性能驗證醫(yī)學(xué)宣教課件

為何要做性能驗證何時做性能驗證性能驗證的內(nèi)容性能驗證的方案

主要內(nèi)容1為何要做性能驗證——復(fù)現(xiàn)驗證性能指標(biāo)是否符合廠家申明的性能驗證性能指標(biāo)是否適用預(yù)期用途，即能否達(dá)到質(zhì)量要求2為何要做性能驗證——符合、保證3何時要做性能驗證使用新的檢測試劑和設(shè)備前。設(shè)備的重大維修和校準(zhǔn)后，比如檢測部件。設(shè)備搬遷到新的場所后或者長距離移動。試劑配方出現(xiàn)調(diào)整后，比如試劑升級換代。性能驗證不能只做一次。45.3.1設(shè)備條款號內(nèi)容5.3.1.2實驗室應(yīng)在設(shè)備安裝和使用前驗證其能夠達(dá)到必要的性能，并符合相關(guān)檢驗的要求5.3.1.5當(dāng)發(fā)現(xiàn)設(shè)備故障時，應(yīng)停止使用并清晰標(biāo)識。實驗室應(yīng)確保故障設(shè)備已經(jīng)修復(fù)并驗證，表明其滿足規(guī)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)后方可使用。實驗室應(yīng)檢查設(shè)備故障對之前檢驗的影響，并采取應(yīng)急措施或糾正措施。當(dāng)設(shè)備脫離實驗室的直接控制時，實驗室應(yīng)保證在其返回實驗室使用之前驗證其性能。設(shè)備故障修復(fù)后，應(yīng)首先分析故障原因，如果設(shè)備故障影響了分析性能，應(yīng)通過以下合適的方式進(jìn)行相關(guān)的檢測、驗證：（a）可校準(zhǔn)的項目實施校準(zhǔn)驗證，必要時，實施校準(zhǔn)；（b）質(zhì)控物檢測結(jié)果在允許范圍內(nèi)；（c）與其他儀器的檢測結(jié)果比較；（d）使用留樣再測結(jié)果進(jìn)行判斷。5.3.1.7應(yīng)保存影響檢驗性能的每臺設(shè)備的記錄，包括但不限于以下內(nèi)容：j)確認(rèn)設(shè)備可持續(xù)使用的性能記錄；55.3.2試劑和耗材條款號內(nèi)容5.3.2.3試劑和耗材-驗收試驗每當(dāng)試劑盒的試劑組分或試驗過程改變，或使用新批號或新貨運號的試劑盒之前，應(yīng)進(jìn)行性能驗證。影響檢驗質(zhì)量的耗材應(yīng)在使用前進(jìn)行性能驗證。5.3.2.7試劑和耗材-記錄應(yīng)保存影響檢驗性能的每一試劑和耗材的記錄，包括但不限于以下內(nèi)容：h)證實試劑或耗材持續(xù)可使用的性能記錄。微生物專業(yè)要求：5.3.2.3試劑和耗材驗收試驗應(yīng)符合如下要求：（a）新批號及每一貨次試劑和耗材使用前，應(yīng)通過直接分析參考物質(zhì)、新舊批號平行實驗或常規(guī)質(zhì)控等方法進(jìn)行驗證，并記錄；（b）新批號及每一貨次試劑和耗材，如吲哚試劑，桿菌肽，奧普托辛，X、V、XV因子紙片等應(yīng)使用陰性和陽性質(zhì)控物進(jìn)行驗證；（c）新批號及每一貨次的藥敏試驗紙片使用前應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行驗證；（d）新批號及每一貨次的染色劑（革蘭染色、特殊染色和熒光染色）應(yīng)用已知陽性和陰性（適用時）的質(zhì)控菌株進(jìn)行驗證；（e）新批號及每一貨次直接抗原檢測試劑（無論是否含內(nèi)質(zhì)控）應(yīng)用陰性和陽性外質(zhì)控進(jìn)行驗證；（f）培養(yǎng)基外觀良好（平滑、水分適宜、無污染、適當(dāng)?shù)念伾秃穸龋嚬芘囵B(yǎng)基濕度適宜），新批號及每一貨次的商品或自配培養(yǎng)基應(yīng)檢測相應(yīng)的性能，包括無菌試驗、生長試驗或與舊批號平行試驗、生長抑制試驗（適用時）、生化反應(yīng)（適用時）等，應(yīng)以質(zhì)控菌株進(jìn)行驗證；（g）一次性定量接種環(huán)每批次應(yīng)抽樣驗證。