第四章動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶

第四章動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶TheproductionofEnzymebyCulturingofAnimalorPlantCells概述動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，容易貼壁對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求嚴(yán)格（血清培養(yǎng)基）對(duì)環(huán)境敏感（pH、溶氧、溫度、剪切應(yīng)力）植物細(xì)胞有細(xì)胞壁，但比微生物的細(xì)胞壁脆弱營(yíng)養(yǎng)要求較動(dòng)物細(xì)胞簡(jiǎn)單生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)周期長(zhǎng)，要達(dá)到高密度較困難植物細(xì)胞與動(dòng)物細(xì)胞、微生物細(xì)胞培養(yǎng)的比較特征哺乳動(dòng)物細(xì)胞植物細(xì)胞微生物細(xì)胞大小(m)10～10010～1001～10生長(zhǎng)形式懸浮、貼壁懸浮懸浮營(yíng)養(yǎng)要求很復(fù)雜很復(fù)雜簡(jiǎn)單倍增時(shí)間(h)15～10020～1200.5～5細(xì)胞分化有有限分化無環(huán)境影響非常敏感敏感一般產(chǎn)物存在部位胞內(nèi)或胞外胞內(nèi)或胞外胞內(nèi)或胞外產(chǎn)物濃度低低高供氧需求(KLa)1～2520～30100～1000產(chǎn)物種類疫苗、單抗、酶、生長(zhǎng)因子、激素等天然色素、天然有機(jī)化合物等抗生素、有機(jī)小分子、酶等植物細(xì)胞與動(dòng)物細(xì)胞、微生物細(xì)胞培養(yǎng)的比較動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞和微生物細(xì)胞可以用相同方式培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞的生產(chǎn)周期比微生物長(zhǎng)植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞對(duì)剪切力敏感植物、微生物和動(dòng)物細(xì)胞的主要目的產(chǎn)物各不相同動(dòng)物細(xì)胞——蛋白疫苗、抗體、激素、酶（蛋白質(zhì)或多肽）植物細(xì)胞——色素、香精、天然產(chǎn)物（小分子）、酶本章主要內(nèi)容動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞及其培養(yǎng)特點(diǎn)植物細(xì)胞培養(yǎng)及產(chǎn)酶的工藝控制動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動(dòng)物細(xì)胞及其培養(yǎng)特點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)及產(chǎn)酶的工藝控制從基因到蛋白質(zhì)有關(guān)微生物細(xì)胞中酶合成的調(diào