臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)

臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)第一頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第一章概述免疫應(yīng)答的過(guò)程1、識(shí)別階段：巨噬細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞對(duì)外來(lái)抗原或自身變性抗原

進(jìn)行識(shí)別、攝取、降解和遞呈抗原信息給T輔助細(xì)胞

（Thc）及相關(guān)淋巴細(xì)胞的過(guò)程。2、活化階段：B細(xì)胞接受抗原刺激后活化、增殖、分化為漿細(xì)胞；T細(xì)胞在接受抗原刺激和協(xié)同刺激雙信號(hào)后活化、增殖、

分化為效應(yīng)細(xì)胞。3、效應(yīng)階段：漿細(xì)胞分泌特異性抗體，執(zhí)行體液免疫功能；T細(xì)胞中

的Th細(xì)胞分泌細(xì)胞因子等效應(yīng)分子，T殺傷細(xì)胞執(zhí)行細(xì)

胞毒效應(yīng)功能。@吉普塞舞神第二頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第一章概述免疫系統(tǒng)由免疫器官、免疫細(xì)胞、免疫分子組成。（一）中樞免疫器官1、骨髓：造血干細(xì)胞（HSC）分化、發(fā)育、成熟2、胸腺：T細(xì)胞發(fā)育的重要中樞器官（二）外周免疫器官及組織1、淋巴結(jié)2、脾：最大的外周淋巴器官3、粘膜伴隨的淋巴組織：如扁桃體、小腸的派氏集合淋巴結(jié)、闌尾淋巴細(xì)胞再循環(huán)與歸巢淋巴細(xì)胞在體內(nèi)依靠歸巢受體由定居地經(jīng)淋巴循環(huán)及血液循環(huán)不斷往返于外周免疫器官、二級(jí)淋巴組織及全身器官組織、淋巴循環(huán)匯集于胸導(dǎo)管，經(jīng)上腔靜脈進(jìn)入血液循環(huán)。血液循環(huán)中的淋巴細(xì)胞及各類免疫細(xì)胞在毛細(xì)血管后微靜脈處穿越高壁內(nèi)皮細(xì)胞，進(jìn)入淋巴組織及淋巴器官，再次進(jìn)入淋巴循環(huán)。@吉普塞舞神第三頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第一章概述免疫細(xì)胞（一）淋巴細(xì)胞1、T細(xì)胞：胸腺依賴淋巴細(xì)胞；約占淋巴細(xì)胞的70%~75%。①T細(xì)胞受體（TCR）：又稱T細(xì)胞抗原受體，是T細(xì)胞特有的表面標(biāo)志。T細(xì)胞識(shí)別抗原和轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)是由TCR特異識(shí)別MHC分子遞呈的抗原肽，CD3分子轉(zhuǎn)導(dǎo)T細(xì)胞活化的第一信號(hào)。

②簇分化抗原（CD）：T細(xì)胞發(fā)育不同階段的亞群存在不同的分化抗原，這是區(qū)分T淋巴細(xì)胞的重要標(biāo)志。2、B細(xì)胞：骨髓依賴性淋巴細(xì)胞，約占淋巴細(xì)胞的5%~25%。主要功能：產(chǎn)生抗體、遞呈抗原、分泌細(xì)胞因子參與免疫調(diào)節(jié)。B細(xì)胞受抗原刺激后可分化為產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞和長(zhǎng)壽記憶細(xì)胞。3、自然殺傷細(xì)胞（NK）NK細(xì)胞無(wú)需抗原刺激，可非特異直接殺傷腫瘤和病毒感染的細(xì)胞，因此在免疫監(jiān)視和早期抗感染免疫過(guò)程中起重要作用。活化NK細(xì)胞可分泌IFNγ和TNFα等細(xì)胞因子，參與免疫調(diào)節(jié)作用。@吉普塞舞神第四頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第一章概述免疫細(xì)胞（二）免疫輔助細(xì)胞1、單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)共同特點(diǎn)是表達(dá)MHCⅡ類分子及具有吞噬作用。2、樹(shù)突狀細(xì)胞專職抗原遞呈細(xì)胞@吉普塞舞神第五頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第一章概述免疫分子（一）免疫球蛋白分泌型（sIg）：主要存在于體液中，具有抗體的各種功能。膜型（mIg）：表達(dá)于B細(xì)胞表面，稱為膜表面免疫球蛋白，為抗原

受體?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)：2條重鏈（H）和2條輕鏈（L）以二硫鍵連接在一起。V-可變區(qū)；C-恒定區(qū)按照體內(nèi)含量的多少分為：IgG、IgA、IgM、IgD、IgEIg的輕鏈分為κ鏈和λ鏈，一個(gè)天然Ig分子的兩條輕鏈相同。@吉普塞舞神第六頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第一章概述免疫分子（一）免疫球蛋白1、IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白，是再次應(yīng)答的主要抗體，

也是唯一能通過(guò)胎盤(pán)的抗體。大多數(shù)抗菌抗體、抗病毒抗

體都是IgG，某些自身抗體及超敏Ⅱ型抗體也是IgG，免疫

檢測(cè)中第二抗體也以IgG為主。2、IgA：大部分血清型Ig為單體；分泌型sIgA為二聚體。每一個(gè)sIgA

分子含一個(gè)J鏈和一個(gè)分泌片。sIgA性能穩(wěn)定，主要存在于

胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液中，是參與黏

膜局部免疫的主要抗體。3、IgM：五聚體，Ig分子中最大的，主要存在于血液。是個(gè)體發(fā)育

最早合成的抗體，也是抗原刺激后最先產(chǎn)生的抗體。感

染過(guò)程中IgM水平升高，說(shuō)明近期感染；新生兒臍血中若IgM增高，說(shuō)明有宮內(nèi)感染。4、IgD：作用不明，B細(xì)胞膜上的IgD可作為B細(xì)胞分化成熟的標(biāo)志。5、IgE：?jiǎn)误w結(jié)構(gòu)，血清中最少。親細(xì)胞抗體，介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)，

在特異性過(guò)敏反應(yīng)和寄生蟲(chóng)早期感染患者血清中可升高。@吉普塞舞神第七頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第一章概述免疫分子（二）補(bǔ)體系統(tǒng)補(bǔ)體是存在于人和脊椎動(dòng)物正常新鮮血清及組織液中的一組具有酶樣活性的球蛋白。補(bǔ)體的大多數(shù)組分都是糖蛋白，多屬于β球蛋白。含量最高的補(bǔ)體：C3、C4含量最低的補(bǔ)體：C2補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定，加熱56℃、30min可使血清中絕大部分補(bǔ)體組分喪失活性，稱為滅活。補(bǔ)體的激活途徑：1、經(jīng)典途徑：以結(jié)合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑，補(bǔ)體C1~C9共11種成分全部參與了激活途徑。2、替代途徑：又稱旁路途徑。病原微生物等細(xì)胞壁成分提供接觸面

直接激活補(bǔ)體C3，然后完成C5~C9的激活過(guò)程。激活

物主要是細(xì)胞壁成分。3、MBL途徑：由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結(jié)合凝集素（MBL）與病

原體結(jié)合后啟動(dòng)激活。補(bǔ)體既可參與機(jī)體的防御效應(yīng)和自身穩(wěn)定，亦可引起免疫損傷。@吉普塞舞神第八頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第一章概述免疫分子（三）細(xì)胞因子免疫細(xì)胞分泌的多肽或小分子蛋白質(zhì)。通過(guò)自分泌、旁分泌、內(nèi)分泌的方式發(fā)揮作用。按生物學(xué)功能分：白細(xì)胞介素、干擾素、生長(zhǎng)因子、趨化因子家族、

腫瘤壞死因子、集落刺激因子。細(xì)胞因子受體分：免疫球蛋白基因超家族、I型細(xì)胞因子受體家族、Ⅱ型細(xì)胞因子受體家族、Ⅲ型細(xì)胞因子受體家族、

趨化性細(xì)胞因子受體家族。（四）黏附分子黏附分子（CAM）是介導(dǎo)細(xì)胞間或細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間相互結(jié)合和黏附作用的小分子多肽或糖蛋白。以受體-配體的結(jié)合形式發(fā)揮作用。參與機(jī)體免疫應(yīng)答、炎癥發(fā)生、凝血、創(chuàng)傷愈合和腫瘤轉(zhuǎn)移等病理生理過(guò)程。（五）CD抗原人類白細(xì)胞分化抗原（HLA）是指血細(xì)胞在分化成熟及活化過(guò)程中，出現(xiàn)或消失的細(xì)胞表面標(biāo)記分子。@吉普塞舞神第九頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二章抗原抗體反應(yīng)一、抗原抗體反應(yīng)的原理抗原抗體是一種非共價(jià)結(jié)合、不形成共價(jià)鍵。1、靜電引力；2、范德華力；3、氫鍵結(jié)合力；4、疏水作用力：是這些結(jié)合力中最強(qiáng)的。親和性：是指抗體分子上一個(gè)抗原結(jié)合點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的抗原表位之間相