65.5.1檢驗程序的選擇、驗證和確認(rèn)條款號內(nèi)容5.5.1.1總則實驗室應(yīng)選擇預(yù)期用途經(jīng)過確認(rèn)的檢驗程序，應(yīng)記錄檢驗過程中從事操作活動的人員身份。每一檢驗程序的規(guī)定要求（性能特征）應(yīng)與該檢驗的預(yù)期用途相關(guān)。5.5.1.2檢驗程序驗證在常規(guī)應(yīng)用前，應(yīng)由實驗室對未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗程序進(jìn)行獨立驗證。實驗室應(yīng)從制造商或方法開發(fā)者獲得相關(guān)信息，以確定檢驗程序的性能特征。實驗室進(jìn)行的獨立驗證，應(yīng)通過獲取客觀證據(jù)（以性能特征形式）證實檢驗程序的性能與其聲明相符。驗證過程證實的檢驗程序的性能指標(biāo)，應(yīng)與檢驗結(jié)果的預(yù)期用途相關(guān)。實驗室應(yīng)將驗證程序文件化，并記錄驗證結(jié)果。驗證結(jié)果應(yīng)由適當(dāng)?shù)氖跈?quán)人員審核并記錄審核過程。75.5.1檢驗程序的選擇、驗證和確認(rèn)條款號內(nèi)容5.5.1.3檢驗程序的確認(rèn)實驗室應(yīng)對以下來源的檢驗程序進(jìn)行確認(rèn)：a)非標(biāo)準(zhǔn)方法；b)實驗室設(shè)計或制定的方法；c)超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法；d)修改過的確認(rèn)方法。方法確認(rèn)應(yīng)盡可能全面，并通過客觀證據(jù)（以性能特征形式）證實滿足檢驗預(yù)期用途的特定要求。注：檢驗程序的性能特征宜包括：測量正確度、測量準(zhǔn)確度、測量精密度（含測量重復(fù)性和測量中間精密度）、測量不確定度、分析特異性（含干擾物）、分析靈敏度、檢出限和定量限、測量區(qū)間、診斷特異性和診斷靈敏度。

實驗室應(yīng)將確認(rèn)程序文件化，并記錄確認(rèn)結(jié)果。確認(rèn)結(jié)果應(yīng)由授權(quán)人員審核并記錄審核過程。當(dāng)對確認(rèn)過的檢驗程序進(jìn)行變更時，應(yīng)將改變所引起的影響文件化，適當(dāng)時，應(yīng)重新進(jìn)行確認(rèn)。8應(yīng)用準(zhǔn)則對方法學(xué)性能的通用要求(1)檢驗程序需文件化；實驗室負(fù)責(zé)人或指定的人員應(yīng)在開始即對程序評審并定期評審。評審?fù)ǔＣ磕暌淮?。評審應(yīng)文件化。性能驗證：定量試驗：正確度、精密度、可報告范圍、（攜帶污染率）定性試驗：陰性符合率、陽性符合率、重復(fù)性、最低檢出限等半定量試驗：重復(fù)性生物參考區(qū)間驗證及評審：20份健康人標(biāo)本，生物參考區(qū)間的評審還應(yīng)該有臨床醫(yī)生的參與。評審內(nèi)容：生物參考區(qū)間的來源、針對的人群、生物參考區(qū)間驗證結(jié)果、與臨床診斷的符合性等。生物參考區(qū)間建立：120份健康人標(biāo)本應(yīng)用準(zhǔn)則對方法學(xué)性能的通用要求(2)通過與其他實驗室（如已獲認(rèn)可的實驗室、使用相同檢測方法的實驗室、使用配套系統(tǒng)的實驗室）比對的方式確定檢驗結(jié)果的可接受性時，應(yīng)滿足如下要求：（a）規(guī)定比對實驗室的選擇原則；（b）樣品數(shù)量：至少5份，包括正常和異常水平；（c）頻率：至少每年2次；（d）判定標(biāo)準(zhǔn)：應(yīng)有≥80%的結(jié)果符合要求。實驗室內(nèi)部結(jié)果比對應(yīng)符合如下要求：實驗室用兩套及以上檢測系統(tǒng)檢測同一項目時，應(yīng)有比對數(shù)據(jù)表明其檢測結(jié)果的一致性，實驗方案可參考WS/T407-2012《醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)定量檢驗結(jié)果的可比性驗證指南》，或比對頻次每年至少1次，樣本數(shù)量不少于20，濃度水平應(yīng)覆蓋測量范圍。應(yīng)用準(zhǔn)則對方法學(xué)性能的專用要求血細(xì)胞分析和尿液有形成分分析：建立復(fù)檢規(guī)則，并驗證，假陰性≦5%；(5.5.1.3)出凝血檢驗項目，更換新批號試劑時，如試劑敏感度差異明顯，應(yīng)重新驗證生物參考區(qū)間；試劑敏感度接近時，可使用5份健康人標(biāo)本進(jìn)行結(jié)果比對，以確認(rèn)參考區(qū)間的適用性。(5.5.2)

