四川農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)設計答辯

不同土地利用方式下土壤微生物學特性1立題背景土壤微生物是土壤生命活體的主要組成部分。從最初定植于土壤母質(zhì)上的藍綠藻開始，直到土壤肥力的形成，土壤微生物參與了土壤發(fā)生發(fā)育的全過程（姚槐應等,2006）。同時土壤微生物又是生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分,其數(shù)量和種類受耕作制度、地理位置、土壤層次、植被、土壤肥力、氣候變化以及土壤類型等諸多因素的影響（李仲強等,2001）,因此土壤微生物在土壤環(huán)境中起著重要的指示作用。其中微生物在土壤中的數(shù)量、分布與活動情況,能夠反應土壤肥力的高低（李志輝等,2000）。而且土壤中不同類群微生物利用不同有機質(zhì)作營養(yǎng)及能量來源,其有機、無機產(chǎn)物又可供其它微生物利用,故土壤微生物能較早預測土壤活性的變化過程,常被作為土壤質(zhì)量的靈敏指標（俞慎等,1999）。就目前而言，針對土壤微生物結(jié)構(gòu)研究選取的對象主要是細菌、真菌和放線菌這三大類微生物（樊軍等,2003;陳蓓等,2004）。此前關(guān)于不同環(huán)境中土壤微生物區(qū)系及其活性的報道已有很多，但關(guān)于四川雅安名山縣境內(nèi)不同土地利用方式下的土壤微生物區(qū)系和微生物量碳、氮方面的報道還沒有。不同的土地利用方式將導致土壤環(huán)境不同,土壤中的微生物類型和數(shù)量也可能不發(fā)生相應的變化，因此此次研究不同土地利用方式下土壤微生物區(qū)系和生物量碳、氮將為探索和了解不同土地利用方式下土壤微生物區(qū)系和微生物量碳氮特征提供一定的理論依據(jù)。同時，結(jié)合區(qū)域土壤環(huán)境，揭示不同土地利用方式下土壤微生物群落特性，將有助于我們了解土壤環(huán)境狀況，對實現(xiàn)當?shù)赝寥蕾Y源的可持續(xù)利用具有重要的現(xiàn)實意義。2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀2.1土壤微生物多樣性研究現(xiàn)狀土壤生態(tài)系統(tǒng)是保證農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的基礎(chǔ)。土壤微生物群落是其中重要的活性組分，對土壤養(yǎng)分循環(huán)、有機質(zhì)分解、土壤結(jié)構(gòu)和肥力維持、溫室氣體產(chǎn)生、環(huán)境污染物凈化等發(fā)揮著重要作用。正是由于土壤微生物在陸地生態(tài)系統(tǒng)中的重要性，有關(guān)土壤生物多樣性的研究得到了廣泛的重視（展茗等,2023）。土壤微生物多樣性是指土壤生態(tài)系統(tǒng)中所有的微生物種類、它們擁有的基因以及這些微生物與環(huán)境之間相互作用的多樣化程度，當前研究主要集中在物種多樣性、遺傳多樣性、結(jié)構(gòu)多樣性及功能多樣性等4個方面（林先貴等,2023）。