)節(jié)理論也基本適用于動(dòng)植物細(xì)胞動(dòng)植物細(xì)胞具有比微生物更多的調(diào)節(jié)方式轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)翻譯水平調(diào)節(jié)激素、神經(jīng)調(diào)節(jié)第一節(jié)動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)基因擴(kuò)增加速酶的合成通過增加基因的數(shù)量調(diào)節(jié)基因表達(dá)，可以發(fā)生在個(gè)體發(fā)育某一階段或細(xì)胞分化某一過程細(xì)胞的一種應(yīng)急方式基因擴(kuò)增可以由選擇壓力引起耐藥性細(xì)胞的抗藥性產(chǎn)生例：CHO細(xì)胞為對(duì)抗氨甲基喋呤對(duì)二氫葉酸還原酶的抑制，編碼這種酶的基因急劇擴(kuò)增第一節(jié)動(dòng)植物細(xì)胞中酶生物合成的調(diào)節(jié)

增強(qiáng)子促進(jìn)酶的生物合成增強(qiáng)子（modulator）——能高效增強(qiáng)或促進(jìn)基因轉(zhuǎn)錄的一段DNA序列增強(qiáng)子能促進(jìn)同源或異源啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄活性，可高效增強(qiáng)某些酶基因的表達(dá)具有細(xì)胞或組織特異性，在不同細(xì)胞或組織中增強(qiáng)效果不同抗原誘導(dǎo)抗體酶的生物合成抗體酶（abzyme）：催化性抗體，是具有生物催化功能的抗體分子，是人工改造的對(duì)抗體可變區(qū)賦予催化特性的特殊抗體修飾法在抗體與抗原結(jié)合部位引進(jìn)催化基團(tuán)誘導(dǎo)法（主要方法）半抗原誘導(dǎo)酶蛋白誘導(dǎo)1902年，Haberlandt首次提出分離植物單細(xì)胞并培養(yǎng)成植株的設(shè)想植物細(xì)胞的全能性Haberlandt植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶種類產(chǎn)酶植物細(xì)胞產(chǎn)酶品種胡蘿卜細(xì)胞糖苷酶紫苜蓿細(xì)胞-半乳糖苷酶甜菜細(xì)胞過氧化物酶、酸性/堿性轉(zhuǎn)化酶、糖化酶大豆細(xì)胞過氧化物酶、苯丙氨酸裂合酶花生細(xì)胞苯丙氨酸裂合酶假挪威槭細(xì)胞漆酶利馬豆細(xì)胞-葡萄糖苷酶番木瓜細(xì)胞木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶大蒜細(xì)胞超氧化物歧化酶菠蘿細(xì)胞菠蘿蛋白酶劍麻細(xì)胞劍麻蛋白酶植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)植物細(xì)胞的主要特點(diǎn)體積較大：比動(dòng)物細(xì)胞和微生物細(xì)胞都大細(xì)胞生長(zhǎng)速率和代謝速率低于微生物細(xì)胞，生長(zhǎng)周期長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)要求較動(dòng)物細(xì)胞簡(jiǎn)單細(xì)胞生長(zhǎng)及合成次級(jí)代謝產(chǎn)物需要光照條件對(duì)剪切力較敏感主要用于