免疫定性試驗：應(yīng)按照制造商的說明或定義定期評審臨界值或閾值(CUTOFF值)。(5.5.5)如制造商無相關(guān)的說明或定義，可以選擇以下方法之一驗證：陰性來源：選擇沒有疾病的健康人和非討論疾病患者的病人的新鮮血清共120份，分3-5批3-5天進(jìn)行檢測，計算X、s，CUTOFF驗證值為：X+3s；陽性來源：選擇弱陽性（CUTOFF值±20%）新鮮血清或質(zhì)控血清共120份，分3-5批3-5天進(jìn)行檢測，計算X、s，CUTOFF值驗證值為:X-3s。應(yīng)定期（至少每6個月1次，每次至少5份臨床樣品）進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢驗人員的結(jié)果比對、考核并記錄；應(yīng)定期進(jìn)行儀器法間白細(xì)胞分類計數(shù)正常標(biāo)本的結(jié)果比對。設(shè)備故障后的特別要求設(shè)備發(fā)生故障后，應(yīng)首先分析故障原因，如果設(shè)備故障可能影響了方法學(xué)性能。故障修復(fù)后，可通過以下合適的方式進(jìn)行相關(guān)的檢測、驗證：（a）可校準(zhǔn)的項目實施校準(zhǔn)驗證，必要時，實施校準(zhǔn)；（b）質(zhì)控物檢測結(jié)果在允許范圍內(nèi)；（c）與其他儀器或方法比對；（d）以前檢驗過的樣品再檢驗。如果設(shè)備故障影響了方法學(xué)性能，在設(shè)備修復(fù)、校準(zhǔn)后，實驗室可通過檢測質(zhì)控菌株或已知結(jié)果的樣品的方式進(jìn)行性能驗證。性能驗證的基本要求操作者應(yīng)熟悉儀器；操作者應(yīng)熟悉評價方案；在評價實驗過程中，設(shè)備應(yīng)經(jīng)嚴(yán)格校準(zhǔn)或檢定，所評價方法或檢測系統(tǒng)必須有室內(nèi)質(zhì)量控制；所使用的標(biāo)本應(yīng)與臨床標(biāo)本有相似的基質(zhì)，最好采用病人新鮮標(biāo)本，避免基質(zhì)效應(yīng)；所使用的標(biāo)本應(yīng)盡可能避免干擾物質(zhì)（溶血、黃疸等）的存在；所選擇不同濃度的標(biāo)本應(yīng)盡量覆蓋廠商聲明的線性范圍（線性、方法學(xué)比對時）并均勻分布；當(dāng)驗證廠商聲明的性能時，選擇控制物的濃度水平應(yīng)接近醫(yī)學(xué)決定值及接近于廠商聲明試驗所具有的濃度。13現(xiàn)場評審內(nèi)容查閱體系文件（程序文件、SOP)：是否有對檢驗程序文件化；是否有方法學(xué)性能驗證的實施步驟；有沒有復(fù)檢規(guī)則、有沒有生物參考區(qū)間驗證或評審的規(guī)定；有沒有定期比對相關(guān)的規(guī)定；文件的描述是否與相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或法規(guī)相吻合等查閱性能驗證報告：是否規(guī)范化；是否制定了合適的判斷標(biāo)準(zhǔn)等；是否簽字保存查血涂片、尿涂片復(fù)檢情況、是否按照復(fù)檢規(guī)則進(jìn)行復(fù)檢現(xiàn)場提問/演示現(xiàn)場試驗：留樣再測、儀器比對、人員比對、圖譜考核等CLSI-EP文件EP5-A2：EvaluationofPrecisionPerformanceofQuantitativeMeasurementMethods;ApprovedGuideline-SecondEdition.EP6-A：Evaluationoflinearityofquantitativeanalyticalmethods:AStatisticalApproach;ApprovedGuideline.EP7-A：InterferenceTestinginClinicalChemistry;ApprovedGuideline.EP9-A2：Methodcomparisonandbiasestimationusingpatientsamples;ApprovedGuideline-SecondEdition.EP10-A:Preliminaryevaluationofquantitativeclinicallaboratorymethods.EP14-A2:Evaluationofmatrixeffects;ApprovedGuideline-SecondEdition.EP15-A:Userdemonstrationofperformanceforprecisionandaccuracy;ApprovedGuideline.EP17-A:ProtocolsfordeterminationofLimitsofDetectionandLimitsofQuantitation;ApprovedGuideline.C28-A2:Howtodefineanddeterminereferenceintervalsintheclinicallaboratory.臨床檢驗行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)CNAS-CL07：2011《測量不確定度的要求》CNAS-GL03：2006《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》CNAS-GL06：2006《化學(xué)分析中不確定度的評估指南》WS/T228-2002《定量臨床檢驗方法的初步評價》WS/T246-2005《白細(xì)胞分類計數(shù)參考方法》WS/T356-2011《基質(zhì)效應(yīng)與互通性評估指南》WS/T402-2012《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》WS/T403-2012《臨床生物化學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量指標(biāo)》WS/T407-2012《醫(yī)療機(jī)構(gòu)內(nèi)定量檢驗結(jié)果的可比性驗證指南》WS/T408-2012《臨床化學(xué)設(shè)備線性評價指南》WS/T409-2013《臨床檢驗方法總分析誤差的確定》WS/T415-2013《無室間質(zhì)量評價時實驗室檢測評估方法》WS/T420-2013《臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證》WS/T492-2016《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》性能驗證的內(nèi)容17定量項目驗證內(nèi)容精密度（Precision）驗證（包括批內(nèi)和總精密度）正確度（Trueness）驗證分析測量范圍（AMR）驗證臨床可報告范圍（CRR）驗證自動稀釋（Auto-dilution）驗證參考區(qū)間（ReferenceInterval）驗證空白限（LOB）驗證檢出限（LOD）驗證定量檢測限（LOQ）驗證污染攜帶（Carryover）驗證方法學(xué)比對（MethodComparison）分析干擾（Interference）性能評價測量不確定度（MeasurementUncertainty）評定18精密度精密度（precision）的完整詞語為測量精密度（precisionofmeasurement），定義為：在規(guī)定條件下，相互獨立的檢測結(jié)果間的一致程度。[G/T6379]。精密度通常用與精密度相反的檢測不精密度統(tǒng)計量表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（s）和變異系數(shù)（CV），精密度越低，s或者CV越大。19精密度驗證（CLSIEP15-A2）驗證材料及要求：質(zhì)控品、已經(jīng)檢測過的病人標(biāo)本或具有血清基質(zhì)的定值材料。