顯微技術(shù)作業(yè)-課后作業(yè)C

生物電子顯微技術(shù)作業(yè)課后作業(yè)C1.簡(jiǎn)述超高壓電子顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)，以及切片與一般超薄切片的不同樣。答：超高壓電鏡不僅分辨率高、單色性好，而且電子穿透力強(qiáng)，對(duì)資料的傷害較小，能夠觀察較厚的資料μm)，場(chǎng)深大，成像有立體感，而且不會(huì)影響分辨率。主要用于觀察資料、礦物、生物樣品、器件透射電子顯微象及電子衍射圖，對(duì)樣品微觀組織、結(jié)構(gòu)、弊端等定性、定量解析?？蓪?duì)樣品在加熱、拉伸、電子輻照等條件下微觀組織的變化過程進(jìn)行動(dòng)向觀察。一般透射電鏡觀察樣品時(shí)，電子束沒法穿過mm以上的切片，因此需將樣品切成50~70nm的薄片才能觀察。與光鏡觀察的3~7mm切片比較而言，常將透射電鏡的切片稱為超薄切片。用于超高壓電鏡的厚切片制備與一般超薄切片相似，可是有一些特別要求:其切片資料的制備與一般電鏡有所不同樣。樣品塊要相對(duì)軟一些，以保護(hù)刀口和便于制作連續(xù)切片。覆蓋的支持膜要厚，并噴碳加固，以抗高壓電子轟擊。采用折疊式載網(wǎng)或單縫載網(wǎng)，以防切片零散和阻截視野。采用淹沒法染色，并適合延長(zhǎng)染色時(shí)間。包埋前可先進(jìn)行整體染色。比較透射電鏡與掃描電鏡在觀察收效和研究用途上的不同樣它們各自的優(yōu)弊端是什么透射電鏡掃描電鏡觀察收效電子顯微鏡是使用電子來顯現(xiàn)它能夠直接觀察直徑物件的內(nèi)部或表面的顯微鏡。100mm，高50mm，或更大高速的電子的波長(zhǎng)比可見光的尺寸的試樣，對(duì)試樣的形波長(zhǎng)短（波粒二象性），而顯狀沒有任何限制，粗糙表微鏡的分辨率受其使用的波長(zhǎng)面也能觀察，這便免除了的限制，因此電子顯微鏡的理制備樣品的麻煩，而且能論分辨率（約納米）遠(yuǎn)高于光真實(shí)觀察試樣自己物質(zhì)學(xué)顯微鏡的分辨率（約200納成分不同樣的襯度（背反射米）。分辨率為～，放大倍數(shù)電子象）。分辨率可達(dá)為幾萬(wàn)～幾十萬(wàn)倍3-10nm,放大倍數(shù)可達(dá)10萬(wàn)倍研究用途用以觀察為亞顯微結(jié)構(gòu)或超微主若是用來觀察物體表結(jié)構(gòu)。面超微形態(tài),適合觀察固觀察樣品面貌、原位解析樣品態(tài)的生物質(zhì)料,也能夠觀的晶體結(jié)構(gòu)察生物質(zhì)料斷面或剝蝕面的結(jié)構(gòu)（亞細(xì)胞形態(tài)），但是需要起初進(jìn)行切割或蝕刻辦理。有時(shí)甚至也可進(jìn)行細(xì)胞化學(xué)標(biāo)記物的形態(tài)觀察。由于擁有很高的分辨率，多以被廣泛用于觀察納米資料。優(yōu)點(diǎn)1.制樣過程對(duì)芯片內(nèi)部結(jié)構(gòu)影1.擁有很高的分辨率響較小2.制樣方便，制樣周期2.透射電子穿過樣品內(nèi)部，同短，有時(shí)能夠作非破壞性樣品內(nèi)部的所有東西發(fā)生相互的解析作用，從而直接獲得內(nèi)部結(jié)構(gòu)3.觀察范圍大，倍率變化信息，因此獲得綜合的高分辨大，立體感強(qiáng)，景深大，率結(jié)果觀察收效好3.易于調(diào)整，經(jīng)過改變線圈中流過電流的強(qiáng)度，能夠改變磁場(chǎng)強(qiáng)度，達(dá)到變化折射率和焦距的目的4.像差較小，且較為簡(jiǎn)單除掉或校正5.對(duì)電子束流的能量耗費(fèi)小弊端1.結(jié)構(gòu)復(fù)雜，對(duì)制作資料的純1.只幸虧樣品表面掃描，度、元件幾何形狀尺寸的加工信號(hào)來自樣品表面，不能夠精美度等都要求極高獲得樣品內(nèi)比較深的部2.制樣的技術(shù)難度大，觀察點(diǎn)位的情況的定位難，有時(shí)需借用聚焦離2.顯微像一般不包括結(jié)子束刻蝕才能完成構(gòu)信號(hào)，不能夠區(qū)分單晶、3.解析周期長(zhǎng)多晶、非晶，不能夠區(qū)分位4.成本較高錯(cuò)、層錯(cuò)、晶界等3.不適合厚度在微米以下的薄膜的解析需求采用低溫辦理制作電鏡樣品的優(yōu)弊端是什么優(yōu)點(diǎn)弊端固定形態(tài)和結(jié)構(gòu)，且固化結(jié)構(gòu)使之易低溫辦理依舊不能夠解決永久活體，而且于進(jìn)一步辦理制作過程簡(jiǎn)單產(chǎn)生冷凍傷害和干燥損2.