產(chǎn)天然產(chǎn)物、色素、香精等有機(jī)物（次級(jí)代謝物）植物細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì)提高目標(biāo)物的產(chǎn)率縮短生產(chǎn)周期木瓜蛋白酶：木瓜生長(zhǎng)期8個(gè)月，木瓜細(xì)胞培養(yǎng)約1個(gè)月易于管理，不受自然因素控制可以提高產(chǎn)物質(zhì)量通過嚴(yán)格的培養(yǎng)條件控制，減少植株病蟲害和污染缺點(diǎn)培養(yǎng)條件要求高——光照、剪切力影響顯著植物細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢——相對(duì)于微生物植物體外培養(yǎng)胚培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、愈傷組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)植物另細(xì)胞蔬培養(yǎng)——外植鼓體選都擇和臥處理外植龍?bào)w（ex巴pl潮an儉t）從植銅株取遍出，咽經(jīng)預(yù)易處理拾后用脾于組襖織和缸細(xì)胞炸培養(yǎng)惡的植謎物組仁織片禽段或拒小塊根、尖莖、桐葉、袋芽、魔花、荒果實(shí)條、種墳子等選擇踢：無診病蟲俯害、序生長(zhǎng)干旺盛幻玉、生里長(zhǎng)有總規(guī)則切片重：0.療5～1醉cm消毒70順%乙醇5%次氯峰酸鈉/置10圈%漂白勿粉0.胞01～0.污1%念H宋gC棄l2植物鹿細(xì)胞好培養(yǎng)——獲取酒植物蠅細(xì)胞手：直網(wǎng)接分悉離法直接角分離烤法即儀直接禁從外成植體測(cè)中分鍋離機(jī)械這法將外動(dòng)植體紀(jì)搗碎絡(luò)，過書濾或?yàn)V離心倒分離榴細(xì)胞質(zhì)壁鵝未分撿離；鮮細(xì)胞句破碎停率高總，完血整細(xì)窮胞數(shù)熄量少酶解租法利用陣果膠驢酶、隊(duì)纖維到素酶萌等處禽理外董植體躁，分望離具偉有代恩謝活銜性的幕細(xì)胞能降黃解細(xì)笑胞壁委，必鎮(zhèn)須對(duì)嗓細(xì)胞組給予娛滲透輝壓保報(bào)護(hù)植物融細(xì)胞愉培養(yǎng)——獲取廟植物蠅細(xì)胞憲：愈源傷組挖織誘擊導(dǎo)法愈傷醉組織堂（ca備ll徒us）由外艇植體贈(zèng)組織嫩增生眾的細(xì)子胞產(chǎn)病生的乏團(tuán)狀擋不定抖型的違疏散較排列陣的薄始壁細(xì)耀胞群飛體；法本意澇是指據(jù)植物矩體的態(tài)局部吸受到泛創(chuàng)傷劣刺激幣后，墾在傷奪口表襲面新略生的袖可幫劫助傷潮口愈銜合的嗓組織誘導(dǎo)邀過程配制膠半固塌體誘樓導(dǎo)培削養(yǎng)基滅菌嫩、植域入外廢植體1～3周后通繼代究培養(yǎng)植物臘細(xì)胞呆培養(yǎng)——獲取鹽植物吳細(xì)胞臣：原墻生質(zhì)慣體再夫生法一般桐采用惠酶解圓法分圈離原衣生質(zhì)奧體，啟使用爺纖維森素酶棚和果茅膠酶悉混合拐物保持枯溶液養(yǎng)的高如滲狀捆態(tài)防止灰原生方質(zhì)體文脹裂滲透氧壓穩(wěn)拾定劑干：糖尺、鹽隱、甘紀(jì)露醇糕、山湖梨醇服等原生撫質(zhì)體抽培養(yǎng)城，再定生細(xì)騾胞壁植物略細(xì)胞偶培養(yǎng)——懸浮訴培養(yǎng)將游有離的泄單細(xì)德胞或憤細(xì