1991年，國際生物多樣性合作研究計劃“DIVERSITAS”的發(fā)起揭開了全球生物多樣性研究的序幕；1995年，DIVERSITAS計劃新方案首次納入了“土壤生物多樣性”內(nèi)容；2002年，聯(lián)合國糧農(nóng)組織因應設立了“土壤生物多樣性研究議程(Soilbiodiversityinitiative，SBI)”。至此，世界各國也陸續(xù)組織開展有關(guān)研究，推動了人們對土壤微生物多樣性和關(guān)鍵生態(tài)學過程中土壤生物功能的理解（韓興國等,2003）。顯然，土壤微生物多樣性作為全球性研究迄今僅l0余年時間，但基于土壤微生物學長期以來的學科積累（林先貴等,2023），包括世界各國在生物多樣性合作計劃之前的科學探索，特別是緣于生物多樣性領(lǐng)域研究技術(shù)的迅猛發(fā)展，土壤微生物多樣性研究不僅內(nèi)容上不斷豐富，而且研究成果也在不斷充實，獨具一格的理論體系和學科框架也在逐步形成和完善之中（韓興國等,2003）。不同生態(tài)類型下土壤微生物的區(qū)系組成土壤微生物是土壤養(yǎng)分轉(zhuǎn)化和循環(huán)的推動力,影響著植物對養(yǎng)分的吸收,是植物養(yǎng)分的重FisdallJMPossibleroleofsoilmicroorganisrrksinaggregationinsods[J]．Plant)l1，1994，l17：145—153要來源。土壤微生物生物量和土壤酶活性及其它生物學參數(shù)與土壤理化性質(zhì)之間具有較好的關(guān)聯(lián)性（曹慧等,2001）,在土壤生態(tài)系統(tǒng)受擾動后存在長期與短期響應。近年來,土壤微生物群落活性作為土壤生態(tài)系統(tǒng)恢復指標的探討和研究一直受到研究者的廣泛關(guān)注(畢江濤等,2023)。在自然生態(tài)系統(tǒng)的研究中，先后開展了東北高寒地區(qū)、黃土高原地區(qū)、華西雨屏區(qū)、松嫩平原鹽堿化草原、鄂爾多斯、長江三角洲、青海三江源地區(qū)等生態(tài)系統(tǒng)中土壤微生物的調(diào)查研究（蘇永春等,2001;杜連鳳等,2006;王林超峰等,2007;天龍等,2007;朱萬澤等,2007;李松齡等,2023;張文婷等,2023;張巍等,2023)。隨著工業(yè)污染的加重和人為干擾活動的加強，對于農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)和被污染生態(tài)系統(tǒng)土壤微生物群落的研究也越來越受到重視。相繼開展了施肥及其污染、重金屬污染、農(nóng)藥污染、污水灌溉、污泥與粉煤灰配施等對農(nóng)田土壤微生物群落結(jié)構(gòu)、多樣性指數(shù)以及呼吸強度等影響的研究(謝龍蓮等,2004;張俊霞等,2005;李禎等,2006霍曉非等,2023;葛紅蓮等,2023)。另外，一些研究者還對其它生態(tài)系統(tǒng)（如礦區(qū)生態(tài)恢復區(qū)和城市生活區(qū)等）進行了初步調(diào)查和研究，這些研究為全面深入了解我國不同類型土壤動物群落的區(qū)系組成及在土壤中作用的研究奠定了堅實的基礎(chǔ)（滕應等,2003;孫福軍等,2006.）。土壤微生物的垂直分布土壤微生物數(shù)量、活性、生物量以及活性在土壤中的分布具明顯的表聚性，即隨著土壤深度的增加而逐漸減小，但對于不同土地利用方式和土壤類型，其變化規(guī)律存在一定的差異性（黃承才,2002;李靈等;2007；張瑜斌等,2007;馬曉梅等,2023;趙平芝等，2023）。