適應(yīng)而存在的引力，它是抗原抗體間固有的引力。親和性用平衡常數(shù)K來(lái)表示，K值越大，親和性越強(qiáng)，結(jié)合越牢固?？贵w是球蛋白，溶解在水中為膠體溶液，不會(huì)發(fā)生自然沉淀。@吉普塞舞神第十頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二章抗原抗體反應(yīng)二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1、特異性；2、可逆性：親和層析法就是利用這個(gè)原理來(lái)純化抗原或抗體。3、比例性：只有當(dāng)抗原抗體分子比例合適時(shí)充分結(jié)合，沉淀物形

成快而多，稱為抗原抗體反應(yīng)的等價(jià)帶；

若抗原或抗體極度過(guò)剩則無(wú)沉淀形成，稱為帶現(xiàn)象，

抗體過(guò)量時(shí)，稱為前帶，抗原過(guò)量時(shí)，稱為后帶。4、階段性：第一階段為抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合的階段，反應(yīng)快；

第二階段為可見(jiàn)反應(yīng)階段，反應(yīng)慢。@吉普塞舞神第十一頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二章抗原抗體反應(yīng)三、影響抗原抗體反應(yīng)的因素

抗體的濃度、特異性和親和性都影響抗原抗體的反應(yīng)。等價(jià)帶的寬窄也影響抗原抗體復(fù)合物的形成，單克隆抗體不適于沉淀反應(yīng)。顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng)；可溶性抗原出現(xiàn)沉淀反應(yīng)；單價(jià)抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀反應(yīng)。環(huán)境因素1、電解質(zhì)：抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合后，由親水膠體變?yōu)槭杷z體，

此過(guò)程需要電解質(zhì)參加，常用0.85%NaCl。2、酸堿度：一般在pH6~9之間。3、溫度：一般以15℃~40℃為宜。@吉普塞舞神第十二頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第三章免疫原和抗血清的制備免疫原：指能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞，并能在體內(nèi)外與

抗體或致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性反應(yīng)的物質(zhì)。一、顆粒型抗原的制備各種細(xì)胞、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)等皆為顆粒型抗原1、細(xì)胞抗原（如綿陽(yáng)紅細(xì)胞）一般情況下經(jīng)生理鹽水或其他溶液洗凈，配置一定濃度即可。2、細(xì)菌抗原多用液體或固體培養(yǎng)基，經(jīng)集菌后處理。顆粒性抗原大多用靜脈內(nèi)注射免疫法。二、可溶性抗原的制備與純化蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、酶、補(bǔ)體、細(xì)菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等。胃蛋白酶或胰酶處理，可獲得游離的單個(gè)細(xì)胞。溶菌酶、蝸牛酶、纖維素酶等使細(xì)菌或組織裂解。木瓜酶將IgG裂解成2個(gè)Fab片段和1個(gè)Fc片段；胃蛋白酶可將IgG裂解成F（ab，）2片段及數(shù)個(gè)小片段；胰蛋白酶可將IgG切成不規(guī)則的肽鏈。@吉普塞舞神第十三頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第三章免疫原和抗血清的制備三、半抗原性免疫原的制備半抗原：某物質(zhì)在獨(dú)立存在時(shí)只具有抗原性而無(wú)免疫原性。半抗原與蛋白質(zhì)載體或高分子聚合物結(jié)合后才有免疫原性。載體1、蛋白質(zhì)類：以牛血白蛋白最常用。2、多肽聚合物：常用多聚賴氨酸。3、大分子聚合物和某些顆粒。半抗原性免疫原的鑒定一般認(rèn)為至少要20個(gè)以上的半抗原分子連接到一個(gè)載體分子上，才能有效刺激免疫動(dòng)物產(chǎn)生抗體。因此，在半抗原與載體連接后，應(yīng)測(cè)定半抗原與載體的比例。1、吸收光譜分析法2、放射性核素標(biāo)記半抗原滲入法@吉普塞舞神第十四頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第三章免疫原和抗血清的制備免疫佐劑佐劑的種類1、化合物，如弗氏不完全佐劑2、生物制劑，①經(jīng)處理改造的細(xì)菌及代謝產(chǎn)物，如卡介苗；

②細(xì)胞因子及熱休克蛋白等。弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑弗氏完全佐劑=弗氏不完全佐劑+卡介苗使用時(shí)加入水溶性抗原并充分乳化，使抗原與佐劑形成油包水乳劑。佐劑和抗原的比例為1:1。佐劑的作用1、改變抗原的物理性狀、延緩抗原降解和排除，從而更有效地刺激免疫系統(tǒng)；2、刺激單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)，增強(qiáng)其處理和遞呈抗原的能力；3、刺激淋巴細(xì)胞增殖和分化；4、致變抗體的產(chǎn)生類型和誘導(dǎo)遲發(fā)型超敏反應(yīng)。@吉普塞舞神第十五頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第三章免疫原和抗血清的制備抗血清的制備含有抗體的血清即抗血清?？乖瓉?lái)源與動(dòng)物種屬差異越大，免疫原性越強(qiáng)，免疫效果越好。R型抗血清：用家兔及其他動(dòng)物免疫產(chǎn)生的抗體，抗原抗體反應(yīng)比

例合適范圍較寬，適于作為診斷試劑。H型抗血清：用馬等大型動(dòng)物免疫產(chǎn)生的抗體，抗原抗體反應(yīng)比例

合適范圍較窄，一般作為免疫治療。某些動(dòng)物體內(nèi)有類似物質(zhì)時(shí)，蛋白質(zhì)抗原對(duì)這些動(dòng)物免疫原性極差。如：IgE對(duì)綿羊；胰島素對(duì)家兔；多種酶類對(duì)山羊。@吉普塞舞神第十六頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四免疫程序1、免疫原的劑量：

劑量過(guò)大或過(guò)小都有可能產(chǎn)生免疫耐受，在一定劑量范圍內(nèi)，免疫原劑量越大，產(chǎn)生的抗體效價(jià)越高。2、免疫途徑：

皮內(nèi)、皮下、肌內(nèi)、靜脈、腹腔、淋巴結(jié)等途徑。皮內(nèi)或皮下免疫時(shí)一般采用多點(diǎn)注射。初次免疫一般選擇皮內(nèi)接種，加強(qiáng)免疫和顆粒性抗原一般選擇靜脈注射。寶貴抗原可選擇淋巴結(jié)內(nèi)微量注射。3、免疫間隔時(shí)間第1次與第2次免疫間隔時(shí)間以10~20天為好，第3次及以后的間隔一般為7~10天。采血法1、頸動(dòng)脈采血法2、心臟采血法3、靜脈采血法第三章免疫原和抗血清的制備@吉普塞舞神第十七頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第三章免疫原和抗血清的制備抗血清的鑒定1、抗體特異性的鑒定常用雙向免疫擴(kuò)散法，觀察沉淀線。2、抗體效價(jià)的測(cè)定顆粒型抗原-凝集試驗(yàn)可溶性抗原-雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、ELISA等稀釋方法：①將經(jīng)過(guò)系列稀釋的血清分別與一個(gè)濃度的抗原反應(yīng)；②同時(shí)稀釋抗原和抗血清，分別與不同濃度的抗血清進(jìn)行雙向免

疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)（棋盤(pán)滴定）3、抗體純度的鑒定SDS、雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫電泳等抗血清的保存①短期保存：2~8℃；②冷凍：-80~-20℃，分為小包裝，一般保存5年，避免反復(fù)凍融。③真空干燥：5~10年@吉普塞舞神第十八頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第三章免疫原和抗血清的制備抗血清的純化IgG類抗體的純化方法有鹽析法、凝膠過(guò)濾法、離子交換層析法、親和層析法。雜質(zhì)的去除：1、親和層析法2、吸附劑法@吉普塞舞神第十九頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第四章單克隆抗體與基因工程抗體的制備雜交瘤技術(shù)：利用聚乙二醇（PEG）為細(xì)胞融合劑，使免疫的小鼠脾細(xì)胞與具有體外生長(zhǎng)繁殖能力的小鼠骨髓瘤細(xì)胞融為一體。這種雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)，接種于小鼠腹腔積液中即可得到高效價(jià)的單克隆抗體。小鼠骨髓瘤細(xì)胞：次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)化酶（HGPRT）或胸腺

嘧啶激酶（TK）的缺陷株腫瘤細(xì)胞合成DNA一般有兩條途徑：一條是生物合成的主要途徑，利用糖和氨基酸合成核苷酸進(jìn)而合成DNA，葉酸拮抗物（甲氨蝶呤）可阻斷該途徑；另一條是替代途徑，當(dāng)葉酸代謝受阻時(shí)，細(xì)胞通過(guò)HGPRT和TK利用核苷酸的前體合成核苷酸，進(jìn)而合成DNA。因此篩選雜交瘤細(xì)胞用HAT培養(yǎng)液。HAT培養(yǎng)液：在基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)添加次黃嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷。細(xì)胞的選擇：有限稀釋法、顯微操作法、熒光激活細(xì)胞分選儀、軟瓊脂平板法。@吉普塞舞神第二十頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第四章單克隆抗體與基因工程抗體的制備單克隆抗體的特性：1、高度特異性2、高度的均一性和可重復(fù)性3、弱凝集反應(yīng)和不呈現(xiàn)沉淀反應(yīng)4、對(duì)環(huán)境敏感性局限性：?jiǎn)慰寺】贵w反應(yīng)強(qiáng)度不如多克隆抗體基因工程抗體1、人源化抗體：減少抗體異源性，利于臨床應(yīng)用。嵌合抗體：從雜交瘤細(xì)胞里分離出可變區(qū)基因，與人Ig恒定區(qū)的基