)胞債團(tuán)按翻照一巧定的器細(xì)胞恨密度拉懸浮宅在液錯(cuò)體培錯(cuò)養(yǎng)基狂中進(jìn)痛行培榴養(yǎng)的案方法懸浮單培養(yǎng)必的細(xì)微胞一皺般來預(yù)源于烤愈傷啟組織吊，選橡擇較邀松散號(hào)的為紛宜植物械細(xì)胞深培養(yǎng)——產(chǎn)物鍬分離預(yù)純化收集干培養(yǎng)城液，攤從中叼獲得鼻所需井的產(chǎn)腸物植物和細(xì)胞府培養(yǎng)垂基水：蠻一般弟用去絲式離子獎(jiǎng)水或襯蒸餾緒水無機(jī)絕成分大量弱元素遺：N、P、K、Ca、Mg、S微量復(fù)元素或：Fe、B、Mn、Zn、Cu、Mo、Co有機(jī)律成分碳源津：糖妖，以合蔗糖緒最常曉用氮源提：氨寫基酸妖（Gl塑y、Al少a、Se驅(qū)r、Cy稀s…）及丹蛋白倦水解圣物、角無機(jī)葉氮維生曠素：田主要李是B族維廟生素訪和維靠生素C生長(zhǎng)傲調(diào)節(jié)握劑：咸生長(zhǎng)廚激素般、細(xì)灣胞分用裂素訴等（鞭微量戀）其他撈：肌仍醇、第瓊脂弄等常用厚的植廉物細(xì)戰(zhàn)胞培門養(yǎng)基MS培養(yǎng)雀基硝酸均鹽濃程度較漢高，家營(yíng)養(yǎng)虛成分哥適宜饅，使森用范鉆圍廣B5培養(yǎng)薪基NH4+濃度羊較低若，適豆用于鞭雙子毯葉木啟本植站物Wh葬it冶e培養(yǎng)座基無機(jī)路鹽濃扮度低酒，高M(jìn)g穗(I蠅I)、B(廳II牙I)，適熔用于給生根脂培養(yǎng)KM版-8下P培養(yǎng)罵基有機(jī)韻成分叮種類計(jì)齊全訪，用牙于原貌生質(zhì)掀體培總養(yǎng)培養(yǎng)巧基配胞制配制妙母液意，使閥用時(shí)注按需票要稀振釋工藝膝條件隸及其灘控制溫度室溫礦范圍齊（25oC左右圖）最適稻產(chǎn)酶回溫度貴和最歌適生床長(zhǎng)溫強(qiáng)度不避同pH微酸串性（pH焰5～6）細(xì)胞逐培養(yǎng)宇時(shí)，pH一般侍變化綱不大溶解贏氧植物融細(xì)胞陳需氧晶量不雞高，融供氧灶不宜桃過量對(duì)剪劍切力增敏感廢，通續(xù)風(fēng)攪竟拌不茅宜太粒劇烈工藝蕩條件綠及其熊控制光照光照鄙對(duì)植五物細(xì)彼胞的爹生長(zhǎng)你和產(chǎn)碼物合普成具梢有重射要影緒響（騾植物嚼特色紫）光照漢有時(shí)活也抑矩制產(chǎn)匯物合協(xié)成添加臭前體前體仙：處弓于目慕的代竹謝物勉代謝射途徑置上游遺的物濤質(zhì)添加雖前體瀉相對(duì)甲于添壟加了畝反應(yīng)紋的底到物刺激岔劑（el家ec嶄to辮r）引導(dǎo)有物質(zhì)僵朝特芹定的辜代謝辛方向驕進(jìn)行嚴(yán)，強(qiáng)鵝化次柴級(jí)代餅謝產(chǎn)劈燕物的褲生物看合成常用梯微生賤物細(xì)戒胞壁劣碎片寒和胞偽外酶產(chǎn)酶彩實(shí)例——大蒜布細(xì)胞辜培養(yǎng)傷產(chǎn)SO破D超氧劈燕化物暫歧化諒酶（su平pe森ro皮xi倘de姑d恭is絨mu揉ta指se，SO陶D，EC挪1堪.1棟5.介1.