血紅蛋白的提取和分離

血紅蛋白的提取和分離第一頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二教學(xué)目標(biāo)知識(shí)與能力：１、通過(guò)嘗試對(duì)血液中血紅蛋白的提取和分離；２、使學(xué)生能夠體驗(yàn)從復(fù)雜體系中提取生物大分子的基本過(guò)程和方法，３、了解色譜法、電泳法等分離生物大分子的基本原理，為今后學(xué)習(xí)運(yùn)用這些技術(shù)打下基礎(chǔ)。重點(diǎn)與難點(diǎn)教學(xué)重點(diǎn)：凝膠色譜法的原理和方法。教學(xué)難點(diǎn)：樣品的預(yù)處理；色譜柱填料的處理和色譜柱的裝填。第二頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二2003年4月14日宣布人類(lèi)基因組序列圖完成這標(biāo)志著進(jìn)入了后基因組和蛋白質(zhì)組時(shí)代人類(lèi)基因組：指DNA分子所攜帶的全部遺傳信息蛋白質(zhì)組：生物個(gè)體表達(dá)的蛋白質(zhì)分子的總和。主要是對(duì)蛋白質(zhì)功能的研究第三頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二課題3血紅蛋白的提取和分離第四頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二(一）蛋白質(zhì)占細(xì)胞干重的50％以上，細(xì)胞中含量最多的有機(jī)物2、組成元素C、H、O、N一、基礎(chǔ)知識(shí)1、含量3、相對(duì)分子質(zhì)量高分子化合物第五頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二4、基本組成單位氨基酸5、氨基酸通式RHCCOOHNH26、氨基酸連接方式脫水縮合第六頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二8、分子結(jié)構(gòu)7、肽鍵CONH氨基酸肽鏈蛋白質(zhì)脫水縮合盤(pán)曲折疊（一條或者多條）第七頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二10、生理功能細(xì)胞和生物體的結(jié)構(gòu)物質(zhì)，是人體發(fā)育和組織更新的主要原料，具有運(yùn)輸、調(diào)節(jié)、免疫、催化等作用，是一切生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者氨基酸的種類(lèi)不同；數(shù)目成百上千；排列順序變化多端；多肽鏈的空間結(jié)構(gòu)千差萬(wàn)別9、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的多樣性第八頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二①氨基酸間脫水縮合時(shí)，原來(lái)的氨基和羧基就不存在了，形成的化合物即多肽的一端只有一個(gè)氨基，另一端只有一個(gè)羧基（不計(jì)R基上的氨基和羧基）。所以對(duì)于一條多肽鏈說(shuō)，至少應(yīng)有的氨基和羧基都是一個(gè)②若有個(gè)n氨基酸分子縮和成m條肽鏈,則可形成n-m個(gè)肽鍵,脫去個(gè)n-m個(gè)水分子，至有氨基和羧基各m個(gè)11、相關(guān)計(jì)算第九頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二③蛋白質(zhì)可以含有一條或n條肽鏈、肽鏈通過(guò)化學(xué)鍵（如二硫鍵）互相連接，具有不同的空間結(jié)構(gòu)④關(guān)于蛋白質(zhì)相對(duì)分子量的計(jì)算：n個(gè)氨基酸形成m條肽鏈，每個(gè)氨基酸的平均相對(duì)質(zhì)量為a,那么由此形成的蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量為n·a-(n-m)·18第十頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二1、分離生物大分子的基本思路選用一定的物理或化學(xué)的方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子2、蛋白質(zhì)分離和提取的原理根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度和吸附的性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力等等，可以用來(lái)分離不同蛋白質(zhì)(二）蛋白質(zhì)的提取第十一頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二3、高溫滅菌和酒精滅菌分別利用蛋白質(zhì)的何種作用，作用結(jié)果是什么被破壞？變性、變性、空間結(jié)構(gòu)第十二頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二（三）凝膠色譜法②實(shí)例：葡聚糖、瓊脂糖3、凝膠1、別名：分配色譜法①性質(zhì)：一些微小多孔的球體，內(nèi)含許多貫穿的通道2、概念：根據(jù)被分離物質(zhì)的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，來(lái)進(jìn)行分離第十三頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二①大多數(shù)凝膠是由多糖類(lèi)化合物（如葡聚糖或瓊脂糖）構(gòu)成的多孔小球體，內(nèi)部有許多貫穿的通道4、凝膠色譜法的原理—分子篩效應(yīng)③分子量較大的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快。相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離②當(dāng)不同的蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)，分子量較小的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢第十四頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二5、具體過(guò)程蛋白質(zhì)分子量的大小4、依據(jù)的特性第十五頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第十六頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第十七頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二（四）緩沖溶液1、概念在一定的范圍內(nèi)，能對(duì)抗外來(lái)少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液PH發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液能夠抵制外界的酸或堿的對(duì)溶液的PH值的影響，維持PH基本不變2、作用第十八頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二4、緩沖溶液的組分分類(lèi)①弱酸和弱酸鹽組合H2CO3NaHCO3

