)胞。①病人外周血經(jīng)分離獲得單個(gè)核細(xì)胞②經(jīng)固化的抗CD3單克隆抗體及細(xì)胞因子激活，使DC成熟③再次加入未經(jīng)激活的外周血淋巴細(xì)胞④加入細(xì)胞因子，整個(gè)過程5天第三十七頁，共49頁。CAPRICAPRI解決問題初級(jí)刺激所激活的抗原呈遞細(xì)胞本身在體內(nèi)已接觸過腫瘤抗原，且具有記憶功能，因此可在體外有效地誘導(dǎo)對(duì)自身病人特異性的免疫應(yīng)答，所以本方法無需確定病人的腫瘤抗原腫瘤細(xì)胞經(jīng)常有意識(shí)地丟失掉表面HLA（人類白細(xì)胞抗原）的表達(dá)，從而逃避殺傷細(xì)胞尤其CTL細(xì)胞的殺傷。實(shí)驗(yàn)表明，CAPRI細(xì)胞可以顯著上調(diào)腫瘤細(xì)胞表面的HLA表達(dá)，使殺傷細(xì)胞很容易識(shí)別并啟動(dòng)免疫殺傷過程CAPRI細(xì)胞在體外已被有效活化，進(jìn)入體內(nèi)后將不受細(xì)胞因子及共刺激因子的限制第三十八頁，共49頁。CAPRICAPRI的四大優(yōu)勢(shì)第三十九頁，共49頁。CAPRI與CIK細(xì)胞療法的比較項(xiàng)目CIKCAPRI說明培養(yǎng)過程一步培養(yǎng)擴(kuò)增獲得效應(yīng)細(xì)胞１）第一步培養(yǎng)的目的不是獲得效應(yīng)細(xì)胞，而是具有抗原提呈功能的DC和下一步刺激的細(xì)胞因子環(huán)境；２）初步刺激激活的DC在體內(nèi)接觸過抗原，具有記憶功能，可有效刺激PBMC的激活；從CIK基礎(chǔ)上改進(jìn)的方法MHC限制性只殺傷不表達(dá)MHC分子的腫瘤細(xì)胞CTL、Th殺傷表達(dá)或高表達(dá)MHC分子的腫瘤細(xì)胞，NK、NKT殺傷不表達(dá)MHC的腫瘤細(xì)胞人類腫瘤細(xì)胞中，表達(dá)MHC分子的腫瘤細(xì)胞約占80%，不表達(dá)MHC分子的細(xì)胞約占20%效應(yīng)細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞CD3+和CD56+細(xì)胞，即NKT細(xì)胞；記憶細(xì)胞：29%Th和CTL細(xì)胞為主，另有少量NK、NKT、DC細(xì)胞等；記憶細(xì)胞：49%CAPRI的效應(yīng)細(xì)胞中NKT細(xì)胞約占20%，CTL和Th細(xì)胞約占80%，而CIK效應(yīng)細(xì)胞均為NKT細(xì)胞；第四十頁，共49頁。CAPRI恢復(fù)和上調(diào)HLA在腫瘤細(xì)胞表面的表達(dá)在效應(yīng)細(xì)胞：腫瘤細(xì)胞（E:T，或效靶比）為1：5條件下，CIK細(xì)胞與乳腺癌細(xì)胞共同孵育5小時(shí)，乳腺癌細(xì)胞的HLA表達(dá)無變化在E:T＝1：5條件下，CAPRI細(xì)胞與乳腺癌細(xì)胞共同孵育5小時(shí)，乳腺癌細(xì)胞的HLA表達(dá)上升100%，即5個(gè)CAPRI細(xì)胞可上調(diào)5個(gè)癌細(xì)胞的HLA表達(dá)腫瘤細(xì)胞HLA表達(dá)的下調(diào)使得腫瘤細(xì)胞無法被效應(yīng)細(xì)胞識(shí)別并殺傷，因此，腫瘤細(xì)胞表面HLA表達(dá)的下調(diào)或喪失是腫瘤細(xì)胞逃避CTL細(xì)胞殺傷的重要手段效應(yīng)細(xì)胞的反復(fù)利用CIK細(xì)胞只能一次性殺傷腫瘤細(xì)胞CAPRI細(xì)胞的效應(yīng)細(xì)胞在消滅腫瘤細(xì)胞系后可以被再次利用，可連續(xù)7次用于同種腫瘤細(xì)胞系，而殺傷活性不減用于CAPRI細(xì)胞反復(fù)利用試驗(yàn)的腫瘤為：黑色素瘤（1個(gè)細(xì)胞系）、乳腺癌（9個(gè)細(xì)胞系）、結(jié)腸癌（3個(gè)細(xì)胞系）、多形性惡性膠質(zhì)瘤（2個(gè)細(xì)胞系）、乳頭狀瘤（1個(gè)細(xì)胞系）成纖維細(xì)胞包裹的腫瘤完全無效有效殺傷包裹的腫瘤細(xì)胞腫瘤在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移病灶通常是被成纖維細(xì)胞所包裹的，因此，CAPRI細(xì)胞對(duì)于轉(zhuǎn)移瘤具有顯著的殺傷力第四十一頁，共49頁。CAPRICAPRI的效應(yīng)細(xì)胞中，記憶細(xì)胞占據(jù)了將近一半（49%）的比例，這些記憶細(xì)胞有三大特點(diǎn)：其一、高表達(dá)抗凋零分子，不易在外界因素的作用下凋零。其二、非抗原依賴性增殖，即不需要抗原的存在即可以不斷增殖，保持相應(yīng)的數(shù)量。其三、也是最重要的一點(diǎn)，再刺激閾值下降，就是說，回輸?shù)襟w內(nèi)后，即使極少量的抗原信息的刺激，都可以引起記憶細(xì)胞強(qiáng)烈、快速、有效的免疫應(yīng)答，從而啟動(dòng)整個(gè)殺傷過程。第四十二頁，共49頁。CAPRI臨床應(yīng)用病人的選擇1、感染甲肝、乙肝、丙肝和艾滋病的腫瘤病人應(yīng)在有單獨(dú)培養(yǎng)條件下進(jìn)行細(xì)胞的制備2、細(xì)菌感染的病人應(yīng)在開展免疫療法前用抗