察1）生物棍體內(nèi)馳清除骨超氧意化物糟陰離父子自野由基柄（O2·-）的毒重要浮金屬糠酶類SO余D和過活氧化據(jù)氫酶(c習(xí)at景al殿as崖e)、過能氧化餐物酶(p面er擁ox莊id老as忌e，PO緩D)一起邁構(gòu)成訓(xùn)了生劫物體害內(nèi)重裙要的哥酶促淋反應(yīng)柜防御桃體系染，從避而維益護(hù)生壤物體跟內(nèi)細(xì)潑胞正濁常的續(xù)生理傾代謝學(xué)和生血化反齒應(yīng)產(chǎn)酶曠實(shí)例——大蒜淚細(xì)胞抖培養(yǎng)停產(chǎn)SO底D大蒜節(jié)愈傷傅組織趙的誘述導(dǎo)選取今結(jié)實(shí)欲、飽誘滿、皂無病給蟲害常的大茫蒜蒜介瓣，童去除秘外皮先用70無%乙醇證消毒20奴s，再火用0.淚1%升汞舊消毒10猴m閱in，然篩后無編菌水聯(lián)漂洗3次在無蒼菌條撫件下妙，切詳成0.練5屑cm3的小茂塊，驅(qū)植入委含有3何mg第/L療2觀,4瘋-D和1.某2駁mg類/L論6續(xù)-B餃A的半昏固體MS培養(yǎng)梁基中25oC，60棚0藏lu嘉x，12迷h換/d光照絡(luò)條件靈下培鄰養(yǎng)18天，麻誘導(dǎo)揭得到機(jī)愈傷匆組織曠，每18天繼呆代一吸次產(chǎn)酶伐實(shí)例——大蒜竄細(xì)胞必培養(yǎng)軟產(chǎn)SO叉D大蒜住細(xì)胞點(diǎn)懸浮性培養(yǎng)將上宏述在執(zhí)半固得體MS培養(yǎng)剃基上懂培養(yǎng)18天的瓶愈傷肅組織諒，在鼓無菌堵條件擊下轉(zhuǎn)趕入含卡有3顫mg已/L脅2綿,4票-D和1.藥2煤mg企/L丈6膛-B黎A的液他體MS培養(yǎng)侄基中占，加職入滅炎菌的賢玻璃厲珠，25oC，60歉0斃lu圖x，12即h擊/d光照便條件腫下振這蕩培速養(yǎng)10～12天，權(quán)使愈漸傷組矩織分章散成敢為小肯細(xì)胞書團(tuán)或狠單細(xì)之胞無菌龜條件濾下，蘿經(jīng)過碰篩網(wǎng)熱將小嫂細(xì)胞抗團(tuán)或雀單細(xì)靜胞轉(zhuǎn)撲入含污有3泥mg凡/L鉆2建,4藥-D和1.仿2節(jié)mg遺/L離6凝-B仍A的液拳體MS培養(yǎng)尋基中癥，25oC，60疑0曉lu快x，12待h遷/d光照句條件腐下振飼蕩培誰養(yǎng)18天SO產(chǎn)D分離牌純化收集陣細(xì)胞怎，破乞碎，卷用pH意7犯.8磷酸厘鹽緩取沖液艷提取19葛07年，Ha障rr瞧is合on開創(chuàng)淹了動(dòng)樓物組薦織培葉養(yǎng)的宅先河從蝌湯蚪的色脊索狗中分墓離出畝神經(jīng)猴組織退，放刑在青墻蛙的佩凝固交的淋隱巴液獲中培寨養(yǎng)，腿蝌蚪國(guó)的神管經(jīng)組械織存虜活了查數(shù)周壩，并覆且從紙神經(jīng)輕細(xì)胞徐中長(zhǎng)可出了秒神經(jīng)休纖維19回50誦s，Ea滅rl筐e用動(dòng)相物細(xì)枯胞培捎養(yǎng)制駕取病超毒疫艘苗19盞67年，尚動(dòng)物嚴(yán)細(xì)胞瘦貼壁愧培養(yǎng)夾微載梅體開血發(fā)19圣75年，裝雜交鉗瘤技捏術(shù)動(dòng)物吊細(xì)胞商可產(chǎn)蹄生較婦高價(jià)競(jìng)值的傳物質(zhì)激素藏、疫燙苗、弱單克不隆抗貼體、杜酶動(dòng)物昆細(xì)胞帽培養(yǎng)需產(chǎn)酶動(dòng)物張細(xì)胞負(fù)結(jié)構(gòu)動(dòng)物勾細(xì)胞格特性沒有屬細(xì)胞敘壁，錫細(xì)胞寸脆弱桌（區(qū)仙別于嚇植物凍和微少生物亭）體積晝比微篩生物閘細(xì)胞揉大幾機(jī)千倍蝦，但乞稍小根于植釣物細(xì)睬胞在肌丸體內(nèi)衣相互置粘連稱，以欠群體咳形式輛存在在培側(cè)養(yǎng)時(shí)粒具有蛇群體腎效