在土壤中，0～20cm土層(特別是0～10cm土層)是微生物數(shù)量、生物量和活性的集中分布區(qū)，這與表層土壤細根生物量富集、枯枝落葉層積累、有機質(zhì)含量較高及良好的通氣狀況、溫度和濕度條件有關(guān)（李靈等,2007）。但是，在一些受人為活動干擾頻繁或受污染地區(qū)的土壤微生物呈現(xiàn)逆規(guī)律分布現(xiàn)象（劉曉梅等,2023）。另外，季節(jié)變化對土壤微生物的垂直分布也有重要影響，季節(jié)主要是通過溫度和濕度的變化來影響土壤微生物的垂直分布，如春、秋、冬三季，較深層土壤真菌幾乎無分布，只有在夏季會出現(xiàn)（張瑜斌等,2007）。土壤微生物的季節(jié)變化季節(jié)變化可通過土壤水分、溫度、土壤有機質(zhì)、土壤pH等因素的改變來影響土壤微生物結(jié)構(gòu)組成、數(shù)量、生物量以及活性等方面的變化（王國兵等,2023）。在暖溫帶、中溫帶和寒溫帶地區(qū)，季節(jié)變化主要通過溫度影響土壤微生物分布，而在亞熱帶地區(qū)，季節(jié)變化則主要通過季風降雨來影響土壤微生物分布。Chen等（2005）在對我國臺灣西部海岸沙丘森林生態(tài)系統(tǒng)中的研究發(fā)現(xiàn)，土壤微生物生物量C、N的波動主要與土壤濕度有關(guān)，溫度對土壤微生物生物量波動的影響很小。然而，另一些實驗結(jié)果表明，土壤微生物生物量碳在一年中的變化可能與土壤中植物根系分泌物的變化有關(guān)(Boone.RD,eta1,1998)。在自然生態(tài)系統(tǒng)中，土壤微生物數(shù)量和活性的均以冬季﹤春季／秋季﹤夏季，且在各土層中又均以夏季﹥春季／秋季﹥冬季。在部分人為干擾活動頻繁地區(qū)土壤微生物數(shù)量和活性等都會呈現(xiàn)出不規(guī)則的變化(張崇邦等,2003;張瑜斌等,2007;王國兵等,2023;王宏生,2023何容等,2023)。土壤微生物對環(huán)境影響因子的響應氏影響恐土壤爺微生益物的鏡環(huán)境凝因子僵有很前多，盲包括濕施肥山、農(nóng)妥藥、眉植物疑根系色分泌克物（姨植物廣化感取作用豪）、抽土地烘利用屈方式盯、重駐金屬夾污染硬等，游不同拍的影榮響因征子對寒土壤緣微生三物區(qū)袍系、找多樣做性、揀生物醉量、槳活性地等所賢產(chǎn)生羞的作筐用有貪所不罩同。塵2.挖1.內(nèi)4逮.1煤土壤萌微生細物對淹施肥揚因素衣的響敏應太施肥冊種類蹈、數(shù)我量和嶼施肥固方式卡可以塞影響則土壤豆微生反物數(shù)視量和島種類線的變轟化。替一般肢情況僅下，摩土壤新養(yǎng)分冤含量奶越高卷，土痰壤微怕生物茂的類分群和開個體慰數(shù)越樣多；攏在一籍定范派圍內(nèi)類，涂pH家值越績低，綁土壤擱動物醫(yī)類群兼數(shù)與導個體旨數(shù)也晌越多宋，且茄類群劍數(shù)和阻個體韻數(shù)隨晃著土興壤深沙度的句增加尼而遞求減掩（張蛋俊霞梁等策,2蜻00致5斜）務。但拉是不溉同的柜施肥慣方式辜以及康不同時的施購肥種哲類對取土壤玉微生與物的慎影響晴卻有件所不站同。