在保存生物活性的基礎(chǔ)上儲(chǔ)蓄生物傷。而且切片太厚，不能夠做連續(xù)切片，資料而且簡(jiǎn)單破碎。在制作冷凍超薄切片晌，不需經(jīng)化學(xué)藥劑固定、脫水、過渡、聚合等，減少了辦理過程造成的閻像為什么要采用臨界點(diǎn)干燥來辦理掃描電鏡樣品哪些資料不用臨界點(diǎn)干燥來辦理也能獲得滿意的圖像答：臨界點(diǎn)干燥就是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)下，液體表面張力除掉的特點(diǎn)，戰(zhàn)勝樣品干燥過程中所發(fā)生的變形，保持樣品原狀，達(dá)到干燥的目的。其原理是在必然的溫度和壓力下，物質(zhì)的液態(tài)平和態(tài)界面將會(huì)消失，液態(tài)剎時(shí)轉(zhuǎn)變成氣態(tài)，形成非液非固的狀態(tài)，即達(dá)到臨界點(diǎn)（）狀態(tài)。在臨界點(diǎn)時(shí)，表面張力消失，分子間的內(nèi)聚力等于零，因此，利用臨界點(diǎn)狀態(tài)對(duì)資料進(jìn)行干燥，資料理論上不會(huì)產(chǎn)生縮短和形變，對(duì)于質(zhì)地較軟的資料這種方法是最好的干燥方法。因此說，對(duì)于比較堅(jiān)硬的資料，及時(shí)不使用臨界點(diǎn)干燥法也能夠?qū)崿F(xiàn)較好的圖像觀察。查找采用了低溫制樣技術(shù)的研究文件，采集精良圖片，解析這些工作的技術(shù)難點(diǎn)和公布圖片的質(zhì)量。答：技術(shù)難點(diǎn)：1、冰晶冰晶是組織在冷凍固化過程中,由于冷凍緩慢,冷凍時(shí)間過長(zhǎng),使細(xì)胞質(zhì)和組織縫隙內(nèi)未結(jié)合的水逐漸析出形成解決方法:取材大小、厚薄要適合,過大過厚影響冷凍速度。2、組織擠壓、皺縮。常有于組織結(jié)構(gòu)軟硬不同樣的組織，如皮膚。解決方法：將表皮面放在標(biāo)本的上端,先切較軟的皮下組織,依次切真皮、表皮,同時(shí)用毛筆輕輕張開,或用抗卷板才能切出完滿的切片3、冷凍切片一般不會(huì)脫片,偶見于壞死組織或含水量大的組織,如子宮肌瘤黏液變性時(shí)。解決方法:第全部片不能夠太厚,其次切片固定后用吹風(fēng)機(jī)吹干再染色。4、甲狀腺等有腔洞的組織，組織冷凍過頭,使之發(fā)脆就會(huì)破碎形成空洞,這時(shí)可用手貼在組織上或用嘴向組織哈氣略加溫使其消融即可切出完滿的切片。5、組織貼附不平也許有皺褶切片切好后用載玻片貼片晌手不能夠顫抖,而且在貼附組織時(shí)手要有一個(gè)向下伸展的動(dòng)作。文件一密方元,李鳳山,馬邦磊,錢寧.冷凍切片5min快速制片染色法.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2009，Oct25.圖1A進(jìn)口OCT包埋的腮腺混雜瘤冷凍切片B膠片包埋的腮腺混雜瘤冷凍切片圖2腎粗針穿刺小標(biāo)本,先制成冷凍圖3脂肪組織冷凍切片,脂肪細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)平后做冷凍切片,保持了組織保持完滿，細(xì)胞界線清楚，染色嬌艷圖4甲狀腺組織,HE染色前未經(jīng)二圖5甲狀腺組織,HE染色前經(jīng)二甲苯脫脂甲苯脫脂辦理,胞核較模糊辦理后，胞核、質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚、透明我認(rèn)為這幾張圖片比較好，清楚，甲狀腺組織切片中破碎形成空洞，染色很均勻。文件二胥維勇，楊紅，李科，楊群.介紹一種FAAPT冷凍切片快速固定液.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志.2002Apr;18大綱手術(shù)中冷凍切片的病理診斷是依照冷凍切片組織學(xué)形態(tài)來進(jìn)行,以確定病變組織的良惡性為目的。制作冷凍切片包括制片、固定、染色三個(gè)環(huán)節(jié),在冷凍切片中固定液的選擇是不能忽視的一個(gè)因素。我們?cè)诠ぷ髦薪?jīng)屢次試驗(yàn)在眾多固定液中選擇FAA液(福爾馬林-醋酸-乙醇),經(jīng)改良配成一種適