應(yīng)涂、貼嗓壁依徐賴性配、接信觸抑矛制性先、功具能全營(yíng)能性營(yíng)養(yǎng)睛要求事復(fù)雜厭（血倉(cāng)清培聾養(yǎng)基兩）動(dòng)物惠細(xì)胞滴培養(yǎng)雨的特堡點(diǎn)主要容用于罩生產(chǎn)康蛋白溪質(zhì)生長(zhǎng)嘆緩慢容易托受污譯染（悶細(xì)菌析、支碧原體鵲），咱培養(yǎng)習(xí)過程趴中需旺添加屋抗生搭素對(duì)剪襲切力叫特別東敏感布（胞厭外缺滾少?？v護(hù)結(jié)際構(gòu)）大部犁分具識(shí)有貼提壁依垃賴性——貼壁氣培養(yǎng)培養(yǎng)鑒基成貼分復(fù)俘雜，憲價(jià)格傳高昂細(xì)胞爹生命引有限暫，一屯般最誤多繼袍代培生養(yǎng)50代即撕退化絕死亡動(dòng)物藥細(xì)胞醋培養(yǎng)盟方式——懸浮是培養(yǎng)適用摘于非綱貼壁蔬依賴催型細(xì)佩胞雜交添瘤細(xì)澇胞、拍腫瘤智細(xì)胞維、體恩液（起血液挽、淋巷巴液季）細(xì)潛胞類似軟于微抖生物饅細(xì)胞扇的深番層發(fā)殊酵，儉但工宇藝條汪件有賭較大蓬差別對(duì)通摟氣、登攪拌齊耐受俯性差對(duì)氧宣氣的吩要求違較微灘生物拿低，魚培養(yǎng)鬧時(shí)需慚通入漸一定編比例CO2優(yōu)點(diǎn)要（相惹對(duì)于雹貼壁逃培養(yǎng)密）細(xì)胞繳在培宇養(yǎng)液皇中均閥勻分塞散，雜生長(zhǎng)始情況勁良好傳代趁培養(yǎng)減容易騙，無愈需消衡化分六散細(xì)歉胞培養(yǎng)逢基中水營(yíng)養(yǎng)頂成分森利用普率高動(dòng)物靜細(xì)胞釣培養(yǎng)辨方式——貼壁鼓培養(yǎng)適用糧于貼情壁依沾賴型鬼細(xì)胞上皮蜘細(xì)胞纖、成圖纖維各細(xì)胞細(xì)胞輸在培辟養(yǎng)容稀器表兔面迅享速鋪殿展并巴分裂滾瓶謠培養(yǎng)銹系統(tǒng)結(jié)構(gòu)艘簡(jiǎn)單稻，但潔比表詞面積勁小微載尿體培獎(jiǎng)養(yǎng)系毅統(tǒng)由葡艙聚糖際凝膠這等聚稱合物化制得院的微寫球兼具孩單層蕉培養(yǎng)艷和懸受浮培訊養(yǎng)的留優(yōu)勢(shì)細(xì)胞遭生長(zhǎng)榨環(huán)境志均一動(dòng)物貴細(xì)胞創(chuàng)培養(yǎng)嚼方式——固定活化培妹養(yǎng)貼壁價(jià)或非襲貼壁近依賴妹型細(xì)贏胞均知適用吸附孔法載體悔為多臘孔性錢顆粒侍，如絡(luò)陶瓷飽顆粒浮、玻鳳璃珠用及硅很膠顆格粒貼壁參型細(xì)蘆胞的腎微載鹿體培撕養(yǎng)即隔屬此置類包埋喜法將細(xì)乒胞包圾埋于裁瓊脂鬼、瓊抹脂糖仁、膠膀原及沉血纖討維等丘海綿恰狀基蘿質(zhì)中細(xì)胞拒不易擔(dān)脫落固定擠化培跳養(yǎng)優(yōu)扭點(diǎn)細(xì)胞裳損傷固程度訪低，駐可重槽復(fù)使?jié)娪卯a(chǎn)物棚分離湖容易動(dòng)物指細(xì)胞棗培養(yǎng)塵過程種質(zhì)急細(xì)胞體細(xì)鼓胞（相動(dòng)物任體內(nèi)新組織威取出茫）雜交俊瘤細(xì)昆胞基本劈燕工藝舅過程動(dòng)物征細(xì)胞繁培養(yǎng)蘋基氨基鞠酸：榜各種動(dòng)必需時(shí)氨基坑酸，Gl霸n等，浸作為權(quán)碳源崗和能旦源利恭用維生蝦素：B族和滲維C，可姓由血第清提夢(mèng)供無機(jī)架鹽：澡調(diào)節(jié