革蘭氏陰性桿菌大腸桿菌介紹

關(guān)于革蘭氏陰性桿菌大腸桿菌介紹第1頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月大腸桿菌的歷史腸桿菌科,為革蘭氏陰性桿菌。根據(jù)生化反應(yīng)、血清學(xué)試驗(yàn)、DNA同源性研究，腸桿菌科至少包括28個(gè)菌屬，110個(gè)以上的菌種。埃希菌屬（Escherichia）中最重要的是大腸埃希菌(E.coli)

，常稱為大腸桿菌。大腸桿菌廣泛分布于自然界，包括腐生菌、寄生菌和人及動(dòng)物的病原菌。多數(shù)是人和動(dòng)物腸道正常菌群的重要成員。20世紀(jì)中葉，認(rèn)識(shí)到一些特殊血清型的大腸桿菌對(duì)人和動(dòng)物有病原性，尤其對(duì)嬰兒和幼畜（禽），常引起嚴(yán)重腹瀉和敗血癥。第2頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月一、大腸桿菌的一般特性1、G－直短桿菌，兩端鈍圓，散在或成對(duì)。 革蘭染色第3頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月

2、周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽孢，有的有莢膜。

3、代謝能力強(qiáng)，代謝類型是異養(yǎng)兼性厭氧型。

第4頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月二、培養(yǎng)及生化特性1、培養(yǎng)特性①兼性厭氧；②最適生長溫度37℃，最適生長pH7.2～7.6；③普通瓊脂培養(yǎng)基：生長良好，圓形凸起、光滑、濕潤、半透明、灰白色菌落，直徑約2~3mm；④普通肉湯培養(yǎng)基：均勻渾濁，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌環(huán)。第5頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月⑤腸道菌鑒別培養(yǎng)基麥康凱瓊脂培養(yǎng)基：紅色菌落。伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基：黑色帶金屬閃光的菌落。SS瓊脂培養(yǎng)基：一般不生長或生長較差，生長者呈紅色。⑥血平板：一些致病性菌株常β溶血。

麥康凱瓊脂培養(yǎng)基伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基SS瓊脂培養(yǎng)基血平板第6頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月

2、

生化特性I：吲哚試驗(yàn)M：甲基紅試驗(yàn)V：V-P試驗(yàn)C：枸櫞酸鹽利用實(shí)驗(yàn)第7頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）三糖鐵培養(yǎng)基①配方牛肉膏5g硫酸亞鐵

0.2g氯化鈉5g蒸餾水1000mL蛋白胨20g硫代硫酸鈉0.2g蛋白胨5g瓊脂12g乳糖

10g2%酚紅溶液

12.5ml蔗糖

10g葡萄糖

1g第8頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月②原理測定細(xì)菌對(duì)葡萄糖、乳糖及蔗糖的發(fā)酵反應(yīng)，以及能否產(chǎn)生硫化氫?？设b別腸道菌。葡萄糖乳糖蔗糖硫酸亞鐵大腸桿菌沙門菌能產(chǎn)硫化氫菌株發(fā)酵葡萄糖和乳糖；大量產(chǎn)酸產(chǎn)氣底層和斜面均呈黃色，底層有氣泡只發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣底層黃色，斜面保持紅色因形成硫化亞鐵而使培養(yǎng)基呈黑色第9頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月對(duì)照假單胞菌志賀氏菌

沙門氏菌大腸桿菌變形桿菌三糖鐵培養(yǎng)基第10頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月吲哚試驗(yàn)V-P試驗(yàn)枸櫞酸鹽試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)IMViC試驗(yàn)第11頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月三、大腸桿菌的基本結(jié)構(gòu)(一)細(xì)胞壁