CH3COOHCH3COONa3、緩沖溶液的配制通常由1－2種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同PH范圍內(nèi)使用的緩沖液第十九頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二②弱堿和弱堿鹽NH4OHNH4CL③多元弱酸的酸式鹽和其他所對(duì)應(yīng)的次級(jí)鹽NaH2PO4Na2HPO4KH2PO4K2HPO4第二十頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二思考：在血紅蛋白整個(gè)實(shí)驗(yàn)室中用的緩沖液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸緩沖液，目的是利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的PH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察(紅色)和科學(xué)研究(活性)第二十一頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二（五）電泳：1、概念帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過(guò)程2、原理②在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)①許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的PH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電第二十二頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二③電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀的不同使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離第二十三頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二3、類(lèi)型瓊脂糖凝膠電泳和聚丙稀酰胺凝膠電泳4、實(shí)例由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠十二烷基磺酸鈉（SDS）—聚丙稀酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)分子量①應(yīng)用②聚丙稀酰胺凝膠第二十四頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第二十五頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第二十六頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶靜電荷的多少以及分子的大小等因素③原理④SDS作用為了消除靜電荷對(duì)遷移率的影響可以在凝膠中加入SDS第二十七頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。由幾條肽鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體在SDS的作用下會(huì)解聚成單條肽鏈，因此測(cè)定的結(jié)果只是單條肽鏈的分子量。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有電荷量。因而掩蓋了不同種電荷間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于分子的大?、軸DS作用機(jī)理第二十八頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二討論：如何測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量？使用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時(shí)進(jìn)行電泳，根據(jù)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，用電泳遷移率和分子量的對(duì)數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，可以測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量。市場(chǎng)上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售第二十九頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二二、實(shí)驗(yàn)操作樣品處理——粗分離——純化——純度鑒定1、樣品處理（一）蛋白質(zhì)提取和分離步驟(1)血液組成（二）操作過(guò)程是否所有種類(lèi)的蛋白質(zhì)的提取和分離都是這樣的?為什么?不是。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的來(lái)源和性質(zhì)不同,分離方法差別很大。第三十頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二血液血漿水分固體物質(zhì)血漿蛋白無(wú)機(jī)鹽磷脂葡萄糖等血細(xì)胞白細(xì)胞血小板紅細(xì)胞（最多）血紅蛋白（90％）兩個(gè)a－肽鏈兩個(gè)β一肽鏈四個(gè)亞鐵紅素基團(tuán)①成分第三十一頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶一分子氧或一分子二氧化碳，血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色②組成及作用本課題可選用豬、牛、羊或其他脊椎動(dòng)物的血液來(lái)分離血紅蛋白③選材能否用雞血來(lái)代替哺乳動(dòng)物的血液？不能。雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含細(xì)胞器，含有大量的雜蛋白，不易分離純化。有DNA，可用于于進(jìn)行DNA的提取。人的紅細(xì)胞無(wú)細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，血紅蛋白含量豐富便于提取血紅蛋白第三十二頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第三十三頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二(2)紅細(xì)胞的洗滌①洗滌操作A、采集血樣B、低速短時(shí)間離心(500r/min,2min)C、吸取血漿：上層透明的黃色血漿D、鹽水洗滌：用五倍體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9％的氯化鈉溶液洗滌,緩慢攪拌10min。速度越高和時(shí)間越長(zhǎng)會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀達(dá)不到分離的效果）第三十四頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二E、低速離心（低速短時(shí)間）F、重復(fù)4、5步驟三次，直至上清液中已沒(méi)有黃色，表明洗滌干凈②洗滌紅細(xì)胞目的除去其中的雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的分離純化，不可洗滌次數(shù)過(guò)少第三十五頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二(3)血紅蛋白的釋放加蒸餾水到原血液體積，再加40％體積的甲苯，置于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?0分鐘,細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白(4)分離血紅蛋白溶液①過(guò)程將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以2000r/min的速度離心10min攪拌的作用:加速紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白第三十六頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第1層（最上層）：甲苯層（無(wú)色透明）第2層（中上層）：脂溶性物質(zhì)沉淀層（白色薄層固體）第3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（紅色透明液體）第4層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層（暗紅色）②試管中溶液層次第三十七頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二用濾紙過(guò)濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體③分離第三十八頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二取1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300ml的物質(zhì)的量濃度為20mmol/l的磷酸緩沖液中（pH為7.0），透析12小時(shí)(5)透析除去樣品中分子量較小的雜質(zhì)①過(guò)程②透析目的第三十九頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第四十頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二2、凝膠色譜（1）凝膠色譜柱的制作①取長(zhǎng)40厘米，內(nèi)徑1.6厘米的玻璃管，兩端需用砂紙磨平②底塞的制作：打孔挖出凹穴安裝移液管頭部覆蓋尼龍網(wǎng)，再用100目尼龍紗包好，插到玻璃管的一端凝膠色譜柱的高度與分離度有關(guān)，一般不超過(guò)1m凝膠色譜柱直徑的大小不影響分離的結(jié)果，但直徑過(guò)大會(huì)造成洗脫液體積增大，樣品的稀釋度過(guò)大，因此直徑不超過(guò)2cm第四十一頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實(shí)尼龍網(wǎng)，還會(huì)導(dǎo)致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底注意事項(xiàng)：⑤安裝其他附屬結(jié)構(gòu)③頂塞的制作打孔安裝玻璃管④組裝將上述三者按相應(yīng)位置組裝成一個(gè)整體第四十二頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第四十三頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二（2）凝膠色譜柱的裝填①凝膠的選擇A、材料“G”表示凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍75表示凝膠的得水值，即每克凝膠膨脹時(shí)吸水7.5克B、代表意義：交聯(lián)葡聚糖凝膠（G-75）第四十四頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二配置凝膠懸浮液：計(jì)算并稱(chēng)取一定量的凝膠浸泡于蒸餾水或洗脫液中充分溶脹后，配成凝膠懸浮液②凝膠的前處理③凝膠色譜柱的裝填方法A、固定B、裝填將色譜柱處置固定在支架上將凝膠懸浮液一次性的裝填入色譜柱內(nèi)，裝填時(shí)輕輕敲動(dòng)色譜柱，使凝膠填裝均勻第四十五頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二注意：2、裝填凝膠柱時(shí)不得氣泡存在：因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果1、凝膠裝填時(shí)盡量緊密，以降低凝膠顆粒之間的空隙第四十六頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第四十七頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二1、液面不要低于凝膠表面，否則可能有氣泡混入，影響液體在柱內(nèi)的流動(dòng)與最終生物大分子物質(zhì)的分離效果

