薄層板,跑版注意事項(xiàng)

薄層色譜法---跑板之五兆芳芳創(chuàng)作.點(diǎn)樣用微量進(jìn)樣器進(jìn)行點(diǎn)樣.點(diǎn)樣前，先用鉛筆在層析上距末端2cm處輕輕畫(huà)一橫線，然后用毛細(xì)管吸取樣液在橫線上輕輕點(diǎn)樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開(kāi)的色譜圖別離度好，顏色清楚.如果要重新點(diǎn)樣，一定要等前一次點(diǎn)樣殘存的溶劑揮發(fā)后再點(diǎn)樣（用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干再點(diǎn)），以免點(diǎn)樣斑點(diǎn)過(guò)大.一般斑點(diǎn)直徑大于2mm，不宜超出5mm.點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干.底線距基線1—2.5cm,點(diǎn)間距離為lcm左右，樣點(diǎn)與玻璃邊沿距離至少1cm,為避免邊沿效應(yīng)，.展開(kāi)將點(diǎn)了樣的薄層板放在盛在有展開(kāi)劑的展開(kāi)槽中，由于毛細(xì)管作用，展開(kāi)溶劑在薄層板上遲緩前進(jìn),前進(jìn)至一定距離后,取出薄層板,樣品組分固移動(dòng)速度不合而彼此別離.展開(kāi)室應(yīng)預(yù)飽和.為達(dá)到飽和效果,可在室中參加足夠量的展開(kāi)劑,密封室頂?shù)纳w.展開(kāi)劑一般為兩種以上互溶的有機(jī)溶劑,并且臨用時(shí)新配為宜.強(qiáng)烈振搖使混雜液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開(kāi)劑.絕對(duì)不該該把各組成溶液倒入展開(kāi)缸，振搖展開(kāi)缸來(lái)配制展開(kāi)劑.混雜不均勻和沒(méi)有分液的展開(kāi)劑，會(huì)造成層析的完全失敗.各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不合的闡發(fā)任務(wù)有不合的要求，盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的最高精確度，比方：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管，薄層板點(diǎn)樣后,應(yīng)待溶劑揮發(fā)完,再放人展開(kāi)室中展開(kāi).④展開(kāi)應(yīng)密閉，展距一般為8—15cm.薄層板放入展開(kāi)室時(shí)，展開(kāi)劑不克不及沒(méi)過(guò)樣點(diǎn).一般情況下，展開(kāi)劑浸入薄層下端的高度不宜超出.⑤展開(kāi)劑每次展開(kāi)后，都需要改換，不克不及重復(fù)使用.（展開(kāi)缸中得展開(kāi)劑棄去，密封在容量瓶中得展開(kāi)劑可在當(dāng)天使用）⑥展開(kāi)后的薄層板用適當(dāng)?shù)霓k法，使溶劑揮發(fā)完全，然落后行檢視.⑦，當(dāng)Rf值很大或很小時(shí)，應(yīng)適當(dāng)改動(dòng)流動(dòng)相的比例..斑點(diǎn)的檢出展開(kāi)后的薄層板經(jīng)過(guò)枯燥后，經(jīng)常使用紫外光燈照射或用顯色劑顯色檢出斑點(diǎn).對(duì)于無(wú)色組分，在用顯色劑時(shí)，顯色劑噴灑要均勻，量要適度.紫外光燈的功率越大，暗室越暗，檢出效果就越好.展開(kāi)別離后，化合物在薄層板上的位置用比移值（Rf值）來(lái)暗示.化合物斑點(diǎn)中心至原點(diǎn)的距離與溶劑前沿至原點(diǎn)的距離的比值就是該化合物的Rf值.注意事項(xiàng)：一．預(yù)飽和分為2部分：1、展開(kāi)缸的預(yù)飽和：在展開(kāi)之前，使展開(kāi)劑蒸汽在展開(kāi)缸內(nèi)飽和，使展開(kāi)缸汽液狀態(tài)達(dá)到一定的穩(wěn)定狀態(tài)，此時(shí)尚未放薄層板.2、薄層板的預(yù)飽和：在展開(kāi)缸飽和后，放入已經(jīng)點(diǎn)樣完畢的薄層板，進(jìn)行飽和，使薄層板整體差別性減小.