因連接，表達(dá)鼠-人嵌合抗體。改型抗體：將人抗體可變區(qū)（V）中互補(bǔ)決定簇（CDR）序列改成鼠

源單抗CDR序列。2、小分子抗體：可在大腸桿菌等原核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。3、抗體融合蛋白：指利用基因工程技術(shù)將抗體片段與其他生物活

性蛋白融合得到的產(chǎn)物。4、雙特異性抗體：兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)具有不同的特異性。5、噬菌體抗體庫(kù)技術(shù)：可以得到完全人源性的抗體，在HIV等病毒

感染和腫瘤的診斷與治療方面有其獨(dú)特的優(yōu)越性。@吉普塞舞神第二十一頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第五章凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)是一個(gè)定性或半定量的檢測(cè)方法，將抗體做一系列稀釋，與抗原結(jié)合產(chǎn)生凝集的最高稀釋倍數(shù)作為其效價(jià)或滴度。兩個(gè)階段：①抗原抗體特異性結(jié)合；②出現(xiàn)可見(jiàn)的顆粒聚集。直接凝集反應(yīng)原理：細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集?？乖贵w—凝集素1、玻片凝集試驗(yàn)：定性分析，一般用來(lái)鑒定菌種和ABO血型測(cè)定。2、試管凝集試驗(yàn)：半定量，用定量抗原懸液與一系列梯度倍比稀釋的待檢血清混合，保溫靜置后，根據(jù)每管內(nèi)顆粒凝集的程度，判斷待檢血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及效價(jià)。如肥達(dá)試驗(yàn)—診斷傷寒、副傷寒；

外斐試驗(yàn)—診斷立克次體；

輸血時(shí)的交叉配血試驗(yàn)。@吉普塞舞神第二十二頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第五章凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng)

是將可溶性抗原（或抗體）先吸附于適當(dāng)大小的顆粒性載體表面，然后與相應(yīng)抗體（或抗原）作用，在適宜電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象。間接凝集反應(yīng)的類型1、正向間接凝集反應(yīng)：可溶性抗原致敏載體，用以檢測(cè)標(biāo)本中待測(cè)抗體的凝集反應(yīng)。2、反向間接凝集反應(yīng)：特異性抗體致敏載體，用以檢測(cè)標(biāo)本中待測(cè)抗原的凝集反應(yīng)。3、間接凝集抑制試驗(yàn)：先將可溶性抗原（或抗體）與相應(yīng)抗體（或抗原）試劑混合，然后再加入抗原（抗體）致敏的載體顆粒，則能抑制原先的凝集現(xiàn)象，稱為正向（或反向）間接凝集抑制試驗(yàn)。4、協(xié)同凝集反應(yīng)：用金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA）做載體，它能夠與IgG的Fc段結(jié)合，稱為抗體致敏的顆粒載體。如與相應(yīng)抗原接觸，即出現(xiàn)反向間接血凝抑制試驗(yàn)?？捎糜诩?xì)菌、病毒的直接檢測(cè)。間接血凝抑制試驗(yàn)載體常用紅細(xì)胞、膠乳顆粒及明膠顆粒@吉普塞舞神第二十三頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第五章凝集反應(yīng)明膠凝集試驗(yàn)：血清中含有病毒抗體則呈肉眼可見(jiàn)的粉紅色凝集。廣泛用于HIV-1抗體和抗精子抗體等的檢測(cè)。自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)抗人O型紅細(xì)胞的單克隆抗體能與任何型紅細(xì)胞結(jié)合，但不引起凝集反應(yīng)，這種抗體與另一特異性抗體連接成的雙功能抗體，可用于檢測(cè)標(biāo)本中的抗原。反應(yīng)中的紅細(xì)胞是未經(jīng)致敏的受檢者新鮮紅細(xì)胞，因此反應(yīng)中的標(biāo)本為受檢者的全血?？捎糜贖IV抗體，HBsAg的檢測(cè)。抗球蛋白試驗(yàn)又稱Coombs試驗(yàn)，是檢測(cè)抗紅細(xì)胞不完全抗體的一種有效方法。包括直接C試驗(yàn)和間接C試驗(yàn)，分別檢測(cè)紅細(xì)胞上的不完全抗體和游離在血清中的不完全抗體。廣泛應(yīng)用于血液病的檢測(cè)，如自身免疫性溶血性貧血、藥物誘導(dǎo)的貧血、新生兒溶血癥等，還可采用專一特異性的抗球蛋白的血清，如抗IgG血清、抗IgA或抗IgM以及抗補(bǔ)體血清等，分析結(jié)合于紅細(xì)胞上的不完全抗體的免疫球蛋白亞類。@吉普塞舞神第二十四頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第六章沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)：指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在特定條件下發(fā)生特異性結(jié)合時(shí)

出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。沉淀反應(yīng)的抗原多為蛋白質(zhì)、多糖、血清、毒素等可溶性物質(zhì)。第一階段：抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合，肉眼不可見(jiàn)，時(shí)間短。第二階段：形成可見(jiàn)的免疫復(fù)合物，如沉淀線、沉淀環(huán)，

約需幾十分鐘到數(shù)小時(shí)。@吉普塞舞神第二十五頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四液體內(nèi)沉淀實(shí)驗(yàn)抗原抗體溶液在電解質(zhì)的存在下結(jié)合，形成絮狀沉淀物，這種絮狀沉淀受抗原抗體比例的直接影響，因此常用來(lái)作為測(cè)定抗原抗體反應(yīng)最適比例的方法。1、抗原稀釋法；2、抗體稀釋法；3、方陣滴定法（棋盤(pán)滴定法）。免疫濁度測(cè)定本質(zhì)上屬于液體內(nèi)沉淀反應(yīng)，可進(jìn)行液體中微量抗原、抗體及小分子半抗原定量檢測(cè)?？乖^(guò)量：形成IC（免疫復(fù)合物）分子小，且會(huì)發(fā)生再解離，濁

度下降，這叫做高劑量鉤狀效應(yīng)。抗體過(guò)量：IC的形成隨著抗原的增加而增加，抗原抗體最適比例

處達(dá)到高峰，這就是經(jīng)典的海德堡曲線理論。免疫比濁法的基本原理就是在反應(yīng)體系中保持抗體適當(dāng)過(guò)量?？贵w的選擇：特異性強(qiáng)、效價(jià)高、親和力強(qiáng)，使用R型抗體。pH6.5~8.5使用磷酸鹽緩沖液做反應(yīng)液增濁劑：聚乙二醇（PEG）、吐溫-20第六章沉淀反應(yīng)@吉普塞舞神第二十六頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)利用可溶性抗原和相應(yīng)抗體在凝膠內(nèi)擴(kuò)散，形成濃度梯度，在抗原抗體濃度比例恰當(dāng)?shù)奈恢眯纬扇庋劭梢?jiàn)的沉淀線或沉淀環(huán)。凝膠支持物：瓊脂、瓊脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺凝膠等。1、單向擴(kuò)散試驗(yàn)在瓊脂內(nèi)混入抗體，待測(cè)抗原從局部向瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，如抗原和相應(yīng)抗體結(jié)合，形成沉淀環(huán)。Mancini曲線（M曲線）：適用大分子抗原和長(zhǎng)時(shí)間擴(kuò)散（＞48h）結(jié)

果，沉淀環(huán)直徑的平方與抗原濃度呈線性關(guān)系。Fahey（F曲線）：適用于小分子抗原和較短時(shí)間（24h）擴(kuò)散的結(jié)果，

用半對(duì)數(shù)紙畫(huà)線，濃度對(duì)數(shù)與擴(kuò)散環(huán)直徑呈線性關(guān)系。雙環(huán)現(xiàn)象：出現(xiàn)兩種抗原性相同成分。第六章沉淀反應(yīng)@吉普塞舞神第二十七頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)2、雙向擴(kuò)散試驗(yàn)讓抗原和抗體雙方都在瓊脂中各自向?qū)Ψ綌U(kuò)散，在比例恰當(dāng)處形成抗原抗體沉淀線，觀察這種沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性分析。平板法是最常用的方法。①抗原或抗體的存在與否以及相對(duì)含量的估計(jì)：②抗原抗體相對(duì)分子量的估計(jì)：擴(kuò)散慢者圈子小，局部濃度大，形成的沉淀線彎向分子量大的一方，如果分子量大致相等，則呈直線。③抗原性質(zhì)的分析：兩條沉淀線相互吻合，說(shuō)明抗體和兩個(gè)抗原的相同表位結(jié)合而沉淀，兩個(gè)抗原相同；沉淀線呈部分相切，說(shuō)明兩個(gè)抗原之間有部分相同；兩條沉淀線交叉而過(guò)，說(shuō)明兩個(gè)抗原完全不同。④抗體效價(jià)的滴定：出現(xiàn)沉淀線最高的抗體稀釋度為該抗體效價(jià)。⑤抗原或抗體純度鑒定：多條沉淀線說(shuō)明抗體不純。第六章沉淀反應(yīng)@吉普塞舞神第二十八頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四免疫電泳技術(shù)1、對(duì)流免疫電泳實(shí)質(zhì)是將雙向免疫擴(kuò)散與電泳相結(jié)合的定向加速的免疫擴(kuò)散技術(shù)?？乖瓗ж?fù)電荷向正極移動(dòng)；抗體在電滲作用下隨水流向負(fù)極。2、火箭免疫電泳實(shí)質(zhì)是加速的單向擴(kuò)散試驗(yàn)。3、免疫電泳是區(qū)帶電泳與免疫雙擴(kuò)散相結(jié)合的免疫分析技術(shù)。抗原經(jīng)電泳分區(qū)帶，沿電泳方向挖一平行抗體槽，加入相應(yīng)抗血清做雙向擴(kuò)散，形成弧形沉淀線。