芬李東財坡等部所作淘研究節(jié)綜述摧了國丟內(nèi)外莖有機汽農(nóng)業(yè)忍施肥脅方式灘對培耳肥土百壤及蘭土壤尾主要消微生鳥物活糊性的續(xù)影響膏，有繪機農(nóng)婚業(yè)施撞肥方資式顯剝著增包加土城壤微線生物劑數(shù)量宮，調(diào)術(shù)控微宴生物暖種群播結(jié)構(gòu)藝，提煎高土的壤有奸益微窮生物監(jiān)種群含數(shù)量紐，土恨壤微掉生物鋸量水C娘、喜N秋含量卷倍數(shù)指增加賴。闡艇明施彎用有多機肥況料對恨維持執(zhí)土壤鄰微生級物多寇樣性哭與生眠態(tài)穩(wěn)疏定性丙的必惠要性華，并銳展望鄙了施晴用有憶機肥語與土港壤微框生物挪活性鹿的關(guān)午系鐘（李綠東坡慢等阻,2諷00瓦5耀）肥。酸2.爭1.兵4鄙.2臟土壤蚊微生潛物對處農(nóng)藥換的響略應衡李建寺政等敞（絡20獻05行）踐的研悲究結(jié)改果就豆顯示丑，有趕機磷露農(nóng)藥較的污漆染使據(jù)土壤膝微秀生物阻個體澇數(shù)量愧減少蠟，種詞群密千度減紙少，悼但有該些污趨染物蓮能加憶速睬微貍生物盯的生菠活史賞進程妻，導簽致個尸體數(shù)婦量的總增加換和種棉群密斧度上耀升。誓在群廊落組跪成上芳敏感慎種被回耐藥遣種代乏替，揮在多窮樣性牢指數(shù)搜上，輕生態(tài)驗系統(tǒng)熱中敏雙感種夢消失側(cè)，物挽種數(shù)推量下村降，燕嚴重附時導跳致物臘種滅窩跡，惰物種裙多樣陳性下寄降。縮有機臣磷農(nóng)械藥的替污染接使微傻生物稀群落孕結(jié)構(gòu)師發(fā)生偉定向率演替穴，最哭后達祝到一載個新借的、忙相對船穩(wěn)定鵲的頂待級群序落。疤而慕農(nóng)藥北對土續(xù)壤微曬生物射及酶掘活性碼的影父響，努也已債成為網(wǎng)不少勻國家慨評價獻農(nóng)藥肥生態(tài)流安全卷的一貫個重班要指默標新(怎朱南績文等攀,1載99僚7艷）全?；艟藭苑峭碌葘滢r(nóng)藥柄污染賠抑制棵土壤鞭微生田物活詢性、丘改變擁它們質(zhì)的功們能和見結(jié)構(gòu)益的研侮究更鳥是與旬前人啞得出而了一棍致的平結(jié)論碌，普揀遍認黎為土叼壤中阻微生辟物的優(yōu)生存充環(huán)境據(jù)的改撒變是巧它們經(jīng)的功電能和震結(jié)構(gòu)對發(fā)生吼變化扭的主奉要原爆因危（霍豬曉非肚等宿,2迷00允8防）郊。爽2.塞1.屆4芒.3銳土壤奪微生起物對禽根系名分泌傅物烏的響緊應個連作嫂障礙毛與土欄壤微板生物逮種群險結(jié)構(gòu)柔組成尚與數(shù)氧量密花切相松關(guān)。獻在生雜產(chǎn)實貧踐中處也發(fā)午現(xiàn)晌,芝微生繞物種廣群多循樣性講減少沾和有吼害微需生物戒數(shù)量扔增加著是連扛作中晝的普梳遍現(xiàn)艘象賠(昆王明畢道等送,2岡00恐8)些。而零早在銷20慈世紀興60百年代超,插中國?？茖W袋院林拼業(yè)土趁壤研糖究所蝶(京現(xiàn)中午國科購學院辮沈陽耗應用重生態(tài)摔研究訓所肅)凱的周吧崇蓮景等人鳴在湖寧南會逢同森境林生半態(tài)實扁驗站黑對杉惡木連叫栽土題壤中風毒現(xiàn)江象進交行了薯研究淡,渴證實表了杉拜木連汁栽土佳壤存斬在毒認性物節(jié)質(zhì)幫,含并進縣一步可用三慨種優(yōu)耕土玻中分脾得的搞真菌只代謝牧產(chǎn)物漢進行餃毒性峰試驗心,形證實屋微生軌物抑抬制體之可能面是土顯壤中戀毒性材物質(zhì)高的來茅源之右一扁（李曠延茂墳等枝,2似00耍5俱）辰。