自身免疫病的檢驗課件

自身免疫病的檢驗一、自身免疫病的概述二、自身抗體的檢測及臨床意義廣醫(yī)臨床免疫教研室徐霞主講1自身耐受與自身免疫Self-tolerance:

正常情況下，機(jī)體免疫系統(tǒng)對自身抗原物質(zhì)不產(chǎn)生免疫應(yīng)答或只產(chǎn)生極微弱的免疫應(yīng)答Autoimmunity:

機(jī)體對自身組織成分產(chǎn)生自身抗體或自身免疫效應(yīng)T細(xì)胞

Autoimmunedisease,AID由自身免疫應(yīng)答引起的疾病稱為自身免疫性疾病。2自身免疫病的基本特征多數(shù)病因不清患者以女性居多有遺傳傾向血液中可檢出高滴度的自身抗體和（或）與自身組織起反應(yīng)的致敏淋巴細(xì)胞疾病的重疊現(xiàn)象病程較長，多遷延為慢性患病組織器官的病理特征為免疫炎癥免疫抑制劑治療可取得一定療效用相同抗原在某些試驗動物中可復(fù)制出相似的疾病模型3自身免疫病的發(fā)病機(jī)制1.隱蔽抗原的釋放2.自身組織的改變3.共同抗原誘導(dǎo)4.遺傳因素5.免疫調(diào)節(jié)失常4

部分自身免疫病與HLA的相關(guān)性自身免疫病抗原相對危險值類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎DR44.2

強(qiáng)直性脊柱炎B2763.1

系統(tǒng)性紅斑狼瘡DR35.8

橋本甲狀腺炎DR53.2

毒性甲狀腺腫DR33.0

多發(fā)性硬化癥DR23.85自身免疫病的分類器官特異性自身免疫病指自身免疫應(yīng)答反應(yīng)特異地作用于某器官引起相應(yīng)的損害，可檢出特異性的自身抗體非器官特異性自身免疫病指自身免疫應(yīng)答反應(yīng)非特異地出現(xiàn)在全身多系統(tǒng)、多器官和組織中，造成全身性病理改變，并可檢出多種非特異性的自身抗體6重癥肌無力（myastheniagravis,MG）患者體內(nèi)存在抗乙酰膽堿受體的自身抗體，引起以骨骼肌運動無力為特征的自身免疫病。毒性彌漫性甲狀腺腫（Gravesdisease）患者血清中存在抗促甲狀腺激素受體（TSHR）的IgG型自身抗體。以上兩種疾病的免疫損傷機(jī)制均屬II型超敏反應(yīng)7系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）是一種累及多器官、多系統(tǒng)的小血管及結(jié)締組織疾病，好發(fā)女性，疾病呈漸進(jìn)性，緩解與復(fù)發(fā)交替，體內(nèi)存在多種自身抗體。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）本病特征以手腳小關(guān)節(jié)發(fā)病，向心對稱性發(fā)展，血清和關(guān)節(jié)滑膜液中出現(xiàn)抗變性IgG抗體，即類風(fēng)濕因子（rheumatoidfactor，RF）以上兩種疾病發(fā)病機(jī)制屬III型超敏反應(yīng)。8自身抗體的檢測及臨床意義抗核抗體：Anti-nuclearantibody,ANA

是以真核細(xì)胞的核成分為靶抗原的器官非特異性自身抗體的總稱ANA的性質(zhì)主要是IgG,少數(shù)為IgM和IgA，無器官和種屬特異性風(fēng)濕性疾?。杭t斑狼瘡、硬皮病、皮肌炎與多發(fā)性肌炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合癥、混合結(jié)締組織病等9ANA類型1.抗核蛋白抗體2.抗DNA抗體抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體抗單鏈DNA(ssDNA)抗體3.抗ENA抗體10一、免疫熒光抗核體Immunofluorescenceanti-nuclearantibody,IFANA以Hep-2（人喉癌上皮細(xì)胞株）細(xì)胞為抗原基質(zhì)+待測血清+熒光抗人Ig熒光顯微鏡下觀察熒光核型1112常見核型：周邊型：是抗dsDNA或抗脫氧核糖核蛋白（dsDNA+組蛋白，DNP）的形態(tài)學(xué)反應(yīng)。高滴度周邊型核熒光多見于SLE均質(zhì)型：抗DNP或抗組蛋白抗體，也可是多種自身抗體高度密集的形態(tài)表現(xiàn)。多見于活動期SLE、藥物性狼瘡等。13顆粒型：抗ENA抗體。核仁型：抗核小體抗體，多見于硬皮病、皮肌炎及類分關(guān)等著絲點型：染色體區(qū)線狀排列熒光（不超過46點），僅見于硬皮?。ㄓ绕涫荂REST綜合癥陽性率可達(dá)80%）14

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16二、抗DNA抗體1.雙鏈DNA(dsDNA)抗體對SLE有很高特異性2.單鏈DNA(ssDNA)抗體缺乏特異性，在各種感染、自身免疫病中均存在檢測方法:免疫熒光法、放免分析法（Farr法）、滴金免疫測定法、ELISA17三、抗可提取核抗原（Extractablenuclearantigen,ENA）抗體ENA是指小牛胸腺或兔胸腺在鹽溶液中可提取的一部分核抗原1.抗Sm抗體是SLE的標(biāo)記抗體,僅在SLE患者中能檢測到,有很高的特異性,但只在1/3患者中出現(xiàn).182.抗核糖核蛋白(RNP)抗體高滴度的抗RNP抗體,尤其是抗U170000RNP抗體陽性對診斷MCTD有重要意義3.抗SSA(Ro)和SSB(La)抗體對干燥綜合癥(sjoergrensyndrome,SS)診斷有意義,尤其是SSB抗體具有特異性194.抗SCL-70抗體約40%的系統(tǒng)性硬皮病和70%的彌漫性硬皮病中SCL-70抗體陽性5.抗Jo-1抗體該抗體具有高度的肌炎特異性,多見于PM(45%)和DM(5%)6.抗rRNP抗體(抗核糖體抗體)

在10%的SLE中出現(xiàn),具有此抗體時中樞NS病變率高20免疫印跡技術(shù)（Immunoblotting,IBT）檢測ENA抗體的原理和流程ENA經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，各種抗原性多肽按分子量大小分離，電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜固定后，患者血清中的自身抗體即可通過酶連免疫反應(yīng)與相應(yīng)的蛋白多肽結(jié)合，在硝酸纖維膜上呈現(xiàn)特異性顯色條帶，參照各種已知陽性血清在膜上留下的顯色區(qū)帶的位置特征及顯色區(qū)帶對應(yīng)的蛋白多肽抗原的分子特征，即可檢測和識別多種自身抗體。21

動物胸腺提取ENASDS

電轉(zhuǎn)移至硝酸纖微膜加標(biāo)本加酶標(biāo)抗體

判斷結(jié)果2223

24方法特點：高分辨率、高靈敏度易于操作、長期保存從靶抗原蛋白多肽水平上檢測和識別自身抗體一次可完成七種自身抗體的檢測25國際上抗核抗體檢測技術(shù)的發(fā)展趨勢將特異性抗原基因轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞以過度表達(dá)特定抗原，增強(qiáng)相應(yīng)抗體檢測的特異性及敏感性是IFANA最新的發(fā)展方向國際上開展以基因工程原理制備重組核抗原為基質(zhì)建立自身抗體檢測方法26類風(fēng)濕因子（RF）是抗變性IgG的自身抗體，主要為IgM,也可見IgG,IgA。檢測方法：膠乳