大腸桿菌的細(xì)胞壁分外膜和肽聚糖層。外膜是大腸桿菌細(xì)胞壁的主要成分，主要由磷脂、蛋白質(zhì)和脂多糖組成。脂多糖是革蘭氏陰性細(xì)菌的內(nèi)毒素，也是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的特有成分，主要與抗原性、致病性及對(duì)噬菌體的敏感性有關(guān)。第12頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月外膜周質(zhì)細(xì)胞質(zhì)膜第13頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）質(zhì)粒F因子：又稱致育因子，插入、復(fù)制和轉(zhuǎn)移的功能。有F因子的大腸桿菌為雄性，用F+表示，不含F(xiàn)因子的大腸桿菌稱為雌性，用F-表示。通過F+和F-細(xì)菌的接合，F(xiàn)因子可經(jīng)性菌毛傳遞給F-菌株，使F-菌株轉(zhuǎn)變?yōu)镕+菌株。R因子：抗性轉(zhuǎn)移因子和抗性決定因子。Col因子：產(chǎn)大腸桿菌素因子，編碼合成大腸桿菌素。

第14頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月四、大腸桿菌的特殊結(jié)構(gòu)1、莢膜

莢膜具有抗原性，構(gòu)成了大腸桿菌的表面抗原，即K抗原。2、鞭毛由鞭毛蛋白組成，構(gòu)成了細(xì)菌的鞭毛抗原，與運(yùn)動(dòng)有關(guān)。3、菌毛