每個項目均需選擇低值和高值兩個濃度水平（至少2個水平）的驗證材料進(jìn)行驗證。所用樣本一定要穩(wěn)定；其基體組成應(yīng)盡可能相似于實際檢測的病人標(biāo)本；樣品中的分析物含量應(yīng)在該項目的醫(yī)學(xué)決定水平附近。驗證方案：對驗證材料每天分析1批次，2個濃度，每個濃度重復(fù)測定3次，連續(xù)5天。離群值剔除：單次測量數(shù)據(jù)超出總均值±4SD。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析與可接受標(biāo)準(zhǔn)：WithinrunSD<廠家聲明or1/4TEaTotalrunSD<廠家聲明or1/3TEa20數(shù)據(jù)處理正確度測量正確度measurementtrueness無窮多次重復(fù)測量所得量值的平均值與一個參考量值間的一致程度。注1：測量正確度與測量系統(tǒng)誤差有關(guān)，與隨機(jī)測量誤差無關(guān)。注2：“測量正確度”不能用“測量準(zhǔn)確度”表示，反之亦然。注3：正確度通常用偏倚(bias)表示。注意與偏差的區(qū)別！正確度驗證驗證材料及要求：定值參考物質(zhì)A新鮮冰凍人血清或其他一些未摻雜成分的人體物質(zhì)B從能力對比試驗中獲得的參考物C廠家提供的正確度確認(rèn)物或質(zhì)控物D實驗室室間質(zhì)評物E由第三方提供的已用一些不同方法定值的物質(zhì)驗證方案：選擇適合該方法最易獲得的PT/EQA材料。最少要求測定2個水平，但更多水平適合于充分評價整個測量范圍。選擇的水平應(yīng)能代表該方法的最低和最高測量范圍。使用前充分混勻，重復(fù)測定2次。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析與可接受標(biāo)準(zhǔn)：數(shù)據(jù)評估，用二之一的總誤差設(shè)定可接受范圍上限和下限范圍。23正確度的判斷242023/6/527儀器比對（CA125例子）實驗結(jié)果比對結(jié)果953.596235.838.3243.0222.0420.2394.6125.8120.721.422.267.464.133.133.590.290.0516.3507.7405.4379.639.439.254.252.6256.5247.7132.4129.3134.4131.2172.4164.045.447.6146.5145.890.788.5根據(jù)回歸方程計算醫(yī)學(xué)決定水平處35U/ml的偏移為-11.08%（1/2TEa為12.5%），比對通過。28分析測量范圍分析測量范圍（analyticalmeasurementrange，AMR）又稱線性范圍：使實驗系統(tǒng)的最終分析結(jié)果為可接受的線性的濃度范圍，此時非線性誤差應(yīng)低于允許誤差。（WS/T420-2013.臨床實驗室對商品定量試劑盒分析性能的驗證）AMR是對分析系統(tǒng)直接檢測分析物濃度或活性范圍能否覆蓋生產(chǎn)商聲明的確認(rèn)。

29LH0.8L+0.2H1234560.6L+0.4H0.4L+0.6H0.2L+0.8H分析測量范圍實驗方法：收集廠商聲明線性范圍高限（H）和低限（L）附近的標(biāo)本，將H和L按照以下比例稀釋：每份標(biāo)本重復(fù)檢測3次，計算均值和每個理論濃度偏差。將得到的均值和預(yù)測值作直線回歸統(tǒng)計，得到直線回歸方程y=bx+a，計算相關(guān)系數(shù)r。判斷標(biāo)準(zhǔn)：實測均值與預(yù)測值偏差小于10%，相關(guān)系數(shù)r≥0.95，b值在0.97-1.03范圍內(nèi)，認(rèn)為廠家聲明線性范圍得到驗證；否則，線性范圍不被驗證。使用EXCELL進(jìn)行數(shù)據(jù)處理不通過，需查找原因，重新驗證。分析測量范圍——EP6A，WS/T408-2012本實驗選取待驗證線性范圍高限附近和低限附近的樣本進(jìn)行混合，至少配制5個濃度。如果高濃度混合血清與低濃度混合血清的被測量濃度未知，可將每種混合血清編碼，編碼可代表每個血清相對濃度，具體見下圖（以5個濃度為例）。