多發(fā)性骨髓瘤患者血清在免疫電泳后，可觀察到異常的M蛋白沉淀弧。4、免疫固定電泳電泳加沉淀反應(yīng)技術(shù)，可用于各種蛋白質(zhì)鑒定。先將待測(cè)樣品做區(qū)帶電泳，覆蓋抗血清，形成抗原抗體復(fù)合物而沉淀。分辨率強(qiáng)，敏感性高，操作周期短，結(jié)果易于分析，目前作為常規(guī)檢測(cè)。5、交叉免疫電泳將區(qū)帶電泳和火箭免疫電泳相結(jié)合，可一次同時(shí)對(duì)多種抗原定量。第六章沉淀反應(yīng)@吉普塞舞神第二十九頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第七章放射免疫分析放射免疫分析（RIA）是以放射性核素標(biāo)記的抗原與反應(yīng)系統(tǒng)中未標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合特異性抗體為基本原理來(lái)測(cè)定待檢樣品中抗原量的一種分析方法。免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素標(biāo)記的過(guò)量抗體與待測(cè)抗原直接結(jié)合，采用固相免疫吸附載體分離結(jié)合與游離標(biāo)記抗體的非競(jìng)爭(zhēng)放射免疫分析法。常用的放射性核素：125I、131I、3H、14C放射性碘原子通過(guò)取代反應(yīng)置換被標(biāo)記物分子中酪氨酸或酪胺殘基及組胺殘基上的氫原子。比較：IRMA反應(yīng)速率、特異性、靈敏度和檢測(cè)范圍都較RIA高。應(yīng)用：常用于各種激素、微量蛋白質(zhì)、腫瘤標(biāo)志物和藥物等測(cè)定。@吉普塞舞神第三十頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第八章熒光免疫技術(shù)常用熒光色素：1、異硫氰酸熒光素（FITC）：黃綠色熒光，最常用；2、四乙基羅丹明（RB200）：橘紅色熒光；3、四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC）：橙紅色熒光；4、藻紅蛋白（R-RE）：橙色熒光。其他熒光物質(zhì)：某些3價(jià)稀土鑭系元素，其中銪（Eu3+）應(yīng)用最廣，其熒光衰變時(shí)間長(zhǎng)，最適合用于時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定。時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定（TRFIA）：是一種非放射性核素免疫分析技術(shù)，用鑭系元素標(biāo)記抗原或抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物的發(fā)光特點(diǎn)，用時(shí)間分辨技術(shù)測(cè)量熒光，同時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)和時(shí)間兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行信號(hào)分辨，可有效排除非特異性熒光的干擾，極大提高了分析靈敏度。熒光偏振免疫測(cè)定：利用抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)原理，根據(jù)熒光素標(biāo)記抗原與其抗原抗體復(fù)合物的熒光偏振程度的差異，測(cè)定體液中小分子物質(zhì)的含量。常用FITC標(biāo)記小分子抗原。@吉普塞舞神第三十一頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第八章熒光免疫技術(shù)熒光酶免疫測(cè)定：利用酶標(biāo)記抗原或抗體，與待檢物反應(yīng)，借助酶反應(yīng)熒光底物，經(jīng)酶促反應(yīng)生成穩(wěn)定且高效的熒光物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定熒光強(qiáng)度確定待檢抗原或抗體的含量。常用堿性磷酸酶ALP標(biāo)記。熒光免疫技術(shù)的應(yīng)用1、自身抗體檢測(cè)；2、病原體檢測(cè)；3、免疫病理檢測(cè)；4、細(xì)胞表面抗原和受體檢測(cè)。@吉普塞舞神第三十二頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第九章酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)：在酶標(biāo)抗體（抗原）與抗原（抗體）的特異性反應(yīng)完成后，加入酶的相應(yīng)底物，通過(guò)酶對(duì)底物的顯色反應(yīng)，對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定位、定性或定量的測(cè)定分析。常用酶及其底物1、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）：由無(wú)色的糖蛋白（主酶）和亞鐵血紅素（輔基）結(jié)合而成的復(fù)合物。輔基是酶活性基團(tuán)。底物：鄰苯二胺（OPD）、四甲基聯(lián)苯胺（TMB）應(yīng)用廣泛2、堿性磷酸酶（AP）底物：對(duì)硝基苯磷脂酸（p-NPP）3、β-半乳糖苷酶（β-Gal）：因人血中缺乏此酶，以其制備的酶標(biāo)志物在測(cè)定時(shí)不易受到內(nèi)源性酶的干擾，從而提高特異性，被用于均相酶免疫測(cè)定中。底物：4-MUU@吉普塞舞神第三十三頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第九章酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)：1、酶免疫測(cè)定（EIA）：用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量。2、酶免疫組織化學(xué)技術(shù)：用于組織切片或其他標(biāo)本中抗原的定位。均相酶免疫測(cè)定利用酶標(biāo)志物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會(huì)發(fā)生改變的原理，可以在不將結(jié)合和游離酶標(biāo)志物分離的情況下，通過(guò)測(cè)定標(biāo)記酶的活性的改變而確定抗原或抗體的含量。異象酶免疫測(cè)定是目前應(yīng)用最廣泛的一類，分為液相和固相酶免疫測(cè)定兩類。如ELISA。@吉普塞舞神第三十四頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第九章酶免疫技術(shù)ELISA三個(gè)必要的試劑：①固相的抗原或抗體；②酶標(biāo)記的抗原或抗體；

③酶反應(yīng)的底物?？乖瓬y(cè)定：①雙抗體夾心法：常用。②雙位點(diǎn)一步法：針對(duì)抗原上的兩個(gè)不同的抗原決定簇的兩種抗體，一個(gè)用來(lái)包被，一個(gè)用來(lái)酶標(biāo)記。當(dāng)抗原過(guò)量時(shí)可分別結(jié)合固相抗體和酶標(biāo)記抗體，出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。③競(jìng)爭(zhēng)法：針對(duì)只有單個(gè)抗原決定簇的小分子?？贵w測(cè)定：①間接法：固相抗原-待測(cè)抗體-酶標(biāo)抗抗體復(fù)合物。②雙抗原夾心法③競(jìng)爭(zhēng)法：多用于乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）的檢測(cè)。④捕獲法：又稱反向間接法，常用病原體急性感染診斷中的IgM抗體。應(yīng)用：ELISA可用于病毒（甲肝、乙肝兩對(duì)半等）風(fēng)疹、皰疹、輪狀病毒等；細(xì)菌如結(jié)核、HP等，也用于各種免疫球蛋白、補(bǔ)體、腫瘤標(biāo)志物等。@吉普塞舞神第三十五頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十章化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)直接化學(xué)發(fā)光劑：1、吖啶酯；2、三聯(lián)吡啶釕酶促反應(yīng)發(fā)光劑：標(biāo)記酶有HRP和堿性磷酸酶；HRP催化的發(fā)光劑為魯米諾及其衍生物；AP催化的發(fā)光底物為AMPPO。@吉普塞舞神第三十六頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十一章生物素-親和素放大技術(shù)生物素（biotin，B）、親和素（avidin，A）生物素-親和素系統(tǒng)（BAS）是一種以生物素和親和素具有的多級(jí)放大結(jié)合特性為基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，既能偶聯(lián)抗原抗體等大分子生物活性物質(zhì)，又可被熒光素、酶、放射性核素等材料標(biāo)記。生物素：可以標(biāo)記蛋白質(zhì)氨基、醛基、巰基和核酸。親和素（AV）和鏈霉親和素（SA）是生物素的天然特異性結(jié)合物。1個(gè)AV和SA能結(jié)合4個(gè)生物素分子，因此具有放大效應(yīng)。@吉普塞舞神第三十七頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十一章生物素-親和素放大技術(shù)BAS的應(yīng)用1、BAB法：也稱僑聯(lián)親和素-標(biāo)記生物素法（BRAB），以游離的親和素

作為僑聯(lián)劑，利用親和素的多價(jià)性，將檢測(cè)體系中的抗原-生

物素化抗體復(fù)合物與標(biāo)記生物素連接起來(lái)。

抗原-生物素+親和素+生物素-標(biāo)記2、ABC法：預(yù)先按一定比例將親和素與酶標(biāo)生物素結(jié)合，當(dāng)其與反應(yīng)體

系中的生物素化抗體相遇時(shí)，ABC中未飽和的親和素結(jié)合部位

即可與抗體上的生物素結(jié)合。

抗體-生物素+親和素-生物素-酶標(biāo)復(fù)合物3、BA法：也叫LAB法，以標(biāo)記親和素直接與免疫復(fù)合物中的生物素化抗

體連接進(jìn)行檢測(cè)。

酶標(biāo)記-親和素+生物素-抗體BAS用于熒光抗體技術(shù)，通常用BA法，用熒光素直接標(biāo)記親和素。@吉普塞舞神第三十八頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十二章固相膜免疫測(cè)定

