艾滋病檢測(cè)原理和技術(shù)規(guī)范課件

艾滋病檢測(cè)原理和技術(shù)規(guī)范2023/6/91一、艾滋病與艾滋病病毒2023/6/92（有A～E多個(gè)亞型）與一種感染灰身白臉猴的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。HIV-1HIV-2Humanimmunodeficiencyvirus

HIV（有A～J，O1～O4多個(gè)亞型）與一種感染黑猩猩的猴免疫缺陷病毒（SIV）相似。2023/6/93艾滋病病毒感染后，可嚴(yán)重破壞人體的免疫系統(tǒng)，使人體喪失抵御各種疾病的能力，有利于各種病原體的侵入，從而導(dǎo)致各種嚴(yán)重的、難以治愈的機(jī)會(huì)性感染或腫瘤，最終導(dǎo)致死亡，病死率可達(dá)100％。2023/6/94HIV-1M組HIV-1O組HIV-2喀麥隆、加蓬HIV型別和亞型的分類進(jìn)化與地區(qū)分布：西非、印度HIV2023/6/95基因亞型與感染途徑的關(guān)系2023/6/96艾滋病從感染到發(fā)病的一般過程2023/6/97二、艾滋病檢測(cè)的原理及方法2023/6/98各種檢測(cè)技術(shù)為艾滋病防治工作提供廣泛的技術(shù)支持平臺(tái)2023/6/99艾滋病實(shí)驗(yàn)診斷方法2023/6/910各種診斷試劑特性2023/6/911硒標(biāo)法金標(biāo)法HIV抗體篩查試驗(yàn)2023/6/912明膠顆粒凝集試驗(yàn)（Particleagglutinationtest，PA）

2023/6/913PA的操作和結(jié)果判斷2023/6/9145

450/630nm下測(cè)定OD值混勻，加蓋，37℃溫育洗板3

加入底物第二次特異性結(jié)合4

加入終止液1

加入樣品洗板2

加入酶標(biāo)記物加蓋，37℃溫育加蓋，37℃溫育第一次特異性結(jié)合酶聯(lián)免疫分析ELISA

（雙抗原夾心、兩步法）2023/6/915快速法可否單獨(dú)使用？《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》（2004版）：將PA、dot-EIA、膠體硒法納入快速檢測(cè)規(guī)范方法，因此可以使用。有研究指出：任何一種快速試劑可以篩查出99%以上的陰性樣本；兩種快速試劑均為陽性時(shí)，可以篩查出98%以上的陽性樣本；兩種快速試劑結(jié)果不一致時(shí)，可用ELISA復(fù)檢；單獨(dú)使用或兩種同時(shí)使用時(shí)，特異性差別無顯著意義。2023/6/916■

針對(duì)各種病毒蛋白的特異抗體■

區(qū)分ELISA真陽性與假陽性■

檢測(cè)HIV-1和HIV-2HIV抗體確證試驗(yàn)WesternBlot免疫印跡法2023/6/917HIV的主要基因及其產(chǎn)物

（HIV標(biāo)志物）2023/6/918ss-RNA2023/6/919全自動(dòng)免疫印跡儀2023/6/920HIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)：■2條env（gp160/gp120+gp41）■1條env+p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白（env）核蛋白（gag）逆轉(zhuǎn)錄酶（pol）2023/6/921篩查試驗(yàn)：診斷出陰性樣本，并為陽性/可疑樣本排除非特異條帶。復(fù)檢1（試劑A）：對(duì)陽性/可疑樣本排除操作誤差。復(fù)檢2（試劑B）：對(duì)陽性/可疑樣本排除試劑誤差。確證試驗(yàn)：診斷出陽性樣本。篩查試驗(yàn)和確證試驗(yàn)的作用2023/6/922HIV/AIDS

診斷標(biāo)準(zhǔn)

（GB16000-1995）2023/6/9232023/6/924HIV！HIV？HIV感染母親所生嬰兒：分別于12個(gè)月、18個(gè)月追蹤檢測(cè)陰性者為陰性，18個(gè)月仍陽性者為陽性。2023/6/925三、艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范2023/6/926主要內(nèi)容：

樣品采集和處理

檢測(cè)方法（HIV抗體、病毒核酸、病毒載量、CD4、HIV抗原檢測(cè)）

安全防護(hù)、職業(yè)暴露質(zhì)量管理（質(zhì)量保證、質(zhì)量控制、質(zhì)量評(píng)價(jià)）實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量考評(píng)