)寨滲透推壓微量蘇元素瓦：Fe、Cu、Zn等，鍵可由六血清敬提供葡萄耀糖：游作為臟碳源櫻和能兩源（崇易產(chǎn)健生乳息酸）激素州：胰梳島素造、生較長(zhǎng)激質(zhì)素、燈氫化捎可的咱松等旅，可親由血飲清提吹供生長(zhǎng)凡因子勻：如己表皮及生長(zhǎng)友因子肢、神瘦經(jīng)生祖長(zhǎng)因掠子、先成纖忌維細(xì)值胞生池長(zhǎng)因烤子等馳，一榴般來聯(lián)源于夢(mèng)血清培養(yǎng)鋼基配設(shè)制配制很母液稅，使庫(kù)用前窗過濾栗除菌之、稀攤釋；Gl睬n單獨(dú)疼配制涼，冷需凍保衣存動(dòng)物咬細(xì)胞碑培養(yǎng)逃的工版藝條食件及忠其控崗制溫度哺乳片動(dòng)物販細(xì)胞室培養(yǎng)倘一般聾控制毀在36風(fēng).5吸±0助.2上5oC溫度傳也影夸響CO2溶解僚度，弓從而尖影響屋培養(yǎng)脅液pH值滲透張壓保持編細(xì)胞百內(nèi)外捐等滲雀狀態(tài)另，一嗚般70念0～85備0渣kP斧a溶解潑氧供氧儉不足潛：細(xì)喘胞生假長(zhǎng)受講抑制過量嬌供氧由：容露易產(chǎn)差生較呼多氧延自由躲基，心殺傷犧細(xì)胞用混仙合氣娘代替命空氣熱（空顏氣、O2、N2、CO2）動(dòng)物助細(xì)胞好培養(yǎng)霞的工熱藝條信件及持其控桿制pH值與CO2濃度動(dòng)物崇細(xì)胞未培養(yǎng)雜液pH在7.職0～7.俘6之間襖，以pH陰7臟.4為最蟲佳最常沖用的嬸緩沖鋪體系屆為CO2/境HC洽O3-動(dòng)物統(tǒng)細(xì)胞芳培養(yǎng)澇時(shí)缺棚少CO2，培復(fù)養(yǎng)液園中的HC兇O3-會(huì)被庭耗盡詞；CO2保持榴了HC負(fù)O3-的濃鼻度，公以提頌供穩(wěn)芝定的秤緩沖竄環(huán)境通常CO2濃度尺維持柴在2～10咐%之間指示怕劑：虜酚紅動(dòng)物倘細(xì)胞移培養(yǎng)犁的工內(nèi)藝條巖件及勇其控叼制pH值——娃H合EP字ES緩沖民體系HE蔥PE恒S：4-羥乙周基哌者嗪乙粘磺酸4-股(2浙-h環(huán)yd廚ro榨xy周et永hy緣瑞l)泊-1襯-p測(cè)ip扭er灑az勺ine-1曬-e厭th這an覽es莖ul桑fo景ni攤c贊ac仆idHE鵝PE暢S悔is稈a者z他wi撓tt某er梯io啦ni搭c光or葉ga烏ni制c緞ch修em起ic振al楊b梯uf傍fe努ri坡ng通a皆ge略nt帆.狡HE睡PE鹿S測(cè)is肢w貴id舟el掀y糞us魚ed酸i敵n拼ce梳ll約c資ul政tu克re插,愧la筍rg遭el務(wù)y不be逝ca產(chǎn)us掀e翼it丹i莖s萍be摸tt受er究a精t禽ma慰in求ta屠in恩in稠g掩ph習(xí)ys必io遞lo踏gi逼ca干l筆pH讀d籌es挖pi檢te雷c洞ha原ng擱es唱i蹤蝶n弄ca悲rb色on戀d侮io檢xi功de克c竹on隱ce舍nt誼ra進(jìn)ti盼on企(霉pr腐od源uc翼ed的b倚y飾ce推ll依ul肺ar按r男es伍pi饒ra隱ti歐on丹)傭wh言en孩c毯om唱pa倉(cāng)re姿d澤to桐b脫ic皺ar呈bo兩na蹲te驗(yàn)b器uf逆fe聚rs監(jiān),菜wh棋ic林h事ar等e訊al跌so吩c勾om巷mo縫nl笨y夜us學(xué)ed茂i泥n疑ce酸ll典c圍ul毀tu所re莫.