以微孔膜作為固相，固相膜的特點(diǎn)：多孔性、高度吸附抗體或抗原、易于漂洗，可被液體穿過(guò)流出，液體也可通過(guò)毛細(xì)管作用在膜上向前移行。標(biāo)記物可用酶、彩色乳膠、膠體金、膠體硒等。常用固相膜：玻璃纖維素膜、尼龍膜、聚偏氟乙烯（PVDF）膜和

硝酸纖維素（NC）膜，最長(zhǎng)用NC膜免疫金標(biāo)記技術(shù)：標(biāo)志物在配體處大量聚集時(shí)，肉眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測(cè)。免疫滲濾實(shí)驗(yàn)（IFA）用于檢測(cè)各種傳染病的抗體和腫瘤標(biāo)志物等。用以檢測(cè)尿液HCG的“金標(biāo)”早孕診斷試劑也已廣泛使用。結(jié)果：膜中央有清晰的淡紅色或紅色斑點(diǎn)為陽(yáng)性，反之陰性。免疫層析實(shí)驗(yàn)（ICA）：常用膠體金，稱為金免疫層析實(shí)驗(yàn)（GICA）與IFA的不同在于液體的移動(dòng)不是直向穿流，而是基于層析作用的橫流。結(jié)果：陰性為一條棕紅線條帶；陽(yáng)性為兩條，無(wú)條帶為試劑失效。@吉普塞舞神第三十九頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十二章固相膜免疫測(cè)定斑點(diǎn)酶免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Do-ELISA）：與ELISA不同之處在于載體為蛋白質(zhì)、NC膜，沒(méi)作用于底物后形成有色的沉淀物，使NC膜染色。結(jié)果：陽(yáng)性者在膜上出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的染色斑點(diǎn)，靈敏度比ELISA高。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)（ELISPOT）：體外檢測(cè)特異性抗體分泌B細(xì)胞和細(xì)胞因子分泌T細(xì)胞。檢測(cè)活細(xì)胞。結(jié)果：陽(yáng)性PVDF膜出現(xiàn)紫色斑點(diǎn)。1個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)細(xì)胞，靈敏度高。應(yīng)用非常廣泛：如移植中排斥反應(yīng)的預(yù)測(cè)，疫苗發(fā)展、Th1/Th2分析、自身免疫性疾病研究、腫瘤研究、過(guò)敏性疾病研究、感染性疾病研究、抗原決定簇圖譜分析、化合物和藥物免疫學(xué)反應(yīng)的篩選。免疫印跡法（WesternBlot）：常用多克隆抗體。@吉普塞舞神第四十頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十三章免疫組織化學(xué)技術(shù)標(biāo)本：1、活體組織：應(yīng)取材于病變組織及病變與正常組織交織處。2、各種體液、穿刺液：直接涂片或經(jīng)離心涂片。3、培養(yǎng)細(xì)胞：?jiǎn)螌蛹?xì)胞直接固定。固定劑：10%福爾馬林制片方法1、冰凍切片：使抗原得到最大限度保存，但形態(tài)保存不佳2、石蠟切片：研究形態(tài)學(xué)的主要制片方法常用抗原暴露方法：微波法、高壓鍋法標(biāo)本的保存：最好直接鏡檢，4℃干燥可保存1個(gè)月。但病毒和某些組織抗原標(biāo)本抗原性喪失很快，需-20℃下保存。@吉普塞舞神第四十一頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十三章免疫組織化學(xué)技術(shù)酶免疫組織化學(xué)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)（與熒光免疫技術(shù)相比）：可長(zhǎng)期保存、可用普通光鏡觀察、可觀察組織細(xì)胞的細(xì)微結(jié)構(gòu)、敏感度高。1、直接法：將酶標(biāo)記在特異抗體上，直接與組織內(nèi)抗原反應(yīng)。2、間接法：將酶標(biāo)記在二抗上，先將一抗與相應(yīng)的組織抗原結(jié)合，

再連接二抗。應(yīng)用廣泛。免疫組化中常用的酶及顯色底物1、HRP：底物為二氨基聯(lián)苯胺（DAB），反應(yīng)產(chǎn)物呈棕色。2、氨基乙基卡巴唑（AEC）：反應(yīng)產(chǎn)物呈橘紅色。3、4-氯-1-萘酚：產(chǎn)物灰藍(lán)色。廣義的親和組織化學(xué)染色包括：抗原與抗體；植物凝集素與糖類；生物素與親和素；SPA與IgG；陽(yáng)離子與陰離子；配體與受體。@吉普塞舞神第四十二頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十四章免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離密度梯度離心2份6%聚蔗糖蒸餾水+1份34%泛影葡胺生理鹽水，比重為1.077±0.002；作為淋巴細(xì)胞分離液，即Ficoll液。上到下依次為：稀釋的血漿層、單個(gè)核細(xì)胞層、粒細(xì)胞層和紅細(xì)胞層。淋巴細(xì)胞的分離利用單核細(xì)胞在37℃和Ca2+存在時(shí)，能主動(dòng)黏附在玻璃、塑料等材料上的特性，從單個(gè)核細(xì)胞懸液中去除單核細(xì)胞，從而獲得淋巴細(xì)胞。也可用Percoll分離液法。分離細(xì)胞的保存1、短期保存：將細(xì)胞用含10%~20%滅活小牛血清的培養(yǎng)液稀釋重懸，4℃保存。2、長(zhǎng)期保存：液氮，加DMSO?；盍y(cè)定：臺(tái)盼藍(lán)藍(lán)色，活細(xì)胞不著色，死細(xì)胞呈藍(lán)色。@吉普塞舞神第四十三頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十四章免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群分類一、T細(xì)胞表面標(biāo)志及其亞群T細(xì)胞共同的標(biāo)志抗原：CD3輔助性T細(xì)胞（Th）：CD3+CD4+CD8-；細(xì)胞毒性T細(xì)胞（Tc/CTL）：CD3+CD4-CD8+；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tr/Treg）：CD4+CD25+。CD2：表達(dá)于全部人T細(xì)胞和NK細(xì)胞，因能與綿陽(yáng)紅細(xì)胞（SRBC）

結(jié)合，又稱綿羊紅細(xì)胞受體。CD3：表達(dá)于全部T細(xì)胞表面，是TCR-CD3復(fù)合物的重要組成部分。CD4/CD8：表達(dá)CD4的主要是輔助性T細(xì)胞、表達(dá)CD8的主要是細(xì)胞

毒性T細(xì)胞。其他表面標(biāo)志：致有絲分裂受體①輔助性T細(xì)胞分為：Th1、Th2Th1主要分泌IL-2、IFN-γ或TNF-β等細(xì)胞因子輔助細(xì)胞免疫或參與遲發(fā)型超敏反應(yīng)，本身具有明顯的細(xì)胞毒作用。Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-6和IL-10等細(xì)胞因子輔助體液免疫，參與速發(fā)型超敏反應(yīng)，但本身不具有明顯的細(xì)胞毒作用。②細(xì)胞毒性T細(xì)胞分為：Tc1、Tc2都有典型的細(xì)胞毒作用。@吉普塞舞神第四十四頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十四章免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群分類二、B細(xì)胞表面標(biāo)志B細(xì)胞的重要表面標(biāo)志：膜免疫球蛋白（SmIg）、Fc受體、補(bǔ)體受體、EB病毒受體、小鼠紅細(xì)胞受體。SmIg為B細(xì)胞特有，是鑒定B細(xì)胞的可靠指標(biāo)。SmIg又稱BCR，mIg的主要作用是結(jié)合特異性抗原，故又稱抗原受體。成熟的B細(xì)胞的mIg主要為mIgM和mIgD。B細(xì)胞的表面特異CD分子有CD19、CD20、CD21、CD22和CD23等。B細(xì)胞及其亞群的檢測(cè)是研究自身免疫性疾病及疾病中免疫調(diào)節(jié)紊亂的重要指標(biāo)。三、NK細(xì)胞表面標(biāo)志NK細(xì)胞典型標(biāo)志：CD3-CD16+CD56+CD16分子又稱為低親和性IgGFc受體，行使針對(duì)靶細(xì)胞的定向非特異性殺傷作用，也即NK細(xì)胞的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC）。@吉普塞舞神第四十五頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十四章免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測(cè)技術(shù)其他免疫細(xì)胞抗原遞呈細(xì)胞（APC）①“專職”抗原遞呈細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和B細(xì)胞，它們均可表達(dá)MHC-Ⅱ類分子；②“非專職”抗原遞呈細(xì)胞，包括內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞和激活T細(xì)胞等。單核-吞噬細(xì)胞系統(tǒng)（MPS）典型表面標(biāo)志是CD14。DC細(xì)胞的主要特征表面標(biāo)志是CD1a、CD11c和CD83。免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測(cè)方法：1、抗體致敏花環(huán)法2、免疫細(xì)胞化學(xué)法3、免疫熒光法4、流式細(xì)胞分析法CD4/CD8比值升高常見(jiàn)于自身免疫性疾?。欢鳦D4/CD8比值降低常見(jiàn)于病毒感染、惡性腫瘤和再障等。@吉普塞舞神第四十六頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十五章免疫細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)一、淋巴細(xì)胞的功能檢測(cè)體內(nèi)試驗(yàn)：主要是進(jìn)行遲發(fā)型超敏反應(yīng)，借此間接了解淋巴細(xì)胞對(duì)