在細(xì)胞表面還含有一種比鞭毛更細(xì)更短更硬的絲狀體叫菌毛，可分為普通菌毛和性菌毛。

第15頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月大腸桿菌可以透過接合作用傳遞遺傳物質(zhì)。第16頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月五、抗原及血清型（一）抗原O抗原，即菌體抗原，為細(xì)胞壁脂多糖。該抗原刺激機(jī)體主要產(chǎn)生IgM類抗體。H抗原，即鞭毛抗原，H抗原主要刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG類抗體，與其他腸道菌基本無交叉反應(yīng)。K抗原，即莢膜抗原，位于O抗原外層，為多糖。具有K抗原的菌株不能被其相應(yīng)的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。據(jù)耐熱性不同，K抗原又分為：L、A和B三型。第17頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月L型K抗原：對(duì)熱敏感，100℃1h破壞其抗原性，并失去與相應(yīng)抗體的結(jié)合力和凝集性，位于被膜中，偶見于莢膜中。A型K抗原：耐100℃1h，但121℃2.5h破壞其抗原性和O不凝集性，但保留與相應(yīng)抗體結(jié)合能力。位于莢膜中，抗A血清可使具有相應(yīng)A抗原的菌體出現(xiàn)莢膜腫脹現(xiàn)象。B型K抗原：100℃1h破壞其抗原性與相應(yīng)抗體的凝集性，但保留其與相應(yīng)抗體結(jié)合力。第18頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月第19頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）血清型可用O:K:H排列表示其血清型。如：O8:K23:H19，表示該菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原為19。致人畜腹瀉的產(chǎn)腸毒素大腸桿菌，除含K抗原外，還可含有蛋白質(zhì)性粘附素抗原。對(duì)粘附素抗原應(yīng)并列寫于多糖K抗原之后。如：O8:K87，K88:H19中K88即為粘附素抗原。第20頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月六、致病性（一）致病物質(zhì)1、定居因子（Colonizationfactor，CF）；也稱粘附素，即大腸桿菌的菌毛。2、腸毒素是腸產(chǎn)毒性大腸桿菌在生長繁殖過程中釋放的外毒素，分為耐熱和不耐熱兩種。①耐熱（ST）：100℃20min不破壞，免疫原性弱。②不耐熱（LT）：65℃30min破壞，免疫原性強(qiáng)。3．其他：細(xì)胞壁脂多糖的類脂A具有毒性；K抗原有抗吞噬作用，有抵抗抗體和補(bǔ)體的作用。第21頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）所致疾病1．腸道外感染：多為內(nèi)源性感染，以泌尿系感染為主；大腸桿菌可侵入血液，引起敗血癥；大腸桿菌性腦膜炎。2．急性腹瀉（1）腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）（2）產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(STEC）（3）腸致病性大腸桿菌（EPEC）（4）腸出血性大腸桿菌（EHEC）（5）腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）（6）腸粘附性大腸桿菌（EAEC）第22頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月腸產(chǎn)毒性大腸桿菌（ETEC）ETEC是致人和幼畜腹瀉最常見的病原菌；毒力因子有粘附素性菌毛和腸毒素。致病過程第23頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月七、抵抗力大腸桿菌對(duì)熱的抵抗力較其他腸道桿菌強(qiáng)。55℃加熱60min或60℃加熱15min仍有部分細(xì)菌存活。膽鹽、煌綠等對(duì)非致病性大腸桿菌有選擇性抑制作用，而對(duì)致病性大腸桿菌無抑制作用，所以用腸道選擇鑒別培養(yǎng)基來分離致病性大腸桿菌。對(duì)磺胺類、鏈霉素、氯霉素等敏感。第24頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月八、非致病性大腸桿菌的作用保護(hù)腸道的微生態(tài)平衡。消耗腸道內(nèi)的氧氣，創(chuàng)造厭氧環(huán)境，利于厭氧菌的生長；分解代謝產(chǎn)物供厭氧菌生長。能合成維生素K和B。對(duì)外襲菌有拮抗作用。某些大腸桿菌能產(chǎn)生大腸菌素，對(duì)一些病原微生物具有拮抗作用。第25頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月九、微生物學(xué)的診斷1、病料的采集：腸道外感染取中段尿、血液、膿液、腦脊液等，腹瀉者取糞便。2、分離培養(yǎng)：糞便標(biāo)本直接接種腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基。其他病料可同時(shí)接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養(yǎng)基。37℃培養(yǎng)18～24h后，觀察菌落并涂片染色鏡檢。3、生化鑒定：大部分菌株發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，并發(fā)酵葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇和木膠糖等產(chǎn)酸產(chǎn)氣。IMViC試驗(yàn)為“++--”。即為典型大腸桿菌。第26頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月病料腹瀉或水腫病例敗血癥病例常采集糞便或腸粘膜刮取物常采集血液及其病變組織麥康凱或伊紅美蘭瓊脂平板劃線血瓊脂或麥康凱瓊脂平板劃線挑取疑似大腸桿菌菌落5～10個(gè)分別在瓊脂平板進(jìn)行純培養(yǎng)革蘭染色鏡檢接種TSI瓊脂培養(yǎng)基革蘭氏染色陰性生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定豬水腫病菌株豬腹瀉菌株Stx2e檢測腸毒素檢測臨床上只檢測O抗原第27頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月4、血清型鑒定假定試驗(yàn)：取經(jīng)生化試驗(yàn)證實(shí)的大腸桿菌培養(yǎng)物，用致病性大腸桿菌，侵襲性大腸桿菌和產(chǎn)毒素大腸桿菌多價(jià)O血清和出血性大腸桿菌的O157血清做玻片凝集試驗(yàn)。當(dāng)與某一種多價(jià)O血清凝集時(shí)，在與該多價(jià)O血清的單價(jià)O血清做實(shí)驗(yàn)。如與某一單價(jià)O血清發(fā)生強(qiáng)凝集反應(yīng)，則為假定試驗(yàn)陽性。證實(shí)試驗(yàn)：制備O抗原懸液。原效價(jià)為1：160～1：320的O血清，用0.5%鹽水稀釋至1：40。稀釋血清與抗原懸液在10mm×75mm試管內(nèi)等量混合，做試管凝集試驗(yàn)?；靹蚝蠓庞?0℃水浴箱內(nèi)，經(jīng)16h后觀察結(jié)果。如出現(xiàn)凝集，可證實(shí)為該O抗原。第28頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月

假定試驗(yàn)大腸桿菌培養(yǎng)物致病性大腸桿菌多價(jià)O血清侵襲性大腸桿菌多價(jià)O血清產(chǎn)毒素大腸桿菌多價(jià)O血清出血性大腸桿菌O157血清玻片凝集試驗(yàn)證實(shí)試驗(yàn)O抗原懸液O血清試管內(nèi)等量混勻50℃水浴箱，16h結(jié)果判定試管凝集試驗(yàn)第29頁，課件共31頁，創(chuàng)作于2023年2月5、Stx2e的檢測

（1）Vero細(xì)胞毒性試驗(yàn)；（2）小鼠神經(jīng)毒性試驗(yàn)；（