注意：2、不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象裝填完畢后，立即用緩沖液洗脫瓶，在50cm高的操作壓下，用300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液（pH為7.0）充分洗滌平衡12小時(shí)④洗滌平衡第四十八頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二視頻：凝膠色譜柱的制作第四十九頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二（3）樣品加入與洗脫①調(diào)節(jié)緩沖液面②滴加透析樣品吸管吸1ml樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時(shí)，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動(dòng)加樣，同時(shí)注意不要破壞凝膠面打開(kāi)下端出口，使柱內(nèi)緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊關(guān)閉出口第五十頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第五十一頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二③樣品滲入凝膠床④洗脫加樣后打開(kāi)下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全進(jìn)入凝膠層后，關(guān)閉下端出口小心加入pH為7的20mmol/l的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開(kāi)下端出口進(jìn)行洗脫⑤收集：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每5ml一試管，連續(xù)收集（在分離過(guò)程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動(dòng)，說(shuō)明色譜柱制作成功）第五十二頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二討論：答：讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能⑥注意：正確的加樣操作1、不要觸及破壞凝膠面2、貼壁加樣3、使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動(dòng)1、在血紅蛋白的整個(gè)過(guò)程中不斷用磷酸緩沖液處理的目的是什么？第五十三頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二2、與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞有什么特點(diǎn)？這一特點(diǎn)對(duì)你進(jìn)行蛋白質(zhì)得分離有什么意義？答：血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過(guò)觀察顏色來(lái)判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過(guò)程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。第五十四頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。首先通過(guò)洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理；再經(jīng)過(guò)透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后通過(guò)凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量較大雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化；最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定3、你能描述血紅蛋白分離的完整過(guò)程嗎？第五十五頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二第五十六頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二（三）SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳2、試劑的配制①丙烯酰胺和N,N-甲叉雙丙烯酰胺:用去離子水配制29%（29g/100mL，下同）的丙烯酰胺和1%的N,N-甲叉雙丙烯酰胺的貯存液②十二烷基硫酸鈉（SDS）:用去離子水配成10%的貯存液，于室溫保存鑒定血紅蛋白純度1、目的第五十七頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二③用于制備分離膠和濃縮膠的Tris緩沖液④TEMED：作用通過(guò)催化過(guò)硫酸銨形成自由基而加速丙烯酰胺與雙丙烯酰胺的聚合⑤用去離子水配制10%過(guò)硫酸銨：作用提供驅(qū)動(dòng)丙烯酰胺和雙丙烯酰胺聚合所必需的自由基。此溶液須配制新鮮液⑥Tris—甘氨酸電泳緩沖液