抗原、半抗原或有絲分裂原的應(yīng)答反應(yīng)；體外試驗(yàn)：主要包括淋巴細(xì)胞對(duì)抗原或有絲分裂原刺激后的增值反

應(yīng)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)及淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)物的測(cè)定。（一）T細(xì)胞功能試驗(yàn)1、T細(xì)胞增殖試驗(yàn)體外刺激物：植物血凝素（PHA）、刀豆素A、白喉類毒素、破傷

風(fēng)類毒素、白色念珠菌等。2、T細(xì)胞分泌功能測(cè)定分別檢測(cè)細(xì)胞因子的含量、生物活性和基因表達(dá)水平。3、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)適當(dāng)?shù)陌屑?xì)胞（腫瘤細(xì)胞）與待檢淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，觀察腫瘤細(xì)胞殺傷情況。4、體內(nèi)試驗(yàn)正常機(jī)體對(duì)某種特殊抗原建立了細(xì)胞免疫后，如用相同抗原做皮膚試驗(yàn)，?？沙霈F(xiàn)陽(yáng)性的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。目前臨床上用來(lái)診斷某些病原生物感染（結(jié)核、麻風(fēng)等）和細(xì)胞免疫缺陷等疾病。結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)；PHA皮膚試驗(yàn)用于檢測(cè)機(jī)體的細(xì)胞免疫水平。@吉普塞舞神第四十七頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十五章免疫細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)（二）B細(xì)胞功能檢測(cè)1、B細(xì)胞增殖試驗(yàn)：小鼠B細(xì)胞用LPS刺激；

人B細(xì)胞用含SPA的金黃色葡萄球菌及抗IgM抗體刺激。2、溶血空斑試驗(yàn)：經(jīng)典溶血空斑試驗(yàn)：檢測(cè)動(dòng)物抗體形成細(xì)胞的功能。被動(dòng)溶血空斑試驗(yàn)：人抗體形成細(xì)胞產(chǎn)生的Ig與SRBC上的抗原結(jié)合，

在補(bǔ)體作用下出現(xiàn)溶血反應(yīng)。3、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)（ELISPOT）既可檢測(cè)抗體分泌細(xì)胞，又可檢測(cè)抗體分泌量。4、體內(nèi)試驗(yàn)常用白喉毒素、破傷風(fēng)毒素、多價(jià)肺炎鏈球菌菌苗等，將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并與免疫前后分別采血，測(cè)定受試者相應(yīng)抗體效價(jià)，判斷B細(xì)胞功能。（三）NK細(xì)胞活性測(cè)定NK細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)，觀察腫瘤細(xì)胞的存活情況。測(cè)定人NK細(xì)胞常用K562細(xì)胞株；測(cè)定小鼠NK細(xì)胞活性常用YAC-1細(xì)胞株。@吉普塞舞神第四十八頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十五章免疫細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)二、吞噬細(xì)胞功能檢測(cè)技術(shù)（一）中性粒細(xì)胞功能檢測(cè)1、趨化功能檢測(cè)Boyden小室法、瓊脂糖平板法2、吞噬和殺菌功能測(cè)定顯微鏡檢查法、溶菌法、NBT還原實(shí)驗(yàn)（二）巨噬細(xì)胞功能檢測(cè)1、炭粒廓清試驗(yàn)2、吞噬功能檢測(cè)3、巨噬細(xì)胞溶酶體酶的測(cè)定4、細(xì)胞毒作用測(cè)定5、巨噬細(xì)胞促凝血活性測(cè)定@吉普塞舞神第四十九頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十六章細(xì)胞因子與細(xì)胞黏附因子的測(cè)定細(xì)胞因子的本質(zhì)是蛋白質(zhì)或多肽；黏附分子的本質(zhì)是糖蛋白。常見(jiàn)的測(cè)定方法：分子生物學(xué)測(cè)定基因或mRNA；

生物活性測(cè)定；生物活性測(cè)定法1、促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞增殖測(cè)定法常用放射性核素?fù)饺敕ê蚆TT比色法2、細(xì)胞毒活性測(cè)定法對(duì)指示細(xì)胞具有破壞作用的細(xì)胞因子，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，檢測(cè)細(xì)胞死亡數(shù)作為檢測(cè)指標(biāo)，本法常用作TNF等測(cè)定。3、抗病毒活性測(cè)定用于IFN等細(xì)胞因子的檢測(cè)。4、趨化活性測(cè)定法趨化因子誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞或淋巴細(xì)胞等定向遷移，其誘導(dǎo)遷移的方式包括趨化性和化學(xué)增活性。趨化性：誘導(dǎo)細(xì)胞由趨化因子低濃度處向趨化因子高濃度處定向移

動(dòng)的特性。采用Boyden小室趨化試驗(yàn)測(cè)定?；瘜W(xué)增活性：指細(xì)胞因子增強(qiáng)細(xì)胞隨機(jī)運(yùn)動(dòng)的能力，采用瓊脂糖小

滴化學(xué)動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)測(cè)定。@吉普塞舞神第五十頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十六章細(xì)胞因子與細(xì)胞黏附因子的測(cè)定免疫測(cè)定方法1、ELISA法：測(cè)定細(xì)胞因子和可溶性黏附分子。2、流式細(xì)胞分析：主要檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子和細(xì)胞表面黏附分子。3、酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（ELISPOT）：

用于類風(fēng)濕因子、IFN-γ等細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的定量測(cè)定。@吉普塞舞神第五十一頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十七章流式細(xì)胞儀分析技術(shù)及應(yīng)用FCM常用染料有：異硫氰酸熒光素（FITC）、藻紅蛋白類（PE）、羅丹明AID檢測(cè)中的應(yīng)用T淋巴細(xì)胞總數(shù)減少、T細(xì)胞亞群CD4Th/CD8Tc比例倒置，Th/Tc＜1，Th細(xì)胞數(shù)量顯著下降，Tc細(xì)胞正常，NK細(xì)胞減少或活力下降，B淋巴細(xì)胞處于正常范圍。自身免疫性疾病相關(guān)HLA抗原分析強(qiáng)直性脊柱炎：外周血HLA-B27的表達(dá)及表達(dá)程度與疾病發(fā)生有很

高的相關(guān)性。@吉普塞舞神第五十二頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十八章體液免疫球蛋白測(cè)定一、血清IgG、IgA、IgM測(cè)定IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白，其中IgG1最多、IgG4最少。

是血液和細(xì)胞外液中的主要抗體，也是機(jī)體再次免疫應(yīng)答的

主要抗體，大多數(shù)抗感染抗體與自身抗體都是IgG。IgA：血清型主要以單體形式存在；

分泌型由J鏈連接的二聚體和分泌成分組成。

是參與黏膜局部免疫的主要抗體，分布于胃腸道和支氣管分

泌液、初乳、唾液和淚液中。IgM：五聚體、分子量最大，又稱巨球蛋白，主要存在于血液中。

是個(gè)體發(fā)育中最早合成和分泌的抗體，也是抗原誘導(dǎo)的體

液免疫中最早出現(xiàn)的抗體。測(cè)定方法：?jiǎn)蜗颦h(huán)狀免疫擴(kuò)散法、免疫比濁法。臨床意義：1、IgG分子量小、可透過(guò)胎盤(pán)，故新生兒血液中IgG含量接近成人。2、3中Ig均升高：見(jiàn)于慢性肝臟疾病。3、IgG升高：見(jiàn)于慢性細(xì)菌性感染，如慢性支氣管炎、肺結(jié)核。4、IgM升高：宮內(nèi)感染、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。5、SLE（系統(tǒng)性紅斑狼瘡）：IgG、IgA升高。@吉普塞舞神第五十三頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四一、血清IgG、IgA、IgM測(cè)定單一免疫球蛋白升高：指患者血清中某一類免疫球蛋白顯著增多，大多在30g/L以上，稱為單克隆蛋白（MP），也叫M蛋白。此類異常增多的免疫球蛋白多無(wú)免疫活性，又稱副蛋白。見(jiàn)于免疫增殖病，如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、

重鏈病、輕鏈病等。免疫球蛋白降低：先天性：見(jiàn)于體液免疫缺陷病和聯(lián)合免疫缺陷病。獲得性：IgA缺乏，易發(fā)生反復(fù)呼吸道感染；IgG缺乏，易發(fā)生化膿性感染；IgM缺乏，易發(fā)生革蘭氏陰性菌敗血癥。第十八章體液免疫球蛋白測(cè)定@吉普塞舞神第五十四頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十八章體液免疫球蛋白測(cè)定二、血清IgD和IgE測(cè)定IgD：膜結(jié)合型IgD（mIgD）構(gòu)成B細(xì)胞BCR，是B細(xì)胞成熟的標(biāo)志。未成熟B細(xì)胞僅表達(dá)mIgM，成熟B細(xì)胞同時(shí)表達(dá)兩種。

活化的B細(xì)胞或記憶B細(xì)胞mIgD逐漸消失。IgE：含量最少，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細(xì)胞分泌。