L1L+3H2L+2H3L+1HH12345所有濃度樣品應(yīng)在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機(jī)測定，每個濃度標(biāo)本重復(fù)檢測3次，所有標(biāo)本檢測應(yīng)在2小時內(nèi)完成，計算每個濃度均值。離群值剔除：對于重復(fù)測定的數(shù)據(jù)組，采用格拉布斯（Grubbs）法進(jìn)行離群值檢驗。以水平1為例進(jìn)行離群值檢驗將水平1從小到大排序，計算均值和標(biāo)準(zhǔn)差計算t1和t2

根據(jù)顯著水平α和重復(fù)測定次數(shù)查表，如果t值大于臨界值則相應(yīng)可疑值為離群值三次回歸的標(biāo)準(zhǔn)誤最小，所以三次回歸曲線最適合本數(shù)據(jù)，對非線性系數(shù)b2、b3與0進(jìn)行t檢驗，P＞0.05，驗證的0.38-21.19范圍是線性的。y=b3x3+b2x2+b1x+a進(jìn)行多元回歸分析（SPSS軟件）如果二次或者三次多項式b2、b3系數(shù)與0有統(tǒng)計學(xué)意義，即P<0.05，需驗證二次或者三次多項式與一次多項式預(yù)測值偏離，即系數(shù)非線性判斷。除去最低點，其余濃度非線性偏移可接受。AMR&CRR分析測量范圍（AMR）：用沒有作任何稀釋、濃縮、或其他不屬于常規(guī)檢查步驟部分的預(yù)處理而直接測量樣本的方法而得到的測試系統(tǒng)產(chǎn)生的結(jié)果范圍，該結(jié)果位于最低的定量界限和最高線性界限之間。也叫做“直接可報告范圍”或“線性范圍”或“動態(tài)范圍”。臨床可報告范圍：某種檢測系統(tǒng)產(chǎn)生的結(jié)果范圍在最低的定量界限和可計量結(jié)果的最高界限范圍之間，包括樣本的稀釋或濃縮。臨床可報告范圍聯(lián)同相關(guān)的稀釋方案（稀釋標(biāo)準(zhǔn)，稀釋液，因子），必須在定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）中指定。37臨床可報告范圍驗證（CLSIEP15-A2/EP17-A）選擇日常檢測標(biāo)本中接近分析測量范圍上限（低于上限）的標(biāo)本，可使用廠商推薦的稀釋液，進(jìn)行系列稀釋或者濃縮。每個稀釋濃度至少檢測兩次，計算均值。比較檢測值和理論值，以R表示檢測值與理論值的比值。判斷標(biāo)準(zhǔn)：90%≤R≤110%為可接受限，超過可接收限的上一稀釋或濃縮倍數(shù)為最大稀釋或濃縮倍數(shù)。實測值/預(yù)期值×100%即為稀釋回收率，最大稀釋度得到驗證。最大稀釋度乘以AMR上限即為CRR的上限。38示例39Tips生理鹽水或水稀釋有可能因基質(zhì)差異影響到方法而使試驗不準(zhǔn)40參考區(qū)間參考區(qū)間一般定義為中間95%區(qū)間，特定情況下，非對稱定位的參考區(qū)間可能更適宜（腫瘤標(biāo)志物）。參考區(qū)間可能會取決于原始樣品種類和所用檢驗程序。41參考區(qū)間驗證（CLSIC28-A3c）驗證材料及要求：接收實驗室在檢驗服務(wù)的總體中抽取20個參考個體，比較小樣本參考值和原始參考值之間的可比性。接收實驗室的操作必須和原始參考值研究的分析前和分析中各因素的控制保持一致，20個參考個體應(yīng)具有接收實驗室健康人群的代表性，并滿足排除和分組標(biāo)準(zhǔn)。驗證方案：檢測按要求收集的20份參考個體樣本。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析與可接受標(biāo)準(zhǔn)：評估數(shù)據(jù)，超出待驗證生物參考區(qū)間范圍的個體數(shù)量小于等于1個，驗證通過4243定量檢出限驗證（CLSIEP17-A）驗證材料及要求：用廠家推薦的稀釋液作為空白樣本，并用此稀釋液將已知濃度的低濃度樣本（如低濃度定標(biāo)液）稀釋成近于廠家說明書檢測低限的低濃度系列（5-10個濃度），作為分析靈敏度的實驗樣本。將每份稀釋好的樣本分成20-50份，冰凍保存。