25mmol/LTris，250mmol/L甘氨酸(pH8.3)，0.1%的SDS第五十八頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二⑦樣品處理液

50mmol/LTris—HCl(pH6.8)，100mmol/LDTT(巰基蘇糖醇)或用5%的巰基乙醇，2%的SDS，0.1%的溴酚藍(lán)，10%的甘油⑨脫色液

10%的甲醇和10%的冰醋酸⑧染色液

0.1%的考馬斯亮藍(lán)R250，40%的甲醇，10%的冰醋酸第五十九頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二1、由于制備凝膠的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，并且容易被皮膚吸收，因此操作必須在通風(fēng)櫥內(nèi)或通風(fēng)處進(jìn)行注意事項(xiàng)：2、TEMED和過(guò)硫酸胺對(duì)黏膜和上呼吸道組織、眼睛、皮膚等有很大的破壞作用，吞服可致命3、在進(jìn)行電泳操作時(shí)一定按照實(shí)驗(yàn)要求和步驟完成。操作時(shí)要戴好一次性手套第六十頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二①SDS-聚丙烯酰胺分離膠制備（1）根據(jù)廠(chǎng)家說(shuō)明書(shū)安裝電泳用的玻璃板（2）SDS—聚丙烯酰胺凝膠制備用去離子水4.6mL，30%的丙烯酰胺2.7mL，1.5mol、pH8.8的Tris緩沖液2.5mL，10%的SDS0.1mL，10%的過(guò)硫酸胺0.1mL，TEMED0.006mL，混合均勻，迅速灌注在兩玻璃板的間隙中間，要留出灌注濃縮膠所需空間(梳子的齒長(zhǎng)再加0.5cm)，再在膠液面上小心注入一層水（約高2—3mm），以阻止氧氣進(jìn)入凝膠溶液3、電泳方法步驟第六十一頁(yè)，共六十六頁(yè)，編輯于2023年，星期二用去離子水2.7mL，30%的丙烯酰胺0.67mL，1.0mol、pH6.8的Tris緩沖液0.5mL，10%的SDS0.041mL，10%的過(guò)硫酸胺0.04mL，TEMED0.004mL，混合均勻，直接灌注在聚合的分離膠上，并立即在濃縮膠溶液中插入干凈的梳子。整個(gè)操作過(guò)程應(yīng)注意避免氣泡的產(chǎn)生。然后再補(bǔ)加濃縮膠溶液，使其充滿(mǎn)梳子之間的空隙，將凝膠垂直放置于室