與額此同紛時，甩王明翠道等撇的研包究也話顯示差：根御系分潑泌物錢將導甲致根嫌際微蒸生物庸種群勢、土啦壤酶饒活性帝、植著物營陶養(yǎng)狀還態(tài)等姨多種行微生植態(tài)因古子的濃變化吳，即徑為植謹物的蔥化感崇作用頓。在狠這些遭變化翠過程盟中，屢某些裕微生洲物數(shù)丟量和吊活性鄙增加惑，而喘某些矛微生塵物數(shù)號量和鑰活性鴨卻被連抑制撕，具冰體變走化情慚況要傻根據(jù)針植物懂種類硬而定宿（胡座開輝捐等懇,2營00陰6;泡收馬衛(wèi)勿賓等熊,2扭00賺7趟）柱。嚼2.領(lǐng)1.哀4騙.4濁土壤煙微生啄物對益土地艱利用傭方式參的響極應紹不同腹的土折地利芹用方毫式對孩土壤竊微生輛物生堂存的放環(huán)境鹿產(chǎn)生禍不同糾的影音響。聽設施林農(nóng)業(yè)樸是一睜種受冰人為并作用胃影響被十分混強烈級的土請地利胃用方佳式，猴人為崇地干州擾不擦僅改該變了創(chuàng)作物鳥生長老的小悶氣候緞環(huán)境美，而療且隨淺著中眠指年京限的仍增加件，出樓現(xiàn)了永許多忽問題任，如脾土壤攀鹽分呼累計辛增加厲，土都壤酸填化與賀養(yǎng)分多失調(diào)正，病慣害特么別是蹤土傳尖病害印發(fā)生漁嚴重結(jié)等。曉這些酬問題胖的出捷現(xiàn)都布與土抬壤中鉤微生藏物區(qū)員系的蛋變化苦有密志切關(guān)磁系腸(宗張乃卸明等擇,2潛00銹4)疑。例冠如菜豐地、水溫室鈴由于黑人為明大量慶施肥亡，園近而肥浮力水易平較鴿高。役雖然目在這匠兩種送利用錯方式卸中細輝菌、喂放線完菌所然占比瓜例沒犧有差歪別，詠但是濁溫室呆土壤款中真狀菌比秤例高信于菜御地，夕真菌效數(shù)量康增加忽，意昏味著肌病害礙加重再。同蔥時，程溫室雨土壤乖由于悲受土株壤鹽荒漬化餅的影決響，塔微生賽物活點性明頌顯低嫩于菜并地禍(姑范籍君華默等扭,2純00敞2)北。寶2.悅1.掙5慕土壤殖微生魔物對忘重金名屬污訴染酒的指炕示作密用柴土壤跳重金容屬污脊染是融指人交類活紅動致鋤使土深壤中寫重金郵屬含掉量過衣高，削并造同成生裙態(tài)環(huán)縣境質(zhì)淋量惡班化的朋現(xiàn)象爐。它株能通冒過食絡物鏈今影響濟人類永健康固，還錘能對鐮土壤德生物滅的群堅落結(jié)脅構(gòu)與糠功能俱產(chǎn)生選不利配影響羊（謝錄龍蓮爐等層,2互00繩4洽）蔥。在低重金梳屬污勇染土紫壤上槽，往刻往富壤集多灶種耐峰重金樣屬的竿真菌舌和細芽菌，偉微生暈物可鐵通過討多種敬作用雷方式植影響研土壤趙重金會屬的晨毒性高及重那金屬劣的遷絡移與劇釋放個（孫傘鐵珩慰,2笛00猶1菜）嶄。而毅土壤穗細菌援、真渣菌和蒜放線常菌是道土壤乓生態(tài)抵系統(tǒng)芝中微椒生物幸區(qū)系繳的主北要組紗成成觀分湊,吧在重勾金屬霉污染油條件美下微朝生物盤區(qū)系村的變搏化是螺反映珍土壤渠環(huán)境儲質(zhì)量冶變化久的重哈要生格物學教指標寶之一澡（葉晃央芳少等蝕,2廟00逝5芳）宗。歌貨樣3階研究墻內(nèi)容蝶、研奏究目弊標和斤技術(shù)貢路線泛3.醒1癢研究領(lǐng)內(nèi)容遷3.滅1.呀1蒜研究痛該區(qū)柔域不遠同土庭地利眨用方煩式下態(tài)土壤垮微生搞物區(qū)衛(wèi)系組韻成特挪征卵3.鞋1.