蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留快速檢測方法標準

#蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留快速檢測方法標準.范圍本標準規(guī)定了由酶抑制法測定蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速檢驗方法。本標準適用于蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速篩選測定。測試方法酶抑制率法.原理在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率和農藥的濃度呈正相關。正常情況下，酶催化神經傳導代謝產物(乙酰膽堿)水解，其水解產物和顯色劑反應，產生黃色物質，用分光光度計在410nm處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在。.試劑PH8.0緩沖溶液：分別取43.5g無水磷酸氫二鉀和2.2g磷酸二氫鉀，用510mL蒸餾水溶解。顯色劑:分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)和15.6mg碳酸氫鈉，用20mL緩沖溶液溶解，4°C冰箱中保存。底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿，加3.1mL蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過十天。乙酰膽堿酯酶：根據酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，3min的吸光度變化DA0值應控制在0.3以上。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?，保存期不超十天?？蛇x用由以上試劑制備的試劑盒。乙酰膽堿酯酶的AA0值應控制在0.3以上。4儀器

分光光度計或相應測定儀。常量天平。恒溫水浴或恒溫箱步驟樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成1cm左右見方碎片，取樣品運，放入燒杯或提取瓶中，加入5mL緩沖溶液，靜制十五分鐘，之間需振蕩幾次，待用。對照溶液測試：先于試管中加入2.5mL緩沖溶液，依次加入0-1^酶液、0.1mL顯色劑、0.lmL底物搖勻，此時檢液開始顯色反應，應立即放入儀器比色池中，記錄反應3min的吸光度變化值人A0。樣品溶液測試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液，其它操作和對照溶液測試相同，但在加底物之前必須放置15分鐘，記錄反應3min的吸光度變化值AAt。6結果的表述計算結果計算檢測結果按公式計算：抑制率（%）=[（△4-△、）/AAJX100式中：AA°一對照溶液反應3min吸光度的變化值；AAt—樣品溶液反應3min吸光度的變化值；結果判定結果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率三50%時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥存在，樣品為陽性結果。陽性結果的樣品需要重復檢驗2次以上。對陽性結果的樣品，可用其它方法進一步確定具體農藥品種和含量。7附則酶抑制率法技術指標

靈敏度指標：酶抑制率法對部分農藥的檢出限見表2酶抑制率法對部分農藥的檢出限表2酶抑制率法對部分農藥的檢出限農藥名稱檢出限mg/kg農藥名稱檢出限mg/kg敵敵畏0.1氧化樂果0.8對硫磷1.0甲基異柳磷5.0辛硫磷0.3滅多威0.1甲胺磷2.0」硫克百威0.05馬拉硫磷4.0敵百蟲0.2樂果3.0吠南丹0.057.1.2符合率：在檢出的抑制率三50%的30份以上樣品中，經氣相色譜法驗證，陽性結果的符合率應該在80%以上。8說明蔥、蒜、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的次生物質，容易產生假陽性。處理這類樣品時，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，減少色素的干擾。當溫度條件低于37度，酶反應的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑后放置反應的時間應相應延長，延長時間的確定，應以膽堿酯酶空白對照測試3min吸光度變化差值在0.3以上，即可往下操作