IgE為親細(xì)胞抗體，可誘發(fā)Ⅰ型超敏反應(yīng)，也和抗寄生蟲(chóng)有關(guān)。檢測(cè)方法：ELISA三、尿液及腦脊液Ig測(cè)定1、尿液中Ig測(cè)定正常人尿液中Ig含量極微，腎小球?yàn)V過(guò)膜損傷輕微時(shí)，尿液中IgG濾出增多；濾過(guò)膜損傷嚴(yán)重時(shí)，分子量較大的IgM也開(kāi)始濾出。臨床常選用測(cè)定尿液和血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白（TRF）和IgG含量，計(jì)算選擇性蛋白尿指數(shù)（SPI），評(píng)估腎小球?yàn)V過(guò)膜的受損程度。SPI≤0.1：見(jiàn)于微小病變型腎病；SPI≥0.2：見(jiàn)于膜性腎病、膜增殖性腎炎與腎病綜合征。@吉普塞舞神第五十五頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十八章體液免疫球蛋白測(cè)定三、尿液及腦脊液Ig測(cè)定2、腦脊液Ig測(cè)定臨床上通過(guò)測(cè)定白蛋白商值（QALB），即測(cè)定CSF（腦脊液）中白蛋白和血清白蛋白比值來(lái)反應(yīng)血腦屏障受損程度。商值＜9，血腦屏障無(wú)受損；9~15，輕度受損；15~33，中度受損；33~100，重度受損；＞100，完全破裂。QALB輕度升高，見(jiàn)于急慢性病毒感染；QALB中度升高，見(jiàn)于急性神經(jīng)疏螺旋體??；QALB重度升高，見(jiàn)于化膿性腦膜炎、結(jié)核性腦膜炎等細(xì)菌性感染。腦脊液IgG測(cè)定采用速率散射免疫比濁法，腦脊液采集后應(yīng)離心再測(cè)定。四、M蛋白測(cè)定及臨床意義1、血清蛋白區(qū)帶電泳技術(shù)：篩選M蛋白的經(jīng)典方法。2、血清免疫球蛋白定量測(cè)定：包括單向免疫擴(kuò)散和比濁法，是檢

測(cè)M蛋白的初篩試驗(yàn)。3、免疫電泳：鑒定M蛋白的常規(guī)方法。4、免疫固定電泳：臨床鑒定M蛋白最常用的方法。

利用區(qū)帶電泳和特異性抗血清的免疫沉淀反應(yīng)。@吉普塞舞神第五十六頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十八章體液免疫球蛋白測(cè)定五、輕鏈測(cè)定及其臨床意義1、本-周蛋白測(cè)定方法：化學(xué)法（加熱沉淀法）和免疫法檢測(cè)本-周蛋白是對(duì)輕鏈病的診斷必不可少的項(xiàng)目。輕鏈病患者尿中可測(cè)得本-周蛋白，血中反而陰性，因?yàn)榉肿恿啃。瑯O易從腎臟排出。2、κ-Ig和λ-Ig定量測(cè)定方法：?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散法和免疫比濁法。六、冷球蛋白的測(cè)定冷球蛋白又稱冷免疫球蛋白，一般在-4℃發(fā)生沉淀，37℃復(fù)溶。Ⅰ型：?jiǎn)慰寺±淝虻鞍祝Ｒ?jiàn)IgG、IgM、IgA，多見(jiàn)于免疫增生

性疾病，如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥。Ⅱ型，單克隆混合型冷球蛋白，最常見(jiàn)的組合為IgM-IgG。多見(jiàn)

于自身免疫性疾病，如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。Ⅲ型，多克隆混合型冷球蛋白，多見(jiàn)于傳染性單核細(xì)胞增多癥、

病毒性肝炎、鏈球菌感染等感染性疾病。檢測(cè)冷球蛋白宜在體溫條件下采集和保存靜脈血。@吉普塞舞神第五十七頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十九章補(bǔ)體檢測(cè)及應(yīng)用補(bǔ)體總活性測(cè)定以紅細(xì)胞的溶解為指示，以50%溶血為判斷終點(diǎn)，故稱CH50。通常CH50指基于經(jīng)典途徑的CP-CH50。（classicpathway）原理：補(bǔ)體最重要的活性是溶細(xì)胞作用，特異性抗體與紅細(xì)胞結(jié)合后可激活補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分滲入，引起紅細(xì)胞腫脹破裂。溶血反應(yīng)對(duì)補(bǔ)體的劑量依賴呈S型曲線，實(shí)驗(yàn)常以50%溶血為終點(diǎn)指標(biāo)，比100%溶血更為敏感，因此稱為補(bǔ)體50%溶血試驗(yàn)（CH50）。該法主要檢測(cè)的是補(bǔ)體經(jīng)典途徑的溶血活性，所得結(jié)果反應(yīng)補(bǔ)體C1~C9等9種成分的綜合水平。如CH50測(cè)定值過(guò)低或完全無(wú)活性，應(yīng)考慮補(bǔ)體缺陷，檢測(cè)補(bǔ)體單個(gè)成分。臨床意義：血清補(bǔ)體水平下降：①肝病或營(yíng)養(yǎng)不良引起的蛋白質(zhì)合成不足；②SLE、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎等自身免疫病活動(dòng)期消耗補(bǔ)體。③細(xì)菌感染，旁路途徑活化消耗補(bǔ)體。血清補(bǔ)體水平升高：心肌梗死、甲狀腺炎、大葉性肺炎、糖尿病、妊娠等。@吉普塞舞神第五十八頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十九章補(bǔ)體檢測(cè)及應(yīng)用單個(gè)補(bǔ)體成分測(cè)定檢測(cè)指標(biāo)：C3、C4、C1q、B因子、C1酯酶抑制物等1、免疫溶血法指示系統(tǒng)：抗原為SRBC，抗體為抗SRBC的抗體，即溶血素。檢測(cè)補(bǔ)體的活性。2、免疫化學(xué)法待測(cè)血清中的C3、C4與相應(yīng)抗體結(jié)合，反應(yīng)介質(zhì)中的PEG可使該復(fù)合物沉淀。檢測(cè)補(bǔ)體的含量。@吉普塞舞神第五十九頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第十九章補(bǔ)體檢測(cè)及應(yīng)用補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)（CFT）利用補(bǔ)體的溶細(xì)胞作用檢測(cè)各種物理狀態(tài)的抗原抗體測(cè)定。實(shí)驗(yàn)原理：1、反應(yīng)系統(tǒng)：已知抗原（抗體）與待測(cè)抗體（抗原）；2、補(bǔ)體系統(tǒng)：多采用豚鼠血清；3、指示系統(tǒng)：致敏綿陽(yáng)紅細(xì)胞。第一步：反應(yīng)系統(tǒng)與補(bǔ)體作用；第二步：指示系統(tǒng)利用剩余補(bǔ)體作用。結(jié)果：不溶血為補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性；溶血為實(shí)驗(yàn)陰性。試驗(yàn)中以50%不溶血作為判斷終點(diǎn)。補(bǔ)體測(cè)定的應(yīng)用1、診斷梅毒螺旋體感染的華氏反應(yīng)；2、HLA分型的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒試驗(yàn)；3、抗體形成細(xì)胞定量檢測(cè)的溶血空斑技術(shù)。@吉普塞舞神第六十頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十二章感染性疾病與感染免疫檢測(cè)感染性疾病的早期診斷：病原體抗原和宿主抗血清。IgM抗體出現(xiàn)早，消失快，常作為感染的早期診斷指標(biāo)；IgG類抗體出現(xiàn)晚，維持時(shí)間長(zhǎng)，是流行病學(xué)調(diào)查的重要依據(jù)。一、細(xì)菌感染性疾病的免疫檢測(cè)抗細(xì)胞內(nèi)感染：主要是細(xì)胞免疫；抗細(xì)胞外細(xì)菌感染：主要是B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫。（一）鏈球菌感染1、鏈球菌最常用的免疫學(xué)檢查是抗鏈球菌溶血素“O”（ASO）檢測(cè)。ASO增高常見(jiàn)于急性咽炎等上呼吸道感染、風(fēng)濕性心肌炎、心包炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和急性腎小球腎炎。2、豬鏈球菌實(shí)驗(yàn)室檢查有細(xì)菌培養(yǎng)、鑒定和免疫學(xué)檢查。以及分子診斷技術(shù)。@吉普塞舞神第六十一頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四一、細(xì)菌感染性疾病的免疫檢測(cè)（二）傷寒沙門菌感染沙門菌可致多種感染，輕者為自愈性腸胃炎，重者可引起致死性傷寒。傷寒沙門菌的實(shí)驗(yàn)室診斷主要依賴于免疫學(xué)檢測(cè)方法。1、肥達(dá)反應(yīng)：血清凝集試驗(yàn)傷寒沙門菌有菌體O抗原、鞭毛H抗原和表面Vi抗原，三者的抗體均為非保護(hù)性抗體。由于O抗原和H抗原的抗原性較強(qiáng)，常用作血清凝集試驗(yàn)。2、ELISA：以傷寒沙門菌脂多糖成分為抗原，檢測(cè)傷寒患者血清

中的特異IgM成分。（三）結(jié)核分枝桿菌感染結(jié)核分枝桿菌（TB）進(jìn)入人體后，可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗感染的細(xì)胞免疫，也能產(chǎn)生抗結(jié)核分枝桿菌的抗體反應(yīng)。1、結(jié)核菌素試驗(yàn)：包括針對(duì)舊結(jié)核菌素（OT）與結(jié)核菌素純蛋