榮2愁研究增該區(qū)遮域不弟同土驅(qū)地利羞用方廁式下宇土壤螺微生緊物生源物量泡碳、絕氮特疑性池3.摧2靈研究奧目標陡3.科2.興1弄本研存究針倉對不龍同土展地利替用方惱式下惱土壤跪，采吧用野拴外采置樣與君室內(nèi)杠分析券相結(jié)出合的饒方法約，結(jié)惰合分再離鑒婦定，艦分析快不同蘆土地殿利用外方式捐下土猛壤微眉生物勤區(qū)系妄和微碧生物迅量碳簽、氮糾特性友，弄鉆清不潛同土伙地利播用方手式下娃土壤鉛微生禍物群餓結(jié)構(gòu)差特征笨。上辦述研西究，技將為陵探索啦和了要解不基同土布地利抱用方伙式下潤土壤幣微生灣物特圈性，壺以進瓜一步賤了解口土壤舊肥力炕狀況義提供宏資料測依據(jù)擁。閘3.害3答技術(shù)美路線蝴采用訊野外嫁調(diào)查賢與室繳內(nèi)分耐析相爐結(jié)合倚。（值見圖貼）室內(nèi)分析測定土壤微生物區(qū)系的測定確定研究區(qū)域野外調(diào)查土樣采集利用方式調(diào)查不同土地利用方式下微生物土樣室內(nèi)分析測定土壤微生物區(qū)系的測定確定研究區(qū)域野外調(diào)查土樣采集利用方式調(diào)查不同土地利用方式下微生物土樣土壤微生物生物量碳、氮測定土壤微生物生物量碳、氮測定不同土地利用方式下微生物特性不同土地利用方式下微生物特性愛4便試驗胡方案許4.么1燃研究鮮區(qū)域牽概況青及樣根點布簡設誠4.偉1.充1焰研究降區(qū)域短概況摘研究搖區(qū)域傍設于護名山滾中鋒么鄉(xiāng)牛竊碾坪劣，地繳處寺四川高盆地突西南苗邊緣犁，蔑蒙頂揭山山考脈西頃北部畝，屬拐亞熱奸帶濕激潤性維氣候袍，四特季分壺明，寶氣候右溫和溫，雨來量充愈沛，論森林俯覆蓋篩率達饅50豎%悔，空殊氣、損水質(zhì)虹達國差家一燒類標御準?；斓匦蜗餅榈蛺偵角饟P陵，檢溝沖產(chǎn)交錯罪。年膽平均概氣溫奏15渣.4呼℃謠，年拌平均界降雨傲量為畏15看12功.7紫mm鑄，感6-叨9戲月較相集中泥，占樂全年煙的脂72壞.6銀%朱，且結(jié)夜雨裝較多丘。年當蒸發(fā)陜量約方10群29至.6途mm爪，各禍月平?jīng)r均相番對濕龜度刺82蠶%紗，日志照年惠平均軍10絹53遠.5益h濕，無顧霜期叼29齊8d暈。拍茶產(chǎn)逃業(yè)是孩該區(qū)倡域經(jīng)銀濟支潤柱產(chǎn)貍業(yè)和汗農(nóng)民解增收惑致富長骨干低項目域，農(nóng)混村人虧均擁茶有茶爽園面堵積均沃居全準國第丸一。谷4.蹄1.助2擾樣方神布設傾結(jié)合填不同似土地樂利用喇方式堤(東人工旗杉木宴林地睡、撂路荒地挨、茶果園、廣人工紀巨桉探林地而、枇末杷園梯地局)膜下植懼物的能生長稅特性喪設置菠樣地蟲。分夾別選攝取具種有代棵表性經(jīng)的樣鋒地，斜在每搏個樣版地中中采用訓“浩梅花世形障”嫂布點股，每通個樣炊地中炮采蘿8亂個樣堤方，架各樣帥方分咱0攻-5姨cm微、是5劫-1婦0c紅m革和愧10激-2椒0c氏m說土層冷進行禮采樣今。副4.棋2淡研究似方法字4.嚷2.記1膠野外匙工作橋方法仁在布圣設的饞樣方治上開寇挖土籃壤剖催面，騾分別深于醉0-陪5c棚m寒、他5-胡10爽cm霞和漂10詢-2獻0c跡m檢深度棗用鐵撓鏟自禿下往傘上順萬次取孫樣（遇在取荷每個勒層次毛的土顏樣前旺需用列該層闊次的寺土壤職潤洗辯雙手礎(chǔ)和采濾土工銳具）升。然免后將遍各層及所取漆土樣逐在潔幟凈塑刷料布抖上混柏勻，丹反復竹按照敘四分冰法分騾取，趟直到主混合毫土樣栽約為廚1寇千克惠，將聲土樣獎放入喇無菌葬塑料掠袋中焦。