HIV診斷試劑質(zhì)量評(píng)估2023/6/927篩查試驗(yàn)（試劑A）陽性／可疑均陰性均陽性陰性重復(fù)檢測(cè)（試劑A+B）陰性陽性確證試驗(yàn)篩查實(shí)驗(yàn)室一陰一陽確證實(shí)驗(yàn)室復(fù)核檢測(cè)（試劑A/B/C）陽性／可疑陰性篩查報(bào)告（陰性）確認(rèn)報(bào)告（陰性）確認(rèn)報(bào)告（陽性）2023/6/928HIV抗體檢測(cè)結(jié)果處理規(guī)范2023/6/929HIV待確證樣品HIV陽性確證報(bào)告原件感染者確認(rèn)報(bào)告原件確認(rèn)報(bào)告復(fù)印件備案篩查實(shí)驗(yàn)室所在單位篩查實(shí)驗(yàn)室所在單位確證實(shí)驗(yàn)室篩查實(shí)驗(yàn)室艾滋病樣本確證、報(bào)告流程：2023/6/930認(rèn)真填寫各類表格（最好能打印），及時(shí)上報(bào)。2023/6/931各篩查實(shí)驗(yàn)室每月5日前上報(bào)上月檢測(cè)數(shù)據(jù)：2023/6/932四、艾滋病檢測(cè)的質(zhì)量控制2023/6/933

行政支持

重視、投入、理解

實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化建設(shè)

規(guī)范、制度、程序

人員要求

資質(zhì)條件、培訓(xùn)和輪訓(xùn)質(zhì)量保證（QA）質(zhì)量控制（QC）

室內(nèi)質(zhì)控

質(zhì)控圖的建立和應(yīng)用

檢驗(yàn)期間核查

試劑對(duì)照、外部質(zhì)控品對(duì)照、平行雙樣結(jié)果關(guān)聯(lián)性（不同方法、不同實(shí)驗(yàn)室結(jié)果、人群特征等）可實(shí)時(shí)校驗(yàn)：樣品、試劑、儀器、操作等環(huán)節(jié)。質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）

實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量考評(píng)2023/6/934■

建立各項(xiàng)規(guī)章制度和操作程序，定期檢查；■人員定期接受培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，培養(yǎng)良好的業(yè)務(wù)素質(zhì)；對(duì)HIV實(shí)驗(yàn)室的10項(xiàng)基本要求2023/6/935■儀器設(shè)備運(yùn)作正常，定期檢定和校準(zhǔn)，妥善維護(hù)；■樣品流轉(zhuǎn)有序，記錄詳細(xì)，保存規(guī)范；■采用合格試劑，經(jīng)常核查試劑質(zhì)量，正確保存和使用；■環(huán)境條件符合要求，有監(jiān)控有記錄；■嚴(yán)格按照規(guī)范和試劑說明書操作；■建立各類質(zhì)量記錄表格，資料保存完整，溯源性強(qiáng)；■堅(jiān)持開展室內(nèi)質(zhì)控，參加室間比對(duì)和能力驗(yàn)證；■安全防護(hù)、廢物處理措施落實(shí)，建立人員健康監(jiān)護(hù)檔案。2023/6/936■每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須配備至少2種不同原理/不同廠家的試劑，其中一種必須是ELISA（第三代、雙抗原夾心、兩步法）?！龅谝淮魏Y查試驗(yàn)推薦使用高敏感性的ELISA法，快速法可用于應(yīng)急試驗(yàn)或復(fù)核試驗(yàn)?！霭凑袠?biāo)目錄采購，保存供應(yīng)商的資質(zhì)證明文件，試劑批批檢報(bào)告?！龅怯浽噭┎少徍褪褂们闆r，注意保存條件并實(shí)行監(jiān)控?！鲈噭┖蜆悠窇?yīng)分開存放，過期試劑必須及時(shí)處理?！霾煌放?、不同批號(hào)的試劑不能混用（包括陽性對(duì)照）。使用診斷試劑注意事項(xiàng)2023/6/937■嚴(yán)格按照說明書操作和判斷?！?/p>

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件（溫度、濕度）的控制。■

試劑使用前室溫平衡的重要性。■

正確使用恒溫設(shè)備（校準(zhǔn)溫度、放置方式、放置位置）。■

固定樣品排列方式，固定對(duì)照品位置?！?/p>

統(tǒng)一加樣的方式方法（加樣器使用習(xí)慣、樣品加樣順序）。■

加樣過程避免污染（氣溶膠、加樣器移動(dòng)路線）?！?/p>

按加樣順序加入各種試劑，加入質(zhì)控對(duì)照前必須搖勻?！?/p>

嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度和時(shí)間。實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)2023/6/938■每次實(shí)驗(yàn)必須設(shè)立內(nèi)部質(zhì)控對(duì)照和外部質(zhì)控對(duì)照?！鰞?nèi)部對(duì)照質(zhì)控血清必須使用同批號(hào)試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對(duì)照血清，其數(shù)量和結(jié)果控制范圍，按該試劑盒說明書的要求設(shè)立和