具體做法是：在雙槽層析玻璃缸內(nèi),將其中一個(gè)槽內(nèi)倒入配好的展開(kāi)劑,另一個(gè)槽內(nèi)放入薄層板,蓋好上面的玻璃蓋,這時(shí)候就是在預(yù)飽和.關(guān)于飽和時(shí)間：按照展開(kāi)劑而定.1、展開(kāi)劑組分極性差別不大的且揮發(fā)性好的，時(shí)間可以短一些，一般15－20 分 鐘 便 可 ；2、極性差別大的，且揮發(fā)性差別大的，時(shí)間要長(zhǎng)一些，一般要30－60分鐘；3、極性差別大的，且揮發(fā)性差別不大的，時(shí)間要長(zhǎng)一些，一般要20－30分鐘；4、極性差別不大，且揮發(fā)性差不大的，時(shí)間可以短一些，一般要10－15分鐘；5、水飽和有機(jī)試劑或有機(jī)試劑飽和水的，時(shí)間一般都比較長(zhǎng)，30－60分鐘.6、另外，大家打開(kāi)封閉展開(kāi)缸的速度要快，放板取板的速度也要快，不然預(yù)飽和的效果全被你前期的操縱給抹殺了?。《归_(kāi)室應(yīng)放在水平、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，不克不及有陽(yáng)光直射，也不克不及在通風(fēng)處放置，離開(kāi)熱源，避免溫度動(dòng)搖對(duì)別離倒霉；光敏物質(zhì)的別離應(yīng)將展開(kāi)室置于暗處進(jìn)行.三.點(diǎn)樣時(shí)間不該超出三分鐘.硅膠的硅醇基以氫鍵形式優(yōu)先吸附水，物理吸附使硅膠的活度下降，影響了弱極性物質(zhì)的吸附，化合物的Rf值相應(yīng)地增大.硅膠薄層的吸水速度很快，當(dāng)用預(yù)先經(jīng)度日化的薄層板，在點(diǎn)樣進(jìn)程中枯燥的薄層會(huì)立即吸附空氣中的水蒸氣，在數(shù)分鐘內(nèi)達(dá)到平衡，吸附水蒸氣的量決定于點(diǎn)樣速度即流露在空氣中的時(shí)間和空氣的相對(duì)濕度.Dallas指出0.25mm厚、20cmx20cm的硅膠薄層板在50%相對(duì)濕度中放置約3min就失去活性的一半，而放置15min時(shí)吸附的水分已達(dá)到最大值.在用相同條件別離同一組化合物得到的結(jié)果不克不及重現(xiàn)時(shí)，必須考慮到相對(duì)濕度對(duì)展開(kāi)的影響，特別是我國(guó)南北地區(qū)濕度相差很大；即便在同一實(shí)驗(yàn)室冬夏季候不合濕度也有明顯不同，如果不注意濕度的影響就得不到預(yù)期的結(jié)果.展開(kāi)時(shí)的最佳相對(duì)濕度規(guī)模決定于溶質(zhì)和溶劑的極性，隨溶質(zhì)和溶劑極性的增加相對(duì)濕度的規(guī)模也相應(yīng)地增大，在用苯作展開(kāi)劑時(shí)，適宜的相對(duì)濕度規(guī)模很窄，因此濕度對(duì)別離的影響十清楚顯；當(dāng)用乙醚為展開(kāi)劑時(shí)，相對(duì)濕度在20%-50%,時(shí)均可得到重現(xiàn)的結(jié)果；如用氯仿-異丙醇-25%氨水（45:45:10）為展開(kāi)劑時(shí)，則相對(duì)濕度在20%-80%規(guī)模內(nèi)可得到較好的重現(xiàn)性.這種不同來(lái)自展開(kāi)室中展開(kāi)劑蒸氣有取代吸附在薄層上水份子的趨勢(shì)，取代量決定于展開(kāi)劑蒸氣的極性和量；苯為非極性溶劑，其取代作用小，因?yàn)楸脚c水極性相差很大，即便吸附水量有微小的變更也能引起Rf值的改動(dòng)，甚至在薄層上形成“兩個(gè)前沿”而使色譜畸形.而在用極性溶劑如乙醇、甲醇或氨水為展開(kāi)劑時(shí)，則吸附的水份子被大量取代，原來(lái)吸附的水分下降，這時(shí)平衡主要決定于高濃度的溶劑蒸氣.展開(kāi)劑極性越大，薄層上吸附水蒸氣的影響越小，因此能在一