紫HE躲PE隆S括is貞l忽ik趁e角wa胸te黨r華in消t妥ha穩(wěn)t辣it族s輛di璃ss景oc臨ia稼ti陪on廣d殲ec猴re塞as橋es淡a憶s創(chuàng)th誼e唯te驢mp買er室at繭ur憶e扇de悔cr蒜ea判se劉s.冷T幼hi求s緒ma幻玉ke哪s壤HE闖PE潤(rùn)S林a仗mo墻re傾e刑ff跳ec親ti債ve兩b鏈uf開fe搶ri要ng管a草ge棗nt巧f腫or峽m堆a(bǔ)i見nt帳ai演ni汗ng椒e夜nz新ym與e巧st窗ru立ct懼ur睛e餃an槍d臭fu券nc桃ti刷on都a派t欠lo弦w文te伴mp靠er傍at字ur植es肅.相關(guān)泰問題——為什方么培連養(yǎng)的鉗細(xì)胞慚要及器時(shí)傳趣代傳代福培養(yǎng)榨：將仍原代珠培養(yǎng)捕的細(xì)橋胞分奧離、時(shí)稀釋創(chuàng)并接雖種到勒新培妨養(yǎng)基趣上繼灶續(xù)擴(kuò)換大培猾養(yǎng)的毒階段體外資培養(yǎng)采的細(xì)毫胞大越多具盤有生捷長(zhǎng)接琴觸抑懼制的壞特性糾，也番就是從說當(dāng)情一個(gè)映細(xì)胞牧被其超他細(xì)傳胞包污圍的哭時(shí)候姓，它逢就會(huì)煌停止鍵生長(zhǎng)當(dāng)細(xì)剪胞鋪侮滿培慢養(yǎng)器自皿的樣表面姐時(shí)，待正常俗的細(xì)壞胞停葬止生爐長(zhǎng)，碗但是陵轉(zhuǎn)化懇（即軋發(fā)生懸遺傳獨(dú)物質(zhì)獅突變甘）的征、對(duì)謙接觸炮抑制那不敏閃感的雞細(xì)胞著會(huì)繼泡續(xù)生未長(zhǎng)如果兵不及或時(shí)傳兇代，犧這些序轉(zhuǎn)化株的細(xì)友胞就肅會(huì)逐鎮(zhèn)步取尊代正綁常的委細(xì)胞忘，導(dǎo)策致正跟常細(xì)己胞的李退化?產(chǎn)酶恨實(shí)例——人黑盒色素辣瘤細(xì)展胞培霞養(yǎng)生棵產(chǎn)tP大ATi凡ss浸ue喂p勾la脾sm紗in世og偵en銀a永ct危iv牛at盯or安(ab本br.產(chǎn)tP攔A)訓(xùn)i雹s道a駕pr已ot柿ei榜n米in弄vo突lv冊(cè)ed尿i鳥n慘th稱e斤br欲ea葡kd姥ow際n黑of柴b體lo婆od把c雜lo澤ts筐.告It暢i乖s傷a營(yíng)se究ri肉ne旬p穩(wěn)ro煎te車as訴e絮(E貧C璃3.駁4.擇21蝕.6劈燕8)廳f功ou艇nd拐o享n掛en路do疫th狡el積ia叼l紀(jì)ce謝ll乏s,寧t膊he緞c爭(zhēng)el端ls圓t銷ha晃t擋li矛ne痛t惜he估b故lo錄od掠v播es建se患ls她.腫As液a駛n午en餐zy得me筋,煮it唐c結(jié)at窗al萄yz州es吩t淹he胡c勸on灰ve狗rs嫌io血n陜of艙p懸la牲sm閱in產(chǎn)og孟en鳥t腔o諸pl請(qǐng)as復(fù)mi閱n,宵t典he儉m等aj媽or址e雁nz岡ym靠e鑼re島sp死on泰si川bl蛇e顏fo艦r稅cl匹ot喂b見re黎ak執(zhí)do悉wn神.苦Be竊ca備us陷e答it廉w交or防ks覺o逗n朋th瞞e困cl腐ot劉ti動(dòng)ng再s耍ys獸te駐m,果t甲PA危i移s厭us她ed緣瑞i漿n萄cl鉛in聾ic麗al擱m妥ed齡ic誼in凈e呢to蟲t螺re樂at漆o藝nl建y抵em廣bo征li遣c騙or堆t群hr倆om彼bo證ti農(nóng)c吩st供ro難ke穿.笑Us爪e客is劍c疑on催tr則ai閉nd凝ic示a