同執(zhí)時用進鉛筆府寫好省兩張衛(wèi)標簽專，一睬張放汪在樣股袋中明，另灘一張都扎在避袋口既上，制標簽蔽上記姻載采綠樣地壓點、釋土類料名稱助、采煎集深的度、書采集榴日期港及采摧集人勇等。克另外乖還需竄要將會有關(guān)轟該采醒樣點逗的詳例細情峰況另釀記載脊在記露錄本夏上。拿4.涼2.提2么室內(nèi)忙工作剛方法快4.礦2.膊2鄭.1禍微生越物區(qū)索系的全測定梯精確尋稱取不相當搶于撿10葡g資烘干析土重放的新都鮮樣征品。坦迅速盈倒入攜盛有異三、標四十流粒玻訂璃球賢的溉10仇0m罰L貓無菌笛水的抽三角鈔瓶中式，充斜分振趣蕩駕15靈-3洲0m死in嬸，制祥成稀豬釋家10峽倍的扶樣品在稀釋躍液，殼靜止柿30奸s駕后，鏟用儀mL剛滅菌政吸管惱吸取叨1m軟L1明0鄙倍稀綠釋液凱加入蠅9m據(jù)L常無菌惠水中摧（注軟意勿綁使吸鵲管碰摟到無鋒菌水比），烤搖勻小及制脊成瓣10斷0爐倍稀崖釋液患，換鏈用緩1m涂L炕滅菌元吸管刪將車10右0很倍稀泛釋液厲吹吸奇幾次企使菌油液混陷勻，制再吸潤1m劫L透移入裙下一襯盛歷9m純L填無菌渣水的章試管凱中，充按上蝕述方反法稀偵釋到肅億倍虛或十幣億倍朵稀釋手液。亡上述堅樣品旨稀釋涼液準漿備完伸后，協(xié)另取謝滅菌蛾吸管季吸取理適當輸稀釋并倍數(shù)辰的樣塞品稀跨釋液碎1m鏟L矩，放事入已紐滅菌故的培唉養(yǎng)皿倘中（秒吸取腿稀釋吩液的贏順序訂由稀賣釋倍焰數(shù)從帆高到噸低，揭這樣塵即可燈不必豪更換云吸管宋）。菊再倒菜入熔漿化并繳冷卻爹到攔50容℃榨總有蜓的瓊稠脂培家養(yǎng)基番[服細菌詳采用霸牛肉揭膏蛋喬白胨孤培養(yǎng)穴基，扇放線算菌用醋改良禽的高蝦氏一禁號培嚷養(yǎng)基與(p洞H=市7.毛2-雁7.洋4基，用立3嘉％重畫鉻酸田鉀抑氧制細匹菌和鴿霉菌休的生焦長，歡每筐30洗0m級L羨培養(yǎng)竹基中蔥加齡3產(chǎn)％重餐鉻酸戰(zhàn)鉀銀1m飾L)啊，真互菌用敏馬丁烈一孟燙加拉風紅培御養(yǎng)基鹿]下?；囵B(yǎng)圈基在金培養(yǎng)魚皿中耳鋪成融一薄路層（供約以1.視5m壞m漠）。英并在炕一平其面上垂做順?gòu)D時針豪和逆歸時針勒方向臺反復召滑動貸，使能樣品妹稀釋搶液和龜培養(yǎng)棕基混喜勻，隸放平懶待其維凝固乞后倒付轉(zhuǎn)放悔置，伯在被擔測生超物適驕合溫水度下飼培養(yǎng)弓（每印處理蜓重復依6憐次，必細菌靠采用臺3O咳℃認恒溫引箱保落濕培帝養(yǎng)斬4d頃，放融線菌盛用伏28接℃?zhèn)€恒溫腸箱保脹濕培喬養(yǎng)拋10速d紐，真城菌用嶺25掙℃瑞恒溫私箱中糠保濕鵲培養(yǎng)技7d面）。威培養(yǎng)豎時間貨到后校，統(tǒng)福計單這個菌認落的乓數(shù)目恥，就羽可計肯算被者測樣炮品的無含菌晚數(shù)。爺同時木用接費種種韻的培峰養(yǎng)皿螞培養(yǎng)盈基做龜空白寄對照露。蝶4.匙2.漠2激.2阿微生雪物量蹈碳、遙氮的基測定若（氯甜仿熏戀蒸法滅—也旱地急土壤何）昂稱取剩相當臥于析10嫩.0慮g意烘干塊土重戒的新牲鮮土慰壤度3繡份，適分別各放在出約陸25堡ml腥的玻淹璃瓶震中，號一起絞放入劫同一撓干燥折器中愈，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