驗證方案：系列稀釋樣本每天檢測1次，推薦至少檢測20天。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析與可接受標(biāo)準(zhǔn)：評估數(shù)據(jù)，計算每個濃度樣本的CV值，CV值<TargetCV（通常是20%）的最低濃度即為LOQ。（一般作為臨床可報告范圍的低限）44攜帶交叉污染驗證材料及要求：對于一些較小樣本攜帶即可造成污染的項目（共用樣本針），實驗室需要對樣本的污染攜帶率進(jìn)行評價。驗證方案：取高濃度樣本（H）和低濃度樣本（L）各一份，將高濃度樣本分成10杯，低濃度樣本分成11杯，21份樣本按順序：L1L2L3H1H2L4H3H4L5

L6L7L8H5H6L9H7H8L10H9H10L11連續(xù)測定。數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析與可接受標(biāo)準(zhǔn)：攜帶污染=High-Low的均值–Low-Low的均值，攜帶污染<3倍Low-Low的SD則驗證通過。測量不確定度的評估1、什么是測量不確定度？例：ALT的結(jié)果為120±12U/L（k=2，k為包含因子）或ALT的結(jié)果為120U/L±10%（k=2）±符號后面的數(shù)量就是測量不確定度12U/L是絕對值，10%(U/L)是相對值測量不確定度又簡稱為不確定度，符號u不確定度定義:根據(jù)所用到的信息，表征賦予被測量量值分散性的非負(fù)參數(shù)。

含包含因子與不含包含因子的不確定度有什么區(qū)別？含包含因子的不確定度稱為擴(kuò)展不確定度，以U表示，在報告測量結(jié)果時以U形式報告，同時說明k。如U=12U/L(k=2)不含包含因子的不確定度稱為合成不確定度，以uc表示。uc×k=U,如uc

=6U/L測量不確定度的評估過程主要就是評定uc可以k=2，也可以k=3常規(guī)檢驗中一般k=2，代表測量結(jié)果95%的可信限常規(guī)檢驗中不確定度分量不確定度評估方法：“自下而上”與“自上而下”不精密度分量與偏移（偏倚）分量不精密度（imprecision）可用標(biāo)準(zhǔn)差（s）或變異系數(shù)（CV）表示偏移（bias）的不確定度分量通過特定方法求得假設(shè)偏移的不確定度為0精密度來源AACB推薦6個月可用“標(biāo)準(zhǔn)差（sRw）”或“變異系數(shù)（CVRw）”表示不精密度的量。根據(jù)定義，可直接用標(biāo)準(zhǔn)差表示不精密度的不確定度分量uimp=sRw

或%uimp=CVRw（1）6個月內(nèi)使用同一質(zhì)控品直接計算sRw或CVRw（2）6個月內(nèi)使用了二個批號質(zhì)控品計算CVRw平方和的根偏移的來源（1）計算偏移（正確度驗證）與參考物質(zhì)（CRM）比較與參考測量程序（參考方法，RMP）比較與室間質(zhì)量評價（EQA/PT）的靶值(target)比較（2）計算參考物質(zhì)（或參考方法）的不確定度（3）計算參考物質(zhì)（或參考方法）（在常規(guī)實驗室）的不精密度（4）計算偏移的不確定度定性項目及其他驗證內(nèi)容：Cutoff值檢測限分析特異性符合率診斷敏感性診斷特異性人員比對室間比對552017最新檢驗行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T494-2017臨床定性免疫檢驗重要常規(guī)項目分析質(zhì)量要求WS/T505-2017定性測定性能評價指南應(yīng)按照制造商的說明或定義定期評審cut-off值。如制造商無相關(guān)的說明或定義，可以選擇以下方法之一驗證：

1、陰性來源：選擇60份健康人新鮮血清和60份目標(biāo)標(biāo)志物陰性而有其他免疫標(biāo)志物陽性的患者新鮮血清，共120份，分3-5批3-5天進(jìn)行檢測，計算X、s，cut-off驗證值為：X+3s；2、陽性來源：選擇弱陽性（cut-off值±20%，±應(yīng)均勻分布）新鮮血清或質(zhì)控血清共120份，分3-5批3-5天進(jìn)行檢測，計算X、s，cut-off值驗證值為：X-3s