白衍生物（PPD）兩種菌體蛋白。2、分枝桿菌抗體檢測(cè)：膠體金法。3、全血干擾素測(cè)定：鑒定菌種。第二十二章感染性疾病與感染免疫檢測(cè)@吉普塞舞神第六十二頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十二章感染性疾病與感染免疫檢測(cè)二、真菌感染性疾病的免疫檢測(cè)臨床上將真菌分為：淺部真菌和深部真菌臨床上的HIV患者、放化療腫瘤患者、長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素的患者以及使用免疫抑制劑的受移植者中真菌感染顯著增加。（一）深部真菌感染1、念珠菌感染；2、隱球菌感染；3、曲霉感染；深部真菌感染缺乏特意癥狀和體征，取材困難，多采用免疫血清法。（二）類真菌感染卡式肺孢子菌，又稱卡氏肺孢子蟲(chóng)。多依賴形態(tài)學(xué)檢查，呼吸道分泌物或肺活檢組織切片染色見(jiàn)肺泡內(nèi)泡沫狀嗜伊紅物質(zhì)中富含本病原體。三、病毒感染性疾病的免疫檢測(cè)（一）流感病毒感染1、病毒抗原檢測(cè)：早期診斷2、抗體檢測(cè)：血凝抑制試驗(yàn)或補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)3、禽流感病毒：A型禽流感病毒（AIV）針對(duì)特異性抗體檢測(cè)。（二）輪狀病毒感染人輪狀病毒（HRV）引起腸炎和腹瀉，主要檢測(cè)抗原和抗體。@吉普塞舞神第六十三頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十二章感染性疾病與感染免疫檢測(cè)三、病毒感染性疾病的免疫檢測(cè)（三）肝炎病毒感染1、甲肝HAV：ELISA或化學(xué)發(fā)光檢測(cè)IgM或IgG。2、乙型肝炎病毒（HBV）①乙型肝炎表面抗原（HBsAg）：早期診斷的重要指標(biāo)。②乙型肝炎病毒表面抗體（抗-HBs）：陽(yáng)性提示感染后的康復(fù)；HBV疫苗接種者血中是否能檢出抗-HBs，是衡量預(yù)防接種效果的最重要指標(biāo)。HBsAg含量消失同時(shí)伴抗-HBs的出現(xiàn)，是臨床上慢性乙肝治療的最終目標(biāo)。③乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）：乙型肝炎傳染性的標(biāo)志。④乙型肝炎病毒e抗體（抗-HBe）：多出現(xiàn)于急性肝炎恢復(fù)期。HBeAg含量消失同時(shí)伴抗-HBe的出現(xiàn)，是目前臨床上慢性乙型肝炎治療的近期目標(biāo)。⑤乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）：是乙型肝炎病毒存在的直接標(biāo)志，與HBV的復(fù)制正相關(guān)，可反映HBV的活動(dòng)性及復(fù)制程度。⑥乙型肝炎病毒核心抗體-IgM（抗-HBc-IgM）早期HBV感染的特異性血清學(xué)標(biāo)志，有助于區(qū)分慢性活動(dòng)性和非活動(dòng)性肝炎。@吉普塞舞神第六十四頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十二章感染性疾病與感染免疫檢測(cè)三、病毒感染性疾病的免疫檢測(cè)2、乙型肝炎病毒（HBV）⑦乙型肝炎病毒核心抗體-IgG（抗-HBc-IgG）⑧乙型肝炎病毒前S1抗原（pre-S1）：HBV外膜蛋白，在病毒入侵肝細(xì)胞中發(fā)揮作用。⑨乙型肝炎病毒前S2抗原（Pre-S2）：與HBV的感染和復(fù)制有密切關(guān)系。3、丙型肝炎病毒感染（HCV）針對(duì)特異性抗體HCV-IgG和HCV-IgM的免疫學(xué)檢測(cè)4、丁型肝炎病毒感染（HDV）目前檢查主要針對(duì)HDVAg、抗HDV總抗體、IgM、IgG。5、戊型肝炎病毒感染（HEV）HEV感染為自限性，一般無(wú)慢性化過(guò)程，也無(wú)慢性HEV攜帶者。實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)檢查針對(duì)HEV-Ag、HEV-IgM、HEV-IgG。（四）冠狀病毒感染SARS的檢查主要針對(duì)血清中的IgM抗體，抗體效價(jià)4倍增長(zhǎng)提示近期感染。@吉普塞舞神第六十五頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十二章感染性疾病與感染免疫檢測(cè)四、先天性感染的免疫檢測(cè)產(chǎn)前檢查4項(xiàng)“TORCH”：弓形蟲(chóng)（TOC）、巨細(xì)胞病毒（HCMV）、風(fēng)疹病毒（RUV）、單純皰疹病毒（HSV）。胎兒在母體內(nèi)受到感染可導(dǎo)致流產(chǎn)、死胎、胎兒畸形、或出現(xiàn)嬰兒智力低下、視聽(tīng)障礙等。五、寄生蟲(chóng)感染的免疫檢測(cè)1、瘧原蟲(chóng)感染瘧原蟲(chóng)寄生于人體紅細(xì)胞和肝細(xì)胞，引起瘧疾。寄生于人體的瘧原蟲(chóng)有間日瘧原蟲(chóng)、惡性瘧原蟲(chóng)、三日瘧原蟲(chóng)和卵形瘧原蟲(chóng)四種?？贵w檢測(cè)：間接熒光抗體實(shí)驗(yàn)。2、血吸蟲(chóng)感染：環(huán)卵沉淀反應(yīng)（COPT）：是一種抗原抗體反應(yīng)。3、絲蟲(chóng)感染：ELISA檢測(cè)絲蟲(chóng)抗體。4、華支睪吸蟲(chóng)感染華支睪吸蟲(chóng)又稱肝吸蟲(chóng)，寄生在人的肝膽管內(nèi)引起肝膽病變。常采用Do-ELISA檢測(cè)其特異性抗體。5、豬囊尾蚴感染俗稱“囊蟲(chóng)病”，檢測(cè)其抗原或抗體。@吉普塞舞神第六十六頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十三章超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)超敏反應(yīng)：又稱變態(tài)反應(yīng)，是機(jī)體對(duì)某些抗原初次應(yīng)答致敏后，再次接觸相同抗原刺激時(shí)，所出現(xiàn)的一種以生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主的異常免疫應(yīng)答。變應(yīng)原：引起超敏反應(yīng)的抗原物質(zhì)，可以是完全抗原也可以是半抗

原，自身組織抗原也可以成為變應(yīng)原。Ⅰ型超敏反應(yīng)：速發(fā)型超敏反應(yīng)Ⅱ型超敏反應(yīng)：細(xì)胞毒型或細(xì)胞溶解型超敏反應(yīng)Ⅲ型超敏反應(yīng)：免疫復(fù)合物型或血管炎型超敏反應(yīng)Ⅳ型超敏反應(yīng)：遲發(fā)型超敏反應(yīng)@吉普塞舞神第六十七頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十三章超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)

Ⅰ型超敏反應(yīng)主要由IgE抗體介導(dǎo)產(chǎn)生，發(fā)生速度最快，常在第二次接觸相同抗原后數(shù)分鐘即出現(xiàn)臨床反應(yīng)。特點(diǎn)：①超敏反應(yīng)發(fā)生快，消退快；②較少發(fā)生嚴(yán)重的組織細(xì)胞損傷；③IgE介導(dǎo)，無(wú)補(bǔ)體參與；④具有明顯的個(gè)體差異和遺傳背景。變應(yīng)原：①某些藥物或化學(xué)物質(zhì)：如青霉素、磺胺；

②吸入性變應(yīng)原：如花粉顆粒、塵螨排泄物、動(dòng)物皮毛等；

③食物變應(yīng)原：如奶、蛋、魚(yú)蝦、蟹貝等；

④某些酶類物質(zhì)：變應(yīng)素：IgE；依賴Th2型細(xì)胞活化。細(xì)胞：肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞。@吉普塞舞神第六十八頁(yè)，共一百零四頁(yè)，編輯于2023年，星期四第二十三章超敏反應(yīng)性疾病及其免疫檢測(cè)

Ⅰ型超敏反應(yīng)發(fā)生過(guò)程：①致敏階段：變應(yīng)原首次進(jìn)入機(jī)體后，選擇性誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體，使機(jī)體出于對(duì)該變應(yīng)原的致敏狀態(tài)。細(xì)胞膜表面結(jié)合有特異性IgE的肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞稱為致敏細(xì)胞。②激發(fā)階段：處于致敏狀態(tài)的機(jī)體再次接觸相同變應(yīng)原時(shí)，變應(yīng)原即與致敏靶細(xì)胞膜上的IgE抗體特異結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)胞脫顆粒，釋放各種生物活性介質(zhì)，如組胺、前列腺素等。③效應(yīng)階段：釋放的生物活性介質(zhì)作用于效應(yīng)組織和器官，引起局部或全身性過(guò)敏反應(yīng)。常見(jiàn)Ⅰ型超敏反應(yīng)疾病1、全身性超敏反應(yīng)①藥物過(guò)敏性休克：青霉素最為常